内质网应激反应蛋白在氧化应激诱导人宫颈癌Hela细胞自噬中的作用

目的：探讨内质网应激反应蛋白在氧化应激诱导人宫颈癌Hela细胞自噬过程中的作用,阐明内质网应激-自噬途径调控肿瘤细胞生存的可能机制。方法：人宫颈癌Hela细胞分为对照组、VK3 (30   μmol•L^-1)组、内质网应激抑制剂牛磺熊去氧酸钠（TUDC ）(500  μmol•L^-1)组和VK3 (30   μmol•L^-1)与TUDC(500  μmol•L^-1)联合作用组。透射电镜观察Hela细胞内质网形态学变化。MTT 法检测细胞生存率。Western blotting法检测内质网应激特征性分子葡萄糖调节蛋白78（GRP78）和自噬相关蛋白（LC3-Ⅱ）的表达水平。结果：对照组细胞形态正常,VK3组细胞浆内可见自噬泡及扩张的内质网。与VK3组比较,VK3与TUDC联合作用组Hela细胞生存率降低（P<0.05）。与对照组比较,VK3组GRP78和LC3-Ⅱ蛋白表达水平均增加（P<0.05）;与VK3组比较,VK3与TUDC联合作用组 GRP78和LC3-Ⅱ蛋白表达水平均降低（P<0.05）。结论：在氧化应激诱导Hela细胞损伤过程中,内质网应激反应蛋白可介导Hela细胞发生自噬。     

大麻二酚通过促进自噬流减轻棕榈酸诱导的肝细胞损伤

目的 观察大麻二酚(CBD)对棕榈酸(PA)诱导的肝细胞损伤的保护作用,并考察其与自噬流相关的潜在机制.方法 原代培养大鼠肝细胞,分别给予1 μmol/L和5μmol/L的CBD处理24 h,采用蛋白质印迹法检测自噬相关蛋白微管相关蛋白1轻链3(LC3)和p62的表达,考察CBD对细胞自噬的影响.将细胞分为4组并分别给予不同处理:PA组(800μmol/L PA处理细胞)、PA+CBD组(800 μmol/L PA和5μmol/L CBD联合作用)、PA+CBD+CQ组[800 μmol/L PA、5μmol/L CBD和50 nmol/L自噬抑制剂氯喹(CQ)共同作用]和阴性对照组(加入等体积0.03％ DMSO处理细胞),每组作用时间均为24 h;采用蛋白质印迹法检测LC3和p62的蛋白表达,流式细胞术考察细胞凋亡情况,qPCR法检测内质网应激相关因子CCAAT/增强子结合蛋白同源蛋白(CHOP)、葡萄糖调节蛋白78(GRP78)和X盒结合蛋白1(XBP-1) mRNA的表达,Rh123和lucigenin荧光探针分别检测线粒体的膜电位和活性氧簇(ROS)含量.结果 1μmol/L和5μmol/L CBD均不影响肝细胞LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ的比值以及p62蛋白的表达.与阴性对照组相比,PA组肝细胞LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ的比值和p62蛋白表达增加(P＜0.05),细胞凋亡增加(P＜0.05),CHOP、GRP78、XBP-1 mRNA表达增加(P＜0.05),线粒体膜电位降低(P＜0.05),线粒体ROS的生成增加(P＜0.05);与PA组相比,PA+CBD组肝细胞内的自噬流恢复,细胞凋亡减少,内质网应激和线粒体失常减轻(P＜0.05);同时给予CQ处理可以逆转CBD的保护作用(P＜0.05).结论 CBD能够通过促进自噬流减轻PA诱导的肝细胞损伤,改善内质网应激和线粒体功能.     

内质网应激自噬参与葫芦素E诱导的结肠癌细胞凋亡

【摘要】目的 观察内质网应激和自噬反应对葫芦素E（CuE）诱导人结肠癌细胞系HT 29凋亡的作用。方法 采用0001、001、01、1、10 μmol/L的CuE分别处理培养的HT 29细胞24、48及72 h,对照组仅用DMEM培养液。Annexin V FITC/PI双染色流式细胞分析法检测细胞凋亡,蛋白免疫印迹法检测内质网应激相关蛋白CHOP、Grp78以及自噬相关蛋白Beclin1、LC3表达水平。结果 Annexin V FITC/PI双染色流式细胞分析结果表明,随着CuE浓度升高,作用时间延长,凋亡细胞占总细胞比例明显升高（P＜005）,呈时间与剂量依赖性。蛋白印迹分析结果显示,用CuE处理HT 29细胞24 h后,与对照组相比,内质网应激相关蛋白CHOP及Grp78蛋白表达明显升高（P＜005）,自噬相关蛋白Beclin1表达逐渐增（P＞005）,胞浆型LC3（LC3 Ⅰ）发生酶解,转变为自噬体膜型LC3 Ⅱ,且LC3 Ⅱ/LC3 Ⅰ比值大小呈现出先上升（P＜005）后下降（P＞005）的趋势。结论 内质网应激和自噬反应参与介导了CuE引起的人结肠癌细胞HT 29凋亡,其可能是CuE诱导结肠癌细胞凋亡的重要途径。     

自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤增强鼻咽癌细胞对放射和化学治疗的敏感性

目的：探讨自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-methyladenine,3-MA)增强鼻咽癌细胞对放射治疗(放疗)和化学治疗(化疗)敏感性的作用及其相关的分子机制。方法：采用MTT法检测3-MA对细胞的增殖抑制作用;集落克隆形成法检测3-MA对细胞集落克隆形成的影响;Annexin V/PI双染法、线粒体膜电位检测试剂盒(JC-1)、DAPI染色检测细胞凋亡;Western 印迹检测内质网应激相关蛋白葡萄糖调节蛋白78(glucose-regulated protein 78,GRP78)、自噬相关蛋白beclin1和微管相关蛋白1轻链3(microtubule-associated protein 1 light chain 3,LC3)表达。结果：不同体积浓度或剂量的顺铂(cisplatin,DDP)、电离辐射(ionizing radiation,IR)、衣霉素(tunicamycin,TM)、3-MA对鼻咽癌细胞HONE-1均具有增殖抑制作用,且随着体积浓度或剂量的增加和作用时间的延长,对HONE-1细胞增殖抑制作用随之增加。经1.00mmol/L 3-MA预处理细胞后,再次给予6.00 μmol/L DDP,4.00 Gy IR,1.00 μmol/L TM处理,细胞存活率明显降低,均低于单用组,与空白对照组比较差异均有统计学意义(P<0.05)。3-MA增强DDP,IR,TM抑制细胞集落克隆形成作用。用6.00 μmol/L DDP或4.00 Gy IR处理HONE-1细胞24 h后,细胞凋亡率分别为5.8%和6.7%,与阴性对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。JC-1和DAPI染色显示3-MA增强DDP,IR或TM诱导的细胞凋亡作用;Western 印迹结果显示DDP,IR或TM处理组GRP78,beclin1表达呈时间依赖性上调,LC3 I向LC3 II转化,3-MA预处理组beclin1表达明显降低,LC3 I向LC3 II的转化。结论：自噬抑制剂3-MA可增强鼻咽癌细胞对放化疗的敏感性,其机制可能与3-MA抑制内质网应激诱导的自噬所产生的保护作用相关。     

miR-217靶向调控HMGA2基因对内质网应激介导的口腔癌细胞自噬与凋亡的影响

目的 探究微小RNA 217(miRNA-217)对口腔癌细胞中内质网应激介导的自噬与凋亡的影响及其分子机制。方法 培养人口腔癌细胞和人正常口腔角质形成细胞,实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)检测细胞中miR-217与高迁移率族蛋白A2(HMGA2)表达水平;将人口腔癌细胞系SAS分为对照组、miR-NC组、miR-217 mimic组和miR-217 mimic+4-PBA组4组,脂质体法进行转染和内质网应激抑制剂4-苯丁酸处理后,流式细胞术检测细胞凋亡率,Hoechst33342染色观察细胞凋亡情况,细胞免疫荧光染色检测细胞中微管相关蛋白1轻链3(LC3)表达,蛋白质免疫印迹(Western Blot)测定细胞中自噬相关蛋白LC3I、LC3II及Beclin-1的表达水平,RT-qPCR和Western Blot测定细胞内质网应激相关分子CCAAT/增强予结合蛋白同源蛋白(CHOP)、葡萄糖调节蛋白78(GRP78)及天冬氨酸蛋白水解酶-12(Caspase-12)的表达水平;双荧光素酶报告基因检测实验和Western Blot验证miR-217对HGMA2的靶向作用。结...     

内质网应激-自噬反应在顺铂诱导宫颈癌HeLa细胞死亡中的作用

目的研究内质网应激-自噬反应在顺铂诱导宫颈癌HeLa细胞死亡中的作用,以及自噬基因Beclin 1对HeLa细胞顺铂敏感性的影响。方法不同浓度顺铂作用HeLa细胞后,丹磺酰戊二胺染色法观察细胞中自噬体的形成,Western blot检测自噬相关蛋白Beclin 1和LC3的表达及内质网应激相关蛋白IRE1、PERK和ATF6的表达。将自噬基因Beclin 1的真核表达载体pcDNA3.1(+)-Beclin1转染HeLa细胞,Western blot检测Beclin 1在HeLa细胞中的蛋白表达,噻唑蓝比色(MTT)法检测顺铂对HeLa细胞半数抑制浓度(IC50)的变化,流式细胞仪检测凋亡细胞的百分率。结果顺铂作用HeLa细胞后,细胞内自噬体形成增加,自噬蛋白Beclin 1和LC3表达增加,且均呈现时间依赖性(P<0.05),内质网应激相关蛋白IRE1、PERK和ATF6的表达增强。pcDNA3.1(+)-Beclin1转染HeLa后,Beclin 1蛋白表达增加(P<0.05);MTT检测IC50由转染前的1.0μg/ml下降到0.5μg/ml;凋亡细胞百分率升高,与对照组相比差异有统计学意义(P<0.05)。结论内质网应激-自噬反应参与了顺铂对宫颈癌HeLa细胞的细胞毒性作用,自噬基因Beclin 1过表达能够增加HeLa细胞对顺铂的敏感性。     

N-乙酰半胱氨酸对脂多糖诱导大鼠肝细胞内质网应激的抑制作用

目的:探讨N-乙酰半胱氨酸(N-acetyl-L-cysteine,NAC)对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导大鼠肝细胞内质网应激的影响.方法:培养大鼠肝细胞系BRL细胞,用NAC或LPS分别或共同处理BRL细胞,其中共同处理时把NAC加入培养液中预处理1h再给予LPS处理肝细胞.用锥虫蓝拒染法检测细胞存活率;Hoechst33258染色荧光显微技术检测肝细胞凋亡的形态学变化;免疫印迹法检测内质网应激标志蛋白GRP78及凋亡相关蛋白CHOP、Caspase-12和Caspase-3的表达.结果:与溶剂对照组比较,LPS能时间依赖性地引起肝细胞细胞活力显著降低和细胞凋亡增多,诱导内质网应激标志蛋白GRP78表达明显上调;NAC预处理抑制LPS引起细胞存活率降低和细胞凋亡增多,并且能显著抑制LPS诱导的GRP78及凋亡相关蛋白CHOP、Caspase-12和Caspase-3表达上调.结论:NAC通过阻断LPS诱导的肝细胞内质网应激而减轻肝细胞损伤.     

小白菊内酯对人胃肠道间质瘤细胞增殖和凋亡的影响

[目的]探讨小白菊内酯(PTL)对人胃肠道间质瘤(GIST)细胞增殖和凋亡的影响.[方法]取细胞株进行体外培养,给予不同浓度(1,3,5μmol/L)PTL作用后利用MTT法测定GIST细胞增殖抑制率,采用Western blot法检测凋亡相关蛋白Bcl2/Bax和内质网应激相关蛋白葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、生长阻滞和DNA损伤诱导基因153(GADD153)的表达情况.[结果]PTL对GIST细胞具有增殖抑制作用,且随着药物浓度的增加抑制率明显升高(P<0.01).Western blot检测结果显示,PTL作用于GIST细胞48 h后随着药物浓度的增加,内质网应激相关蛋白GRP78和GADD153的表达水平逐渐升高,凋亡相关蛋白Bcl2/Bax比例逐渐降低,差异均具有统计学意义(P<0.01).[结论]PTL可抑制GIST细胞增殖并引起凋亡,机制认为可能与内质网应激途径介导有关系.     

杨梅素诱导卵巢癌SKOV3细胞内质网应激途径及DNA断裂介导的凋亡

目的:杨梅素具有抗肿瘤效果的具体机制还未被阐明。目前有研究表明,杨梅素通过线粒体凋亡途径诱导肿瘤细胞死亡。凋亡是一种细胞的程序性死亡过程,其经典诱导途径主要为:线粒体途径介导凋亡、内质网(ER)应激所介导的凋亡、以及由DNA双链断裂损引起的细胞凋亡。为此,我们想探究杨梅素在诱导SKOV3细胞凋亡中,是否也存在内质网(ER)应激和DNA双链断裂损伤途径所介导的凋亡。方法:采用人卵巢癌SKOV3细胞,给予杨梅素进行体外实验。MTT法检测细胞生存率。结果:杨梅素作用于SKOV3细胞后,能够抑制其增殖,且呈剂量依赖性。免疫荧光结合免疫印迹技术检测内质网应激标志蛋白GRP78和促凋亡转录因子CHOP(C/EBP同源蛋白,GADD153)的表达,发现杨梅素上调了GRP78和CHOP的表达。免疫荧光技术检测细胞内DNA断裂的标记性物γ-H2AX,发现γ-H2AX也明显上调。结论:杨梅素能诱导SKOV3内质网应激途径和DNA损伤所介导的凋亡。     

抑制葡萄糖调节蛋白78表达对阿霉素诱导人乳腺癌SK-BR-3细胞凋亡的增敏作用

目的:探讨特异性下调葡萄糖调节蛋白78(GRP78)对阿霉素(adriamyc in,ADR)诱导人乳腺癌SK-BR-3细胞凋亡的影响,以期为乳腺癌化疗提供新的靶点。方法:培养人乳腺癌SK-BR-3细胞,用ADR(1 mg/L)处理人乳腺癌SK-BR-3细胞0、6、12、24、36 h,W estern b lot检测GRP78的表达;ADR处理SK-BR-3细胞48 h后,用溴化丙啶染色测定细胞凋亡率;用小分子干扰RNA siRNA预处理SK-BR-3细胞,再予ADR同上处理,检测细胞凋亡率,比较siRNA作用前后细胞凋亡率的变化。结果:ADR可诱导内质网应激,上调GRP78的表达,SK-BR-3细胞对ADR诱导的细胞凋亡率<30%;siRNA可明显阻断GRP78的表达,显著增加ADR诱导的细胞凋亡作用,凋亡率达到(62.30±0.88)%(P<0.01)。结论:抑制GRP78的表达可增强人乳腺癌SK-BR-3细胞对ADR经内质网应激途径诱导细胞凋亡的敏感性,促进肿瘤细胞的凋亡,增强其抗肿瘤作用。     

“非典”与应激

应激是一种涉及心身两个方面的紧张状态,引起这种状态的刺激物称为应激原,应激源分为社会性、心理性、躯体性和文化性。“非典”成为社会应激源,给人类躯体与心理带来双重伤害,要战胜“非典”,必须同时依靠医学、生物化学、医学心理学、心身医学、行为医学、中医药学等多学科的理论、研究方法和防治手段。鉴于“非典”具有传染性强、病情重的特点,采用支持性心理治疗较为妥当。     

严重急性呼吸综合征(SARS)与应激

严重急性呼吸综合征 (SARS)又称为“传染性非典型性肺炎”是由新型变异的冠状病毒 (SARS CoV )感染引起的一种以肺部感染病变为主要特征的新型传染病 ,是一种新的、传染性强、病死率高的急性呼吸道传染病。SARS已成为 2 1世纪严重威胁全球尤其是我国人民健康的新发传染病 ,使全人类面临了一场突如其来的重大灾难。据统计 ,自 2 0 0 3年 1月广东省首先报告SARS以来 ,截止 2 0 0 3年 8月 9日 ,疫情已波及全球 3 2个国家或地区 ,WHO报道全球SARS临床诊断病例已达 842 2例 ,累计死亡 916例。其中我国内地共有 2 5个省 (自治区、直辖市…     

糖尿病与氧化应激

糖尿病是当今社会的常见病、多发病,严重危害着人们的健康.糖尿病的并发症包括肾病、神经病变、视网膜病变、大血管和微血管疾病、骨和矿物质代谢改变[1].越来越多的证据表明,高血糖、氧化应激与糖尿病及其血管并发症之间关系密切.现对目前糖尿病及其并发症与氧化应激反应的关系做一综述,旨在探讨调节机体氧化应激与防治糖尿病发生发展的意义.     

Working women and stress

Occupational stress is a growing problem in US workplaces and may be a problem of particular magnitude for working women, in part because of sex-specific job stressors (sex discrimination and difficulties combining work and family). Although such stressors have received little research attention until recent years, new research indicates that these stressors may have a negative impact on health and well-being above and beyond the effects of general job stressors (work overload, skill underutilization, etc). A number of stress-reduction strategies have been shown to be useful for working women, ranging from the more common individual stress management techniques to higher-level interventions focused on removing the sources of occupational stress. This article provides a brief overview of occupational stress as it affects working women and presents research on approaches for reducing the negative effects of job stress.     

氧化应激与糖尿病

最近研究显示，氧化应激在糖尿病及其并发症的发生、发展过程中起了重要作用，抗氧化治疗为糖尿病和其并发症的治疗提供了一个新的策略。本文就此方面的研究作一综述。     

Stress and stress counselling

This is a report by the 1989 National Association of Clinical Tutors Wyeth Travelling Fellow to the United States of America. The stresses of postgraduate training and attempts to modify these are described, including stress counselling. The significance of stress and the relevance of the findings for postgraduate training in the United Kingdom are considered.     

心理应激与神经递质

神经递质 (ｎｅｕｒｏｔｒａｎｓｍｉｔｔｅｒ)与心理应激 (ｐｓｙ ｃｈｏｌｏｇｉｃａｌｓｔｒｅｓｓ)关系的研究近几十年来取得了可喜的进步 ,虽然科学家们并没有或者说很少从心理应激的角度去研究神经递质与心理应激之间的关系 ,但是每一种新的递质被发现或者某种递质的作用     

子宫内膜异位症与氧化应激

子宫内膜异位症是育龄期妇女的一种常见的妇科疾病,近年来其发病率有上升趋势.经典理论未能完全解释其发病机制.研究发现,子宫内膜异位症患者体内氧化系统与抗氧化系统失衡、氧化标记物增加,抗氧化剂对子宫内膜异位症具有预防和治疗作用,说明子宫内膜异位症与氧化应激有关.本文对子宫内膜异位症与氧化应激的相关研究进行综述,为探讨子宫内膜异位症发病机制及抗氧化治疗的可能性提供参考.