ATPR通过促进自噬缓解脂多糖诱导的小鼠急性肝损伤

目的 研究4-氨基-2-三氟甲基苯基维甲酸酯(ATPR)对脂多糖(LPS)诱导C57BL/6小鼠急性肝损伤的影响及相关机制。方法 6周龄的雄性C57BL/6品系小鼠15只随机均分为正常组、模型组和ATPR组。ATPR组小鼠腹腔注射ATPR[15 mg/(kg·d)],正常组和模型组给予溶剂,持续给药1周后,模型组和ATPR组腹腔注射LPS(6 mg/kg), 6 h后处死所有小鼠。检测小鼠血清中谷丙转氨酶(ALT)和谷草转氨酶(AST)含量;qPCR检测肝脏组织白细胞介素-6 (IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的mRNA水平;苏木精-伊红(HE)染色观察小鼠肝脏组织形态学变化;透射电子显微镜(TEM)观察小鼠肝细胞超微结构变化;Western blot检测线粒体损伤相关蛋白FUNDC1、OPA1和自噬相关蛋白LC3B、P62、Beclin1、ATG5的表达水平。结果 与正常组相比,模型组小鼠血清中ALT、AST含量上升,肝脏组织IL-6、TNF-α的mRNA水平升高,ATPR组逆转这一变化。HE染色显示正常组小鼠肝小叶结构正常,肝索呈放射状排列,无充血和炎性细胞浸润,肝细胞边...     

TGF-β Ⅲ型受体在小鼠肝纤维化中的作用研究

目的 建立四氯化碳(CCl4)诱导的肝纤维化小鼠模型,观察转化生长因子β Ⅲ型受体(TβRⅢ)在肝纤维化中的作用.方法 C57BL/6J小鼠随机分为正常对照组和CCl4模型组,模型组腹腔注射10% CCl4油溶液(5 ml/kg),每周2次,分别在造模第2、4、6、8周处死小鼠,HE染色观察小鼠肝脏的病理学变化,检测模型进展过程中血清谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)活性,Western blot法检测肝组织中I型胶原、TβRⅢ、p-Smad3、Smad3、p-Akt、Akt的表达情况.结果 HE染色结果显示,随着造模时间的延长,小鼠肝纤维化程度逐渐加重,血清ALT、AST活性逐渐增加,Western blot 结果显示I型胶原的表达逐渐增加,TβRⅢ的表达逐步降低,p-Smad3和p-Akt的表达逐渐升高.结论 TβRⅢ的降低可能与小鼠肝纤维化的发生发展有关.     

白介素22融合蛋白对刀豆蛋白A诱导肝损伤病理状态下肝切除后肝再生的影响

目的 研究白介素22融合蛋白(IL-22-FP)对刀豆蛋白A(ConA)诱导急性肝损伤后行70%肝切除手术(PHx)的小鼠术后肝再生及肝脏保护的作用.方法 建立小鼠ConA肝损伤和PHx手术模型,术后32 h通过过量麻醉法处死小鼠.5-溴脱氧尿嘧啶核苷染色,观察小鼠肝脏再生情况;全自动生化分析仪检测小鼠血清谷丙转氨酶(ALT)和谷草转氨酶(AST)水平;HE染色观察小鼠肝脏组织损伤情况;Western blot法检测小鼠肝组织中增值细胞核抗原(PCNA)、细胞周期蛋白D1(CycliD1)、信号转导子及转录激活子3(STAT3)及p-STAT3蛋白的表达情况.结果 ConA+PHx+IL-22-FP组小鼠同ConA+PHx+rh-IL-22组及其他组小鼠相比,表现出更多的肝细胞增殖和更高的肝指数(肝脏重量/体重);HE染色显示ConA+PHx+IL-22-FP组小鼠肝脏坏死及炎症细胞浸润程度较低;生化检测显示ConA+PHx+IL-22-FP组血清ALT和AST水平明显低于其他组;Western blot结果表明ConA+PHx+IL-22-FP组小鼠的肝脏组织PCNA、CyclinD1和p-STAT3蛋白的表达量也明显高于其他组.结论 IL-22-FP能够促进由ConA诱导肝损伤的小鼠PHx后的肝再生,并表现出显著的肝脏保护作用.     

Hsf1在DEN诱导小鼠急性肝损伤中的表达及活性变化

[目的]观察Hsf1在二乙基亚硝胺(DEN)诱导急性肝损伤组织中的表达及活性变化。[方法]选取8周龄C57BL/6J小鼠,随机分为3组:对照组、DEN损伤24 h组及DEN损伤48 h组。DEN损伤组小鼠腹腔注射二乙基亚硝胺(20mg/kg)24 h或48 h,建立急性肝损伤模型;对照组小鼠腹腔注射同体积PBS溶液。试剂盒检测小鼠血清谷丙转氨酶、谷草转氨酶、碱性磷酸酶活性。HE染色检测小鼠肝组织病理变化。提取小鼠肝组织蛋白,Western blotting检测肝组织Hsf1及其调控蛋白Hsp70、Hsp90、Hsp25蛋白表达。[结果]DEN损伤24 h组小鼠血清谷丙转氨酶、谷草转氨酶、碱性磷酸酶活性分别较对照组升高574.97%、86.67%、174.49%(P<0.05)。DEN损伤48 h组小鼠血清谷丙转氨酶、谷草转氨酶、碱性磷酸酶活性分别较对照组升高665.63%、95.33%、194.90%(P<0.05)。HE染色显示,DEN损伤小鼠肝脏细胞排列紊乱、水肿,肝组织点状及灶性坏死,伴有炎性细胞浸润。Western blotting检测发现,DEN损伤24 h组及DEN损伤48 h组肝组织Hsf1表达较对照组明显增多,同时Hsf1调控蛋白Hsp70、Hsp90及Hsp25表达水平均较对照组明显增高。[结论]二乙基亚硝胺可诱导小鼠急性肝损伤组织中Hsf1表达增加,转录活性增高。     

肌醇依赖酶1内切酶活性抑制剂STF⁃083010对肝脏缺血再灌注损伤的保护作用

目的：探讨STF-083010在小鼠肝脏缺血再灌注损伤中的保护作用及其可能机制。方法：选取健康清洁级雄性C57BL/6 小鼠30只,随机分成假手术组(sham组)、肝缺血再灌注组(IR+NS组)和STF-083010预处理+肝缺血再灌注组(IR+STF-083010组)三组,每组10只。缺血再灌注 6h后处死小鼠,收取静脉血及肝组织标本。通过酶联免疫吸附试验（ELISA法）检测小鼠血清谷丙转氨酶( ALT) 和谷草转氨酶（AST）水平;用苏木素-伊红（HE）染色及TUNEL染色检测肝脏组织损伤情况及肝细胞的凋亡情况;用实时定量PCR法检测白介素-6（IL-6）、肿瘤坏死因子α(TNF-α),白细胞介素1β( IL-1β)水平;免疫组织化学法检测sXBP1蛋白表达水平,蛋白印迹法检测肝脏组织中sXBP1、CHOP蛋白表达水平。结果: 与IR+NS组相比,IR+STF-083010组小鼠血清ALT,AST水平明显降低（P＜0.01）;组织学上,损伤情况得到明显改善（P＜0.01）;肝组织中IL-6、TNF-α、IL-1βmRNA水平及sXBP1、CHOP蛋白水平明显降低（P＜0.01）。结论: STF-083010预处理可通过抑制sXBP1/CHOP通路减轻肝脏缺血再灌注损伤。     

鼠巨细胞病毒感染C57BL/6小鼠急性肝炎动物模型的建立与鉴定

目的：建立鼠巨细胞病毒（MCMV）感染C57BL/6小鼠急性肝炎模型并对其感染特点进行分析及鉴定。方法：将24 只C57BL/6小鼠随机分为阴性对照组（n =12）及病毒感染组（n =12），病毒感染组腹腔注射1.0×106 PFU（200 μL）MCMV悬液，阴性对照组注射等体积小鼠胚胎成纤维细胞（MEF）悬液。于感染后第3天和第7天取外周血分离血清检测谷丙转氨酶（ALT）及谷草转氨酶（AST）。同时进行肝组织病毒分离、组织病理学及MCMV IE和M55基因、细胞因子白细胞介素-6（IL-6）、白细胞介素-1β（IL-1β）、肿瘤坏死因子α（TNF-α）的检测。结果：病毒感染组肝组织匀浆病毒分离均为阳性，肝炎发生率为100%。在感染后第3天即发生肝炎病理改变，病毒感染组血清ALT及AST较阴性对照组明显升高（P ＜0.01）；病毒感染组肝脏HE染色第3天可见局灶性炎性细胞浸润及肝脏点灶状坏死，持续至第7天，Ishak评分较阴性对照组明显升高（P ＜0.01）；在感染后第3天病毒感染组肝组织内可检测到MCMV IE及M55基因，且在感染后第7天仍可测得IE基因；感染后第3天及第7天病毒感染组炎性细胞因子IL-6、TNF-α及IL-1β mRNA表达水平明显升高（P ＜0.05）。 结论：成功建立MCMV感染C57BL/6小鼠急性动物肝炎模型，其感染表现主要集中在急性感染前期。     

急性肝炎小鼠血清IL-12水平与肝损伤相关性分析

目的探讨急性肝炎小鼠血清白细胞介素-12(IL-12)与肝损伤的相关性.方法利用3型鼠肝炎病毒体外感染Babl/cJ小鼠建立急性肝炎小鼠模型,肝脏HE染色进行肝脏病理评估,常规生化和定量ELISA方法检测感染后各时间点血清ALT及IL-12的水平.结果感染后的Balb/cJ小鼠血清ALT的水平持续升高,在在72h 达到峰值,IL-12的水平在感染48h后达到峰值,随后有所回落;相关性分析显示血清IL-12水平与ALT的水平显著正相关(相关系数为0.734;P<0.05).结论 IL-12在小鼠急性肝炎肝细胞损伤中可能发挥着重要作用.     

环肽α-amanitin在小鼠体内的毒性作用研究

目的 研究环肽α-amanitin在动物体内的毒性作用. 方法对小鼠尾静脉和腹腔注射给药,确定环肽α-amanitin对小鼠的半数致死量(LD50);研究α-amanitin对小鼠外周血血象和生化指标的影响,脏器指数、组织病理学改变,并定性检测中毒小鼠血液及组织中的α-amanitin. 结果腹腔和尾静脉两种给药方式的LD50分别为0.742 mg/kg和0.327 mg/kg.对小鼠尾静脉注射0.327 mg/kg α-amanitin 24 h后,小鼠白细胞(WBC)、红细胞(RBC)和血红蛋白(Hb)明显降低,同时尿素氮(BUN)和肌酐(Crea)明显增高,谷丙转氨酶、谷草转氨酶、总胆红素和结合胆红素(ALT、AST、TBIL和DBIL)值分别增高至空白对照组的24.0、9.6、26.3和37.0倍;作用48 h后,小鼠肝脏和肾脏指数显著增高,细胞核碎裂和组织局灶性坏死,肝脏和肾脏组织中可检出α-amanitin. 结论小鼠对α-amanitin毒性作用的敏感血液指标是BUN、Crea、ALT、AST、TBIL和DBIL;肝脏、肾脏是主要受损脏器,α-amanitin作用后期,可以蓄积在肝脏和肾脏.     

外源性IL⁃25对日本血吸虫感染引起肠壁损伤的影响

目的：探究外源性白细胞介素（interleukin,IL）-25对日本血吸虫感染所致小鼠肠壁损伤的影响。方法：24只雌性 C57BL/6J小鼠随机分为正常组、正常+IL-25组、感染组、感染+IL-25组。感染组、感染+IL-25组中每只小鼠感染日本血吸虫尾蚴40条;感染+IL-25组、正常+IL-25组小鼠于感染后或实验开始后第4周开始腹腔注射IL-25（0.5 μg/只,隔天注射1次,持续 3周）。感染6周后剖杀小鼠,取肝脏和肠组织制作病理切片,苏木素伊红（hematoxylin-eosin,HE）染色后观察小鼠肝脏、结肠病理学变化,阿尔新蓝-过碘酸雪夫（Alcian blue-periodic acid-Schiff,AB-PAS）染色观察小鼠结直肠内杯状细胞数量变化;酶联免疫吸附试验（enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA）、实时荧光定量试验（real-time polymerase chain reaction,real-time PCR） 检测小鼠结肠部位炎症相关因子IL-10、IL-4、IL-13、肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor α,TNF-α）、γ干扰素（interferon γ, IFN-γ）和IL-1β等的表达水平。结果：感染6周后的肠组织HE染色结果显示,日本血吸虫感染后,结直肠部位出现虫卵堆积, 但是在经过IL-25注射之后,肠道损伤减轻,虫卵堆积减少;感染+IL-25组小鼠肠道单个肉芽肿面积显著低于感染组小鼠,但是感染组小鼠肝脏肉芽肿面积与感染+IL-25组小鼠无明显区别;AB-PAS结果显示IL-25能够显著增加日本血吸虫感染小鼠肠道杯状细胞数量;ELISA、real-time PCR结果显示感染日本血吸虫后小鼠结肠1型、2型细胞因子均有不同程度的升高,且在注射 IL-25之后,呈现2型细胞因子表达量上升、1型细胞因子表达量下降的趋势。结论：IL-25可通过促进杯状细胞分化缓解日本血吸虫感染所致的肠壁损伤。     

ω-3多不饱和脂肪酸对热应激小鼠肝脏损伤的保护作用研究

目的 探讨ω-3多不饱和脂肪酸(omega-3 polyunsaturated fatty acid, ω-3 PUFA)对热应激小鼠肝脏损伤的影响。方法 成年雄性健康野生型C57BL/6C小鼠16只和FAD3转基因小鼠16只分为C57BL/6C组(n=8)、C57BL/6H组(n=8)、FAD3C组(n=8)和FAD3H组(n=8)。C57BL/6C组和FAD3C组给予室温环境(23±1℃),C57BL/6H组和FAD3H组给予高温处理(30℃),自由取食饮水,每4天记录1次小鼠体质量和直肠温度,第7周末,取血后处死小鼠并取其肝脏组织,称重并记录肝重。计算平均体质量增量、平均日摄食量以及肝重比(肝重/终体质量)。采用酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)检测血清天门冬氨酸氨基转移酶(aspartate aminotransferase, AST)和丙氨酸氨基转移酶(alanine aminotransferase, ALT)的含量,以评估小鼠肝脏损伤的状况。实时荧光定量聚合酶链反应(real-time quantitative polymerase chain reaction,RT-qPCR)检测肝脏中肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-alpha, TNF-α)、白细胞介素-6(interleukin-6, IL-6)、白细胞介素-1β(interleukin-1β, IL-1β)、白细胞介素-10(interleukin-10, IL-10)、单核细胞趋化蛋白-1(monocyte chemoattractant protein-1, MCP-1)以及热休克蛋白72(heat shock proteins 72,HSP72)mRNA表达水平。结果 与C57BL/6C组比较,C57BL/6H组小鼠肝脏HSP72、TNF-α、IL-1β、IL-6、MCP-1mRNA表达水平以及血清AST、ALT含量均显著增加(P<0.05);然而,与C57BL/6H组比较,FAD3H组小鼠肝脏HSP72、TNF-α、IL-1β、IL-6、MCP-1mRNA表达水平以及血清AST、ALT含量均显著降低(P<0.05)。结论 ω-3 PUFA通过抑制高温诱导的热应激小鼠肝脏中促炎性细胞因子TNF-α、IL-1β、IL-6以及MCP-1mRNA的表达水平,降低血清AST和ALT的含量,下调HSP72 mRNA表达水平,进而缓解热应激小鼠肝脏的损伤。