木犀草素抑制ERK1/2与p38 MAPK的活化介导鼻咽癌CNE1细胞的生长、移动性和肿瘤干细胞样特性

目的:探索木犀草素对鼻咽癌CNE1细胞生长、移动性和肿瘤干细胞样特性的影响,及对相关蛋白表达的影响.方法:将CNE1细胞随机分为4组,对照组用含正常血清的DMEM培养基培养,其余3组细胞的血清DMEM培养基中分别加入5、10、20mg·L-1木犀草素,EdU渗入检测细胞增殖状态;免疫印迹法检测Ki67、Bcl-2/Ba...     

miR-34a通过靶向调控Notch1表达影响乳腺癌细胞的增殖

目的探讨miR-34a通过靶向调控Notch1表达影响乳腺癌细胞的增殖。方法乳腺癌细胞MCF-7转染miR-34a mimics及miR-34a NC,RT-PCR法检测细胞中miR-34a表达,MTT,克隆形成实验,Hoechst染色及流式细胞术分别检测miR-34a mimics对乳腺癌MCF-7细胞活力、克隆能力、凋亡情况及细胞周期的影响;通过双荧光素酶报告基因实验,western blot及RT-PCR检测Notch1是否是miR-34a的下游靶基因。结果与miR-34a NC比较,miR-34 mimics组中miR-34a表达量上调,细胞活力降低(P0.01),细胞凋亡率显著提高(P0.01),细胞克隆数目减少(P0.01),细胞周期阻滞在G1期(P0.01),Notch1蛋白及mRNA表达量都显著降低(P0.01),同时荧光素酶报告基因实验也证实miR-34a mimics能与报告基因结合。结论 miR-34a mimics能通过负性调控Notch1表达,从而显著的抑制MCF-7乳腺癌细胞增值,并诱导细胞凋亡。     

HOXC10通过靶向调控CST1的表达对肺癌细胞干细胞样特性的作用研究

目的:探究HOXC10通过靶向调控CST1的表达对肺癌细胞干细胞样特性的作用。方法:肺癌细胞系A549在无血清培养条件下形成肿瘤球,WB分别检测HOXC10及干性标志蛋白CD44、CD133、Nanog、SOX2、OCT4的表达。构建ShNC、ShHOXC10 A549细胞,检测干性标志蛋白CD44、CD133、Nanog、SOX2、OCT4的表达,肿瘤成球实验检测细胞自我更新能力,CCK8法检测细胞增殖能力。构建ShNC、ShHOXC10肺癌小鼠皮下瘤模型,测定肿瘤体积和重量,免疫组织化学法检测HOXC10、CST1和干性蛋白标志蛋白CD44、CD133在肿瘤组织中的表达。q PCR和WB法检测ShNC、ShHOXC10组A549细胞中CST1 mRNA和蛋白表达,ChIP-PCR和ChIP-qPCR检测HOXC10和CST1启动子序列结合,双荧光素酶报告基因验证HOXC10对CST1启动子活性的调控。在ShHOXC10细胞中回补pcDNA3.1-CST1,检测CST1过表达对干性标志蛋白CD44、CD133、Nanog、SOX2、OCT4表达及肿瘤成球和细胞增殖的影响。结果:HOX...     

miR-4727-5p通过调控EPS8 L3表达抑制乳腺癌细胞的增殖与迁移

目的 探讨微小RNA-4727-5p(miR-4727-5p)靶向表皮生长因子受体激酶底物8样蛋白3(epidermal growth factor receptor kinase substrate 8-like protein 3,EPS8L3)抑制乳腺癌细胞增殖和迁移的分子作用机制.方法 选取2019年2月至20...     

miR-16-5p通过靶向YWHAQ调控乳腺癌耐药细胞的凋亡与迁移能力

目的 探究miR-16-5p对乳腺癌紫杉醇耐药细胞生物学活性的影响及分子机制。方法 以人乳腺癌亲本细胞（SKBR-3）与乳腺癌紫杉醇耐药细胞（SKBR-3/PR）为研究对象。实验设空白对照组、阴性对照组、miR-16-5p类似物组（miR-16-5p mimics）、miR-16-5p抑制剂组（miR-16-5p inhibitor）,YWHAQ干扰组（si-YWHAQ）,以及联合组（miR-16-5p mimics+si-YWHAQ）。利用qRT-PCR检测乳腺癌组织与癌旁组织、SKBR-3与SKBR-3/PR间miR-16-5p的表达水平。使用生信数据对miR-16-5p的靶基因做预测,双荧光素酶实验验证靶向结合。免疫印迹检测细胞YWHAQ、Bcl-2和Bax表达。CCK-8和Transwell检测细胞增殖迁移能力。流式细胞术检测耐药细胞周期凋亡改变。结果 qRT-PCR显示乳腺癌组织中miR-16-5p水平低于癌旁组织（-1.19±1.90 vs 1.59±1.76,P<0.01）。生物信息预测YWHAQ是miR-16-5p的靶基因,荧光素酶实验证实miR-16-5p能够靶...     

ALDH1高表达对乳腺癌细胞MCF-7干细胞特性的影响

目的 探讨ALDH1高表达对乳腺癌MCF-7细胞干细胞特性的影响,为乳腺癌的治疗提供理论依据。方法 构建慢病毒ALDH1RNA,转染乳腺癌MCF-7细胞,嘌呤霉素筛选稳定高表达ALDH1的亚克隆,命名为MCF-ALDH1细胞株。荧光定量PCR和Western blot法检测MCF-ALDH1细胞株及对照细胞中ALDH1在mRNA和蛋白水平的表达;克隆形成实验、悬浮球形成实验及裸鼠成瘤实验检测MCF-ALDH1及对照组细胞的干细胞特性,MTT法测定细胞的耐药性。结果 与MCF-7组细胞比较,MCF-ALDH1细胞株的ALDH1在mRNA和蛋白表达量明显升高;MCF-ALDH1细胞克隆形成数目为128±22个,高于MCF-ALDH1细胞球克隆形成数（46±15个）;悬浮成球实验,MCF-ALDH1细胞悬浮成球数目明显增多（16±2个）,高于对照细胞悬浮球数（8.0±1.5个）;肿瘤细胞在裸鼠皮下接种后,MCF-7细胞组有3只裸鼠成瘤,MCF-ALDH1有5只成瘤,瘤体积明显大于MCF-7组,差异有统计学意义（P<0.05）。耐药实验显示,MCF-ALDH1对顺铂、紫杉醇的耐药性明显提高。结论 高表达ALDH1的乳腺癌MCF-7细胞干细胞特性增强,ALDH1可能成为乳腺癌治疗的靶点之一。     

miR-27b-3p通过靶向SSRP1调控骨肉瘤细胞的生长

目的：探究miR-27b-3p对骨肉瘤（osteosarcoma,OS）细胞生长的影响及其潜在的分子机制。方法：(1)采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)分析miR-27b-3p在骨肉瘤细胞系中的表达;(2)CCK-8实验、集落形成实验及流式细胞术检测miR-27b-3p以及SSRP1对骨肉瘤细胞生长的影响;(3)使用在线数据库预测miR-27b-3p的靶基因并进行筛选,使用双荧光素报告酶实验测定miR-27b-3p与结构特异性识别蛋白1(structure-specific recognition protein-1,SSRP1)的关系;(4)干扰效率以及过表达效率使用Western blot实验验证。结果：(1)miR-27b-3p在骨肉瘤细胞和临床样本中低表达,过表达miR-27b-3p会抑制骨肉瘤细胞的生长;(2)生物信息学分析和双荧光素报告酶实验证实SSRP1为miR-27b-3p的靶基因,SSRP1表达受miR-27b-3p的直接调控;(3)干扰SSRP1的表达会抑制骨肉瘤细胞的增殖,促进凋亡;(4)过表达SSRP1会部分逆转miR-27b-3p对骨肉瘤细胞生长的抑制效...     

乳腺癌干细胞相关miRNA的高通量筛选及miR-25介导自噬对乳腺癌干细胞的调控作用

目的探讨乳腺癌干细胞相关微RNA(miRNA)的高通量筛选及miR-25介导自噬对乳腺癌干细胞的调控作用。方法以MDA-MB-231乳腺癌干细胞为研究对象,通过干细胞成球实验、高通量芯片检测、生物信息学分析、乙醛脱氢酶(ALDH)流式检测、实时自噬活性监测及自噬相关蛋白表达的检测明确miRNA如何通过介导自噬影响乳腺干细胞自我更新能力。结果 miRNA微阵列芯片共筛选出131个差异miRNA,其中56个上调miRNA,57个下调miRNA。与非乳腺癌干细胞相比,一部分miRNA在乳腺癌干细胞上低表达,其中miR-25的表达在乳腺癌干细胞内显著下调约41%。差异的miRNA按照5个数据库(miRWalk、miRanda、miRDB、RNA22和Targetscan)来预测其靶基因,共获得4 565个靶基因。与紫杉醇单药组相比,紫杉醇联用3-甲基腺嘌呤或氯喹均导致成球直径缩小近1/2[(254±16)μm、(226±38)μm比(494±44)μm](均P <0. 05)。与空白对照组相比,紫杉醇组的微管相关蛋白1轻链3-Ⅱ表达水平升高且p62表达水平降低;与Nc+紫杉醇组相比,Mimics+紫杉醇组的UNC-51样激酶1蛋白表达明显降低。结论 miR-25可能是介导自噬活性与乳腺癌干细胞之间的重要信号分子,其表达异常可能与其启动子区域DNA甲基化调控有关。     

miR-34a-5p下调Notch1表达增强三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞对紫杉醇的敏感性

目的:本研究旨在阐明miR-34a-5p是否通过下调Notch1表达,进而增强三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞对紫杉醇的化疗敏感性.方法:qRT-PCR测定MCF-10A细胞与MDA-MB-231细胞miR-34a-5p的表达水平;以miR-34a mimic瞬时转染MDA-MB-231细胞,qRT-PCR与wes...     

miR-148a-3p抑制NRAS表达调控乳腺癌细胞增殖与凋亡的机制

目的 探讨miR-148a-3p在乳腺癌中的作用及可能的机制.方法 根据人乳腺癌细胞株-7(MCF-7)细胞是否转染及是否存在miR-148a-3p的模拟物分为3个组:未转染组、miR-148a-3p对照组和miR-148a-3p转染组.通过实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测转染后miR-148a-3p在各组的信使RNA(mRNA)水平,运用四唑盐比色法(MTT)比较MCF-7细胞在3组的增殖情况,应用RT-qPCR检测各组神经母细胞瘤病毒性ras致癌因子的同原体(NRAS)的基因水平,应用Western blot检测各组RAS病毒致癌基因同源物NRAS的蛋白水平,应用流式细胞术检测各组细胞凋亡情况,应用双荧光素酶报告基因实验验证miR-148a-3p与NRAS之间的作用.结果 过表达miR-148a-3p显著抑制乳腺癌细胞株MCF-7的增殖(P＜0.05),促进其凋亡(P＜0.05),降低NRAS基因和蛋白的表达(P＜0.05),双荧光素酶报告基因实验证明NRAS是miR-148a-3p的直接作用靶点.结论 miR-148a-3p可能通过靶向NRAS抑制乳腺癌MCF-7细胞的增殖,促进细胞凋亡.     

尿路上皮癌相关1基因通过竞争性抑制miR-18a增强乳腺癌细胞的他莫昔芬治疗耐药

目的：探讨尿路上皮癌相关1（urothelial carcinoma-associated 1,UCA1）基因及miR-18a在雌激素受体（estrogen receptor, ER）阳性的乳腺癌细胞他莫昔芬耐药中的作用和调控机制。方法： 通过反转录实时定量PCR测定乳腺癌细胞中UCA1和miR-18a的表达,用双荧光素酶报告实验验证miR-18a和UCA1 3′UTR区域结合。在他莫昔芬敏感的MCF-7细胞中过表达UCA1或敲减miR-18a,在他莫昔芬耐药的LCC9和BT474细胞中敲减UCA1或过表达miR-18a,CCK-8方法测定细胞活力,软琼脂克隆形成实验测定细胞克隆形成能力,流式细胞术测定细胞周期。结果： 他莫昔芬耐药的LCC2、LCC9和BT474细胞中,UCA1表达量显著高于他莫昔芬敏感的MCF-7细胞。MCF-7细胞在0.1 μmol/L 他莫昔芬处理后,UCA1的表达水平显著升高。UCA1过表达提高了MCF-7细胞在他莫昔芬处理后的活力,而UCA1 siRNA则显著降低了LCC9和BT474细胞在他莫昔芬处理后的活力。在MCF-7细胞中,相对于质粒对照+他莫昔芬组,UCA1+他莫昔芬组的克隆数目多19.0%,克隆平均大小增加29.0%,G1期细胞比例减少7.3%,S期细胞增加6.7%。在BT474细胞中,相对于siRNA对照+他莫昔芬组,si-UCA1+他莫昔芬组的克隆数目少54.0%,克隆平均大小减少42.0%,G1期细胞比例增加9.0%,S期细胞减少6.2%。UCA1有一个miR-18a结合位点,敲减miR-18a提高了MCF-7细胞在他莫昔芬处理后的活力,过表达miR-18a则显著降低了BT474细胞在他莫昔芬处理后的活力。在MCF-7细胞中,相对于对照+他莫昔芬组,miR-18a抑制+他莫昔芬组的克隆数目多15.0%,克隆平均大小增加33.0%,G1期细胞比例减少8.8%,S期细胞增加5.3%。在BT474细胞中,相对于对照+他莫昔芬组,miR-18a过表达+他莫昔芬组的克隆数目少47.0%,克隆平均大小减少25.0%,G1期细胞比例增加13.3%,S期细胞减少7.9%。结论： UCA1可以通过竞争性抑制miR-18a增强乳腺癌细胞的他莫昔芬治疗耐药。     

m iR-335通过靶向生存素对乳腺癌细胞增殖的调控作用

目的：探讨miR‐335通过靶向生存素对乳腺癌细胞增殖的调控作用。方法（1）选取乳腺癌组织及癌旁正常组织,分别采用RT‐PCR、Western blot检测组织中 miR‐335及生存素蛋白表达。（2）选取乳腺癌细胞系 MCF‐7,分别转染 miR‐335 mimic及mimic对照组,采用RT‐PCR、Western blot检测组织中miR‐335及生存素蛋白表达。（3）选取乳腺癌细胞系MCF‐7,分别将野生型survivin 3′‐UTR质粒（survivin‐wt）和突变型survivin 3′‐UTR质粒（survivin‐Mut）与miR‐335 mimic或模拟物阴性对照（NC）共转染至乳腺癌细胞系MCF‐7,双荧光素酶报告基因检测细胞荧光素酶活性。（4）选取乳腺癌细胞系MCF‐7,分别转染mimic对照组、miR‐335 mimic及miR‐335 mimic＋survivin ,采用四甲基偶氮唑蓝（MTT）法检测各组细胞增殖活性。结果（1）与癌旁组织相比较,乳腺癌组织中miR‐335表达显著降低（P＜0．05）,同时生存素蛋白表达显著增高（P＜0．05）。（2）与转染mimic对照组相比较,转染miR‐335 mimic可使乳腺癌细胞MCF‐7中miR‐335表达上调（P＜0．05）,同时生存素蛋白表达表达下调（P＜0．05）。（3）与转染NC相比较,共转染miR‐335 mimic与survivin‐wt可使MCF‐7荧光素酶活性降低（P＜0．05）,而共转染miR‐335 mimic与survivin‐Mut则MCF‐7荧光素酶活性无显著性变化（P＞0．05）。（4）转染miR‐335mimic后,MCF‐7增殖活性较转染mimic对照组显著降低（P＜0．05）;而转染miR‐335 mimic＋survivin后,MCF‐7增殖活性较单纯转染miR‐335 mimic显著提高（P＜0．05）,但仍显著低于转染mimic对照组（P＜0．05）。结论在乳腺癌组织中miR‐335呈现低表达,生存素呈现高表达;而miR‐335可通过靶向生存素抑制乳腺癌细胞系MCF‐7增殖。     

miR-373-3p调控小窝蛋白1逆转膀胱癌细胞顺铂耐药的机制研究

目的 探讨微小RNA-373-3p(miR-373-3p)靶向小窝蛋白1(Cav1)对膀胱癌细胞顺铂(DDP)耐药性的影响。方法 建立膀胱癌DDP耐药细胞株T24/DDP,RT-qPCR检测T24细胞与T24/DDP细胞中miR-373-3p表达,在T24/DDP细胞中过表达miR-373-3p或抑制Cav1表达,每组实验设置6个复孔,MTT法检测DDP对T24/DDP细胞的半数抑制浓度(IC₅₀)及细胞增殖活性;流式细胞术检测细胞凋亡;免疫印迹法检测细胞中Cav1、多药耐药相关蛋白(MRP)、P-糖蛋白(P-gp)蛋白表达;双荧光素酶报告基因实验验证miR-373-3p与Cav1的靶向关系。结果 与T24细胞比较,T24/DDP细胞中miR-373-3p表达水平降低(0.34±0.06 vs. 1.00±0.18,t=8.521,P<0.001),Cav1蛋白表达水平升高(0.95±0.10 vs. 0.41±0.06,t=11.342,P<0.001);双荧光素酶报告基因实验证明miR-373-3p可靶向负调控Cav1表达;T24/DDP细胞中过表...     

人参皂苷通过NF-κB/NLRP3途径改善狼疮性肾炎小鼠肾损伤

目的探讨土贝母苷甲通过调控miR-215-5p表达对膀胱癌T24细胞增殖、迁移及侵袭的影响。 方法不同质量浓度土贝母苷甲(10、20、30 mg/L)处理人膀胱癌细胞T24。细胞分别转染miR-NC、miR-215-5p mimics、anti-miR-NC、anti-miR-215-5p,随后用土贝母苷甲(30 mg/L)处理T24细胞。CCK-8实验检测细胞增殖;平板克隆形成实验检测细胞克隆形成能力;Transwell实验检测细胞迁移及侵袭;qRT-PCR法检测miR-215-5p的表达;Western blotting法检测基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、MMP-9蛋白表达。 结果土贝母苷甲作用于T24细胞后,细胞存活率和MMP-2、MMP-9蛋白水平、细胞克隆形成、迁移及侵袭降低(P＜0.05),而miR-215-5p表达升高(P＜0.05),且呈剂量依赖性递减或递增。miR-215-5p过表达可抑制细胞增殖、克隆形成、迁移及侵袭(P＜0.05);抑制miR-215-5p可逆转土贝母苷甲对T24细胞恶性行为的抑制作用。 结论土贝母苷甲可通过促进miR-215-5p的表达而抑制膀胱癌细胞恶性行为。     

土贝母苷甲通过调控miR-215-5p影响膀胱癌T24细胞增殖、迁移及侵袭

目的探究慢性阻塞性肺疾病急性加重期(AECOPD)发生肺部感染危险因素及痰热清联合常规治疗疗效及安全性。 方法选取156例AECOPD患者,感染者50例,未感染者106例。1∶1倾向性评分匹配(PSM)方法分为对照组(n=78)和研究组(n=78);Logistic分析影响AECOPD发生肺部感染危险因素;比较对照组和研究组治疗效果。 结果Logistic结果显示,年龄、病程、一年内COPD住院次数是AECOPD肺部感染危险因素(P＜0.05);相较对照组,研究组治疗总有效率明显增高,复发率降低(P＜0.05);治疗后研究组肺功能和动脉血气指标改善更为显著(P＜0.05)。 结论年龄、病程、一年内因慢性阻塞性肺病COPD住院次数及治疗方案是影响AECOPD患者发生肺部感染的危险因素;痰热清注射液可改善患者肺功能,降低再入院率。     

miR-520a-5p通过调控有氧糖酵解诱导前列腺癌细胞多西他赛耐药

目的：探索mi R-520a-5p对前列腺癌增殖能力和多西他赛耐药性的影响及其作用机制。方法：使用RT-q PCR检测PC-3/DU145前列腺癌细胞及RWPE-1前列腺正常上皮细胞中mi R-520a-5p表达水平;使用免疫印迹检测mi R-520a-5p是否调控糖酵解关键酶己糖激酶2(hexokinase 2,HK2)和磷酸果糖激酶(phosphofructokinase,PFKM)表达水平;使用CCK-8实验检测mi R-520a-5p对前列腺癌细胞增殖能力和多西他赛耐药性的影响;使用ELISA评估培养上清中葡萄糖消耗水平和乳酸生成水平。依据转染物的不同,将所有细胞分成4组：minic组、minic NC组、inhibitor组、inhibitor NC组。结果：mi R-520a-5p在前列腺癌细胞中表达下调(P<0.001)。与minic NC组比较,minic组可显著降低PC-3和DU145前列腺癌细胞的增殖能力(P<0.001)、多西他赛半抑制浓度(IC₅₀)、葡萄糖消耗水平和乳酸生成水平(P<0.001);与inhibitor N...     

紫杉醇耐药乳腺癌细胞外泌体来源的miR-5585-5p诱导乳腺癌细胞产生耐药表型研究

目的研究紫杉醇耐药乳腺癌细胞外泌体来源的miR-5585-5p对乳腺癌细胞迁移、凋亡和耐药性的影响。方法超速离心法获取外泌体,使用qRT-PCR方法分别检测乳腺癌细胞（SKBR-3）和紫杉醇耐药乳腺癌细胞（SKBR-3/PR）细胞株和外泌体中miR-5585-5p的表达量;通过外泌体共培养技术以及在乳腺癌耐药细胞中转染miR-5585-5p的抑制剂,用Transwell检测其迁移能力,流式细胞术检测其凋亡情况;qRT-PCR和Western blotting检测其耐药指标。结果与SKBR-3相比,miR-5585-5p在耐药细胞SKBR-3/PR细胞株和外泌体中表达均上调（P < 0.01和P < 0.05）;在耐药细胞株中转染miR-5585-5p的抑制剂,Transwell、流式分析等结果显示,与对照相比,抑制剂组的耐药性下降,生物学活性降低（P < 0.01）;耐药细胞源性的外泌体与亲本细胞共培养可使SKBR-3细胞产生耐药表型,增强其迁移能力,抑制其凋亡率（P < 0.01）,而转染抑制剂的耐药细胞分泌的外泌体可减弱这一作用。结论紫杉醇耐药乳腺癌细胞通过外泌体递送高表达的miR-5585-5p至亲本细胞并诱导亲本细胞产生耐药表型,外泌体miR-5585-5p可为乳腺癌耐药治疗提供新的分子靶点,为乳腺癌预后评估提供新的生物标志物。     

外泌体介导的miR-18b-5p调控NEDD9对乳腺癌细胞增殖、迁移、侵袭的影响

目的:探讨miR-18b-5p调控神经前体细胞表达下调蛋白9(NEDD9)对乳腺癌细胞侵袭、迁移的影响及其作用机制.方法:qRT-PCR检测人正常乳腺癌上皮细胞MCF-10A与2株乳腺癌细胞株(SKBR-3和SKBR-3/PR)中miR-18b-5p的表达水平;Western blotting检测SKBR-3/PR细胞...     

Snail调控乳腺癌细胞中MTDH表达机制的研究

目的分析乳腺癌细胞中Snail与MTDH基因的作用,明确Snail是否通过结合于MTDH的启动子区域促进乳腺癌转移。方法克隆、转染Snail基因至乳腺癌细胞,观察过表达Snail的乳腺癌细胞中MTDHmRNA及蛋白表达的变化;再使用免疫共沉淀法检测Snail与MTDH基因的共作用。结果转染Snail基因进入乳腺癌MDAMB-435细胞后,转染组、空白组和对照组中MTDHmRNA的表达水平分别为1.61±0.22、1.02±0.18、0.99±0.20,转染组高于空白组和对照组,差异有统计学意义(P<0.05),而后两组表达无差异(P>0.05);Westren blot检测结果显示,Snail可促进MTDH蛋白的表达;免疫共沉淀显示,Snail与MTDH在细胞内存在相互结合作用。结论 Snail在乳腺癌细胞中可通过结合于MTDH基因的启动子区域,促进MTDHmRNA转录及相关蛋白的表达,从而导致乳腺癌转移。