lncGAS5通过NCAM1调节细胞自噬抑制A549细胞增殖

目的 研究长链非编码RNA GAS5通过神经细胞黏附分子1(neural cell adhesion molecule 1,NCAM1)调节非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer, NSCLC)A549细胞增殖机制。方法 CCK8法分别检测Control组、LV-sg-NC组(空载体的慢病毒转染A549细胞作为阴性对照组)、LV-sg-lncGAS5组(携带sg-lncGAS5的慢病毒转染A549细胞作为实验组)OD值及A549细胞相对存活率。QPCR分别检测Control组、LV-sg-NC组、LV-sg-lncGAS5组A549细胞中lncRNA GAS5及NCAM1的表达。免疫荧光实验检测在A549细胞中过表达及敲降lncRNA GAS5后,微管相关蛋白1A/1B-轻链3(MAP1LC3、LC3)的表达;检测过表达NCAM1后,LC3的表达,并在过表达NCAM1的A549细胞中加入ERK抑制剂,检测LC3的表达。结果 抑制lncGAS5表达后,A549细胞相对存活率增高(P<0.001)。并且A549细胞感染sg-lncGAS5病毒后可发现lnc...     

阿糖胞苷对人肺腺癌细胞A549凋亡和脂质过氧化的影响

目的探讨阿糖胞苷（Ara-C）对人肺腺癌细胞A549凋亡和脂质过氧化的影响。方法采用四唑氮蓝（MTT）法测定不同浓度和时间阿糖胞苷对A549细胞的生长抑制作用;采用羟胺比色法对超氧化物歧化酶（SOD）活性进行测定,硫代巴比妥酸比色法进行丙二醛（MDA）含量测定,5.5-二硫代双（2-硝基苯甲酸）比色法进行还原性谷胱甘肽（GSH）含量、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）活力测定。吖啶橙（AO）/溴乙锭（EB）混合染色检测A549细胞凋亡。结果 Ara-C对A549细胞的增殖有明显抑制作用,并具有明显的时效和量效关系。随着干预剂量的增加,细胞内MDA含量水平逐渐升高,与对照组比较（P〈0.05,P〈0.01）;GSH含量,SOD、GSH-Px活性则逐渐下降,与对照组比较（P〈0.05,P〈0.01）;阿糖胞苷作用A549细胞后可以出现凋亡增高和形态学改变。结论阿糖胞苷对人肺腺癌A549细胞有生长抑制作用,并引起脂质过氧化水平改变,其机制可能与诱导A549细胞周期阻滞和凋亡有关。     

鸦胆子油乳对人非小细胞肺癌A549细胞增殖、迁移和自噬的影响及机制

目的：探讨鸦胆子油乳对人非小细胞肺癌A549细胞增殖、迁移和自噬的影响及机制。方法：以A549细胞 为研究对象,先采用不同浓度的鸦胆子油乳处理,并将其分为对照组和低、中、高剂量鸦胆子油乳组(0,2.5,5.0, 10.0 mg/mL);再采用5.0 mg/mL鸦胆子油乳或3-甲基腺嘌呤(3-methyladenine,3-MA)+5.0 mg/mL鸦胆子油乳处理,并将 其分为鸦胆子油乳组和3-MA+鸦胆子油乳组。采用细胞计数试剂盒(cell counting kit-8,CCK-8)和克隆形成实验检测细 胞增殖,划痕实验和Transwell实验测量细胞迁移;应用细胞免疫荧光和Western印迹分析细胞自噬。结果：与对照组 (0 mg/mL)相比,低、中、高剂量(2.5,5.0,10.0 mg/mL)鸦胆子油乳组的A549细胞增殖受抑制、细胞克隆形成数减 少、细胞迁移率降低、Transwell穿膜细胞数减少(均P<0.05),且呈现剂量依赖性(均P<0.05);与对照组(0 mg/mL)相 比,5.0 mg/mL鸦胆子油乳组的A549细胞微管相关蛋白轻链3(microtu-bule associated protein 1 light chain 3,LC3)绿色荧 光聚集、LC3-II/LC3-I比值增加,p62水平降低(均P<0.05);与鸦胆子油乳组(5.0 mg/mL)相比,3-MA+鸦胆子油乳组的 A549细胞增殖增加,细胞克隆形成数、细胞迁移率和Transwell穿膜细胞数增多(均P<0.05)。结论：鸦胆子油乳可诱导 非小细胞肺癌A549细胞自噬,可参与肿瘤细胞增殖和迁移的抑制作用。     

槲皮素对肺腺癌A549细胞生长的影响

目的 观察槲皮素对肺腺癌A549细胞生长及对hTERT基因表达的影响. 方法以台盼蓝拒染法计数肺腺癌细胞的生长抑制率,透射电镜和DNA Ladder实验了解A549细胞凋亡的发生;PCR-TRAP法检测端粒酶活性,实时RT-PCR检测hTERT mRNA表达.结果 台盼蓝拒染法计数显示槲皮素抑制肺腺癌A549细胞增殖的作用明显,且呈剂量和时间依赖性,槲皮素处理48 h后的IC50为22.5 μmol/L.DNA Ladder实验和透射电镜形态学检测显示出细胞凋亡的特征性变化,细胞呈现核固缩、染色质边集、凋亡小体形成等典型凋亡表现.经槲皮素处理后肺腺癌A549细胞hTERT mRNA表达降低,端粒酶活性受抑制. 结论槲皮素能抑制肺腺癌细胞的生长,呈时间、剂量依赖性,能诱导A549细胞凋亡,其抑制增生与诱导凋亡的机制可能与下调hTERT 基因表达,抑制端粒酶活性,破坏端粒稳定性有关.     

白藜芦醇诱导肺腺癌A549细胞凋亡的作用机制

目的探讨白藜芦醇(Res)对肺腺癌A549细胞凋亡的作用及其机制。方法常规培养肺腺癌A549细胞(购于中国科学院细胞生物学研究所)至对数生长期,加入不同浓度的Res(终浓度分别为3、10、30、60、100、200、300 mg/L),以Res 0 mg/L为对照组,采用噻唑蓝(MTT)比色法检测不同浓度的Res对A549细胞的吸光度值,计算细胞的生长抑制率;采用Annexin-Ⅴ/PI双染法检测Res对肺腺癌A549细胞凋亡的影响;采用逆转录酶-聚合酶联反应(RT-PCR)检测端粒酶mRNA和β-actin mRNA的相对活性。结果 MTT检测显示Res呈剂量依赖性抑制A549细胞增殖。与对照组比较,不同浓度(10、30、100 mg/L) Res可抑制A549细胞增殖; Annexin-Ⅴ/PI检测结果显示,与对照组比较,随着Res剂量(10、30、100 mg/L)的增加,A549细胞的凋亡数升高,差异有统计学意义(P <0. 05);与对照组比较,不同剂量Res(10、30、100 mg/L)诱导端粒酶mRNA相对含量明显下降,差异有统计学意义(P <0. 05)。结论 Res可诱导肺腺癌A549细胞凋亡,其机制可能与抑制端粒酶活性有关。     

PEDF对人肺腺癌A549细胞增殖与凋亡的影响

目的探讨不同浓度色素上皮衍生因子( PEDF)作用不同时间对体外培养的人肺腺癌A549细胞增殖和凋亡的影响。方法用不同浓度(0、80、160、320、640 nmol/L)的重组人PEDF蛋白对体外培养的人肺腺癌细胞株A549进行干预,在处理24、48、72 h后,分别用MTT法检测PEDF对A549细胞增殖的抑制率并比较;在作用48 h后,以流式细胞仪检测技术计算、分析 A549细胞凋亡率。结果不同浓度PEDF(0、80、160、320、640 nmol/ L)干预A549细胞相同作用时间(24、48、72 h)情况下,随着PEDF 浓度的增加,PEDF 对 A549细胞的增殖抑制率递增(P <0.05);相同PEDF 浓度(80、160、320、640 nmol/ L)情况下,除了80、160 nmol/ L PEDF 作用24 h 和48 h 的细胞增殖抑制率间差异无统计学意义外,随着PEDF 作用时间的延长,PEDF 对A549细胞的增殖抑制率也基本呈递增趋势(P <0.05)。上述不同浓度的PEDF 处理A549细胞48 h,细胞凋亡率随着PEDF 浓度的升高呈递增趋势(P <0.05)。结论摇PEDF 在体外能抑制人肺腺癌细胞株A549的增殖并诱导其凋亡。PEDF 抑制细胞增殖作用可能和PEDF 浓度及作用时间有关,PEDF 诱导细胞凋亡作用的强弱也与PEDF 浓度有一定关系。     

芹菜素通过AMPK/mTOR通路调控肺癌A549细胞自噬

目的 探讨芹菜素（APG）对肺癌A549细胞增殖及自噬的影响及其与AMPK/mTOR通路的关系。方法 体外培养肺癌A549细胞,采用CCK-8法检测不同浓度芹菜素处理A549细胞不同时间后对细胞增殖的影响。后续实验分为空白对照组(0 μmol/L APG),低、中、高浓度实验组和抑制剂组5组,采用MDC染色法检测各组对细胞自噬的影响,免疫印迹法检测自噬相关蛋白以及AMPK/mTOR通路相关蛋白表达情况。结果 芹菜素可显著抑制A549细胞增殖,且呈浓度依赖性（P<0.05）;20、40、80 μmol/L芹菜素组随作用时间延长,对A549细胞的增殖抑制率逐渐增加,呈时间依赖关系（P<0.05）。与空白对照组比较,实验组A549细胞中含高亮点状荧光的自噬小泡数量及IOD值逐渐增加（P<0.05）,芹菜素可浓度依赖性上调LC3Ⅰ、LC3Ⅱ、p-AMPKα蛋白表达水平及p-AMPKα/AMPKα比值（P<0.05）,下调p-mTOR、p62蛋白表达水平及p-mTOR/mTOR比值（P<0.05）。与高浓度实验组比较,抑制剂组细胞中含高亮点状荧光的自噬小泡减少,IOD值下降,LC3Ⅰ、LC3Ⅱ、p-AMPKα蛋白表达水平及p-AMPKα/AMPKα比值降低,而P62、p-mTOR蛋白表达水平及p-mTOR/mTOR比值升高（P<0.05）。结论 芹菜素能抑制肺癌A549细胞增殖,诱导其自噬,作用机制可能与AMPK/mTOR通路有关     

欧当归内酯A对人胶质瘤细胞U251细胞凋亡及自噬的影响

目的 探讨欧当归内酯A(LA)对人胶质瘤细胞U251凋亡及自噬的影响。方法 将对数生长期的U251细胞随机分为空白组、30μmol·L^-1LA组、60μmol·L^-1LA组、90μmol·L^-1LA组,分别用含有0、30、60、90μmol·L^-1的LA培养基培养24、48、72 h,应用细胞计数试剂盒(CCK-8)检测4组细胞的增殖能力,应用流式细胞术检测4组细胞培养24 h时的细胞凋亡率。将对数生长期的U251细胞分为空白组、3-甲基腺嘌呤(3-MA)组、90μmol·L^-1LA组、30μmol·L^-1LA+3-MA组、60μmol·L^-1LA+3-MA组、90μmol·L^-1LA+3-MA组,空白组不加LA和3-MA,其余5组分别加入含0、90、30、60、90μmol·L^-1 LA和1、0、1、1、1 mmol·L^-1 3-MA的培养基培养24 h,采用CCK-...     

黄芪总苷对人肺腺癌A549细胞增殖及凋亡的影响

目的:研究黄芪总苷(TA)对人肺腺癌A549细胞增值及凋亡的影响.方法:采用不同药物浓度作用于人肺腺癌A549细胞,应用MTT、DNA琼脂糖凝胶电泳、流式细胞术分析药物对细胞的影响.结果:TA对A549细胞有明显的生长抑制及凋亡作用,并呈剂量、时间依赖性.DNA凝胶电泳显示出特征性凋亡梯状带.结论:在一定条件下,TA可抑制人肺腺癌细胞增殖,抑制作用具有明显的浓度和时间依赖性,同时可诱导其凋亡,凋亡可能与细胞周期阻滞有关.     

紫草素诱导肺腺癌A549细胞凋亡及其机制的研究

目的 研究紫草素(shikonin, SK)诱导肺腺癌A549细胞凋亡及其作用机制。方法 不同浓度紫草素作用于肺腺癌A549细胞后,CCK-8法检测细胞的增殖情况;DAPI荧光染色法和FCM检测细胞凋亡;Western blotting检测紫草素处理48h后Bax、Bcl-2、p-Akt、p-ERK1/2的蛋白水平。结果 紫草素显著抑制肺腺癌A549细胞的增殖活性(P<0.05),诱导细胞凋亡,与空白对照组比较,紫草素处理组Bax表达上调(P<0.05),Bcl-2、p-Akt、P-ERK1/2表达下调(P<0.05)。结论 紫草素可以显著抑制肺腺癌A549细胞增殖,诱导细胞凋亡,其机制可能与线粒体凋亡途径,PI3K/Akt信号通路和ERK 1/2信号通路有关。     

三七皂苷诱导人肺腺癌A549细胞凋亡作用

目的 探讨三七皂苷（panax notoginseng saponins,PNS）对人肺腺癌A549（hA549）细胞的致凋亡作用.方法 体外培养的hA549细胞,经不同浓度的PNS或联合应用磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）特异性抑制剂LY294002处理.采用MTT比色法检测肺腺癌A549细胞存活率,Hoechst33258荧光染色法检测其细胞形态学变化,流式细胞术检测细胞凋亡率,Western blot检测凋亡抑制基因Bcl-2、Bax和蛋白激酶B（Akt）蛋白的表达.结果 PNS能降低肺腺癌细胞的存活率,且其效应随剂量和作用时间的增加有增强的趋势;在PNS组可见细胞核出现固缩、边集和凋亡小体,并发现肺癌细胞凋亡率提高,细胞内Bax蛋白表达上调,Bcl-2、Akt蛋白表达下调.各浓度PNS组与空白对照组及溶剂对照组相比,差异均有统计学意义（P＜0.05）;PNS与LY294002联合应用则具有协同作用,可进一步促进肺癌细胞的凋亡及其细胞内的Bax蛋白表达上调和Bcl-2及Akt蛋白表达下调,与单用PNS组相比差异具有统计学意义（P＜0.05）.结论 PNS具有降低肺癌细胞存活率、诱导癌细胞凋亡的作用,并与PI3K特异性抑制剂LY294002具有协同作用,这可能与抑制PI3K/Akt信号通路、促进凋亡蛋白表达有关.     

FBXO11基因对肺腺癌A549细胞迁移的影响

目的 研究泛素连接酶复合体特异性亚基FBXO11的表达对肺腺癌A549细胞迁移的影响.方法 将A549细胞株分为3组:Blank组、阴性对照RNA组和siRNA-FBXO11组,应用Lipofectamine 2000将阴性对照RNA、siRNA-FBXO11分别转染至A549细胞中.RT-PCR法检测FBXO11的mRNA,Western blot法检测FBXO11和Snai1的蛋白表达,划痕修复实验检测细胞迁移能力.结果 与Blank组和阴性对照RNA组比较,siRNA-FBXO11组FBXO11的mRNA水平和蛋白水平显著降低(P<0.05),而Blank组与阴性对照RNA组比较,FBXO11的mRNA水平和蛋白水平无显著性差异;与Blank组和阴性对照RNA组比较,siRNA-FBXO11组的Snail蛋白表达水平显著增加(P<0.05),而Blank组与阴性对照RNA组比较,Snail蛋白表达水平无显著性差异;划痕实验结果显示:与Blank和阴性对照RNA组比较,siRNA-FBXO11组的细胞迁移距离显著增加(P<0.05),而Blank组与阴性对照RNA组比较,细胞迁移距离无显著性差异.结论 FBXO11抑制肺腺癌A549细胞的迁移能力,这可能与Snail调控有关.     

SIRT1对肺癌A549细胞增殖和迁移的影响

目的 通过调节肺癌A549细胞中沉默信息调节因子1(SIRT1)的表达,探讨SIRT1对肺癌细胞增殖和转移的影响及其分子机制.方法 培养肺癌A549细胞,用重组腺病毒感染A549细胞上调/下调SIRT1的表达;通过MTT实验、克隆形成实验、划痕实验和Transwell迁移实验检测上调/下调SIRT1表达对肺癌A549细胞增殖和转移的影响;干扰SIRT1表达后用Western blot检测SIRT1对肺癌A549细胞中上皮细胞向间质细胞转化(EMT)相关蛋白标记物ZO-1、β-连环蛋白(β-catenin)、Snail和ZEB1表达的影响.结果 上调/下调SIRT1表达对肺癌A549细胞增殖无明显影响,但是可以促进/抑制肺癌A549细胞迁移;下调SIRT1表达后EMT相关上皮性标记蛋白ZO-1表达增多,间质性标记蛋白β-catenin、Snail和ZEB1表达减少.结论 SIRT1可能通过影响EMT相关标记蛋白的表达促进肺癌A549细胞迁移.     

Bcl-xl反义寡核苷酸转染对肺腺癌A549细胞增殖及凋亡的影响

目的研究Bcl-xl反义寡核苷酸(ASODN)对肺腺癌A549细胞增殖及凋亡的影响。方法将肺腺癌A549细胞分为细胞对照组(无脂质体及核酸)、脂质体(Lip)组(空脂质体,无核酸)、序列对照寡核苷酸(SCODN)组和ASODN组,设计合成特异性靶向Bcl-xl ASODN,用阳离子脂质体介导其转染肺腺癌A549细胞株。采用细胞计数试剂盒(CCK8)法检测A549细胞增殖抑制率;末端脱氧核苷酰基转移酶介导性d UTP切口末端标记(TUNEL)法检测A549细胞凋亡情况;反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot法检测A549细胞中Bcl-xlm RNA和蛋白表达水平。结果 ASODN和SCODN浓度为50 nmol·L~(-1)时,各组A549细胞增殖抑制率比较差异均无统计学意义(P>0.05);浓度为100、200、400 nmol·L~(-1)时,ASODN组A549细胞增殖抑制率均高于SCODN组和Lip组(P<0.05);ASODN对细胞增殖抑制作用随其浓度增加而增高,具有剂量依赖性(P<0.05)。细胞对照组、Lip组、SCODN组和ASODN组细胞凋亡率分别为(4.01±0.18)%、(5.23±0.22)%、(8.01±0.32)%和(41.50±1.91)%,ASODN组细胞凋亡率高于SCODN组、Lip组和细胞对照组(P<0.05)。ASODN和SCODN浓度为50 nmol·L~(-1)时,各组A549细胞中Bcl-xl mRNA表达量比较差异均无统计学意义(P>0.05);浓度为100、200、400 nmol·L~(-1)时,ASODN组A549细胞中Bcl-xl mRNA表达量均低于SCODN组、Lip组和细胞对照组(P<0.05);ASODN组A549细胞中Bcl-xl mRNA表达量随浓度增加相应地下降(P<0.05);SCODN组和Lip组Bcl-xl mRNA表达量较细胞对照组下降,但差异均无统计学意义(P>0.05)。细胞对照组、Lip组、SCODN组和ASODN组A549细胞中Bcl-xl蛋白表达量分别为0.62±0.17、0.67±0.27、0.62±0.21和0.23±0.10,ASODN组A549细胞中Bcl-xl蛋白表达量低于细胞对照组、Lip组和SCODN组(P<0.05)。结论转染Bcl-xl ASODN可下调Bcl-xl基因表达,能有效抑制A549细胞增殖,并显著促进A549细胞凋亡;Bcl-xl基因有望成为肺腺癌基因治疗的新靶点。     

端粒酶反义寡核苷酸抑制端粒酶活性和诱导肺腺癌A549细胞凋亡的研究

目的 研究端粒酶反义寡核苷酸在肺腺癌A549细胞中抑制端粒酶活性和诱导细胞凋亡的能力.方法 用脂质体将荧光标记的端粒酶反义寡核苷酸转染入肺腺癌A549细胞后,TRAP-PCR-ELISA检测端粒酶活性变化,凋亡细胞用透射电镜(TEM)观察,TUNEL法检测各组细胞凋亡率.结果 转染72h后,端粒酶反义寡核苷酸进入A549细胞内,端粒酶活性显著降低.透射电镜下,端粒酶反义寡核苷酸转染组细胞凋亡增加,细胞凋亡率比其他组明显增高,差异有统计学意义(P＜0.01).结论 端粒酶反义寡核苷酸能靶向端粒酶,抑制其活性,并诱导肺腺癌A549细胞凋亡.     

5,7-二甲氧基黄酮通过线粒体途径诱导人肺癌A549细胞凋亡

目的 探讨5,7-二甲氧基黄酮(5,7-dimethoxyflavone,5,7-DMF)诱导人肺癌A549细胞凋亡及其机制.方法 体外培养A549细胞.MTT法测定5,7-DMF对A549细胞活性的抑制作用;Annexin V/PI双染色分析细胞凋亡率;JC-1探针流式细胞术分析线粒体跨膜电位;Western Blotting法分析线粒体细胞色素c的释放和Bax蛋白表达.结果 5,7-DMF抑制人肺癌A549细胞活性,呈浓度依赖性.Annexin V/PI法检测结果显示10μmol/L的5,7-DMF作用A549细胞6、12和24h后,其凋亡率分别为(6.58±0.65)％、(16.70±1.85)％和(28.60±3.52)％.JC-1探针流式细胞术分析表明,5,7-DMF能降低'A549细胞线粒体跨膜电位.Western Blotting法分析证实,5,7-DMF能促进线粒体细胞色素c的释放和上调Bax蛋白表达.结论 5,7-DMF具有诱导A549细胞凋亡的作用,其作用机制与激活线粒体诱导凋亡途径有关.     

二甲双胍联合培美曲塞对人肺腺癌A549细胞增殖及凋亡的影响

目的：研究二甲双胍（metformin,Met）联合培美曲塞（pemetrexed,Pem）对人肺腺癌A549细胞株的增殖及凋亡的影响。方法：不同浓度Met（0、2.5、5.0、10.0、20.0、40.0 mmol/L）、Pem（0、0.5、1.0、2.0、4.0、8.0 μmol/L）48 h下处理A549细胞,CCK?8法检测细胞增殖率并确定Met及Pem的半抑制浓度（IC50）;Met（IC50）及Pem（IC50）单用或联用,不同时间（24、36、48 h）下处理A549细胞,CCK?8法检测细胞增殖率;流式细胞术检测细胞凋亡率;Western blot 检测Bcl?2、Bax、Mcl?1、Noxa蛋白表达。结果：①不同浓度Met及Pem对A549 细胞均有增殖抑制作用,呈剂量依赖性（P＜0.05）;②Met+Pem组作用A549细胞增殖抑制率优于单药组（P＜0.05）,呈时间依赖性（P＜0.05）;③Met+Pem组作用 A549细胞的凋亡率（30.6 ± 0.4）%优于Met组凋亡率（13.3 ± 0.3）%和Pem组凋亡率（12.9 ± 0.1）%（P＜0.05）;④与单药组相比,Met+Pem组明显下调Bcl?2、Mcl?1蛋白表达,上调Bax、Noxa蛋白表达（P＜0.05）。结论：Met联合Pem可抑制A549细胞增殖、诱导凋亡,其效果优于单药,机制可能与下调Bcl?2、Mcl?1蛋白,上调Bax、Noxa蛋白的表达有关。