间歇性禁食对小鼠脑缺血再灌注TLR4/NF-κB通路的作用

目的 探讨间歇性禁食对小鼠脑缺血再灌注损伤中TLR4/NF-κB通路的作用及对脑缺血再灌注损伤的保护机制。方法 KM小鼠45只平均随机分为假手术组(Sham组)、正常饮食组(CIRI组)和间歇性禁食组(IF组)。IF组造模前连续间歇性禁食14天,除Sham组外,其他各组构建小鼠脑缺血再灌注损伤模型,观察各组小鼠行为学变化,HE染色观察细胞形态,免疫组化法测定TLR4及NF-κB阳性细胞的表达情况。结果 IF组神经功能缺损评分较CIRI组明显下降(P<0.05),IF组TLR4及NF-κB阳性细胞表达较CIRI组明显下降(P<0.05)。HE染色显示IF组缺血半暗带及海马区神经元细胞深染及皱缩较CIRI组明显减轻,细胞形态明显改善。结论 间歇性禁食对小鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用可能与减轻炎症,抑制TLR4及NF-κB的表达有关。     

TLR4和NF-κBp50在肾缺血再灌注损伤中的表达及意义

目的:观察大鼠肾缺血再灌注后Toll样受体4(Toll-like receptors 4,TLR4)和细胞核因子kappa B(Nuclearfactor kappa B,NF-k B)p50蛋白的表达情况,探讨它们参与肾缺血再灌注损伤的作用机理.方法:SD雄性大鼠48只随机分为对照组(Control组,简称C组)、缺血再灌注组(Ischemia-repeffusion组,简称Ir组)2个实验组,每组各4个时相(6、12、24、72 h).采用切除右肾,夹闭左肾动脉45 min后恢复灌流建立肾缺血再灌注损伤模型.免疫组化二步法检测大鼠肾组织中TLR4和NF-kBp50蛋白的表达情况,测定髓过氧化物酶(Myeloperoxidase,Mpo)活性及血清肌酐(Serum creatinine,Scr)水平以反映中性粒细胞活化及肾功能损害的程度.结果:TLR4和NF-kBp50蛋白在C组中几乎无表达,Ir组中表达明显增强(P＜0.01).与C组比较,Ir组Scr水平明显升高,Mpo活性显著增加(P＜0.01).结论:肾缺血再灌注损伤的发生可能与TLR4活化NF-kB诱导的炎症反应有关.     

栀子苷抑制TLR4/RIP3/NF-κB信号通路对急性胰腺炎大鼠肠损伤的影响

目的 研究栀子苷抑制Toll样受体4(TLR4)/受体相互作用蛋白3(RIP3)/核转录因子-κB(NF-κB)信号通路对急性胰腺炎(AP)大鼠肠损伤的影响。方法 以胰管逆行注射牛磺胆酸钠溶液的方法建立AP大鼠模型,随机分为模型组、栀子苷低剂量(40 mg/kg)组、栀子苷高剂量(80 mg/kg)组、栀子苷(80 mg/kg)+脂多糖(LPS,TLR4激活剂,0.4 mg/kg)组4组(每组12只),另取12只大鼠开腹后仅翻转胰腺,不做其他处理,设为假手术组。以栀子苷、LPS分组对大鼠进行干预处理后,检测大鼠疾病活动指数(DAI)和结肠大体形态损伤评分;检测大鼠肠道通透性,比较荧光素异硫氰酸酯(FITC)葡聚糖浓度;HE染色检测大鼠结肠黏膜组织病理损伤,并进行Chiu评分;酶标仪检测大鼠血清D-乳酸、细胞间黏附分子-1(ICAM-1)、二胺氧化酶(DAO)、白细胞介素(IL)-17、IL-1β与IL-6水平;蛋白免疫印迹实验检测大鼠肠黏膜组织TLR4/RIP3/NF-κB信号通路相关蛋白表达。结果 与假手术组相比,模型组大鼠肠黏膜组织出现病理损伤严重,DAI、结肠大体形态损伤评分、C...     

缺血后处理对大鼠脑缺血再灌注时TLR4和NF-κB表达的影响

目的了解缺血后处理(IP)对大鼠局灶性脑缺血再灌注时Toll样受体4(TLR4)和核因子-κB(NF-κB)表达的影响,探讨TLR4-NF-κB信号通路在脑IP中的作用。方法成年健康雄性SD大鼠110只,随机分为假手术组(sham组,n=10)、缺血再灌注组(I-R组,n=50)和后处理组(IP组,n=50),后两组根据再灌注时间又分为6、12、24、48、72h亚组(n=10)。I-R组:线栓大脑中动脉2h后,拔出线栓完成持续性再灌注,建立局灶脑缺血再灌注模型;IP组:大脑中动脉阻闭2h后,持续再灌注前行再灌注15s、缺血15s,反复3次;sham组:不施加缺血及再灌注处理。对各组大鼠进行神经行为学评分,行TTC染色测定脑梗死体积,免疫组化法检测脑组织TLR4和NF-κB蛋白的表达,原位杂交法检测TLR4和NF-κB mRNA的表达。结果 I-R组大鼠可见神经行为学的缺失及缺血侧大脑半球梗死。与I-R组相比,IP组大鼠脑梗死体积明显减小,神经行为学评分改善,差异有显著性(t=2.683～5.657,P0.05)。TLR4、NF-κB蛋白及mRNA在sham组额顶叶有微弱表达,在I-R组和IP组的表达于再灌注6h时开始升高,24h达高峰(F=7.995～11.704,q=4.770～9.001,P0.05);与I-R组各相应亚组比较,IP组TLR4、NF-κB蛋白及mRNA表达均明显降低,差异均有显著性(t=2.333～6.916,P0.05)。结论 IP可下调TLR4和NF-κB的表达,减轻大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤,改善神经功能。     

乳化异氟烷预处理对大鼠心肌缺血再灌注时TLR4-α、NF-κB及血清中炎症细胞因子的影响

目的 探讨乳化异氟烷预处理对心肌缺血再灌注损伤可能的保护作用.方法 健康雄性SD大鼠48只,体重230~280 g,随机分成4组(n=12):S组(假手术)、IR组(缺血再灌注)、L组(脂肪乳剂预处理)、EI组(乳化异氟烷预处理).取大鼠(每组6只),于再灌注120 min后采集股动脉血2 mL用于测定血清中心肌钙蛋白I(cTnI)浓度及肌酸激酶同工酶(CK-MB)活性,实验结束后红四氮唑染色(TTC)法测定心肌梗死范围.另取大鼠(每组6只)于再灌注30 min(T1)、再灌注120 min(T2)时采集股动脉2 mL,采用酶联免疫吸附法(ELISA)测定血清中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素-10(IL-10)的浓度,随后处死大鼠,取心脏,采用荧光定量逆转录聚合酶链反应(Real-time PCR)法测定心肌组织中TLR4 mRNA表达、Western blot法测定心肌细胞核因子-κB(NF-κB)活性,电镜下观察心肌细胞超微结构的变化.结果 与S组比较,IR组、L组和EI组心肌细胞TLR4 mRNA表达增强,NF-κB活性升高,血清TNF-α、IL-10、cTnI浓度及CK-MB活性升高,心肌梗死面积增加(P<0.05);与IR组比较,EI组心肌细胞TLR4 mRNA表达明显减弱,NF-κB活性降低,血清TNF-α、IL-10、cTnI浓度及CK-MB活性降低(P<0.05),IL-10浓度升高(P<0.05),心肌梗死面积减小(P<0.05),而L组上述指标差异无统计学意义.电镜结果显示:EI组心肌细胞损伤程度较IR组和L组减轻.结论 乳化异氟烷预处理对缺血再灌注心肌具有一定的保护作用,这种保护作用可能与乳化异氟烷抑制TLR4 mRNA表达,降低NF-κB活性,抑制炎性反应有关.     

紫檀芪通过TLR4/NF-κB信号通路对肺纤维化大鼠的保护作用

目的:基于Toll样受体4(TLR4)/核转录因子-κB(NF-κB)信号通路观察紫檀芪(PTE)对博来霉素诱导的肺纤维化大鼠炎症反应和氧化应激的影响。方法:采用气管内注射博来霉素溶液制备大鼠肺纤维化模型。随机分为正常对照组、模型组、紫檀芪组(30 mg/kg)及强的松组(强的松3 mg/kg)。取肺组织进行Masson染色,试剂盒检测羟脯氨酸(HYP)含量、总抗氧化能力(T-AOC)及谷胱甘肽(GSH)表达水平,免疫组化法检测肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)、一氧化氮合酶(iNOS)的含量,Western Blot和PCR检测大鼠肺组织Toll样受体4(TLR4)、核转录因子-κB p65(NF-κB p65)的蛋白和mRNA的表达。结果:与模型组比较,紫檀芪组大鼠肺组织中HYP、TNF-α、IL-1β、iNOS蛋白表达量下降,T-AOC、GSH表达增强,TLR4和NF-κB p65的蛋白和mRNA表达水平明显下调。结论:紫檀芪能有效缓解肺纤维化,其机制可能与通过调控TLR4/NF-κB信号通路,抑制肺纤维化过程中的炎性因子、减弱氧化应激反应有关。     

参麦对大鼠肾缺血再灌注损伤中TLR4/NF-κB信号通路的影响

目的 观察参麦注射液(SM)对大鼠肾缺血再灌注损伤TLR4/NF-κB信号通路的影响,探讨参麦对肾脏保护作用的机制.方法 建立大鼠肾缺血再灌注损伤模型,随机分为假手术组(Sham组)、缺血再灌注组(IR组)、参麦预处理组(IR+SM组).HE法观察肾组织病理学形态,自动生化分析仪测定BUN、Cr水平,实时荧光定量PCR法检测肾组织中TLR4和NF-κB p65 mRNA含量,ELISA法检测血浆中ICAM-1和TNF-α表达.结果 IR组较Sham组肾组织病理学明显改变,BUN、Cr水平、TLR4、NF-κB p65 mRNA含量及ICAM-1、TNF-α表达均升高(P＜0.05).与IR组相比,IR+SM组肾组织病理学改变减轻,BUN、Cr水平、TLR4、NF-κB p65 mRNA含量及ICAM-1和TNF-α表达降低(P＜0.05).结论 SM通过抑制TLR4/NF-κB信号通路,下调其下游ICAM-1和TNF-α表达,发挥肾脏保护作用.     

TLR4和NF-κB及细胞因子炎症反应在急性胰腺炎发病中的作用

目的研究在急性胰腺炎发病过程中较全面反映出Toll样受体4(TLR4)通过激活NF-κB引起大量炎性递质的释放及其临床意义。方法通过应用凝胶迁移率改变分析法检测轻症和重症急性胰腺炎发病1、3、7d外周血中性粒细胞NF-κB的表达情况及应用免疫荧光流式细胞技术检测外周血单核细胞TLR4的表达,并同时检测血TNF-α、IL-1β、IL-6,分析各组数据的相关性。结果入院第1天,MAP组、SAP组TLR4表达及NF-κB活化水平显著升高且明显高于对照组,SAP组TLR4表达较MAP组更为增高,随时间延长而逐渐下降。通过Pearson相关分析表明SAP组、MAP组患者发病第1、3、7天外周血PMN内NF-κB蛋白活性及PBMCs表面TLR4的表达与APACHE-Ⅱ评分及TNF-α、IL-1β水平的变化一致,呈正相关,并随时间相关性呈递减趋势。与IL-6变化无相关性。结论在人体急性胰腺炎发病、病情进展中较全面动态地反应出TLR4通过激活NF-κB,引起大量炎性递质的释放,加重病情的进展,为今后预测疾病进展及防治提供依据。     

白芍总苷对糖尿病大鼠肾组织TLR2、TLR4/NF-κB信号通路调节的影响

目的研究白芍总苷(TGP)对糖尿病大鼠肾组织中Toll样受体2(TLR2)、Toll样受体4(TLR4)、核转录因子-κB(NF-κB-p-p65)表达的影响。方法将链脲佐菌素(STZ)诱导的糖尿病大鼠模型随机分为模型组、TGP组(50、100、200mg/kg.d),正常大鼠为对照组,8周后免疫组化法检测肾组织中TLR2、TLR4、NF-κB-p-p65的表达。结果模型组大鼠尿白蛋白排泄率(AER)明显高于对照组(P<0.01),TGP(50、100、200 mg/kg.d)给药8周后大鼠AER水平明显低于模型组(P<0.05,P<0.01)。模型组大鼠肾组织中TLR2、TLR4与NF-κB-p-p65表达明显高于对照组(P<0.01),TGP(50、100、200 mg/kg.d)给药8周肾小球TLR2表达与模型组相比差异无显著性,肾小管-间质TLR2表达明显低于模型组(P<0.01),TGP(50、100、200 mg/kg.d)给药8周肾小球与肾小管-间质TLR4、NF-κB-p-p65表达明显低于模型组(P<0.05,P<0.01)。结论 TGP可显著改善糖尿病大鼠早期肾脏损害,其机制与部分抑制糖尿病大鼠肾组织中TLR2、TLR4/NF-κB信号通路有关。     

TLR4/NF-κB信号通路对变应性鼻炎的调控作用及中药治疗的研究进展

变应性鼻炎(allergic rhinitis,AR) 耳鼻咽喉科的常见病种,其中辅助性T细胞Th(T helper lymphocyte,Th)1/Th2及Th17/调节性T细胞(regulatory cell,Treg)失调均可引起AR,通过阻断Toll样受体(toll like receptor,TLR)4/核转录因子(nuclear factor-κB,NF-κB)经典信号通路来治疗AR可能与其能调控Th1/Th2及Th17/Treg平衡和影响体内特异性免疫球蛋白E(immunity globulin E,IgE)、相关炎性细胞因子的作用有关。近年来,TLR4/NF-κB信号通路的分子结构与功能等方面的研究逐渐增多,但其对AR发生和发展的调控机制仍有待于进一步探究。该文对TLR4/NF-κB信号通路在AR中的作用新进展进行总结,或可能成为治疗AR的新方向,这也将为中药治疗AR的深入研究提供新思路。     

金丝桃苷通过TLR4/NF-κB信号通路对动脉粥样硬化小鼠的干预作用

目的 探讨金丝桃苷通过Toll样受体4(TLR4)/核转录因子-κB(NF-κB)信号通路对动脉粥样硬化小鼠的干预作用。方法 将50只雄性小鼠随机分为正常组、模型组、金丝桃苷低剂量组、金丝桃苷高剂量组、辛伐他汀组,各10只。除正常组小鼠外,其余各组建立动脉粥样硬化小鼠模型。建模完成后,分别给予金丝桃苷低剂量组、金丝桃苷高剂量组、辛伐他汀组小鼠灌胃30 mg/(kg·d)金丝桃苷、60 mg/(kg·d)金丝桃苷、辛伐他汀,给予正常组、模型组小鼠灌胃等量生理盐水,连续干预4周。采用HE染色观察各组小鼠主动脉组织病理学变化。除正常组外,检测其余小鼠斑块成分占比、斑块易损指数、斑块内新生血管密度。检测各组小鼠血清三酰甘油、总胆固醇、HDL-C、白细胞介素(IL)-6、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、IL-8、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、活性氧簇、超氧化物歧化酶(SOD)、血管内皮生长因子(VEGF)、内皮素1水平,以及主动脉组织TLR4、NF-κB蛋白表达量。结果 相比于正常组,模型组小鼠主动脉内有斑块形成,动脉壁不均匀增厚并发生局部钙化,有大量巨噬细胞和淋巴细胞浸润,且血清VEGF、...     

青蒿琥酯对高糖诱导的肾小管上皮细胞TLR4、NF-κB表达及合成的影响

目的：探讨青蒿琥酯( Art)对高糖诱导下的大鼠肾小管上皮细胞(NRK-52E)Toll样受体4(TLR4)、核转录因子-κB( NF-κB)表达及合成的影响。方法体外培养NRK-52E细胞,分为6组：正常对照组、高糖组、Art小剂量组、Art中剂量组、Art高剂量组、依那普利组。培养48 h后收集各组细胞,采用逆转录-聚合酶链反应( RT-PCR)法检测细胞TLR4、NF-κB mRNA 含量;采用 Western blot 法检测细胞TLR4、NF-κB蛋白表达水平。结果①与正常对照组比较,高糖组细胞TLR4、NF-κB mRNA和蛋白表达水平明显升高( P <0．05);②与高糖组比较, Art 小、中、高剂量组细胞TLR4、NF-κB mRNA和蛋白表达水平明显降低,且呈剂量依赖性(P<0．05);③与依那普利组比较,Art小、中、高剂量组细胞TLR4水平表达均升高,且Art高剂量组与依那普利组差异无统计学意义。与依那普利组比较,Art小、中剂量组细胞NF-κB水平表达升高,Art高剂量组细胞NF-κB水平表达降低,且Art中、高剂量组与依那普利组差异无统计学意义。结论 Art可呈剂量依赖性地抑制高糖环境下NRK-52E细胞TLR4、NF-κB的高表达及合成。     

炎症相关因子TLR4 NF-κB在特发性膜性肾病肾组织中的表达及临床意义

目的:研究炎症相关因子Toll样受体4(TLR4)、核转录因子-kappa B(NF-κB)在特发性膜性肾病(IMN)患者肾组织的表达水平,探讨炎症因子TLR4、NF-κB在IMN发病过程中的临床意义。方法:本研究纳入于蚌埠医学院第一附属医院肾病科经肾活检初次诊断为IMN的患者45例为特发性膜性肾病组(IMN组),同期选取因肾挫伤、肾肿瘤或输尿管肿瘤等行肾脏切除留取健康肾脏组织20例为正常对照组(NC组)。收集两组相关临床指标并分析比较两组间差异性。采用免疫组化的方法分别检测炎症因子TLR4、NF-κB在两组肾组织中的表达,并进行平均光密度值分析,比较两组间炎症因子表达差异。将IMN组分为纤维化组29例,无纤维化组16例,分析比较两组间炎症因子表达的差异性,了解炎症在肾间质纤维化中的作用。应用Pearson相关性分析两组炎症因子之间及其与临床指标间的相关性。结果:IMN组患者肾组织中TLR4、NF-κB的表达水平显著高于NC组(P<0.01)。IMN纤维化组TLR4、NF-κB表达明显强于无纤维化组(P<0.05)。相关性分析显示：TLR4与NF-κB两者之间密切相关(P&...     

TLR4 mAb对人正常肝内胆管上皮细胞LPS-TLR4-NF-κB通路的影响

目的对脂多糖( LPS)及Toll样受体4单克隆抗体( TLR4 mAb)作用于体外培养的人肝内胆管细胞( HiBEC)后其TLR4 mRNA和核转录因子-κB( NF-κB) mRNA的表达情况进行了研究。方法体外培养HiBEC,采用 RT-PCR 法检测经LPS和不同浓度的TLR4 mAb作用后,HiBEC细胞株中TLR4 mRNA和NF-κB mRNA的表达情况。结果 LPS可以上调HiBEC中TLR4 mRNA和NF-κB mRNA的表达( P<0．05);而 LPS 作用于 TLR4 mAb 处理后的 HiBEC 中其TLR4 mRNA和NF-κB mRNA的表达下调;高质量浓度TLR4 mAb使NF-κB mRNA的表达下调更明显( P<0．05)。结论LPS 能上调HiBEC中TLR4 mRNA和NF-κB mRNA的表达;而 TLR4 mAb 则能拮抗 LPS 对 HiBEC 的刺激作用,下调TLR4 mRNA和NF-κB mRNA 的表达。     

缺血预适应通过抑制TLR4/NF-_κB信号通路保护大鼠心肌缺血再灌注损伤

目的：研究缺血预适应对大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用是否由toll样受体4（TLR4）/NF-κB途径所介导,以及是否与促进降钙素基因相关肽（CGRP）释放有关。方法：结扎Sprague-Dawley大鼠左冠状动脉前降支60 min,复灌3 h造成心肌缺血再灌注损伤。缺血预适应为结扎大鼠左冠状动脉前降支5 min,复灌5 min,共4个周期。RT-PCR分析心肌TLR4 mRNA表达。免疫组织化学法分析心肌TLR4和NF-κB蛋白表达。同时,测定心肌梗死面积、血浆CGRP浓度和血清肌酸激酶活性。结果：缺血预适应显著减少心肌梗死面积,降低肌酸激酶活性,增高血浆CGRP水平。心肌缺血再灌注可显著上调TLR4和NF-κB表达,缺血预适应可抑制其作用。结论：缺血预适应通过抑制TLR4/NF-κB信号通路保护大鼠心肌缺血再灌注损伤,其作用与促进CGRP释放有关。     

HMGB1基因敲除通过抑制TLR4/NF-κB通路减轻脓毒症小鼠急性肺损伤

目的 研究高迁移率族蛋白B1(HMGB1)基因敲除减轻脓毒症小鼠急性肺损伤及抑制Toll样受体4(TLR4)/核因子-κB(NF-κB)通路的作用。方法 野生型(WT)小鼠分为WT-Sham组和WT-模型组,HMGB1基因敲除(KO)小鼠分为KO-Sham组和KO-模型组。WT-模型组和KO-模型组采用盲肠结扎穿孔术制备脓毒症ALI模型,WT-Sham组和KO-Sham组进行假手术操作。造模后24 h,检测动脉血氧分压(PaO₂),计算氧合指数(OI),检测肺组织病理改变,计算肺损伤评分,检测血清及肺组织中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)、IL-6、活性氧簇(ROS)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)的浓度,肺组织中HMGB1、TLR4、核NF-κB的表达。结果 WT-模型组的PaO₂、OI、血清及肺组织SOD的浓度低于WT-Sham组,肺损伤评分、血清及肺组织中TNF-α、IL-1β、IL-6、ROS、MDA的浓度、肺组织中HMGB1、TLR4、核NF-κB的表达水平高于WT-Sham组(P<0...     

大鼠缺血再灌注心肌TLR4，TNF-α，NF-κB表达及其关系

目的：研究缺血再灌注大鼠心肌TLR-4,TNF-α仪和NF-κB的表达及相互关系．方法：建立大鼠缺血再灌注模型,大鼠随机分为假手术组、缺血组、再灌注30min组、再灌注60min组、再灌注90min组．以RT—PCR法检测心肌中TLR4及TNF—α mRNA的表达．结果：各种心肌中均检测到TLR4的表达,缺血及再灌注后TLR-4 mRNA含量显著增加,随着再灌注时间延长,TLR-4 mRNA含量增加更为显著．缺血组与假手术组TNF—α mRNA表达无统计学差异,而再灌注后表达显著增加,随再灌注时间延长,TNF-α mRNA含量继续增加更为明显．缺血及再灌注后心肌NF—κB mRNA表达增加,随再灌注时间延长,NF—κB mRNA含量继续增加,具有统计学意义．TLR-4表达增加时TNF—α和NF-κB表达也增加,三者有一定相关性．结论：心肌缺血再灌注损伤使TLR-4,TNF—α表达增高,阻断TLR-4可能有助于减轻缺血再灌注所致心肌损伤,并抑制急性炎症反应的发生．     

奈达铂对乳腺癌细胞增殖、侵袭转移、凋亡及TLR4/NF-κB信号通路的影响

目的 探讨奈达铂对乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖、侵袭转移及凋亡的影响,并探讨相关作用机制.方法 体外培养人乳腺癌MDA-MB-231细胞株,分为空白对照组、阳性对照组(1μmol/L多西紫杉醇)及奈达铂低、中、高剂量组(15、30、45μg/mL奈达铂).M T T法检测MDA-MB-231细胞增殖能力;Anne...