肌动蛋白调节分子CAP1对肺癌细胞迁移和增殖的影响

目的 探讨腺苷酸环化酶关联蛋白1(adenylatecyclase-associated protein 1,CAPl)在非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)中的表达及其对肺癌细胞迁移和增殖的影响.方法 收集本院2010-2015年NSCLC临床标本42例,采用免疫组化检测肺癌组织、癌旁组织和正常肺组织中CAP1的表达;以shRNA慢病毒感染NSCLC细胞系,敲低CAP1表达,采用划痕和Transwell实验观测敲低CAP1后肺癌细胞迁移能力的变化;MTS法及克隆形成实验检测细胞增殖能力的变化;免疫荧光观察细胞骨架的变化;流式细胞仪检测细胞周期的改变.结果 与癌旁组织和正常肺组织相比,CAP1蛋白在NSCLC癌组织中显著高表达(P＜0.01);划痕实验及Transwell实验显示,敲低CAP1的肺癌细胞较对照细胞迁移能力显著减弱(P＜0.01),细胞肌动蛋白骨架改变,并且其增殖减慢,克隆形成能力降低(P＜0.01);细胞周期分析发现CAP1敲低的肺癌细胞阻滞在G0/G1期.结论 CAP1促进肺癌细胞的迁移和增殖,可能与CAP1参与细胞肌动蛋白骨架和细胞周期调控有关.     

埃兹蛋白通过L1细胞黏附分子信号通路促进肺癌转移

目的 研究埃兹蛋白(Ezrin)促进人肺癌发生转移的分子机制.方法 通过RT-PCR、Western blot检测肺癌细胞系中Ezrin的表达;划痕试验检测Ezrin对肺癌细胞系迁移能力的影响;Western blot检测Ezrin调控L1细胞黏附分子(L1CAM)的机制.结果 Western blot结果显示,与低转移肺癌细胞系H460、EBC-1比较,高转移细胞系95D及PC9具有更高的Ezrin蛋白表达(P＜0.05);用基因方法沉默95D细胞Ezrin表达后(siEzrin-95D),细胞划痕试验结果发现与95D细胞比较,siEzrin-95D细胞的迁移能力明显减弱(P＜0.05).与95D及H460细胞比较,基因沉默95D及H460细胞Ezrin表达后,其L1CAM的表达明显下调(P＜0.05).结论 Ezrin可能通过调节L1CAM的表达促进肺癌转移.     

CD151通过上皮间质转化及干性相关通路调控非小细胞肺癌脑转移的机制研究

目的 探讨四跨膜蛋白CD151在肺癌脑转移中的预测作用及相关分子通路机制.方法 收集2010年12月至2015年6月本中心160例非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)患者临床资料,其中脑转移患者88例,无脑转移患者72例,采用免疫组织化学方法检测CD151在肺癌组织的表达,并运用Spearman分析CD151表达与脑转移相关性.再选择人NSCLC细胞株HCC827,应用siRNA干扰、Western blot、划痕和Transwell实验检测敲低CD151表达对细胞增殖、迁移状况以及上皮间质转化(EMT)、干性通路相关蛋白表达的影响.结果 相对于无脑转移患者,NSCLC脑转移患者肺癌组织CD151表达显著增加(P =0.012),Spearman分析表明CD151高表达与脑转移呈正相关(r =0.478,P=0.004).通过siRNA敲低CD151可上调Ecadherin表达,并下调Vimentin、SOX2、CD44和CD133表达,同时降低HCC827细胞增殖(P =0.026)与迁移能力(P =0.032).结论 CD151可能通过调控EMT、干性通路相关蛋白表达影响NSCLC细胞的增殖、迁移,CD151可能是NSCLC脑转移的潜在预测因子.     

下调乙酰辅酶A合成酶2通过诱导自噬抑制非小细胞肺癌细胞增殖

目的：探讨乙酰辅酶A合成酶2（ACSS2）在非小细胞肺癌（NSCLC）细胞中的表达及其对细胞增殖、侵袭的调控机制。方法：采用蛋白质印迹（Western blot）实验检测并分析NSCLC细胞系A549和H1299与人成纤维细胞HFF-1中ACSS2表达的差异。利用慢病毒在NSCLC细胞系中构建ACSS2敲低（ACSS2 KD组）和对照细胞系（NC组）。采用MTT实验及细胞克隆形成实验分析ACSS2 对NSCLC细胞增殖的影响。采用划痕实验和Transwell实验分析ACSS2对NSCLC细胞的迁移和侵袭能力的影响。Western blot及免疫荧光实验分析敲低ACSS2 对细胞自噬的影响。结果：与人成纤维细胞HFF-1相比,NSCLC细胞中ACSS2 的蛋白表达水平明显升高（P ＜0.05）。与NC组相比,ACSS2 KD组细胞增殖能力和细胞活力显著降低,ACSS2 KD组细胞的迁移和侵袭能力均明显降低（均P ＜0.01）。Western blot和免疫荧光实验显示,敲低ACSS2 细胞自噬活性明显增加,自噬小体增多（P ＜0.01）。但是,敲低ACSS2几乎不影响caspase3和caspase8的蛋白表达水平（P ＞0.05）。ACSS2 shRNA+Beclin1/Atg7-shRNA共转染A549细胞（ACSS2+Beclin1/Atg7 KD组）,结果显示与ACSS2KD组比,ACSS2 KD+Beclin1/Atg7 KD组细胞增殖能力有所增强,克隆形成数目明显增多（P ＜0.05）。结论：ACSS2在NSCLC细胞中高表达,促进细胞的增殖、侵袭。下调ACSS2可诱导NSCLC细胞发生自噬性细胞死亡,抑制细胞增殖。     

脂联素受体AdipoR1对肺癌细胞PC9增殖和迁移的影响

目的：观察过表达或敲低人脂联素受体1（AdipoR1）对肺癌细胞PC9增殖和迁移的影响,阐明AdipoR1对肺癌的调控作用。方法：逆转录聚合酶链反应（RT?PCR）检测AdipoR1在PC9细胞及正常人支气管上皮细胞HBEC中的表达量;利用分子克隆的方法构建AdipoR1过表达和shRNA干扰载体,转染至PC9细胞中并采用RT?PCR和Western blot方法检测AdipoR1的表达情况。运用CCK8方法和划痕愈合实验检测AdipoR1激动剂AdipoRon、AdipoR1过表达及AdipoR1敲低对PC9细胞的增殖和迁移活性的影响。结果：RT?PCR结果显示AdipoR1在PC9细胞中的表达量明显降低（P < 0.05）。RT?PCR和Western blot结果显示AdipoR1过表达的PC9细胞中AdipoR1 mRNA和蛋白的表达量明显高于空载体细胞（P均<0.05）,AdipoR1干扰组AdipoR1表达量明显低于阴性对照细胞（P均<0.05）。CCK8和划痕愈合实验结果显示,在24 h和48 h时,与溶剂对照组相比,AdipoRon能显著降低PC9细胞的增殖和划痕愈合率,过表达AdipoR1的PC9细胞增殖和划痕愈合率明显低于空载体细胞,而AdipoR1敲低能明显促进PC9细胞的增殖和划痕愈合率（P均<0.05）。结论：AdipoR1激动剂AdipoRon或AdipoR1过表达能抑制肺癌细胞PC9的增殖和迁移活性,而AdipoR1敲低则能明显促进肺癌细胞PC9的增殖和迁移。     

FBXO22表达对HPV阳性宫颈癌细胞生物学行为的影响

目的探索FBXO22表达对人乳头瘤病毒(HPV)阳性宫颈癌细胞生物学行为的影响。 方法qRT-PCR和Western blotting检测FBXO22在正常宫颈细胞H8细胞和宫颈癌细胞系中的差异表达。实验组构建敲除和过表达FBXO22的Hela、CaSki细胞,对照组转入空载体。qRT-PCR和Western blotting检测转染后FBXO22表达；MTT、细胞克隆形成实验、流式细胞术、划痕实验和Transwell实验检测FBXO22表达对细胞增殖、细胞周期、迁移、侵袭能力的影响。 结果与H8细胞比较,FBXO22在HPV阳性宫颈癌细胞中呈现过表达(P＜0.05)。与对照组比较,Hela、CaSki细胞FBXO22 mRNA和蛋白、细胞增殖活性、细胞克隆形成率过表达组增加,敲低组减少(P＜0.05)；G2/M期细胞百分率、划痕宽度、穿膜细胞数过表达组减少,敲低组增加(P＜0.05)。 结论FBXO22在HPV阳性宫颈癌细胞中过表达,FBXO22表达促进宫颈癌细胞增殖和迁移,沉默FBXO22可能为宫颈癌治疗提供潜在靶点。     

PRR11调节肺癌细胞系A549侵袭迁移的分子机制研究

目的：PRR11（proline rich protein 11）是近年来发现的一个肿瘤相关基因,前期研究结果显示其高表达对于肺癌等恶性肿瘤细胞的侵袭迁移具有重要作用,本研究为了更进一步研究其促进肺癌细胞侵袭转移的分子机制。方法：综合利用siRNA敲减、划痕及迁移实验、Western blot及免疫荧光等方法分析人肺癌细胞系A549沉默PRR11表达后细胞侵袭迁移能力下降的分子机制。结果：PRR11沉默后,划痕及Transwell实验结果表明,PRR11沉默明显减弱了A549细胞运动、侵袭及迁移能力。进一步定量qRT-PCR及Western blot检测发现,PRR11稳定沉默导致上皮细胞标志分子E-cadherin明显上调、而EMT上游关键转录因子Twist1及间质细胞标志分子N-cadherin表达下调,另外免疫荧光染色结果同样显示Twist1及N-cadherin下调明显。结论：肺癌细胞系A549中PRR11可能通过调节Twist1等EMT关键分子的表达在细胞侵袭转移过程中起关键作用,为进一步探索PRR11在肺癌中的作用机制奠定了基础。     

下调METTL3-LYN m6A-IGF2BP2通路抑制内皮细胞迁移

目的 研究甲基转移酶样蛋白3(methyltransferase like 3,METTL3)对人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)迁移能力的影响,并初步探究其作用机制.方法 通过在线设计靶向METTL3第1个外显子的sgRNA,构建到lentiCRISPR v2载体;Western blot和免疫荧光染色实验检测METTL3蛋白表达水平;细胞划痕实验和Transwell实验检测细胞迁移能力;m6A甲基化RNA免疫沉淀实验检测细胞迁移相关基因酪氨酸激酶LYN mRNA上m6A甲基化修饰情况;荧光定量PCR(qPCR)检测LYN的表达情况;利用shRNA敲低m6A识别蛋白IGF2BP1和IGF2BP2,siRNA敲低m6A识别蛋白YTHDF2,qPCR检测识别蛋白敲低水平及LYN的mRNA表达情况;RNA免疫沉淀实验进一步检测IGF2BP2与LYN mRNA的结合情况;放线菌素D抑制转录后,qPCR检测LYN mRNA半衰期.结果 利用CRISPR-Cas9技术成功构建METLL3基因敲低的HUVECs细胞系.METTL3基因敲低后,内皮细胞的迁移能力下降(P＜0.05),细胞迁移相关基因LYN mRNA上m6A甲基化修饰水平显著降低(P＜0.01),且LYN mRNA的表达明显下调(P＜0.05).敲低m6A识别蛋白YTHDF2和IGF2BP1,对LYN mRNA的表达量无显著影响(P＞0.05),而敲低IGF2BP2,LYN的mRNA表达量显著下调(P＜0.01),RNA免疫沉淀实验结果显示IGF2BP2与LYN mRNA结合.mRNA半衰期实验结果表明敲低IGF2BP2降低LYN mRNA稳定性.结论 敲低METTL3抑制内皮细胞迁移,其机制可能通过IGF2BP2识别并结合LYN mRNA上m6A修饰位点,调控其mRNA稳定性来发挥作用.     

KRAS促进肺癌细胞糖酵解

目的 探讨KRAS对肺癌细胞糖酵解的影响及其初步机制.方法 采用Real-time PCR 和Western blot检测KRAS、HK2、PKM2在肺癌细胞系H1299、A549、SPC-A1中的表达水平,应用干化学方法检测肺癌细胞培养48 h后培养基上清中乳酸的浓度.采用RNA干扰技术,将KRAS-shRNA感染H1299细胞,实验分为3组:空白对照组(CON组)、阴性对照组(NC组)、慢病毒干扰组(KD组).采用Real-time PCR和Western blot检测KRAS敲低效率及敲低KRAS基因前后H1299细胞中HK2、PKM2的表达变化.将TNF-α作用于NC组和KD组细胞,检测KRAS、HK2、PKM2的表达水平及乳酸浓度的变化.结果 在3株肺癌细胞系中,H1299细胞中KRAS和HK2、PKM2的表达水平最高,乳酸水平也高于A549、SPC-A1细胞.与空白对照组相比,KRAS-shRNA感染H1299细胞后,KRAS基因拷贝以及蛋白表达水平被显著抑制(P＜0.05),HK2、PKM2基因拷贝及蛋白表达水平显著下降,培养基中乳酸浓度明显降低(P＜0.05).以TNF-α作用NC组、KD组细胞后,KRAS、HK2、PKM2基因和蛋白表达均升高(P＜0.05).KRAS-shRNA可部分抑制TNF-α升高的乳酸浓度(P＜0.05).结论 KRAS能通过调节HK2和PKM2促进肺癌细胞的糖酵解.     

敲低EEFSEC可体外抑制前列腺癌细胞的增殖、迁移和侵袭

目的 探讨硒代半胱氨酸tRNA特异性真核延伸因子（EEFSEC）对人前列腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响。方法 采用qRT-PCR法检测人正常前列腺细胞系RWPE1和人前列腺癌细胞系22Rv1、LNcap、Vcap、PC-3细胞中EEFSEC mRNA的表达;收集前列腺癌患者的癌组织和癌旁组织,采用Western blot法检测前列腺癌组织中EEFSEC的蛋白表达情况。慢病毒感染22Rv1 细胞,Western blot检测敲低效率;XTT实验检测各组细胞的增殖能力;划痕实验和Transwell实验用来检测细胞迁移能力;Transwell试验检测细胞侵袭能力;流式细胞术检测细胞周期;qRT-PCR检测敲低EEFSEC后周期相关基因的mRNA水平的变化。结果 与对照组相比,EEFSEC在前列腺癌中高表达（P<0.05）;且EEFSEC高表达导致前列腺癌患者不良预后;感染敲低EEFSEC的慢病毒后,可明显降低22Rv1细胞中EEFSEC的蛋白表达水平;与对照组相比,敲低EEFSEC可显著抑制22Rv1细胞的增殖（P<0.001）,迁移（P<0.001）和侵袭能力（P<0.001）;敲低EEFSEC细胞周期主要阻滞在G0/G1期,qRT-PCR实验显示敲低EEFSEC可明显下调C-myc和CCNB1的表达,上调p15的表达。结论 敲低EEFSEC可能通过降低C-myc表达来抑制前列腺癌细胞22Rv1的增殖、迁移和侵袭能力。     

麻疹的双相移位研究进展

近年新生儿、婴儿、成人麻疹患者逐年增加,临床表现一般仍较典型,成年人麻疹患者全身中毒症状较重。麻疹抗体检测结果阳性是主要的诊断依据。麻疹发病的双相移位的机理可能是,免疫保护力不足,婴儿出生时麻疹抗体力低。孕期母传胎的麻疹抗体减弱,母经乳汁传给婴儿的抗体减弱,成人麻疹抗体水平逐年下降。预防措施是怀孕前给予育龄妇女麻疹疫苗接种,鼓励母乳喂养,麻疹疫苗计划免疫适当提前,在成人追加麻疹疫苗的免疫,加强病毒变异的研究等。     

正常增殖期子宫内膜细胞增生状态的定量观察

以＾３氢－胸腺嘧啶核苷放射自显影法及ＨＥ染色，观察并分别测定了１８例正常子宫内膜增殖中期，１５例增殖晚期的腺上皮细胞或间质细胞的标记指数、分裂指数。结果显示：子宫内膜增殖晚期腺上皮细胞或间质细胞之ＬＩ均明显高于增殖中期。同时，增殖晚间质细胞之ＭＩ也明显高于增殖中期，即此两种细胞在增殖晚期中增生明显，其增生状态初步获得了定位定量测定的正常值。     

人工全髋关节置换术的手术配合

目的：介绍人工全髋关节置换术的手术配合做法;方法：主要在手术配合的六个方面,解决防感染、防栓塞等问题。结果：30例人工全髋关节置换术均获成功,结论：手术配合是护士责任心和基本功的全面体现,对提高手术效果有至关重要的影响。     

80例局限性银屑病误诊原因分析

本文报告80例局限于小腿或手或足的银屑病。均经皮肤组织病理检查确诊。因部位比较特殊。受多种理化因素影响,使皮疹形态发生轻重程度不同的变化,常看不到典型损害,因而误诊为神经性皮炎,湿疹,慢性皮炎及癣等。作者对误诊原因进行了分析后,提出了鉴别诊断方法。     

腰椎间盘突出症再次手术的原因分析

目的解决腰椎间盘突出症手术中神经压迫。方法对1980～1998年再手术资料进行统计分析,讨论分析再手术原因,再次手术前影像学检查,观察病理变化以确定再手术方法。结果对11例随访6个月～1年,优7例(68．4％),良3例(36．8％),差1例(2．8％)。结论初次手术前详细查体和分析X线片,术中用导尿管和神经剥离探查,尽量避免髓核遗留,手术范围不宜太大,尽量减少对软组织和脊柱结构的破坏,避免形成硬膜囊与神经根粘连而致单纯形疤痕。     

妊娠晚期重度妊高征的监测

重度妊高征表现为高血压、蛋白尿、浮肿等症状 ,严重可以导致母婴死亡。对妊娠足月的重度妊高征 ,可以根据其临产与否及宫颈条件 ,立即决定其为阴道分娩或是剖宫产术。对于妊娠晚期的重度妊高征 ,因其胎龄不足月 ,胎儿生长发育及胎肺成熟度情况需通过一定时间的治疗 ,根据其病情变化来决定其治疗方案或终止妊娠的时机[1,2 ] 。这就需要我们对这一阶段的治疗进行监测 ,防止母儿并发症的发生。现将 2 0 0 0年至今我院收治妊娠晚期重度妊高征 30例的监测结果回顾分析如下。1　资料和方法1.1　研究对象　选择孕 31～ 36周重度妊高征 30例 ,其中 …     

尿微量白蛋白检测在继发性肾脏疾病中的临床意义

目的探讨尿微量白蛋白（m-Alb）检测在继发性肾脏疾病中的临床意义。方法采用Beckman Immage全自动特种蛋白分析仪对糖尿病组、高血压组、心脏病组患者进行了m-Alb测定,同时与健康组结果作对比。结果m-Alb检测糖尿病组为3.7±5.26mg/dl,高血压组为7.5±8.18mg/dl,心脏病组为7.8±3.76mg/dl,健康组为0.66±0.48mg/dl,各试验组m-Alb增高百分率为糖尿病组48.9%,高血压组37.5%,心脏病组26.9%。结论尿蛋白阴性的糖尿病、高血压、心脏病患者进行m-Alb检测,可以监测病程的进展。