外源性p53基因导入不同时限后联合放疗对肺腺癌细胞A549的影响

目的 探讨重组人腺病毒p53导入不同时限后联合放疗对A549肺腺癌细胞生长抑制、凋亡和p53蛋白表达的影响.方法 将外源性p53基因导入人肺腺癌细胞株A549中,加药后即刻、3、6、24和48 h联合射线照射(单次4Gy).MTT检测细胞生长抑制,流式细胞仪检测细胞凋亡,Western blot检测野生型p53蛋白的表达情况.结果 加药6、24和48 h后放疗组与加药未放疗组、加药即刻放疗组和加药3 h后放疗组比较,A549细胞生长抑制率、凋亡率及p53蛋白表达水平均显著增高(P<0.05).结论 为获得对肿瘤细胞的最大杀伤作用,可将放疗时间选定在导入重组人腺病毒p53后6～48 h内.     

薏苡仁注射液联合X线照射对人肺腺癌细胞A549抑制作用的机制研究

目的 探讨薏苡仁注射液(康莱特)联合X线照射对人肺腺癌细胞A549抑制作用的机制.方法 体外培养人肺腺癌细胞A549,分成4组:A549对照组(给予1640培养液);A549康莱特组(给予20 μl康莱特);A549照射组(照射4 Gy剂量的X线);A549联合组(给予20 μl康莱特,同时4 Gy的X线照射).正常细胞系人脑微血管内皮细胞 (HBMEC),分成2组:HBMEC对照组(给予0.9%氯化钠溶液);HBMEC康莱特组(给予20 μl康莱特).磺酰罗丹明(SRB)染色法检测康莱特及X线照射对各组细胞的抑制率;逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测增殖、凋亡相关蛋白增殖细胞核抗原(PCNA)、p53、Bcl-2、Bax mRNA在各组细胞中表达情况;蛋白质印迹(Western blot)法检测蛋白表达水平.将各组结果进行比较.结果 康莱特联合放疗对6组细胞体外抑制率、PCNA、p53、Bcl-2、Bax mRNA及4种因子的蛋白表达比较,差异均有统计学意义(P＜0.05).其中与A549对照组比较,A549康莱特组、A549照射组、A549联合组的抑制率、PCNA和 Bcl-2 mRNA及4种因子的蛋白表达降低,p53、Bax mRNA及其蛋白表达升高,差异均有统计学意义(P＜0.05);HBMEC康莱特组与HBMEC对照组比较,抑制率、4种因子表达比较,差异均无统计学意义(P＞0.05).结论 康莱特可通过调控肿瘤细胞的增殖凋亡来抑制肺腺癌细胞生长,该药与放射联合治疗可进一步增强对肿瘤的抑制作用,探讨康莱特作用机制对指导临床肺腺癌治疗有一定的价值.     

Urolithin A在肺癌细胞系A549中的抗增殖效应

目的:研究尿石素A(Urolithin A)对肺癌细胞系A549增殖的影响和作用机制。方法:流式细胞术检测Urolithin A对A549细胞凋亡的影响;SA-β-gal检测Urolithin A对A549细胞衰老的状态;Western blot检测Cleaved PARP、p21、PUMA、p53蛋白的表达量。MTT实验探究Urolithin A对A549细胞的生长抑制作用。结果:不同浓度Urolithin A作用A549细胞,细胞凋亡率升高(P<0.05);SA-β-gal实验显示,Urolithin A促进A549细胞衰老(P<0.05);Western blot显示,Cleaved PARP、p21、PUMA、p53的蛋白表达量随Urolithin A浓度的升高而上调;不同浓度Urolithin A处理A549细胞,细胞活力以浓度依赖性下降,增殖抑制率升高(P<0.05),敲低p53能减弱Urolithin A对A549细胞引起的增殖抑制(P<0.05)。结论:Urolithin A抑制A549细胞的增殖,可能是由p53介导的。     

百里醌类似物ATQTHB对肺癌细胞株A549增殖与凋亡的影响

目的 研究人工合成百里醌类似物ATQTHB对肺癌细胞A549的增殖抑制和诱导凋亡作用。方法 将细胞分为5组：空白对照组、A549细胞组、A549细胞+ATQTHB干预(400μg/mL)组、人正常肺上皮细胞(BEAS-2B)组、BEAS-2B细胞+ATQTHB干预组。采用CCK-8法分析细胞增殖抑制情况,采用流式细胞术检测细胞凋亡水平,采用Western blot检测凋亡相关蛋白Bcl-2和Bax表达水平。结果 与A549细胞组相比,400μg/mL ATQTHB干预对A549细胞增殖具有显著抑制作用(P<0.05);ATQTHB干预后,人正常肺上皮细胞BEAS-2B增殖与未干预细胞间差异无统计学意义(P>0.05);与A549细胞组相比,A549细胞+ATQTHB干预组的细胞凋亡率显著增加(P<0.05),抑制凋亡蛋白Bcl-2表达减少(P<0.05),促凋亡蛋白Bax表达增加(P<0.05);与BEAS-2B细胞组相比,BEAS-2B细胞+ATQTHB干预组的细胞凋亡率无显著改变(P>0.05),Bcl-2和Bax的蛋白表达水平差异无统计学意义(...     

外源性PUMA对非小细胞肺癌A549细胞增殖和凋亡的影响

目的探讨外源性p53上调凋亡调制因子(PUMA)对非小细胞肺癌A549细胞增殖、凋亡的影响。方法将肺癌A549细胞分为Control组、空载体组、PUMA组(转染pCEP4-(HA)2-PUMA质粒),DDP组(10μg·mL-1)和PUMA+DDP组(转染pCEP4-(HA)2-PUMA质粒,加10μg·mL-1顺铂)5个组。细胞生存率和凋亡率分别用MTT法和流式细胞仪检测,细胞PUMA、Bax及Bcl-2蛋白表达水平采用Western blot方法检测。结果与Control组比较:PUMA组、DDP组及PUMA+DDP组A549细胞增殖均显著降低(P<0.01),且PUMA+DDP组降低程度最强(P<0.01);凋亡率均显著升高(P<0.01);Bax蛋白水平呈显著性升高(P<0.01),Bcl-2蛋白呈显著性下降(P<0.01)。结论外源性PUMA可抑制肺癌A549细胞增殖,促进凋亡,其机制与增加细胞Bax蛋白表达,降低Bcl-2蛋白表达有关。 更多还原     

低氧状态下血管内皮细胞HIF-1α表达及与细胞凋亡的关系

目的探讨低氧对人脐静脉内皮细胞ECV304凋亡及低氧诱导因子-1α表达的影响及意义。方法人脐静脉内皮ECV304细胞分为低氧处理组和对照组,处理后MTT法检测细胞增殖抑制率;流式细胞术和TUNEL染色检测细胞凋亡;应用荧光实时定量PCR(QPCR)和Western blot检测Bcl-2、Bax、Caspase-3和HIF-1α的mRNA和蛋白表达。结果与对照组比较,低氧处理能明显抑制细胞的增殖,且抑制作用随着低氧处理时间的延长而增强(P<0.05);低氧处理细胞后凋亡率明显增加,且呈时间依赖性(P<0.05);QPCR和Western blot结果显示,低氧处理组细胞Caspase-3、Bax的mRNA和蛋白表达均显著升高(P<0.05),Bcl-2则明显下降(P<0.05),Bcl-2/Bax比值显著降低,且呈时间依赖性(P<0.05)。低氧呈时间依赖性上调HIF-1α的mRNA和蛋白水平(P<0.05)。结论低氧能促进人脐静脉内皮细胞ECV304细胞凋亡,其机制可能与HIF-1α表达上调及Bcl-2的表达降低、Caspase-3和Bax的表达升高有关。     

γ分泌酶抑制剂阻断Notch信号通路对肺腺癌细胞A549增殖的影响

目的观察γ分泌酶抑制剂MW167阻断Notch信号对肺腺癌细胞A549增殖的影响。方法正常氧条件下培养肺腺癌细胞A549,通过Western blotting及RT-PCR方法检测Notch受体各亚型的表达。在正常氧条件下,不同浓度(5、10、20μmol/L)MW167处理肺腺癌细胞A549(加药组),48 h后采用Western blotting方法检测Notch1蛋白表达的变化,采用RT-PCR方法检测Notch信号通路下游基因HES1mRNA表达的变化,应用MTT法检测MW167对细胞增殖的影响;每个浓度设二甲基亚砜对照组。结果 Notch1～4各亚型在A549细胞均有表达。5、10、20μmol/L MW167处理肺腺癌A549细胞48 h后,各加药组与对照组相比,Notch1蛋白表达升高(P<0.05),而HES1 mRNA表达下降(P<0.05),随MW167浓度升高,对HES1 mRNA表达的抑制率逐渐升高(r=0.927,P<0.01)。MTT法检测结果显示各加药组吸光度高于对照组(P<0.05),且随MW167浓度升高,细胞增殖率相应升高(r=0.904,P<0.01)。结论在正常氧条件下,MW167可阻断Notch信号通路,对A549细胞起促增殖作用;Notch1信号通路可能在A549细胞中起一定抑癌作用。     

曲古菌素A联合全反式维甲酸对宫颈癌HeLa细胞株杀伤机制的研究

目的探讨曲古菌素A(TSA)联合全反式维甲酸(ATRA)对宫颈癌HeLa细胞株的杀伤作用及其作用机制。方法 TSA联合ATRA或单独处理HeLa细胞,CellTiter 96AQueous法检测细胞增殖抑制情况;7-AAD荧光染色法观察细胞凋亡改变;流式细胞术检测细胞凋亡率;Western blot法检测p21、p53、Bcl-2、Caspase-3蛋白表达变化。结果 TSA联合ATRA对HeLa细胞具有明显的生长抑制作用,诱导细胞凋亡,出现核碎裂等典型凋亡改变,细胞凋亡率明显升高,与对照组和单独用药组比较,差异有统计学意义(P<0.05);与对照组比较,TSA联合ATRA组中p21、p53、活化性Caspase-3蛋白的表达显著升高(P<0.01),而Bcl-2蛋白表达显著下降(P<0.05)。结论 TSA联合ATRA在体外对HeLa细胞有明显的杀伤作用,推测其机制可能是上调p21、p53、活化性Caspase-3蛋白表达水平,下调Bcl-2蛋白表达水平有关。     

桃红四物汤促进自噬抑制氧糖剥夺诱导的心肌细胞凋亡的实验研究

目的 探讨桃红四物汤(TST)对氧糖剥夺(OGD)诱导的H9C2心肌细胞损伤的保护作用。 方法 将H9C2心肌细胞分为5组(n=3)：对照组、OGD模型组、OGD +TST含药血清处理组、OGD +TST含药血清+雷帕霉素处理组、OGD +TST含药血清+氯奎处理组。四唑盐(MTT)比色法检测细胞活力;流式细胞术检测细胞凋亡;免疫印迹法(western blot)检测自噬相关蛋白(LC3、p62)和凋亡相关蛋白(Bax、Bcl-2)的表达。结果 与对照组相比,OGD模型组细胞活力显著下降(P<0.05),细胞凋亡显著增多(P<0.05),LC3II/LC3I比值和促凋亡蛋白Bax显著增多,p62和抗凋亡蛋白Bcl-2表达减少。与OGD模型组相比,OGD +TST含药血清处理组的细胞活力显著升高(P<0.05),细胞凋亡明显减少(P<0.05),LC3II/LC3I比值、Bcl-2表达增多,p62和Bax蛋白表达减少。与OGD +TST含药血清处理组相比,OGD +TST含药血清+雷帕霉素处理组的细胞活力进一步升高(P<0.05),细胞凋亡比例进一步减少(P<0.05),LC3II/LC3I比值、Bcl-2表达进一步增多,p62和Bax蛋白表达进一步减少;而氯奎处理桃红四物汤治疗组的细胞活力下降(P<0.05),凋亡细胞比例升高(P<0.05),LC3II/LC3I比值、Bcl-2表达减少,p62和Bax蛋白表达增多。结论 桃红四物汤促进氧糖剥夺H9C2心肌细胞自噬,抑制心肌细胞凋亡,对心肌缺血起保护作用。     

N-(3-三氟甲基苯基)维甲酰胺对人肺腺癌A549细胞增殖及凋亡的影响

目的研究新合成的全反式维甲酸(ATRA)衍生物[N-(3-三氟甲基苯基)维甲酰胺]对人肺腺癌A549细胞株体外增殖及凋亡的影响。方法3种浓度的ATRA衍生物和ATRA(1、5、10mg/L)分别处理A549细胞1、2、3、7d,应用MTT法和流式细胞技术分别观察该ATRA衍生物对A549细胞增殖、凋亡和细胞周期的影响;Western blot分析凋亡相关蛋白表达的变化。结果ATRA衍生物处理组A549细胞增殖抑制率随药物浓度的增加而提高,分别为9.1%、17.8%、47.0%;抑制率亦随药物作用时间的延长而提高,分别为18.1%、20.6%、40.4%、83.4%。10mg/LATRA衍生物可明显诱导A549细胞凋亡,凋亡率达到40.9%,G0～G1期细胞比例明显下降,细胞凋亡峰较对照组明显提前,凋亡过程伴随Bcl-2表达下降,而Bax、Bak、酶原形式的Caspase-3、p53、NF-κB的表达无明显变化。结论ATRA衍生物对A549细胞的增殖抑制作用呈浓度和时间依赖性;并诱导细胞凋亡,可能与Bcl-2蛋白的表达下调有关。