泛素羧基末端水解酶L1 C90S和I93M点突变不影响小鼠卵母细胞成熟

目的 通过观察泛素羧基末端水解酶L1(UCHL1)点突变蛋白与野生型蛋白过量对小鼠卵母细胞成熟的影响,并分析其在小鼠卵母细胞离体成熟过程中的作用及作用方式.方法 通过原核重组蛋白技术制备UCHL1点突变(C90S和I93M)和野生型蛋白与谷胱甘肽S-转移酶(GST)的融合蛋白,通过显微注射技术将UCHL1野生型蛋白与GST的融合蛋白、UCHL1点突变蛋白与GST的融合蛋白、GST、PBS分别注射到小鼠未成熟卵母细胞,或在体外培养基中添加UCHL1野生型蛋白与GST的融合蛋白,分析野生型UCHL1过量、UCHL1(I93M)点突变蛋白添加及泛素水解酶活性缺失的UCHL1(C90S)点突变蛋白添加对卵母细胞生发泡破裂(GVBD)率的影响.分离UCHL1(I93M)点突变小鼠与野生型小鼠的生发泡期卵母细胞,体外培养3 h后比较其GVBD率.结果 显微注射UCHL1野生型蛋白及其点突变体与GST的融合蛋白的各组之间、注射GST组、注射PBS组卵母细胞GVBD率差异均无统计学意义,在培养基中添加UCHL1蛋白与GST的融合蛋白组卵母细胞GVBD率与无注射无添加对照组相比差异也无统计学意义(P均>0.05).注射UCHL1(C90S)与GST的融合蛋白组有少量生发泡期卵母细胞体外发育为MⅡ期卵母细胞后呈现极体较对照组偏大的现象.UCHL1(I93M)点突变小鼠生发泡期卵母细胞体外GVBD率与野生型小鼠比较差异无统计学意义(P>0.05).结论 在小鼠卵母细胞中添加外源性UCHL1、有致病作用的UCHL1(I93M)突变体或泛素水解酶活性丧失的UCHL1(C90S)突变体均不影响卵母细胞成熟的GVBD进程,UCHL1(I93M)点突变小鼠卵母细胞GVBD率亦无异常,但UCHL1(C90S)点突变可能影响极体的形成.     

泛素C末端水解酶L1活性对皮层神经元中tau蛋白磷酸化的影响

目的:在细胞水平探讨泛素C末端水解酶L1(UCH-L1)活性抑制对微管相关蛋白tau的磷酸化影响。方法:使用UCH-L1特异性抑制剂LDN-57444处理原代培养皮层神经元后检测UCH-L1酶活性,tau蛋白磷酸化水平采用免疫印记法检测。结果:LDN-57444对UCH-L1酶活性的抑制呈浓度依赖性和时间依赖性关系(P<0.01);伴随UCH-L1酶活性的显著抑制,tau蛋白Ser199、Ser202和Ser396位点磷酸化水平均明显升高(P<0.01),而总tau水平无明显改变(P>0.05)。结论:UCH-L1抑制可诱发神经元过度磷酸化tau蛋白的聚积,UCH-L1活性失调可能参与了阿尔茨海默病的病理过程。     

小儿主动脉缩窄围术期泛素羧基末端水解酶L1的变化与临床意义

目的 观察体外循环（cardiopulmonary bypass,CPB）和非CPB下行手术的主动脉缩窄患儿中血清泛素羧基末端水解酶L1（ubiquitin carboxyl-terminal esterase-L1,UCH-L1）浓度变化,评价UCH-L1是否是一个主动脉弓部手术后CPB相关脑损伤的预测指标。方法 2012年1月和2013年6月首都医科大学附属北京儿童医院共39例主动脉缩窄患儿接受了主动脉成型手术;其中A组17例未行CPB,B组22例应用选择性脑灌注分别在6个时间点（麻醉诱导后,关胸,术后2、8、24、48 h）收集血清标本,采用酶联免疫吸附法分别测定UCH-L1、神经胶质蛋白S-100β和神经元特异性烯醇化酶（neuron specific enolase,NSE）浓度。在术后8 h,拔除气管插管后6 h和出院前进行神经系统功能评分。结果 2组血清中UCH-L1浓度在术前基本相同[A组（0.184±0.066）μg/L vs B组（0.194±0.067）μg/L]。B组术后2 h后血清UCH-L1浓度较A组明显升高[A组（0.238±0.067）μg/L vs B组（0.327±0.151）μg/L,P<0.05],并于术后8 h达到高峰。在术后24 h,2组血清UCH-L1浓度差异无统计学意义[A组（0.208±0.078）μg/L vs B组（0.201±0.081）μg/L,P>0.05]。B组血清UCH-L1的峰值浓度和CPB时间明显相关（r=0.575,P=0.005）。术后所有患者均未出现持续存在的严重神经系统合并症。结论 与非CPB手术相比,应用选择性脑灌注的小儿主动脉弓部手术可引起血清UCH-L1浓度显著升高,并且与CPB时间密切相关。UCH-L1可以作为一个CPB相关脑损伤诊断的潜在生物标志物。     

热性惊厥患儿外周血泛素羧基末端水解酶L1、神经烯醇化酶表达水平及临床意义

目的 探讨热性惊厥患儿外周血泛素羧基末端水解酶L1(UCH-L1)、神经烯醇化酶(NSE)表达水平.方法 回顾性分析2017年1月—2019年6月安徽省芜湖市第二人民医院(以下简称我院)收治的97例热性惊厥患儿为病例组,根据疾病类型将其分为单纯性热性惊厥组(单纯组,55例),复杂性热性惊厥组(复杂组,42例);根据...     

泛素羧基末端水解酶-1在神经退行性疾病中的作用及临床应用

泛素羧基末端水解酶1(UCH-L1),又称蛋白基因产物9.5(PGP9.5),主要通过泛素-蛋白酶体系统(UPS)和自噬-溶酶体途径(ALP)间接影响体内蛋白的降解代谢,参与包括阿尔兹海默病、帕金森病在内的多种神经退行性疾病的发病和调控机制。本文主要概述了UCH-L1结构和功能、UCH-L1及其突变型在阿尔兹海默病、帕金森病中的作用、机制以及临床应用意义。     

轻型颅脑损伤患者血清泛素C末端水解酶L1水平变化情况分析

目的分析血清泛素C末端水解酶L1(UCH-L1)水平在轻型颅脑损伤中的意义及同预后的关系。方法选取2014年8月到2015年7月东莞市塘厦医院收治的30例轻型颅脑损伤患者作为观察组,根据头颅CT阴性和阳性分为A、B两组;同时取30例健康体检者为对照组,用ELISA方法检测患者血清UCH-L1水平,分析患者轻型颅脑损伤程度与UCH-L1水平的关系,并评估患者预后质量。结果对照组血清UCH-L1水平明显低于观察A、B两组,差异有统计学意义(P<0.05);观察A组患者血清UCH-L1水平明显低于观察B组,差异有统计学意义(P<0.05);观察A组患者GOS评分低于观察B组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论血清UCH-L1可以作为鉴别轻型颅脑损伤的生物标志物,对患者预后质量的判断具有一定的参考价值。     

老年急性脑梗死患者血清胶质纤维酸性蛋白、泛素羧基末端水解酶L1水平与卒中量表评分的相关性分析

目的:分析老年急性脑梗死患者血清胶质纤维酸性蛋白(GFAP)、泛素羧基末端水解酶L1(UCH-L1)水平与美国国立卫生研究院卒中量表(NIHSS)评分的相关性.方法:回顾性收集洛阳市第三人民医院2019年1月-2020年1月收治的83例老年急性脑梗死患者临床资料,将轻度神经功能缺损37例患者资料作为轻度组,将中度神经功...     

急性脑梗死患者血清泛素羧基末端水解酶-1和胶质纤维酸性蛋白的表达及其临床意义

目的：观察急性脑梗死患者血清泛素羧基末端水解酶-1(ubiquitin C-terminal hydrolase-L1,UCH-L1)和血清胶质纤维酸性蛋白(serum glial fibrillary acidic protein,GFAP)的临床表达水平,并探讨二者对脑梗死患者的临床意义。方法：选取重庆市肿瘤医院在2014年1月至2016年2月期间收治的80例急性脑梗死患者作为观察组,另选取同时段来院做体格检查的80例健康者作为对照组。分别检测两组研究对象的血清UCH-L1和GFAP的表达水平。结果：UCH-L1诊断脑梗死的敏感度为75.0%,特异度为87.5%;GFAP诊断脑梗死的敏感度为81.3%,特异度为 90.0%。UCH-L1和GFAP的受试者工作特征(receiver operating characteristic,ROC)曲线下面积分别为0.670及0.757。两组研究对象在年龄、性别、饮酒、吸烟、糖尿病、高脂血症等一般情况中比较,差异无统计学意义(P>0.05);观察组患者患高血压的比例明显高于对照组(P<0.05);经Spearson/Pearson分析显示血清UCH-L1与GFAP水平与高血压呈正比,与性别、年龄、糖尿病、高血脂、饮酒、吸烟等因素无相关性;观察组患者不同发病时间一般资料的比较,差异无统计学意义(P>0.05),血清UCH-L1和GFAP表达水平明显高于对照组(P<0.05);在不同发病时间两组患者血清UCH-L1和GFAP表达水平差异无统计学意义(P>0.05);轻、中、重型3组患者的血清UCH-L1和GFAP表达水平高于对照组(P<0.05);中、重型患者血清UCH-L1和GFAP表达水平高于轻型(P<0.05);观察组患者在不同发病时间里血清UCH-L1和GFAP表达水平与梗死灶大小差异有统计学意义(P<0.05);Pearson相关性分析结果示血清UCH-L1和GFAP表达水平呈正相关(r=0.634,P=0.001)。结论：在急性脑梗死患者中早期血清UCH-L1和GFAP的表达水平明显升高,与脑梗死的病情严重程度有一定的相关性,可为临床上早期诊断及治疗提供依据。     

血清神经胶质原纤维酸性蛋白和泛素羧基末端水解酶-L1与足月儿缺氧缺血性脑病的关系

目的 探讨血清神经胶质原纤维酸性蛋白(GFAP)、泛素羧基末端水解酶-L1(UCH-L1)与足月儿缺氧缺血性脑病(HIE)病情严重程度的关系。方法 选择2019年2月至2020年2月延安大学附属医院新生儿科收治的46例HIE足月儿为观察对象,根据病情程度分为轻度HIE组(n=13)、中度HIE组(n=21)和重度HIE组(n=12);另选择同期在本院出生且无窒息及神经系统症状的30例足月儿为对照组。轻度HIE组患儿给予常规的三支持治疗(1.维持良好的通气功能;2.维持脑和全身良好的血流灌注;3.维持血糖在正常范围)和三对症治疗(1.控制惊厥;2.降低颅内压;3.消除脑干症状);中、重度HIE患儿除了给予常规的三支持和三对症治疗外,同时于出生后6～72 h期间给予头部亚低温治疗,维持肛温在34～35℃。各组受试者均于出生第1、3、7天采集外周静脉血1.5～2.0 mL,置于干燥促凝管中,凝血后以3 200 r·min^-1离心5 min,取血清-70℃保存,采用酶联免疫吸附法检测血清GFAP、UCH-L1水平,比较各组受试者出生第1、3、7天血清GFAP、UCH-L1...     

血清高速泳动族蛋白B1、泛素羧基末端水解酶-Ll水平与心肺复苏术后神经功能预后不良的关系

目的 探讨血清高速泳动族蛋白B1(HMGB1)、泛素羧基末端水解酶-L1(UCH-L1)与心肺复苏术后神经功能预后不良的关系。方法 选取2019年1月至2022年10月海南医学院第一附属医院收治的心脏骤停体外心肺复苏后自主循环恢复患者175例为研究对象。依据患者神经功能预后情况分为预后不良组（75例）、预后良好组（100例）。比较两组血清HMGB1、UCH-L1水平及临床资料[性别、年龄、体重指数、机械通气时间、吸烟史、饮酒史、既往基础疾病史、心脏骤停病因、自主循环恢复时间、院前急救时间、肾脏替代治疗、格拉斯哥昏迷量表（GCS）评分、急性生理与慢性健康Ⅱ（APACHEⅡ）评分]的差异,采用logistic多因素回归分析影响患者神经功能预后的因素,受试者操作特征（ROC）曲线分析血清HMGB1、UCH-L1对神经功能预后不良的预测价值。结果 预后不良组APACHEⅡ评分、机械通气时间、血清HMGB1、UCH-L1高于预后良好组,而GCS评分低于预后良好组,差异有统计学意义（P<0.05）。logistic多因素回归分析显示,HMGB1、UCH-L1、APACHEⅡ评分是心肺复苏后神...     

重型脑外伤患者血浆泛素羧基末端水解酶-1水平的变化及预后因素分析

目的 研究血浆泛素羧基末端水解酶-1(UCH-L1)水平与重型脑外伤患者临床预后的相关性.方法 取86例重型脑外伤患者入院时及86例健康体检者静脉血,用ELISA法测定血浆UCH-L1水平,分析血浆UCH-L1水平与入院时格拉斯哥昏迷评分(GCS)及重型脑外伤后6个月内神经功能预后不良(格拉斯哥预后评分1~3分)的相关性,以及血浆UCH-L1水平对重型脑外伤患者6个月内神经功能预后不良的预测特异度和敏感度.结果 重型脑外伤患者血浆UCH-L水平[(1.69±0.45)ng/ml]较健康体检者[(0.14±0.03)ng/ml]明显升高(P＜0.01).多因素分析显示,入院时血浆UCH-L1水平是重型脑外伤后6个月内神经功能预后不良的独立危险因素(P＜0.05),与入院时GCS呈显著负相关(P＜0.01).受试者工作特征曲线分析显示,血浆UCH-L1水平预测脑外伤后6个月神经功能预后不良有显著预测价值(P＜0.01),且判定血浆UCH-L1水平2.08 ng/mL对预测脑外伤后6个月神经功能预后不良有83.3%的灵敏度和81.8%的特异度.结论 脑外伤后血浆UCH-L1水平显著升高,可作为重型脑外伤患者预后判断的重要指标.     

UCH37 与非小细胞肺癌患者预后的相关性研究

目的??检测泛素化羧基末端水解酶 37（UCH37）在非小细胞细胞肺癌组织中的表达情况,研究 UCH37 的表达与非小细胞肺癌患者的临床病理特征及生存预后之间的关系。方法??通过实时荧光定量聚合 酶链反应（qRT-PCR）检测非小细胞肺癌患者组织及对照癌旁组织中 UCH37 的表达情况,分析 UCH37 的 临床意义。结果??与癌旁组织比较,UCH37 在非小细胞肺癌组织中的表达增高（ P <0.05） ; UCH37 在非小细 胞肺癌组织中的表达与患者肿瘤的 TNM 分期、淋巴结转移相关（ P <0.05） ,生存曲线显示非小细胞肺癌组织 中 UCH37 高表达的患者术后总体生存率、无进展生存率低于低表达者（ P <0.05） ; Cox 比例风险回归模型 证实 UCH37 可作为非小细胞肺癌判断预后的预测指标 [H ^ R=2.221（95%?CI ： 1.367,3.437） , P =0.038]。结论? UCH37 表达在非小细胞肺癌组织中升高, 并可作为判断非小细胞肺癌患者生存及预后的评价指标。     

丹参多酚酸盐抑制主动脉弓缩窄所致的小鼠心肌肥厚的作用与机制

目的 研究丹参多酚酸盐抑制压力负荷型小鼠心肌肥厚的作用与机制.方法 60只C57BL/6J小鼠随机分为:假手术组、单纯给药组、主动脉弓缩窄组及主动脉弓缩窄给药组,每组15只.行主动脉弓缩窄术(transverse aortic constriction,TAC)构建小鼠心肌肥厚模型.术后6周,超声评价心脏功能;计算小鼠...     

血清UCH-L1蛋白在新生大鼠缺氧缺血性脑病评估中的价值

目的:探讨血清泛素羧基末端水解酶-1(UCH-L1)蛋白在新生大鼠缺氧缺血性脑病中的价值.方法:将168只新生大鼠随机分为对照组、手术组及缺氧缺血性脑损伤(HIBD)组,每组56只;各组组内又随机分为7个亚组:6 h组、12 h组、24 h组、48 h组、72 h组、96 h组及7 d组,每亚组8只;HIBD组采用改良Rice法制备HIBD模型.各组大鼠于不同时间点处死取血,采用ELISA法检测血清中UCH-L1表达水平的变化.结果:不同时间点3组大鼠间UCH-L1蛋白表达水平差异均有统计学意义(P<0.01),HIBD组UCH-L1蛋白表达水平显著高于对照组和手术组(P<0.01),而对照组与手术组间UCH-L1蛋白表达水平差异无统计学意义(P>0.05).HIBD组大鼠各时间点UCH-L1蛋白表达水平差异有统计学意义(P<0.01);HIBD组血清UCH-L1蛋白在6 h时检测水平明显升高,48 h到达峰值,后逐渐下降,且脑组织损伤越严重,血清UCH-L1蛋白表达水平越高.结论:UCH-L1蛋白血清表达水平与脑组织损伤的严重程度表现一致,可作为检测指标应用于评估脑组织损伤的严重程度.     

HGF抑制细胞凋亡干预心肌损伤的研究

目的 通过构建大鼠心肌缺血再灌注损伤（myocardial ischemia-reperfusion injury,MIRI）模型并应用肝细胞生长因子（hepatocyte growth factor,HGF）干预,观察HGF对MIRI细胞凋亡的影响。方法 24只雄性Wistar大鼠,采用随机数字表法分为假手术组（n=8）、MIRI组（n=8）和HGF组（n=8）。假手术组只穿线不结扎,MIRI组结扎大鼠左前降支30min再灌注180min,HGF组在结扎大鼠前降支同时给予尾静脉注射HGF(1mg/kg)。检测各组大鼠血清肌酸激酶同工酶（creatine kinase isoenzyme,CK-MB）水平,采用TUNEL法测定心肌细胞凋亡指数,免疫组织化学法检测胱天蛋白酶（Caspase）-3及Bax蛋白表达,以及通过超声心动图检查大鼠心功能。结果 与假手术组相比,MIRI组大鼠血清CK-MB、心肌细胞凋亡指数、Caspase-3和Bax蛋白表达、左心室收缩末期内径（left ventricular end systolic diameter,LVESD）、左心室舒张末期内径（left...     

二甲双胍对糖尿病大鼠心肌纤维化的影响

目的 探讨二甲双胍对糖尿病大鼠心肌纤维化的作用。方法 雄性SD大鼠随机分为正常对照组(NC组,n=8、糖尿病组(DM组,n=9)、二甲双胍组(MET组,n=10)。DM组、MET组大鼠高脂饲料喂养4周,腹腔注射小剂量链脲佐菌素(STZ)建立糖尿病模型,DM组、MET组大鼠继续高脂饲料喂养,并且MET组大鼠给予二甲双胍500mg/(kg·d)灌胃6周。实验末,计算心脏体质量比(HW/BW),采用Masson染色及免疫组织化学染色,检测左室心肌胶原含量及转化生长因子-β1(TGF β1)、血小板反应蛋白-1(TSP-1)表达的变化。结果 与NC组相比,DM组和MET组大鼠HW、HW/BW均显著增加(P<0 .05),心肌胶原含量、TGF-β1、TSP-1表达均显著增加(P<0.05);与DM组大鼠相比,MET组大鼠HW/BW显著减轻(P<0.05),心肌胶原含量、TGF-β1、TSP-1表达均显著减少(P<0.05)。结论 糖尿病大鼠存在心肌纤维化,二甲双胍可以减轻糖尿病大鼠的心肌纤维化。     

葛根素对糖尿病大鼠心肌纤维化的影响

目的:观察葛根素对糖尿病大鼠心肌损伤的保护作用,探讨心肌纤维化可能的发病机制.方法:制造糖尿病大鼠心肌病模型并分别给予不同剂量的葛根素灌胃,12周后检测血糖、心脏质量指数变化,光镜下观察心肌细胞形态学及胶原纤维的改变,免疫组化法和蛋白质印迹法测定心肌组织中基质金属蛋白酶2(MMP-2)和基质金属蛋白酶9(MMP-9)蛋...