基于Wnt/β-catenin大鼠心肌损伤的修复作用通路探讨益气活血方对急性心肌梗死

【目的】 探讨益气活血方对急性心肌梗死（AMI）大鼠心肌损伤的修复作用及机制。【方法】 将60只大鼠随机分为假手术组、模型组、中药组、Wnt-C59（Wnt/β-catenin信号通路抑制剂）组,每组15只。模型组、中药组、Wnt-C59组大鼠采用冠状动脉前降支结扎法建立 AMI 模型,假手术组大鼠仅打开胸腔后缝合。成功造模后,中药组大鼠灌胃益气活血方药液6.48 g·kg-1·d-1,Wnt-C59组大鼠灌胃Wnt-C59 30 mg·kg-1·d-1,假手术组和模型组大鼠灌胃0.9% 氯化钠（NaCl）溶液20 mL·kg-1 ,共4周。给药结束后,评价大鼠心功能变化,采用苏木素-伊红（HE）法和Masson染色法观察大鼠心肌组织病理学改变,脱氧核苷酸末端转移酶（TdT）介导的核苷酸（dUTP）缺口末端标记法（TUNEL）染色检测心肌细胞凋亡情况,实时荧光定量多聚核苷酸链式反应（RT-qPCR）法检测心肌组织半胱氨酸蛋白酶 3（Caspase-3）、B 淋巴细胞瘤-2 基因（Bcl-2）、Bcl-2 相关 X 蛋白（Bax）mRNA表达,酶联免疫吸附分析（ELISA）法检测血清心肌损伤指标乳酸脱氢酶（LDH）、磷酸肌酸激酶（CK）、CK同工酶（CK-MB）的含量,蛋白免疫印迹（Western Blot）法检测心肌组织 Wnt3a、β-catenin 及 β-catenin 靶基因细胞周期蛋白 D1（Cyclin D1）、C-myc蛋白表达水平。【结果】 与正常组比较,模型组大鼠心功能显著降低,出现明显心室扩张和重构,心肌组织排列紊乱、纤维化明显、细胞凋亡增加,Caspase-3、Bax mRNA表达水平上调,Bcl-2 mRNA表达水平下调,血清心肌损伤因子含量显著升高,心肌组织Wnt3a、β-catenin、Cyclin D1、C-myc蛋白表达水平显著升高（P＜0.05）。与模型组比较,中药组和Wnt-C59组大鼠心功能指标得到显著改善,心肌组织排列较为整齐,胶原纤维沉积减少,细胞凋亡减少,Caspase-3、Bax mRNA表达水平降低,Bcl-2 mRNA表达水平增加,血清心肌损伤因子含量降低,心肌组织Wnt3a、β-catenin、Cyclin D1、C-myc蛋白表达水平降低（P＜0.05）。【结论】 益气活血方可能通过调节Wnt/β-catenin信号通路改善AMI大鼠心肌损伤。     

反式白藜芦醇对自发性高血压大鼠心肌肥大的影响与机制研究

目的:观察反式白藜芦醇对自发性高血压大鼠心肌肥大及丝裂原活化蛋白激酶表达的影响。方法:21只SHR大鼠随机分为模型组、白藜芦醇高(45mg/kg)、低(15mg/kg)剂量组,另7只同龄WKY大鼠作为正常对照组。30天实验后,分别采用尾套法、称重与彩色多普勒超声法、定量PCR法检测各组大鼠血压、左心室肥大指标、以及心肌组织JNK mRNA和p38MAPK mRNA的表达。结果:反式白藜芦醇(45mg/kg)能显著降低SHR血压、左心室PWT、IVST及心肌肥厚指数,减少心肌组织中JNK、p38MAPKmRNA表达。结论:反式白藜芦醇能有效防治SHR大鼠心肌肥大,其作用与调控p38MAPK和JNK信号转导相关。     

内关穴位埋线对大鼠心肌梗死后心肌肥大的影响及作用机制

目的 观察内关埋线对大鼠心肌梗死后心肌肥大的影响,探究其作用机制。方法 采取结扎大鼠左冠状动脉前降支的方法建立心肌梗死动物模型,将其随机分为模型组、内关埋线组、培哚普利组,另设假手术组,其中假手术组只穿线不结扎,每组5只,术后第2天开始干预治疗,干预治疗7 d后,检测大鼠心脏功能,并观察心脏梗死边缘区心肌细胞形态学改变,检测心肌梗死边缘区ANP、m TOR、p-P70S6K、P70S6K、p-4E-BP1、4EBP1的蛋白表达情况。结果 1）与假手术比较,模型组大鼠左室射血分数（LVEF）、左室短轴率（LVFS）明显降低,左室舒张末期内径（LVIDd）、左室收缩末期内径（LVIDs）显著升高,与模型组比较,内关埋线组和培哚普利组LVEF、LVFS显著升高,LVIDd、LVIDs显著降低（P <0.05）。2）与假手术组比较,模型组横截面积显著升高,与模型组比较,内关埋线组和培哚普利组横截面积显著降低（P <0.05）。3）与假手术组比较,模型组ANP蛋白表达显著升高,与模型组比较,内关埋线组和培哚普利组ANP蛋白表达降低（P <0.05）。4）与假手术组比较,模型组p...     

益气活血方对实验性心肌梗死大鼠促血管新生机制研究

1 现代中医学对冠心病的认识 由《诸病源候论·心病诸侯》中"心为诸脏主而藏神,其正经不可伤,伤之而痛为真心痛"一句,可以推断出,在中医领域,冠心病心肌梗死隶属于"胸痹心痛","厥心痛"等疾病."急性心肌梗死"在国家标准《中医临床诊疗术语》中所对应的中病名为"厥(真)心痛",其病机主要由于内因久患胸痹之疾,心气亏虚,心阳渐衰,心阴血不足,寒、痰、瘀血内阻,外因寒冷、饱食、酗酒、劳累或喜怒不节等,徒生气血逆乱,心脉猝然闭阻,营气不从,逆陷于心而成瘀血内结,气滞于内致热结不散,痰瘀互结,形成心体失营,脉络瘀阻,治疗上"益气化瘀通络"是急性心肌梗死的重要治则.中医认为,气血具有相关性,气血相生,血脉同源.因此,心肌梗死后促心肌内微血管新生的前提条件是保证气血的流畅.     

温阳化饮益气活血法对慢性心功能不全大鼠心肌α-MHC、β-MHC基因表达的影响

目的:探讨温阳化饮益气活血法对慢性心功能不全大鼠心肌α- MHC、β-MHC基因表达的影响。方法:采用腹腔注射阿霉素法复制慢性心功能不全大鼠动物模型,利用RT-PCR技术检测心肌重构的相关调控因素α- MHC、β-MHC在慢性心功能不全发病中的作用,同时观察温阳化饮益气活血法对其干预作用。结果:慢性心功能不全大鼠模型组心肌组织α-MHC基因表达下调,β-MHC基因表达上调;温阳化饮益气活血法治疗组心肌组织α-MHC基因表达上调,β-MHC基因的表达下调。结论:温阳化饮益气活血法能上调慢性心功能不全大鼠α-MHC基因的表达,下调β-MHC基因的表达,为温阳化饮益气活血法的临床应用提供了实验依据,这可能是温阳化饮益气活血法防治慢性心功能不全的作用机制之一。     

益气活血方促心梗后大鼠缺血心肌血管新生及对VEGF-B表达的影响

本研究观察了中药复方制剂益气活血方对实验性心肌梗死(AMI)大鼠缺血心肌血管新生的影响,并通过测定梗死边缘区心肌组织中VEGF-B蛋白的表达来初步探讨其作用的分子学机制。1材料与方法1·1实验材料1·1·1实验动物Wistar大鼠,雄性,体重230g±20g(郑州大学动物中心提供,合格证号:410116)。1·1·2药物及试剂①益气活血方干浸膏(人参、黄芪、黄精、赤芍、西红花),每1g干浸膏相当于原生药材2·81g,由河南省中医院制剂室提供。②麝香保心丸:上海和黄药业有限公司生产,批号:A040214。③小鼠抗大鼠CD34单克隆抗体,购自美国Santa公司;兔抗鼠V…     

益气活血方对压力超负荷致大鼠心肌肥厚的影响

目的:观察益气活血方对压力超负荷致心肌肥厚大鼠的血流动力学、形态学及神经内分泌因子影响。方法:采用腹主动脉缩窄法制作压力超负荷致心肌肥厚模型。造模4周后,分为假手术组(S组),模型组(M组),依那普利组(E组)、卡维地洛组(C组)及益气活血方组(SQAB组),观察8周的血流动力学参数、心率(HR)、心输出量(CO)、心脏指数(HMI、LVMI)、血清ANP、BNP含量、形态学等。结果:与S组相比,M组血压及心室内压显著升高,CO下降明显,心脏指数及血清ANP、BNP含量明显上升(P0.05),心肌组织肥厚明显。与M组相比,SQAB组具有降低LVSP、升高±dp/dtmax,减慢HR,增加CO,降低HMI及血清ANP、BNP含量的作用(P0.05),改善心肌肥厚程度。结论:益气活血方具有改善压力超负荷致心肌肥厚大鼠的血流动力学,提高心输出量,减轻心肌肥厚,改善神经内分泌因子的作用。     

益气活血方对慢性心力衰竭大鼠心室重构的干预作用及其机制

目的:观察益气活血方对慢性心力衰竭模型大鼠心脏结构变化的影响,并从线粒体动力学和分泌型糖蛋白(Wnt)/β-链蛋白(β-catenin)通路探讨其作用机制。方法:40只雄性SD大鼠随机选取10只为假手术组,其余行左冠状动脉前降支结扎术构建慢性心力衰竭(CHF)大鼠模型,造模完成后随机分为模型组、卡托普利组和益气活血组,每组10只。给药组分别予以卡托普利片13.5 mg·kg^-1·d^-1,益气活血颗粒20 g·kg^-1·d^-1灌胃给药,干预8周后取心脏组织,称取体质量与心脏质量结合超声心动图检测心脏结构变化情况,行马松(Masson)染色测定心肌间质胶原容积分数,应用蛋白免疫印迹法(Western blot)检测心肌线粒体融合蛋白视神经萎缩相关蛋白1(Opa1),分裂蛋白线粒体动力相关蛋白1(Drp1)的表达水平,应用实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测Wnt/β-catenin通路相关因子低密度脂蛋白受体相关蛋白6(LRP6),糖原合成酶激酶-3β(GSK-3β),β-catenin mRNA的表达。结果:与假手术组比较,模型组左心室壁明显增厚(P<0.05),心腔明显扩大、心肌间质胶原含量升高(P<0.01);Opal表达水平降低,Drp1表达水平升高(P<0.01),LRP6,GSK-3β,β-catenin的mRNA表达量升高(P<0.01)。与模型组比较,益气活血组可减轻室壁增厚和心腔扩大(P<0.05,P<0.01),降低心肌间质胶原含量(P<0.05);上调Opa1的低表达、下调Drpl的高表达、下调LRP6,GSK-3β,β-catenin的高表达(P<0.01),作用效果优于或不劣于卡托普利组。结论:益气活血方可有效减轻慢性心力衰竭大鼠心室重构、改善线粒体能量代谢,其机制可能与抑制Wnt/β-catenin的相关因子的表达相关。     

心肌肥大的分子机制及中药干预研究进展

综述心肌肥大的分子机制和中药防治心肌肥大的最新研究进展。心肌肥大是心力衰竭的主要风险因素,是由多种细胞因子和/或信号通路(如钙信号传导、AMPK、TLR4/NF-κB、MAPK、PI3K/AKT以及氧化应激相关等)失调引起的;黄芪甲苷、天麻素、人参皂苷以及蜂胶、积雪草等可通过调节相关通路阻止或逆转病理性肥大,从而避免发展为心力衰竭。     

多肽药物汇利心康对小鼠心肌肥大与肌球蛋白重链表达的影响

 目的 探讨Gq蛋白羧基端模拟肽盐酸GCIP-27（汇利心康,HLXK）对去甲肾上腺素诱导的小鼠心肌肥大和肌球蛋白重链表达的影响。方法 60只小鼠,随机分为对照组、模型组、氯沙坦组、HLXK（10、30、90 μg·kg-1）组,分别给予生理盐水、去甲肾上腺素1.5 mg·kg-1（ip,bid）、氯沙坦钾9 mg·kg-1（ig,qd）、HLXK（10、30、90 μg·kg-1;ip,bid）。连续给药20 d后,称量小鼠体重、心脏质量、左心室质量,计算心脏质量指数和左心室质量指数。采用免疫组化法测定肌球蛋白重链(myosin heavy chain,MHC)α、β在心肌组织中的表达情况。结果 去甲肾上腺素可明显诱导小鼠心肌重构。氯沙坦、HLXK（30、90 μg·kg-1;bid）能明显降低小鼠心脏质量指数和左心室质量指数,增加心肌组织中α-MHC的表达,降低β-MHC的表达。结论 汇利心康能够有效防止小鼠发生心肌肥大,纠正心肌肥大过程中的肌球蛋白重链表达失衡。     

益气活血方促心梗后大鼠缺血心肌血管新生的实验研究

目的：观察益气活血方对心梗后大鼠缺血心肌局部血管新生的影响。方法：建立心梗模型后，分为五组，即益气活血方大剂量组、益气活血方小剂量组、麝香保心丸组、假手术组、模型组，灌胃6周后处死动物，取心肌组织，用免疫组化法（CD34）测定心梗边缘区新生血管数及微血管密度。结果：与假手术组相比，模型组大鼠心梗边缘区新生血管数及微血管密度明显升高（P〈0.05）；所有治疗组对新生血管数及微血管密度均有不同程度的促进作用，与模型组比较均有显著差异（P〈0．05），其中大剂量组和麝香保心丸组的作用尤为明显（P〈0.05）。结论：益气活血方能够促进心梗后大鼠缺血心肌局部血管新生，对缺血心肌具有保护作用。     

粉防已碱对血管紧张素II诱导心肌肥大及p-ERK1/2表达的影响

目的:观察粉防已碱(tetrandrine, Tet)对血管紧张素II(angiotensin Ⅱ, Ang Ⅱ)诱导的心肌肥大及p-ERK1/2表达及活性的影响.方法:培养新生大鼠心肌细胞,用相差显微镜计数心肌细胞搏动频率、细胞图像分析系统测量细胞体积、考马斯亮蓝法测定心肌细胞总蛋白含量、[3H]-亮氨酸掺入法测定蛋白合成速率作为心肌肥大指标;以ERK免疫沉淀活性试剂盒测定ERK活性,Western-blot测定p-ERK1/2表达.结果:Tet能显著抑制Ang II诱导的心肌细胞搏动频率、体积、总蛋白含量、蛋白合成速率的上升;对p-ERK1/2表达及活性具有剂量依赖性的抑制作用.结论:Tet可以明显抑制Ang II诱导的心肌肥大,机制与降低p-ERK1/2表达及活性有关.     

温阳化饮益气活血法对慢性心功能不全大鼠心肌α-MHC、β-MHC基因表达的影响

目的：探讨温阳化饮益气活血法对慢性心功能不全大鼠心肌α-MHC、β-MHC基因表达的影响。方法：采用腹腔注射阿霉素法复制慢性心功能不全大鼠动物模型，利用RT—PCR技术检测心肌重构的相关调控因素α-MHC、β-MHC在慢性心功能不全发病中的作用，同时观察温阳化饮益气活血法对其干预作用。结果：慢性心功能不全大鼠模型组心肌组织α-MHC基因表达下调，β-MHC基因表达上调；温阳化饮益气活血法治疗组心肌组织α-MHC基因表达上调，β-MHC基因的表达下调。结论：温阳化饮益气活血法能上调慢性心功能不全大鼠α-MHC基因的表达，下调β-MHC基因的表达，为温阳化饮益气活血法的临床应用提供了实验依据，这可能是温阳化饮益气活血法防治慢性心功能不全的作用机制之一。     

益气活血方对胃癌前病变大鼠胃黏膜Sonic Hedgehog信号通路的影响

目的:研究益气活血方对1-甲基-3-硝基-1-亚硝基胍(MNNG)诱导的新生大鼠胃癌前病变胃黏膜组织Sonic Hedgehog(Shh)信号通路的影响.方法:48只雄性乳鼠随机分为正常组8只,造模组40只.造模组灌服800mg/L的MNNG0.1mL/只,正常组灌服等量0.9％氯化钠溶液,共10d.23周后将造模组随...     

芪丹利心丸对心肌梗死后慢性心力衰竭大鼠心肌纤维化的影响

[目的] 观察芪丹利心丸对心肌梗死后慢性心力衰竭大鼠心肌纤维化的影响。[方法] 通过结扎大鼠左冠状动脉（冠脉）前降支的方法诱导形成慢性心力衰竭模型,经过芪丹利心丸药物[1.1、2.2、4.4 g/（kg·d）]4周干预后,利用超声心动仪和左心室压力-容积环检测评价心功能。采用Masson染色观察各组心脏病理学变化,采用反转录-聚合酶链反应（RT-PCR）测定各组胶原蛋白（Collagen I和Ⅲ）的mRNA水平,采用蛋白质免疫印迹实验（Western Blot）检测各组转化生长因子-β1（TGF-β1）、Smad3、Smad7的蛋白表达水平。[结果] 模型组心功能显著下降[左室射血分数（LVEF）、左室短轴缩短率（LVFS）、左室内压上升或下降最大速率（±dp/dt max）,P<0.05],心室重构明显[室间隔厚度（IVST）、左室收缩末期内径（LVESD）,P<0.05];与模型组比较,芪丹利心丸能够明显改善慢性心力衰竭大鼠心功能,延缓心室重构进程,其中芪丹利心丸中剂量组和芪丹利心丸高剂量组效果较为明显（P<0.05）,并且抑制胶原蛋白CollagenI和Ⅲ的mRNA表达（P<0.05）,减少心肌纤维细胞形成,下调心肌纤维化相关蛋白TGF-β1、Smad3蛋白表达（P<0.05）,提高抗纤维化蛋白Smad7水平（P<0.05）。[结论] 益气活血利水方芪丹利心丸能改善心肌梗死后慢性心力衰竭大鼠心功能,延缓心室重构和心肌纤维化水平,其机制可能与调控TGF-β1/Smads的信号通路有关。     

粉防已碱对血管紧张素II诱导心肌肥大及p-ERK1/2表达的影响

目的：观察粉防已碱(tetrandrine, Tet)对血管紧张素II(angiotensin Ⅱ, Ang Ⅱ)诱导的心肌肥大及p-ERK_1/2表达及活性的影响。方法：培养新生大鼠心肌细胞,用相差显微镜计数心肌细胞搏动频率、细胞图像分析系统测量细胞体积、考马斯亮蓝法测定心肌细胞总蛋白含量、［₃H］-亮氨酸掺入法测定蛋白合成速率作为心肌肥大指标；以ERK免疫沉淀活性试剂盒测定ERK活性,Western-blot测定p-ERK_1/2表达。结果：Tet能显著抑制Ang II诱导的心肌细胞搏动频率、体积、总蛋白含量、蛋白合成速率的上升；对p-ERK_1/2表达及活性具有剂量依赖性的抑制作用。结论：Tet可以明显抑制Ang II诱导的心肌肥大,机制与降低p-ERK_1/2表达及活性有关。     

益气活血方促心梗后大鼠缺血心肌血管新生及对bFGF影响的研究

目的:探讨益气活血方对心梗后大鼠缺血心肌局部血管新生的影响及其分子学机制。方法:建立心梗模型后,分为五组,即益气活血方大剂量组、益气活血方小剂量组、麝香保心丸组、假手术组、模型组,灌胃6周后处死动物,取心肌组织,用免疫组化法测定心梗边缘区新生血管数及微血管面密度;检测缺血心肌局部碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)的表达。结果:与假手术组相比,模型组大鼠心梗边缘区新生血管数、微血管面密度及bFGF的表达明显升高(P<0.05);所有治疗组的新生血管数、微血管面密度及bFGF表达均有不同程度的升高,与模型组比较均有显著差异(P<0.05),其中大剂量组的作用尤为明显(P<0.05)。bFGF表达与微血管数增多呈一致性。结论:益气活血方能够促进心梗后大鼠缺血心肌局部血管新生,对缺血心肌具有保护作用,上调心肌局部bFGF蛋白表达可能是其作用机制之一。     

益气活血方对肝纤维化大鼠JNK通路的作用研究

目的:研究c-Jun氨基末端激酶(JNK)信号转导通路在CCl4诱导的肝纤维化大鼠模型中的表达,以阐明益气活血方抑制肝纤维化的分子机制.方法:27只雄性Wistar大鼠随机分为对照组、模型组和益气活血方治疗组.模型组以30％CCl4橄榄油溶液腹腔注射诱导建立肝纤维化模型;益气活血方治疗组在CCl4建模的同时以益气活血方...     

辛伐他汀对高血压大鼠心肌肥厚及细胞外信号调节激酶的影响

 目的探讨辛伐他汀对自发性高血压大鼠(SHR)心肌肥厚及细胞外信号调节激酶(ERK)的影响。方法将14只14周龄雄性SHR随机分成2组,每组7只;其中辛伐他汀组40mg·kg^-1·d^-1灌胃;对照组灌胃载体(0.5%羧甲基纤维素钠);共10 周。并以雄性同周龄Wistar Kyoto大鼠(WKY)作对照比较。以左心室质量与体重的比值反映心肌肥厚的程度;用Western-blot 方法检测大鼠心肌总ERK(t-ERK)、磷酸化ERK(p-ERK)以及丝裂原活化蛋白激酶磷酸酶-1(MKP-1)水平。结果SHR辛伐他汀组心肌肥厚指数明显低于SHR对照组(P<0.05)。3组大鼠t-ERK水平无显著性差异(P>0.05);辛伐他汀组心肌p-ERK和p-ERK/t-ERK比值明显低于SHR对照组(P<0.01),与WKY组接近;辛伐他汀组心肌MKP-1水平低于SHR对照组(P<0.05), 与WKY组无显著差异。结论辛伐他汀能抑制心肌肥厚,其作用机制可能与降低ERK活性有关。     

益气活血方对心肌梗死后心力衰竭大鼠心功能的影响及其细胞凋亡机制

目的观察益气活血方对心肌梗死后心力衰竭大鼠心功能的影响并探讨其中的细胞凋亡机制。方法将50只雄性SD大鼠随机分为假手术组、模型组、酒石酸美托洛尔组、益气活血小剂量组和益气活血大剂量组。所有组别均进行大鼠冠状动脉结扎术,假手术组不进行最后的冠状动脉结扎。益气活血方由人参、黄芪、当归按一定比例组成。酒石酸美托洛尔组按12 mg/(kg·d)给药剂量灌胃,益气活血小剂量组和大剂量组分别按2 g/(kg·d)和20 g/(kg·d)给药剂量灌胃,假手术组和模型组给予生理盐水灌胃。于造模后24小时开始,连续给药8周后进行小动物心动超声检测以及心脏组织取材TUNEL染色检测细胞凋亡。结果小动物心动超声结果显示,与假手术组比,模型组大鼠的心脏LVDd、LVDs显著增加(P<0.05),LVEF%、LVFS%显著降低(P<0.05)。与模型组比,给予益气活血方小剂量可以显著改善LVEF%、LVFS%(P<0.05),而大剂量益气活血方有改善LVEF%、LVFS%的趋势,但差异没有统计学意义(P>0.05)。大鼠心肌组织TUNEL染色表明,模型组大鼠心肌细胞TUNEL染色阳性细胞核显著增高(与假手术组比较,P<0.01),益气活血小剂量和大剂量可以明显抑制冠状动脉结扎大鼠模型心肌组织细胞凋亡的发生(P<0.05;P<0.01)。结论益气活血方可以改善心肌梗死后心功能,抑制细胞凋亡的发生可能是其中重要的机制。