鼠源pcDNA3.1-3×Flag-c-NUP85真核表达质粒的构建及其部分功能研究

目的 构建鼠源pcDNA3.1-3×Flag-c-NUP85真核表达质粒,并观察其对脂多糖(LPS)诱导的RAW264.7细胞中炎症相关因子分泌的影响及对RAW264.7细胞增殖和凋亡的影响。方法 通过PCR扩增NUP85基因,构建pcDNA3.1-3×Flag-c-NUP85真核表达质粒。将pcDNA3.1-3×Flag-c载体进行酶切。纯化的PCR产物与载体连接,将连接产物转化细菌感受态细胞。酶切鉴定后,再进行测序和比对分析。然后将其转染至RAW264.7细胞中,通过CCK-8实验和流式细胞术检测其对LPS诱导的RAW264.7细胞增殖和凋亡的影响,并通过Western blot技术和ELISA法检测RAW264.7细胞中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)的表达情况。结果 酶切鉴定和Western blot结果显示pcDNA3.1-3×Flag-c-NUP85真核表达质粒成功构建和表达。CCK-8实验结果显示：24 h后过表达NUP85组细胞的存活率显著低于对照组[(0.55±0.03)vs(0.67±0.05),F=30.98,P<0.05]。流式细...     

脂源性细胞因子对人脂肪细胞miR-506表达的调控影响

目的 探讨脂源性细胞因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)对成熟人脂肪细胞miR-506表达的调控影响.方法 采用实时荧光定量多聚核苷酸链式反应方法检测人脂肪前体及成熟脂肪细胞中miR-506的表达水平.并以10、30 ng/mL的TNF-α、IL-6干预成熟脂肪细胞0、4、8、24 h,检测各...     

p38丝裂原激活蛋白激酶抑制剂对脓毒症早期大鼠心肌中炎性因子和细胞凋亡蛋白表达的影响

 目的 探讨脓毒症时心肌损害的原因及p38丝裂原激活蛋白激酶(MAPK)抑制剂的保护作用。方法 将84只雄性SD大鼠随机分为对照组、实验组和治疗组（n=28）。实验组和治疗组采用腹腔注射内毒素（10 mg/kg）制作脓毒症模型,治疗组同时加p38MAPK抑制剂SB203580予以干预,对照组腹腔注射生理盐水。在不同时间点观察大鼠血清脑钠素（BNP）、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素6（IL-6）的浓度及心肌组织中TNF-α、IL-6、凋亡蛋白caspase-9的表达情况。 结果 实验组大鼠血清TNF-α、IL-6进行性升高。对照组心肌组织中仅有微量TNF-α、IL-6及caspase-9表达,而实验组心肌组织中则大量表达。血清TNF-α、IL-6浓度及心肌中caspase-9的表达与心肌损害程度呈显著正相关。应用SB203580后,治疗组血清TNF-α、IL-6浓度显著降低,心肌中caspase-9的表达也减少。但各组血清BNP浓度之间差异无统计学意义,均在正常范围之内。结论 TNF-α、IL-6的大量释放及其在心肌中的表达是脓毒症心肌损害的原因之一,p38MAPK抑制剂SB203580可对脓毒症大鼠心肌损害起保护作用。     

碘化钠对人甲状腺细胞白细胞介素-6、γ-干扰素和肿瘤坏死因子-α基因表达的影响

甲状腺组织中含有多种细胞因子,甲状腺细胞本身亦可合成与分泌白细胞介素-6(IL-6)及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)等免疫介质,而后者与甲状腺疾病,尤其是自身免疫性甲状腺疾病(AITD)之间存在着密切的关联性。迄今为止,碘能否调节甲状腺细胞产生细胞因子,并继而影响甲状腺内环境的稳定状态,导致AITD的发生与发展尚不得而知。本文采用细胞培养方法和RT-PCR技术,研究人甲状腺细胞表达IL-6、TNF-α和INF-γ的特征,以及碘对这些细胞因子基因表达的调节,旨在了解细胞因子在碘致AITD中的作用与地位。1　材料和方法甲状腺细胞培养及碘化钠刺…     

p38蛋白激酶在脂多糖诱导肺泡巨噬细胞活化中的作用

目的探讨p38蛋白激酶在脂多糖(LPS)刺激肺泡巨噬细胞激活机制中的作用.方法分离培养大鼠肺泡巨噬细胞,设正常对照组、LPS刺激组、SB203580干预组(SB203580 LPS组).分别采用免疫组织化学和原位分子杂交方法检测p38蛋白质及其mRNA的表达,用放射免疫分析法检测细胞培养上清TNF-α、IL-8的含量.结果LPS刺激肺泡巨噬细胞p38胞核染色阳性细胞百分比、胞浆p38mRNA的表达以及培养上清TNF-α、IL-8含量显著升高,分别为正常对照组的5.75倍、1.44倍、3.57倍和3.22倍;加入SB203580预处理后,上述指标均较LPS刺激组显著下降,较正常对照组稍高,但差异无显著性.肺泡巨噬细胞p38蛋白质胞核染色阳性细胞百分比及其mRNA的表达与培养上清TNF-α、IL-8含量均呈显著正相关.结论LPS刺激肺泡巨噬细胞释放炎性细胞因子可能是通过p38蛋白激酶介导的,抑制p38的活性可能成为治疗炎症反应的一条新途径.     

CO2气腹后肠再灌注对细胞因子表达的影响及其预处理效应

目的:观察C0O2气腹下胃肠pH(I-pH)及细胞因子的变化及糖皮质激素、抑肽酶预处理效果.方法:45例ASAⅠ～Ⅱ级择期腹腔镜胆囊切除术患者,随机分为对照组(A组),地塞米松组(B组)和抑肽酶组(C组).入室后,A组:静脉输注生理盐水100 mL;B组:输注生理盐水100 mL加入地塞米松20 mg;C组:输注生理盐水100 mL加入抑肽酶556U.于充气前(T0),排气后30 min(T1),排气后90 min(T2)检测I-pH,各时点取静脉血3 mL,检测肿瘤坏死因子-α(TNF-α),白介素-6(IL-6)及白介素-8(IL-8).结果:T1时3组患者I-pH均降低(P<0.05),T2时3组I-pH水平基本恢复至T(0时水平(P>0.05);T1,T2时A组TNF-α,IL-6及IL-8均升高(P<0.05),B组和C组较T(0时升高,但无统计学差异(P>0.05),与A组相比较降低,有统计学差异(P<0.05).结论:CO(2气腹下胃肠道有缺血低灌注现象,应用抑肽酶、糖皮质激素预处理可明显降低血浆TNF-α,IL-6,IL-8浓度,对缺血/再灌注损伤有保护作用.     

细胞因子在大鼠溃疡性结肠炎模型中的表达研究

目的：探讨促炎细胞因子IL-6、TNF-α与抑炎细胞因子IL-10在三硝基苯磺酸（TNBS）/乙醇所致的溃疡性结肠炎（ulcerative colitis,UC）大鼠模型结肠组织中的表达,探讨其在该模型中的作用及意义。方法：雌性SD大鼠随机分为正常对照组及模型组,每组7只。正常对照组不造模,模型组用三硝基苯磺酸（TNBS）/乙醇溶液灌肠复制UC模型。观察两组实验大鼠体质量变化、大体及组织病理学改变,采用酶联免疫吸附法检测细胞因子（IL-6、IL-10、TNF-α）的含量。结果：与正常组比较,模型组大鼠结肠大体形态评分、组织学评分明显升高（0.00±0.00与5.43±1.27,1.29±0.49与6.71±0.95,P〈0.01）;与正常组比较,模型组大鼠结肠组织IL-6、TNF-α表达明显升高（102.13±7.12与188.27±11.65,87.39±6.74与121.51±8.56,P〈0.01）;IL-10表达明显下降（202.97±12.26与71.40±8.28,P〈0.01）。结论：促炎细胞因子IL-6、TNF-α与抑炎细胞因子IL-10的失衡在TNBS诱导的大鼠UC发病中起重要作用。     

首发精神分裂症IL-1β,IL-6,TNF-α的血清蛋白水平及PBMC mRNA表达

目的:观察精神分裂症及其不同亚型中IL-1β,IL-6,TNF-α的动态变化情况,探讨免疫机制与精神病理的关系.方法:应用ELISA和RT-PCR方法,同时检测83例精神分裂症患者治疗前后和65例健康对照者IL-1 β,TNF-α,IL-6血清蛋白水平和PBMC mRNA表达.结果:①精神分裂症组治疗前、后与对照组血清IL-1β,IL-6,TNF-α水平相比均增高,差异有统计学意义(P＜0.05).精神分裂症组治疗后血清IL-1β水平与治疗前相比下降,差异有统计学意义(P＜0.05).②精神分裂症组治疗前阴性亚型患者TNF-α水平高于阳性亚型(P＜0.05),治疗后两型IL-1β水平和阴性亚型患者TNF-α水平较治疗前下降(P＜0.05);治疗前家族型患者IL-6水平高于散发型(P＜0.05),治疗后两型IL-1β水平和家族型患者TNF-α水平较治疗前下降(P＜0.05).③治疗前TNF-α水平与阴性症状评分呈正相关(r=0.412,P＜0.05);IL-1β治疗前后的差值与PANSS量表降分率呈正相关(r=0.388,P＜0.05).④精神分裂症组治疗前、后PBMC中IL-1β,IL-6,TNF-α mRNA表达与对照组相比增高,差异有统计学意义(P＜0.05);精神分裂症组治疗后PBMC中IL-1β mRNA表达与治疗前相比明显下降,差异有统计学意义(P＜0.05).结论:①精神分裂症患者存在免疫激活,IL-1β水平的变化可作为病情缓解的一个灵敏指标.②遗传背景可能影响了精神分裂症患者血清IL-6水平及其介导的免疫功能;TNF-α水平的变化可能与阴性症状的改善密切相关.③精神分裂症患者PBMC细胞因子mRNA表达上调,其可能是细胞因子的主要来源之一.     

sTRAIL真核表达质粒对人胃癌裸鼠移植瘤的抑制作用

目的 探讨可溶性肿瘤坏死因子相关捌亡诱导配体(soluble tumor necrosis factor.related apoptosis inducing lig-and,sTRAIL)真核表达质粒对人胃癌裸鼠移植瘤的抑制作用. 方法 建立胃癌细胞株BGC-823裸鼠移植瘤模型,成瘤后于瘤内多点注射重组真核表达质粒pBud-EGFP-TRAIL,并设pBud-EGFP组和生理盐水组为对照,观察并记录肿瘤的生长情况.Western blot和RT-PCR检测sTRAIL mRNA和蛋白表达情况,HE染色观察肿瘤组织病理改变,TUNEL法及电镜技术观测肿瘤组织细胞凋亡情况.结果注射pBud-EGFP-TRAIL组的sTRAIL mRNA和蛋白为阳性,其瘤休大小明显小于pBud-EGFP组和生理盐水组.差异有统计学意义(P<0.05).HE染色示pBud-EGFP-TRAIL组肿瘤细胞大量死亡,电镜下可见到典型凋亡细胞,TUNEL法显示其凋亡细胞明显增多. 结论 sTRAIL真核表达质粒pBud-EGFP-TRAIL瘤内注射对人胃癌裸鼠移植瘤有抑制作用.     

祛毒胶囊对狼疮样小鼠外周血白细胞介素-6、刊扰素-γ和肿瘤坏死因子-α的影响

目的 :观察祛毒胶囊对LPS诱导的狼疮样模型小鼠几项免疫指标和病理改变的影响 ,探讨祛毒胶囊治疗SLE的可能机制。方法 :用ELISA试剂盒检测血清中的白细胞介素 - 6 (IL - 6 )、干扰素 -γ(IFN -γ)、和肿瘤坏死因子 -α(TNF -α)水平 ,对肝肾组织常规HE染色。结果 :(1)血清中IL - 6、IFN -γ及TNF -α水平各治疗组与模型组比较 ,差异有显著性 (p <0 .0 5 ) ;(2 )病理结果显示模型鼠肝肾炎性改变 ,治疗组炎性改变减轻。结论 :祛毒胶囊对狼疮样小鼠血清中IL - 6、IFN -γ及TNF -α的分泌有抑制作用 ,能明显改善其病理状态。     

38例白大衣高血压患者血清TNF-α、sL-2R、L-6水平临床分析

目的 对白大衣高血压患者血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、可溶性白细胞素-2受体(sL-2R)与白细胞介素-6(L-6)水平的水平进行观察,评价其临床意义.方法 采用酶标法(EL ISA)测定原发性高血压组(EH组,36例)、白大衣高血压组(38例)及正常血压组(38例)血清TNF-α(ng/L)、sL-2R(kIU/L)、L-6(ng/L)水平,并测量诊室血压及24h动态血压(ABPM)值.结果 (1)诊血压参数:EH组及白大衣高血压组收缩压(SBP)、舒张压(DBP)明显高于正常血压组(P＜0.01).ABPM参数,EH组平均日间、平均夜间、平均24h DBP及平均24h DBP均明显高于白大高于白大衣高血压组及正常血压组(P＜0.01),EH组平均日间、平均夜间DBP高于白大衣高血压组及正常血压组(P＜0.05).(2)EH组血清TNF-α,sL-2R,L-6水平均高于白大衣高血压组(P＜0.05)和正常血压组P＜0.05),白大衣高血压组sL-2R,TNF-α吨及L-6水平明显高于正常血压组(P＜0.01).结论 白大衣高血压患者血清细胞因子水平介于EH者与正常血压者之间,反映白大衣高血压时机体己产生免疫调节与自身保护,提示白大衣高血压是介于高血EH者与正常血压之间,反映白大衣高血压时机体已产生免疫调节与自身保护,提示白大衣高血压是介于高血压与正常血压之间的临床状态,应视为EH早期的表现之一.     

慢性肾炎患者治疗前后血清IL-2、IL-6和TNF-α的检测及意义

目的探讨慢性肾炎患者治疗前后血清白细胞介素-2（IL-2）、白细胞介素-6（IL6）和肿瘤坏死因子-α（TNF-α）的水平变化及意义。方法选择我院2007年3月-2011年3月期间收治的慢性肾炎患者40例及同期健康体检者50例（对照组）,采用放射免疫法测定两组血清IL-2、IL-6和TNF-α的水平。结果慢性肾炎组治疗前的血清IL-6和TNF-α水平均显著高于对照组（P〈0.05）,而IL-2则显著低于对照组（P〈0．05）;经治疗后,上述指标与对照组相比较,差异仍具有统计学意义（P〈0．05）。结论检测慢性肾炎患者血清IL-2、IL-6和TNF-α水平的变化,对观察患者病情及预后判断等均具有十分重要的临床意义。     

hGITRaa1-165-IgG1Fc真核表达质粒的构建及其表达

目的:构建含有人糖皮质激素诱导的肿瘤坏死因子受体(GITR)胞外段基因的真核表达质粒hGITRaa1-165-IgG1Fc-peDNA3.1(+),检测hGITRaa1-165-IgGIFc融合蛋白在真核细胞COS-7中的表达.方法:以pGEMT-GITR质粒为模板,通过PCR扩增获得人GITR胞外段的基因hGITRaa1-165,将该目的基因连接至IsGlFc-pcDNA3.1(+)质粒,构建hGITRaa1-165-lgG1Fc-pcDNA3.1(+)真核表达质粒.将该重组质粒采用脂质体法转染COS-7细胞,通过SDS-PAGE和蛋白质印迹法检测hGITRaa1-165-IgG1Fc融合蛋白在真核细胞COS-7中的表达.结果:成功构建真核表达质粒hGI-TRaa1-165-IgG1Fc-pcDNA3.1(+),并在其转染的COS-7细胞培养上清中检测到hGITRaa1-165-IgG1Fc融合蛋白的表达.结论:成功表达hGITRaa1-165-IgG1Fc融合蛋白,为进一步研究GITR的生物学功能奠定了基础.     

金水宝对血液透析患者细胞免疫功能的影响

血液透析(HD)患者往往有不同程度的免疫功能缺陷，导致HD患者易于发生各种类型感染，目前尚无确切有效的控制方法。近3年来，我们对HD患者使用金水宝，取得了较好的疗效，报告如下。     

首发精神分裂症患者血清IL-1 β、2、6及TNF-α水平变化的研究

目的：探讨细胞因子在精神分裂症中的变化及临床意义。方法：采用酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测32例精神分裂症患者和26例健康志愿者血清IL-1β、IL-2、IL-6及TNF-α水平。结果：精神分裂症患者治疗前后血清IL-1β、IL-2、IL-6及TNF-α含量显著高于对照组（P〈0.05）;治疗后精神分裂症组血清IL-1β水平比治疗前下降,差异有统计学意义（P〈0.05）,而IL-2、IL-6、TNF-α水平有下降趋势,但无统计学意义（P〉0.05）。结论：精神分裂症存在免疫激活现象,IL-1β可能作为一种疗效观察的指标。     

首发精神分裂症患者血清IL-1β、2、6及TNF-α水平变化的研究

目的：探讨细胞因子在精神分裂症中的变化及临床意义。方法：采用酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测32例精神分裂症患者和26例健康志愿者血清IL-1β、IL-2、IL-6及TNF-α水平。结果：精神分裂症患者治疗前后血清IL-1β、IL-2、IL-6及TNF-α含量显著高于对照组（P〈0.05）;治疗后精神分裂症组血清IL-1β水平比治疗前下降,差异有统计学意义（P〈0.05）,而IL-2、IL-6、TNF-α水平有下降趋势,但无统计学意义（P〉0.05）。结论：精神分裂症存在免疫激活现象,IL-1β可能作为一种疗效观察的指标。     

p38丝裂原活化蛋白激酶在溃疡性结肠炎中的作用

目的 探讨p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)在溃疡性结肠炎(UC)以及葡聚糖硫酸钠(DSS)诱导的小鼠结肠炎中的作用。 方法 ①7只Balb/c小鼠随机分为3组:正常对照组、DSS结肠炎组、p38MAPK选择性抑制剂SB203580干预组。结肠炎组小鼠每日饮用5% DSS溶液,干预组小鼠则在饮用5% DSS溶液72 h后,加用SB203580[1 mg/(kg·d)]进行腹腔注射。观察并记录各组小鼠的疾病活动指数(DAI);7 d后处死小鼠,观察各组小鼠肠黏膜组织中肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白细胞介素-1β(IL-1β)的表达。②收集36例活动性UC患者的肠黏膜组织标本,并以18例结肠癌旁的正常组织标本作对照,通过体外组织培养,观察SB203580对UC患者肠黏膜活检组织中TNF-α和IL-1β表达的影响。 结果 ①DSS结肠炎小鼠的DAI评分、肠黏膜组织中TNF-α和IL-1β的水平明显升高(P均<0.01),经SB203580干预后,其DAI评分、TNF-α、IL-1β的水平均明显降低,但仍然高于正常对照组(P均<0.01)。②体外组织培养结果显示,与未用SB203580处理的UC组比较,SB203580处理后UC患者肠黏膜组织中TNF-α和IL-1β的水平明显降低(P<0.01)。 结论 SB203580能阻断p38MAPK信号转导通路,从而降低促炎性细胞因子TNF-α和IL-1β的释放。     

TNF-α在MODS鼠心肌中的表达及p38MAPK的调控作用

目的 探讨肿瘤坏死因子-α(TNF-α)在多器官功能障碍综合症(MODS)鼠心肌损伤中的作用及D38MAPK的调控机制。方法采用盲肠结扎并穿刺(CLP)来制作MODS模型。在不同时相点观察大鼠血清生化指标(GPT、BUN、Cr、CPK-MB)、TNF-α浓度及其mRNA在心肌的表达、心肌p38MAPK的活性。结果CLP术后血清TNF-α浓度进行性升高,CPK-MB显著提高。正常心肌组织不表达TNF-αmRNA,MODS时可见大量表达,且p38MAPK明显激活。血清TNF-α的水平及其mRNA在心肌中的表达与CPK-MB呈显著正相关。直用p38MAPK抑制剂SB203580后,p38MAPK激活受抑,血清TNF-α浓度显著降低,TNF-α在心肌中的表达减少,心肌损害明显减轻。结论TNF-α的大量释放及其在心肌中显著表达是MODS鼠心肌损伤的原因之-,通过调控p38MAPK信号通路可对心肌起保护作用。     

白细胞介素-6、白细胞介素-10、肿瘤坏死因子-α在不同时期胰腺炎的表达和临床意义

目的探讨白细胞介素-6（interleukin-6,IL-6）、白细胞介素-10（interleukin-10,IL-10）、肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor-alpha,TNF-α）在不同时期急性胰腺炎的表达和临床意义。方法选择2010年1月～2011年12月治疗的急性胰腺炎患者75例患者,患者根据病情分为轻症急性胰腺炎40例,重症急性胰腺炎35例,采用ELISA法检测患者血清中IL-6、IL-10、TNF-α的表达情况。结果与轻症急性胰腺炎患者血清IL-6、IL-10、TNF-α比较,重症急性胰腺炎血清IL-6、IL-10、TNF-α明显增高,差异有统计学意义（P〈0.05）。血清IL-6、IL-10、TNF-α随症状的加重而增加。结论血清IL-6、IL-10、TNF-α可预测急性胰腺炎的患病严重程度。