黄连解毒汤对apoE基因敲除小鼠单核细胞发育的影响

目的观察野生型C57BL/6小鼠和apoE基因敲除(apoE~(-/-))小鼠外周血单核细胞(monocyte,Mo)发育情况及黄连解毒汤对apoE~(-/-)小鼠外周血Mo发育的影响。方法 4、8、12、16周龄雌性C57BL/6为不同周龄对照组,4、8、12、16周龄雌性apoE~(-/-)小鼠为不同周龄高脂血症组。4周龄C57BL/6雌性小鼠为空白组,4周龄apoE~(-/-)雌性小鼠采用配对比较法随机分为对照组、西药组和中药组,每组5只。给药小鼠根据体重给予临床等效剂量,西药组灌胃阿托伐他汀[10mg/(kg·d)],中药组灌胃黄连解毒汤[5g/(kg·d)]。每周检测体重,4周后检测TG、TC、LDL-C和HDL-C水平、Mo及其亚型Ly6chi比例变化。结果与同种小鼠4周龄组比较,C57BL/6 16周龄组Mo比例降低(P0.05),apoE~(-/-)8周龄小鼠TC、TG、Ly6c~(hi)比例升高(P0.05),Mo比例降低(P0.05);12周龄小鼠TC、TG和LDL-C升高(P0.05),16周龄小鼠TC、TG、LDL-C及HDL-C升高(P0.05,P0.01)。与同种小鼠8周龄组比较,C57BL/6 16周龄组Mo比例降低(P0.05);12周龄apoE~(-/-)小鼠TC和LDL-C升高(P0.05),16周龄小鼠TC和HDL-C升高(P0.05,P0.01)。与同周龄C57BL/6组比较,4、8周龄apoE~(-/-)小鼠TC、TG升高(P0.01),HDL-C降低(P0.01),12、16周龄小鼠TC、TG、LDL-C升高,HDL-C降低(P0.05,P0.01);apoE~(-/-)4周龄小鼠Mo比例升高(P0.05),8周龄小鼠Mo、Ly6c~(hi)比例升高(P0.05)。与空白组比较,对照组小鼠干预后TC、TG、LDL-C、Mo及Ly6chi比例升高(P0.01,P0.05),HDL-C降低(P0.01)。与对照组比较,西药组和中药组小鼠体重增长降低(P0.05),中药组Ly6chi比例降低(P0.05)。结论在发育过程中apoE~(-/-)小鼠的血脂水平不仅与周龄相关,由其引发的天然免疫系统的发育改变也与周龄有关。发育早期用黄连解毒汤干预apoE~(-/-)小鼠可纠正这种独特免疫效应。     

黄连解毒汤对高脂饮食apoE－/－小鼠全身和主动脉血管局部免疫反应影响的研究

目的观察黄连解毒汤对高脂饮食喂养的apoE基因敲除（apoE-/-）小鼠全身和主动脉血管局部免疫反应的影响。方法以8只野生型C57BL6小鼠为野生普食组,24只apoE-/-小鼠随机分为apoE-/-普食组、apoE-/-高脂组、apoE-/-高脂加中药组,每组8只。普食组与高脂组分别给予普食和高脂饮食4周。ApoE-/-高脂加中药组同时给予黄连解毒汤5g,（kg·d）灌胃,其他小鼠采用等量纯净水灌胃。4周后,检测血脂水平、外周血单核细胞比例及其表面T0ll样受体4（Toll-likereceptor4,TLR4）和清道夫受体CD36的表达;检测主动脉病理变化和主动脉血管局部细胞因子表达水平;进-步采用脂多糖（Lipopo—lysaccharide,LPS）刺激检测血浆细胞因子的水平。结果（1）与野生普食组比较,apoE-/-普食组TC、TG和LDL-C水平显著升高（P〈0．05,P〈0．01）;与apoE-/普食组比较,apoE-/-高脂组TC和LDL—C水平显著增高（P〈0．05）;apoE-/-高脂组与apoE-/-高脂加中药组血脂各项指标比较,差异无统计学意义（P〉0．05）。（2）与野生普食组比较,apoE-/-普食组外周血单核细胞比例无明显变化,TLR4表达水平显著增多（P〈0．05）;与apoE-/-普食组比较,apoE。高脂组小鼠外周血单核细胞比例及TLR4表达水平显著增多（P〈0．05）;与apoE-/-高脂组比较,apoE-/-高脂加中药组外周血单核细胞比例及其表面TLR4表达显著降低,清道夫受体CD36表达水平亦显著降低（P〈0．05）。（3）LPS刺激3h后,与野生普食组比较,apoE-/-普食组血浆TNF—α和IL-10表达显著增加（P〈0．05）;与apoE-/-普食组比较,apoE-/-高脂组小鼠血浆IL-12、TNF—α、MCP-1和IL-10表达增加,但差异无统计学意义（P〉0．05）;黄连解毒汤干预4周后,与apoE-/-高脂组比较,apoE-/-高脂加中药组MCP-1表达显著下调,而lL-10水平进-步显著上升,差异有统计学意义（P〈0．05）。（4）与野生普食组比较,apoE-/-普食组主动脉血管壁炎症因子IFN-αMCP-1、TNF-α和IL-113mRNA水平显著升高,抑炎因子IL-10亦显著升高（P〈0．05,P〈0．01）;与apoE-/-普食组比较,apoE-/-高脂组主动脉血管壁不仅IFN-αMCP-1、TNF—α和IL-1β水平进一步显著升高,且抑炎因子IL-12、IL-10和TGF-1β亦显著升高（P〈0．05,P〈0．01）;黄连解毒汤干预4周后,与apoE-/-高脂组比较,apoE-/-高脂加中药组主动脉血管壁炎症因子MCP-1、TNF—α、IL-1β和IL-12显著降低（P〈0．05,P〈0．01）。结论高脂饮食引发apoE-/-小鼠全身性炎症反应和血管局部炎症反应,血管局部炎症反应程度超过全身性炎症反应。黄连解毒汤干预后能够减轻炎症反应,并且对血管局部的作用更为显著,同时增强全身抗炎反应。     

黄连解毒汤及其拆方对高脂高糖模型小鼠血脂和血糖的影响

目的 探讨黄连解毒汤及其拆方对高脂高糖模型小鼠血脂及血糖的影响。方法 雄性KM小鼠随机分为黄连解毒汤组、黄连黄柏栀子组、黄连黄柏黄芩组、黄连黄柏组、黄连组、黄芩栀子组、辛伐他汀组、模型组、正常对照组9组。每周测量小鼠体质量,4周后检测小鼠血脂(血清总胆固醇、甘油三酯及血糖)水平。结果 与正常对照组比较,模型组的总胆固醇、甘油三酯及血糖均明显升高,差异有统计学意义(P < 0.01);与模型组比较,中药各组及辛伐他汀组的总胆固醇、甘油三酯均明显降低,黄连黄柏黄芩组、黄连黄柏组的血糖明显降低(P < 0.01,P < 0.05);其中黄连黄柏栀子组的总胆固醇、甘油三酯明显低于黄连黄柏黄芩组、黄连黄柏组、黄芩栀子组,差异有统计学意义(P < 0.01);黄连黄柏栀子组的总胆固醇低于黄连解毒汤组、黄连组,差异有统计学意义(P < 0.05);黄连解毒汤组、黄连组的总胆固醇均低于黄连黄柏黄芩组、黄连黄柏组、黄芩栀子组,差异有统计学意义(P < 0.05)。各组小鼠在给药前体质量的差异无统计学意义(P > 0.05),给药4周时黄连黄柏组、辛伐他汀组的体质量低于模型组,差异有统计学意义(P < 0.05)。结论 黄连解毒汤及其拆方组合均有降低高脂高糖模型小鼠总胆固醇、甘油三酯的作用,其中黄连黄柏栀子组的降脂效果优于黄连解毒汤组、黄连黄柏黄芩组、黄连黄柏组、黄连组及黄芩栀子组。黄连黄柏黄芩组及黄连黄柏组能降低高脂高糖饮食小鼠的血糖。     

黄连解毒汤对ApoE-/-小鼠动脉粥样硬化的干预作用及其机制

目的：研究黄连解毒汤对高脂饮食诱导的载脂蛋白E基因敲除(ApoE^-/-)小鼠动脉粥样硬化的干预作用。方法：高脂饮食建立ApoE^-/-小鼠动脉粥样硬化模型,给予黄连解毒汤进行干预。通过苏木素-伊红(HE)染色观察动脉粥样硬化病变后主动脉病理形态变化;全自动生化分析仪检测血清总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)及低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)水平变化;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测主动脉沉默信息调节因子2相关酶1(SIRT1)与核转录因子-κB(NF-κB)蛋白表达水平;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测肝脏腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)与过氧化物酶体增殖物激活受体α(PPARα)mRNA表达水平,检测主动脉组织肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-1β(IL-1β)与NOD样受体热蛋白结构域3(NLRP3)mRNA表达水平。结果：与正常组比较,模型组血管中有大量脂质积累,血清中TG、TC、LDL-C水平均显著升高(P<0.01),...     

黄连及黄连解毒汤对小鼠的急性毒性实验研究

 目的 探讨黄连单味药及其复方黄连解毒汤对小鼠的急性毒性,摸索半数致死量（LD₅₀）或最大耐受量,并确定其毒性靶器官。方法 采用灌胃给药的方法,给予不同剂量黄连水煎液或黄连解毒汤水煎液,连续观察7 d,检测药物对小鼠的急性毒性作用,用加权回归几率法（Bliss）计算LD₅₀,对死亡小鼠进行主要脏器的病理学观察。结果 黄连水煎液的小鼠LD₅₀剂量（以含黄连生药量计）为18.826 g·kg-1,95%可信限为16.923~21.314 g·kg-1,LD₅为12.407 g·kg-1,LD₉₅为28.565 g·kg-1。病理结果提示,黄连对小鼠的主要毒性靶器官为脑、肝、脾、肺、肾。黄连解毒汤未引起小鼠死亡,其最大耐受量（以含黄连生药量计,黄连-黄芩-黄柏-栀子=20∶6∶6∶9）为80 g·kg-1。结论 单味黄连水煎液具有毒性,其小鼠LD₅₀剂量（以含黄连生药量计）为18.826 g·kg-1,毒性靶器官为脑、肝、脾、肺、肾;经配伍后的黄连解毒汤则较为安全。     

黄连解毒汤调控肠道菌群抗apoE-/-小鼠非酒精性脂肪性肝病和动脉粥样硬化的研究

目的:观察黄连解毒汤对高脂饮食导致的apoE基因敲除(apoE-/-)小鼠血脂水平、肠道菌群、单胺氧化酶(monoamine oxidase,MAO)活力及其脂肪肝和血管动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)斑块形成的影响.方法:8周龄雌性apoE-/-小鼠给予高脂饮食,治疗组同时给予黄连解毒汤或阿托伐他...     

黄连解毒汤调控单核、巨噬细胞及泡沫细胞分化的实验研究

目的观察黄连解毒汤体内调控载脂蛋白E基因敲除（ApoE^-/-）小鼠外周血单核细胞亚型分化,黄连解毒汤含药血清体外调控巨噬细胞和泡沫细胞亚型分化的作用。方法将15只ApoE^-/-小鼠随机分为ApoE^-/-普食组、ApoE^-/-高脂组及ApoE^-/-高脂加中药治疗组,每组5只,分别给予普食及高脂饮食4周。5只C57BL/6野生型小鼠作为野生普食对照组,ApoE^-/-高脂加中药组给予黄连解毒汤5 g/（kg·d）灌胃,其他组给予等量纯净水灌胃。4周后流式细胞仪检测外周血单核细胞亚型。另选30只SD大鼠给予黄连解毒汤5 g/（kg·d）灌胃,每12 h 1次,共5次,制备黄连解毒汤含药血清。采用5%黄连解毒汤含药血清对体外原代骨髓衍生的巨噬细胞（bone marroW-derived macrophage,BMDM）和泡沫细胞分化进行干预,流式细胞仪检测巨噬细胞和泡沫细胞表面受体CD206表达（CD206^＋M2型）比例;实时定量PCR检测巨噬细胞和泡沫细胞M1型因子Nos2和M2型因子Arg1的表达。结果 ApoE^-/-小鼠高脂饮食喂养4周后,外周血炎症型单核细胞（Ly6C^high）比例增高;黄连解毒汤干预可显著降低炎症型单核细胞比例（P〈0.05）。与对照血清比较,5%黄连解毒汤含药血清可显著增加CD206＋M2型BMDM的比例（P=0.034）。实时定量PCR结果 显示,含药血清可上调巨噬细胞M2亚型基因Arg1的表达水平（P〈0.05）,抑制巨噬细胞M1亚型基因Nos2的表达水平（P=0.017）。在ox-LDL促进M2型泡沫细胞分化的基础上,黄连解毒汤含药血清可进一步提高CD206＋M2型泡沫细胞比例及Arg1的表达（P〈0.01）。黄连解毒汤含药血清抑制Th1因子作用下的M2型泡沫细胞向M1型逆转,显著提高Arg1表达水平,降低Nos2表达水平（P〈0.01）。结论黄连解毒汤能降低高脂导致的ApoE^-/-小鼠外周血炎症性单核细胞亚群比例;黄连解毒汤含药血清体外促进M2型巨噬、泡沫细胞分化。黄连解毒汤可能通过调节?     

黄连解毒汤对APP/PS1双转基因阿尔茨海默病小鼠自由基代谢及海马区病理形态学影响

目的 观察黄连解毒汤对阿尔茨海默病（Alzheimer′s disease,AD）模型小鼠自由基代谢及海马CA1区的神经细胞形态学、组织病理学的影响,并探讨其可能治疗机制,为黄连解毒汤治疗AD提供实验依据。     

基于非靶向代谢组学的APP/PS1小鼠与认知功能障碍相关的生物标志物发现及黄连解毒汤干预机制研究北大核心CSCD

该研究旨在通过对APP/PS1转基因小鼠内源性物质进行非靶向代谢组学研究,发现APP/PS1小鼠模型与认知功能障碍相关的生物标志物,寻找黄连解毒汤(Huanglian Jiedu Decoction)治疗阿尔茨海默病(Alzheimer′s disease, AD)的作用靶点并阐明其作用机制。通过超高效液相色谱串联静电场轨道阱高分辨质谱(UPLC-Orbitrap MS)技术分析小鼠脑组织和血清代谢质谱,运用偏最小二乘法判别分析(PLS-DA)、正交偏最小二乘法判别分析(OPLS-DA)对比分析正常组、模型组、黄连解毒汤高剂量组、黄连解毒汤低剂量组、小檗碱组的代谢数据,筛选潜在生物标志物,并借助KEGG数据库分析构建相关代谢通路。共筛选鉴定出脑内13种、血清35种,共计45种潜在内源性代谢物,其中白三烯B4、酪氨酸和腺苷有望成为与认知功能关联的差异性代谢物。黄连解毒汤可以回调22种差异性代谢物,涉及的主要代谢通路有氨酰-tRNA生物合成,缬氨酸、亮氨酸和异亮氨酸生物合成,泛酸和辅酶A生物合成,苯丙氨酸、酪氨酸和色氨酸生物合成,花生四烯酸代谢。这些通路主要提示了黄连解毒汤干预AD的主要作用机制为抑制中枢和外周炎症,调节能量代谢、脂肪酸代谢和氨基酸代谢。黄连解毒汤对改善认知功能障碍有一定疗效,可通过回调内源性差异代谢物来调控相关通路,这将有助于进一步发现AD的生物标志物和阐明黄连解毒汤治疗AD的干预机制。     

黄连解毒汤调控lncRNA MALAT1减轻小鼠脓肿创面炎性焦亡的实验研究

目的 从lncRNA MALAT1调控炎性焦亡角度探讨黄连解毒汤促进小鼠脓肿创面愈合的作用机制。方法 将48只C57BL/6雄性小鼠适应性喂养1周后,采用随机数字表法分为空白组12只、造模小鼠36只。造模小鼠予以皮肤开窗+污染物覆盖的改良小鼠脓肿创面模型法制备模型,模型成功后再采用随机数字表法再分为模型组、中药组和对照组各12只。空白组小鼠进行常规饲养,模型组小鼠给予等体积生理盐水灌胃,中药组先采用0.1%雷夫诺尔冲洗创面,1次/d换药,再给予5 g/kg黄连解毒汤水煎液灌胃给药;对照组小鼠采用0.1%雷夫诺尔冲洗创面,1次/d换药,再给予等体积生理盐水灌胃;灌胃剂量依据小鼠体质量调整,干预共2周。干预结束后,经5%异氟醚吸入麻醉下处死各组小鼠,分离与收集小鼠脓肿创面皮肤组织。HE染色观察脓肿创面组织形态变化;qPCR检测各组小鼠脓肿创面组织中肺腺癌转移相关转录本1(MALAT1)水平变化;Western blot检测各组小鼠脓肿创面组织中NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)、半胱天冬酶-1(Caspase-1)、白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-18(IL-18...     

黄连解毒汤对脓毒症模型小鼠肺损伤的保护作用及其机制研究

目的:研究不同剂量黄连解毒汤对脓毒症小鼠模型肺损伤的保护作用及其机制。方法:SPF级ICR小鼠100只随机分为正常组、模型组和黄连解毒汤低、中、高剂量组,每组又分为造模后24h和48h两个时间点检测组。除正常组外,其余各组小鼠腹腔注射酵母多糖-石蜡混悬液,建立脓毒症小鼠模型,造模同日各组分别灌胃给予相应的药物,正常组与模型组灌胃生理盐水,1次/d,持续至实验结束。于造模24h、48h进行小鼠行为学观察,酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测小鼠血清炎症因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-6(IL-6)水平,荧光定量PCR法检测肺组织核转录因子kappa Bp65(NF-κBp65)、Toll样受体4(TLR4)m RNA转录水平变化,光镜观察小鼠肺组织病理结构。结果:与模型组同时间点比较,黄连解毒汤各剂量组小鼠血清TNF-α、IL-6水平均明显降低(P0.01),中、高剂量组指标明显低于低剂量组(P0.01),中、高剂量组组间比较无统计学差异(P0.05)。与模型组同时间点比较,黄连解毒汤中、高剂量组大鼠肺组织NF-κBp65、TLR4 m RNA转录水平均明显降低(P0.01),低剂量组NF-κBp65(24h、48h)、TLR4 m RNA(48h)转录水平明显降低(P0.01),中、高剂量组上述指标明显低于低剂量组(P0.01),中、高剂量组组间比较差异无统计学意义(P0.05)。组内比较,黄连解毒汤各剂量组48h时点对上述指标的改善作用均明显优于24h时点,以中、高剂量组更为明显(P0.05,P0.01)。病理结果显示,黄连解毒汤各剂量组小鼠肺组织损伤程度明显轻于模型组,以中剂量组损伤程度最轻。结论:黄连解毒汤能够明显改善脓毒症小鼠的肺损伤,且该保护作用可能是通过调控TLR4受体介导的炎症反应通路来实现的,治疗最佳剂量确定为中剂量。     

基于UPLC-Q-TOF-MS^(E)技术的黄连地上部分与地下部分化学成分比较研究北大核心CSCD

该实验采用超高效液相色谱串联四极杆飞行时间质谱(UPLC-Q-TOF-MS^(E))技术,对不同批次黄连的地上部分和地下部分进行化学成分比较研究。通过与对照品的保留时间、分子离子峰和LC-MS^(E)碎片信息进行比对或参考现有文献资料,共指认了40个成分,从黄连主根中指认了33个化合物,黄连茎叶中指认了31个化合物,二者共有成分24个,主要为小檗碱、药根碱等生物碱类及绿原酸、奎宁酸、丹参素等酚酸类化合物,这表明黄连茎叶中有较多化学成分与主根相同。同时两者也存在差异成分,黄连主根中含有木兰花碱葡萄糖苷等生物碱糖苷,黄连茎叶含有(±)lariciresionol-4-β-D-glucopyranoside等木脂素类化合物,通过与对照品二级谱图比对进行裂解规律分析。不同批次间黄连化合物含量存在差异,进一步进行主成分分析(PCA)结果表明,黄连的主根和茎叶清晰地聚成2类,说明各部位所含化学成分存在差异。进一步开展偏最小二乘法判别分析(PLS-DA),结果表明黄连的主根和茎叶中VIP>1的化合物有31个,差异成分主要为生物碱类、酚酸类、木脂素类以及黄酮类化合物等。研究结果表明,黄连茎叶中可利用成分种类较多,具有良好的开发潜力。该研究为黄连非药用部位的开发利用提供数据支撑,也为其他中药非药用部位的综合开发利用提供思路。     

荷丹片对APOE~(-/-)小鼠血脂、炎症因子及形态学变化的影响

目的研究荷丹片(荷叶,丹参,山楂,番泻叶,补骨脂)对载脂蛋白E基因敲除(APOE-/-)小鼠的血脂、脂联素、肿瘤坏死因子(TNF-α)、高敏C反应蛋白(hs-CRP)和形态学变化的影响。方法将50只APOE-/-小鼠随机分为对照组、模型组、荷丹片低、高剂量组、辛伐他汀组。对照组普通饲料喂养,其余各组高胆固醇饲料喂养。12周后,取血清测血脂,ELISA法测脂联素、TNF-α、hs-CRP水平;取同部位主动脉HE染色光镜下观察形态学变化。结果与对照组相比,模型组血脂、TNF-α、hs-CRP水平明显升高(P0.01),脂联素水平明显降低(P0.01),主动脉形态学病变加重。与模型组相比,荷丹片低、高剂量组、辛伐他汀组的血脂、TNF-α、hs-CRP水平明显降低(P0.01),脂联素水平明显升高(P0.05),主动脉形态学病变有所减轻。结论荷丹片可降低APOE-/-小鼠血脂和TNF-α、hs-CRP水平,升高脂联素水平,从而抑制动脉粥样硬化的发生、发展。     

黄连解毒汤改善1-氯-2,4-二硝基苯诱导特应性皮炎小鼠瘙痒症状的作用及机制研究

目的 探讨黄连解毒汤改善1-氯-2,4-二硝基苯(DNCB)诱导特应性皮炎(AD)小鼠瘙痒症状的作用及机制。方法 将36只Balb/c小鼠随机分为正常组、模型组、地塞米松组(阳性对照,2.5 mg·kg^-1)及黄连解毒汤低、中、高剂量组(0.4、0.8、1.6 g·kg^-1),每组6只。剃除小鼠背部毛发后将200μL DNCB溶液涂抹于小鼠背部进行致敏(1%DNCB,连续3 d)与激发(1.5%DNCB,从第14天开始,每3 d激发1次,共进行5次)。激发与药物干预同时进行,各组按照设定剂量对小鼠进行灌胃给药,每日1次,连续14 d。参照特应性皮炎评分标准(SCORAD)计算小鼠皮损严重程度评分;记录小鼠20 min内抓挠次数。采用HE染色法观察皮损组织病理形态变化;甲苯胺蓝染色法观察皮损组织肥大细胞浸润情况;RT-q PCR法检测皮损组织中胸腺基质淋巴细胞生成素(TSLP)、白细胞介素(IL)13、组胺H4受体(HRH4)、IL-31 m RNA表达水平。结果 与正常组比较,模型组小鼠的背部皮肤经DNCB激发后出现明显的红斑、苔藓化、结痂、...     

黄连解毒汤有效活性成分靶向调控TLR4/NF-κB信号通路的作用机理研究

目的:阐明黄连解毒汤有效活性成分对炎症级联反应信号传导通路TLR4/NF-κB的阻断作用。方法:利用脂质体转染试剂Li-pofectin 2000将含有h TLR4(human toll-like receptor 4)基因和NF-κB-Luc报告基因的质粒转染入人胚肾细胞(HEK293细胞),加入不同浓度和配伍组成的药物刺激后再检测细胞荧光素酶表达水平,筛选出能够有效阻断TLR4/NF-κB信号传导通路的黄连解毒汤有效组分;进一步选择Caco-2细胞单层模型研究转运蛋白对黄连解毒汤有效活性成分的吸收和转运机理。结果:黄连解毒汤中小檗碱和黄芩苷活性单体能阻断TLR4介导的信号通路的传导,显著抑制NF-κB因子的生成;摄取实验中,黄芩苷和小檗碱配伍组能够显著提高小檗碱活性单体在Caco-2细胞中摄取量[(1.23±0.03)ng/μg],加入多药耐药相关蛋白(multidrug resistance-as-sociated protein 2,MRP2)抑制剂MK-571之后,小檗碱的摄取量有显著提高[(1.05±0.09)ng/μg],但是在加入P-糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)抑制剂维拉帕米后,虽然有黄芩苷存在,小檗碱的摄取量未见提高[(0.53±0.05)ng/μg]。结论:通过TLR4受体介导NF-κB通路抑制剂筛选模型,筛选出黄连解毒汤内小檗碱能够有效阻断TLR4/NF-κB信号通路的传导,在小檗碱的跨膜转运的过程中不存在肠道转运蛋白P-gp的作用,但存在MRP2的外排作用,这可能是因为黄连解毒汤中配伍黄芩苷可抑制MRP2蛋白活性,从而使Caco-2细胞中小檗碱被外排的量减少,增加小檗碱的吸收量。     

黄连解毒汤调控apoE~(-/-)小鼠粒细胞释放中性粒细胞捕捉网的研究

目的:观察黄连解毒汤对高脂饮食导致的apoE基因敲除(apoE~(-/-))小鼠血浆中性粒细胞捕捉网(NETs)水平及其血管动脉粥样硬化(AS)斑块形成的影响。方法:8周龄雌性apoE~(-/-)小鼠给予高脂饮食,治疗组同时给予黄连解毒汤干预。4周后,常规检测血脂水平,PicoGreen法定量检测血浆中NETs cfDNA的含量,流式细胞仪检测外周血粒细胞、淋巴细胞比例及中性粒细胞/淋细胞(NLR),干预18周后病理检测主动脉血管斑块形成情况。结果:高脂饮食导致apoE~(-/-)小鼠血浆TC和LDL水平升高,血浆NETs cfDNA水平升高,外周血粒细胞比例升高,淋巴细胞比例降低,NLR显著升高。黄连解毒汤和阿托伐他汀干预4周,血脂水平没有明显改变,但NETs cfDNA显著降低,NLR降低。干预18周,高脂导致apoE~(-/-)小鼠主动脉血管斑块数量增多、面积增大,黄连解毒汤和阿托伐他汀减少AS斑块面积。结论:高脂饮食导致apoE~(-/-)小鼠血脂和机体免疫应答水平增高,促进主动脉血管AS斑块形成。黄连解毒汤干预通过调控粒细胞免疫,降低NETs表达,减少高脂引发的免疫损伤,抑制AS斑块形成。     

黄连-大黄-肉桂复方及其最佳组分配伍对肝癌小鼠肿瘤增殖及证候的影响

目的研究黄连-大黄-肉桂复方及其最佳组分配伍对肝癌小鼠肿瘤增殖及证候的影响。方法通过右腋下皮下注射人肝癌细胞建立移植瘤裸鼠肝癌模型,成模小鼠分为模型对照组(模型组)、黄连-大黄-肉桂复方组(复方组)、小檗碱-大黄素-桂皮醛组方组(组方组),各组给予相应的药物治疗,共2周。给药期间观察小鼠的状态,给药前后分别测定各组小鼠的瘤径并计算瘤体积,测定体质量、腋温、抓力、旷场水平移动格数及垂直站立次数、爪尾显微拍照,据此计算各组的阴盛衰度、血盛衰度、气盛衰度和阳盛衰度,以各四诊指标治疗后/治疗前的比值用于分析证候的变化。最后取瘤体称重,计算抑瘤率。结果①小鼠状态:实验过程中,各组小鼠状态尚可,活动较灵敏,大小便正常。②抑瘤作用:各组小鼠瘤体积随时间增大,其中模型组复方组组方组,瘤重结果与瘤体积一致。③证候变化:两用药组小鼠的气盛衰度均有所提升,组方组优于复方组;两用药组小鼠的血盛衰度均有所升高,复方组优于组方组;两用药组小鼠的阴盛衰度、阳盛衰度均变化不大。结论黄连-大黄-肉桂复方及其最佳组分配伍均能一定程度抑制肝癌小鼠肿瘤的增殖,且具有益气血的趋势。     

天香丹对ApoE(-/-)基因敲除小鼠动脉粥样硬化的影响

目的:观察天香丹对ApoE(-/-)基因敲除小鼠高脂血症及动脉粥样硬化的影响.方法:将30只8周龄的ApoE(-/-)基因敲除小鼠随机分为模型组、天香丹组和阿托法汀组,每组各10只,另以相同遗传背景的同龄正常C57BL/6J小鼠为正常对照组(n=10).天香丹组每只灌服天香丹7.2g·kg-1·d-1,阿托伐他汀组每只灌服阿托伐他汀10mg·kg-1·d-1,模型组和正常对照组每只灌服0.9％生理盐水0.2ml·10g-1·d-1.连续灌胃12周后眼眶采血测定各组血脂含量,取小鼠主动脉弓部进行形态学观察及图像分析.结果:模型组血清总胆固醇、甘油三酯和低密度脂蛋白水平明显高于正常对照组(P＜0.05),而天香丹组和阿托伐他汀组以上3项指标与模型组相比明显下降(P＜0.05).图像分析测量结果显示模型组与正常对照组比较其斑块总面积明显增加(P＜0.05);天香丹组动脉硬化病变程度较模型组减轻,其斑块总面积明显减小(P＜0.05).结论:天香丹有降低ApoE(-/-)基因敲除小鼠血清总胆固醇、甘油三酯和低密度脂蛋白胆固醇水平及减缓动脉粥样硬化病变的作用.     

依折麦布对高脂饮食ApoE~(-/-)小鼠骨微结构的影响

目的观察依折麦布对高脂饲料喂养的ApoE基因敲除(ApoE~(-/-))小鼠骨微结构的影响。方法选取8只野生型C57BL6小鼠为野生正常组,将24只ApoE~(-/-)小鼠随机分为ApoE~(-/-)正常组、ApoE~(-/-)高脂组、ApoE~(-/-)高脂加依折麦布组(依折麦布组)。其中依折麦布组小鼠给予依折麦布10 mg/(kg·d)灌胃,其他各组小鼠给予等量去离子水灌胃。6周后取各组小鼠的股骨,分别利用HE染色和番红O/固绿染色观察骨微结构,利用质构仪测定骨生物力学,用免疫组化法测定Cathepsin K蛋白表达情况。结果依折麦布组小鼠骨微结构均明显改善,股骨的第一循环硬度和峰值压力均明显高于ApoE~(-/-)高脂组(P均<0.05),股骨Cathepsin K蛋白表达量均明显低于ApoE~(-/-)正常组和ApoE~(-/-)高脂组(P均<0.05)。结论依折麦布能明显改善高脂饲料喂养的ApoE~(-/-)小鼠骨微结构,提高骨强度,其作用机制与降低Cathepsin K表达量有关。