TAK-733对人甲状腺乳头状癌TPC-1细胞生物学行为影响的研究

目的 探究一种新型MEK 1/2抑制剂(R)-3-(2,3-二羟丙基)-6-氟-5-((2-氟-4-碘苯基)氨基)-8-甲基吡啶[2,3-d]嘧啶-4,7(3H,8H)-二酮(TAK-733)对人甲状腺乳头状癌(PTC)人甲状腺乳头状癌(TPC)-1细胞生物学行为的影响.方法 取生长状态良好,处于对数生长期的TPC-1...     

T3对甲状腺乳头状癌细胞TPC-1增殖的影响及机制研究

目的 探讨三碘甲腺原氨酸(T3)对甲状腺乳头状癌细胞TPC-1增殖的影响及其机制.方法 将TPC-1细胞分为对照组(0 ng/ml T3处理组)、12.5 ng/ml T3处理组和50 ng/ml T3处理组,分别用对应T3浓度处理细胞,实时无标记细胞功能分析技术(RTCA)和克隆形成实验检测细胞的增殖能力,Weste...     

瘦素对人甲状腺乳头状癌K1细胞增殖.迁移及侵袭的影响

目的 探讨不同浓度的瘦素对人甲状腺乳头状癌K1细胞增殖.迁移.侵袭能力的影响。方法 分别用0ng/ml(空白对照组).10ng/ml.50ng/ml.100ng/ml.125ng/ml,5组不同浓度的瘦素处理人甲状腺乳头状癌K1细胞,MTT实验检测不同浓度瘦素处理后细胞的增殖能力.划痕实验检测细胞迁移能力.Transwell实验检测细胞侵袭能力。结果 MTT实验检测结果显示,瘦素对K1细胞的增殖没有影响(P>0.05);不同浓度的瘦素处理K1细胞后24h后划痕实验迁移率分别为:40.201%.47.383%.59.950%.68.732%.79.306%;48h后划痕实验迁移率分别为:49.398%.74.192%.86.733%.87.795%.90.005%。随瘦素浓度增加与处理时间延长,划痕内面面积缩小,迁移率增加(P<0.05)。Transwell实验结果显示,穿出聚碳酸酯膜的细胞数依次增多(P<0.05)。结论 随处理时间的延长和瘦素浓度的增加,人甲状腺乳头状癌K1细胞增殖能力不受影响,K1细胞迁移和侵袭能力均呈上升趋势。     

茶多酚诱导人甲状腺乳头状癌细胞凋亡作用的研究

目的研究茶多酚对人甲状腺乳头状癌细胞的凋亡作用.方法实验组(含茶多酚100μg/ml,200μg/ml,400μg/ml),对照组(含10.00?S的RPMI1640)分别培养48 h,采用碘化吡啶染色,流式细胞仪检测凋亡细胞百分比,并于电镜下观察凋亡细胞的形态.结果经茶多酚作用48 h后CGTH W-3细胞凋亡百分比明显增加,对照组凋亡百分比为3.51%,茶多酚100μg/ml组为12.61%,茶多酚200μg/ml组为52.90%,茶多酚400μg/ml组为70.79%(P＜0.01).电镜下可见细胞浆空泡变性,染色质浓集,核膜皱缩.结论茶多酚具有诱导人甲状腺乳头癌细胞(CGTH W-3)凋亡的作用,并呈浓度依赖关系.     

枸杞多糖对人肝癌细胞 HepG2 生长的影响及其分子机制

目的 探讨枸杞多糖 (Lycium barbarum polysaccharides, LBP) 对人肝癌细胞 HepG2 生长的影响及可能机制。方法 人肝癌 HepG2 细胞用 100～1 000 mg/L LBP 处理 1～5 d,分别用 MTT 方法、流式细胞术检测细胞增殖、细胞周期和细胞凋亡。用 Western blotting 分析周期蛋白 (cyclin) 和周期蛋白依赖性激酶 (cyclin-dependent kinase, CDK) 表达的变化。结果 LBP 以质量浓度依赖方式抑制肝癌细胞的生长,阻滞细胞在 G⁰/G¹ 期,并诱导细胞凋亡;其分子机制为引起 cyclin D、cyclin E 和 CDK2 蛋白表达下降。结论 LBP 抑制人肝癌细胞 HepG2 增殖的机制包括阻滞细胞周期和诱导细胞凋亡。     

siRNA干扰膜联蛋白AI表达对甲状腺乳头状癌TPC-1细胞凋亡的影响

目的 通过小干扰RNAs(siRNA)干扰膜联蛋白A1(ANX A1)在甲状腺乳头状癌(PTC)细胞中的表达,探讨ANXA1对PTC细胞的生物学特性的影响.方法 设计并筛选使用高效的siRNA在PTC TPC-1细胞株特异性干扰ANX A1的表达,然后用流式细胞术观察ANX A1干扰后对PTC细胞TPC-1凋亡的影响.结果 筛选的siRNA可高效沉默ANX A1在PTC细胞中的表达,促进PTC细胞的凋亡.结论 siRNA干扰ANX A1表达,可促进PTC细胞的凋亡,提示ANX A1可能是PTC治疗的一个重要的生物学靶标.     

硝呋齐特对甲状腺乳头状癌细胞增殖、迁移及侵袭的影响

目的 探讨硝呋齐特对甲状腺乳头状癌细胞BCPAP和TPC-1的增殖、迁移及侵袭的影响。方法 用不同浓度（0、1.25、2.5、5、10、20 μmol/L）硝呋齐特处理BCPAP和TPC-1细胞,采用MTT法和克隆形成实验观察硝呋齐特对细胞增殖的影响;采用Hoechst 33258染色及流式分选技术观察对细胞凋亡的影响;通过Western blot法检测硝呋齐特处理后BCPAP细胞凋亡相关蛋白及迁移侵袭相关蛋白的表达情况;采用Transwell小室观察细胞迁移和侵袭能力。结果 硝呋齐特0、1.25、2.5 μmol/L处理BCPAP细胞,0、1.25 μmol/L处理TPC-1细胞,24、48、72 h后细胞增殖力均未受到明显抑制（ P>0.05）;硝呋齐特5、10、20 μmol/L处理BCPAP细胞,10、20 μmol/L处理TPC-1细胞,24、48、72 h后细胞增殖力均受到明显抑制（ P<0.05）,且随浓度增加和时间延长其抑制作用逐渐增强;此外,2.5、5 μmol/L硝呋齐特对TPC-1细胞的增殖抑制作用分别从72 h和48 h起效（ P<0.05）。暴露于10 μmol/L硝呋齐特10 d后,BCPAP和TPC-1细胞的克隆形成均受到抑制（ P<0.05）。10 μmol/L硝呋齐特处理48 h后,BCPAP和TPC-1细胞均出现细胞核改变,凋亡小体出现;流式分析显示BCPAP及TPC-1凋亡细胞增加（ P<0.05）。10 μmol/L硝呋齐特处理BCPAP细胞48 h,促凋亡蛋白CC-3、Bax的表达增加（ P<0.05）,而抗凋亡蛋白Bcl-2表达减少（ P<0.05）;促迁移侵袭相关蛋白基质金属蛋白酶（MMP）-2、MMP-9的表达减少（ P<0.05）,MMPs家族抑制剂——金属蛋白酶组织抑制剂（TIMP）-2表达增加（ P<0.05）。10 μmol/L硝呋齐特处理BCPAP和TPC-1细胞48 h,BCPAP细胞及TPC-1细胞迁移率与侵袭率均下降（ P<0.05）。结论 硝呋齐特于体外抑制人甲状腺癌细胞系BCPAP和TPC-1的增殖,通过上调CC-3和Bax蛋白的表达诱导细胞凋亡,通过降低MMP-2和MMP-9蛋白的表达阻断细胞的迁移与侵袭。     

microRNA-145对人结肠癌Caco-2细胞生物学行为的影响

目的探讨微小核糖核酸-145(miRNA-145)对人结肠癌细胞系Caco-2细胞迁移、增殖及细胞周期等生物学行为的影响。方法选用Caco-2细胞并进行培养,用脂质体转染法分别将miRNA-145及阴性对照miRNA过表达的质粒转入Caco-2细胞,分为对照组和miRNA-145组进行实验。在倒置荧光显微镜下观察细胞转染效率;采用划痕试验检测miRNA-145对Caco-2细胞迁移的影响;噻唑蓝法检测miRNA-145对Caco-2细胞增殖的影响;流式细胞术检测miRNA-145对Caco-2细胞周期的影响。结果与对照组相比,Caco-2细胞过表达miRNA-145后,细胞迁移速度减慢,生长活力明显受到抑制(P<0.05),G1期细胞百分比增高(P<0.05),而G2期及S期细胞百分比则无明显改变(P>0.05)。结论miRNA-145可抑制Caco-2细胞的迁移和增殖,同时可使Caco-2细胞发生G1期阻滞,减慢细胞周期进程。     

miR-30c-2过表达联合阿霉素对甲状腺乳头状癌细胞增殖及迁移能力的影响

目的 探究微小RNA-30c-2(microRNA-30c-2,miR-30c-2)联合阿霉素对甲状腺乳头状癌TPC-1细胞增殖和迁移能力的影响。方法 体外培养TPC-1细胞,将细胞分为空白对照组(未做任何处理的细胞,即Control组)、过表达对照组(瞬时转染NC mimic质粒,即NC mimic组)、过表达组(瞬时转染miR-30c-2过表达质粒,即miR-30c-2组),采用qRT-PCR技术检测细胞中miR-30c-2的表达水平;将TPC-1细胞分为4组,分别为空白对照组(未做任何处理的细胞,Control组)、阿霉素处理组(使用阿霉素混合液培养TPC-1细胞24 h、48 h)、过表达组(瞬时转染miR-30c-2过表达质粒,即miR-30c-2 mimic组)、共处理组(阿霉素混合液与转染miR-30c-2过表达质粒共同培养TPC-1细胞24 h、48 h),CCK-8试验及细胞划痕实验分别检测4组细胞的增殖和迁移能力。结果 经qRT-PCR检测,与NC mimic组相比,过表达组的miR-30c-2表达水平明显升高(P<0.001);CCK-8实验表明,阿霉素+m...     

Effect of DRB on the Biological Characteristics of Human Laryngeal Carcinoma Hep-2 Cell Line

In order to study the effect of 5, 6-Dichloro-1-β-D-ribofuranosyl-benzimidazole (DRB) on the biological characteristics of human laryngeal carcinoma Hep-2 cell line in vitro, Hep-2 cells cultured in vitro were treated with different concentrations of DRB. Changes in cell proliferation, apoptotic rate and invasiveness were detected by MTT assay, flow cytometry (FCM) and matrigel in vitro invasion assay, respectively. It was found that DRB inhibited the proliferation of Hep-2 cells in a dose- and time-dependent manner. After being treated with 0, 10, 20, 40, 80 μmmol/L DRB for 24 h, the apoptotic rate in Hep-2 cells was (0.68±0.19)%, (1.95±0.12)%, (8.51±0.26)%, (11.26±0.17)% and (14.99±0.32)%, respectively. The matrigel in vitro invasion assay revealed that DRB began to inhibit the invasion of Hep-2 cells at the concentration of 5 μmmol/L, and with the increase of DRB concen-tration, the inhibitory effect was enhanced. It was suggested that DRB could influence the essential biological characteristics of Hep-2 cells, inhibit Hep-2 cells proliferation, reduce invasive ability and induce apoptosis of Hep-2 cells.     

甲状腺乳头状癌超声参数与微血管密度、癌细胞恶性生物学行为的相关性

目的 分析甲状腺乳头状癌超声参数分别与微血管密度、癌细胞恶性生物学行为之间的相关性,旨在为甲状腺乳头状癌的性质评估提供参考。方法 回顾性分析,采集我院2016年3月至2019年3月期间收治的353例甲状腺疾病患者病历资料,根据术中病理组织情况将其分为恶性组（268例）、良性组（85例）,检测并对比两组超声参数［峰值强度（PI）、达峰时间（TTP）、平均渡约时间（MMT）］、微血管密度［微血管密度（MVD）］、癌细胞恶性生物学行为［增殖基因包括：BRD4、FoxM1,侵袭基因包括：Stat5、Twist1,自噬基因包括：LC3、PTEN］情况,分析甲状腺乳头状癌患者各超声参数与微血管密度、癌细胞恶性生物学行为之间的相关性。结果 与良性组相比,恶性组PI、TTP、MMT、MVD水平均较高,BRD4、FoxM1、Stat5、Twist1表达均较高,LC3、PTEN表达较低,差异均有统计学意义（P＜0.05）;经双变量Pearson直线相关性检验结果显示,甲状腺乳头状癌超声参数各指标（PI、TTP、MMT）与MVD呈正相关（r＞0,P＜0.05）,与BRD4、FoxM1、Stat5、Twist1均呈正相关（r＞0,P＜0.05）,与LC3、PTEN均呈负相关（r＜0,P＜0.05）。结论 甲状腺乳头状癌超声参数有其特点,且与微血管密度、癌细胞恶性生物学行为密切相关,对高度疑似甲状腺乳头状癌的患者可考虑早期进行超声检查,并对主要超声参数值进行分析,这对指导疾病恶性程度评估及治疗有一定价值。     

紫杉醇对人甲状腺未分化癌细胞体外作用的实验研究

目的观察紫杉醇对人甲状腺未分化癌DRO细胞增殖、细胞凋亡以及血管内皮生长因子(VEGF)、bcl-2和bax基因表达的影响。方法MTT法检测紫杉醇对DRO细胞增殖的抑制效应;流式细胞术检测经紫杉醇6.25μg/L作用24、487、2 h后细胞周期和凋亡率的变化;RT-PCR方法观察经紫杉醇6.25μg/L作用48 h后细胞内VEGF、bcl-2和bax基因的表达情况。结果紫杉醇能够抑制DRO细胞生长,72 h的IC50为10μg/L;可将细胞阻滞于G2/M期并诱导其凋亡,6.25μg/L紫杉醇作用48 h后凋亡达高峰,凋亡率为32.76%±1.54%;细胞内VEGF的表达低于对照组;凋亡抑制基因bcl-2在细胞凋亡过程中表达没有显著性变化,而促凋亡基因bax呈高表达。结论紫杉醇明显抑制DRO细胞生长,并诱导细胞凋亡,且能下调VEGF的表达,bax基因在紫杉醇诱导的DRO细胞凋亡中可能起着重要的调控作用。     

siRNA干扰ski基因的表达对人肝癌HepG2细胞生物学功能的影响

目的:设计并化学合成针对原癌基因ski的siRNA分子片段,转染人肝癌HepG2细胞,观察其对HepG2细胞增殖、细胞周期和凋亡等生物学功能方面的影响.方法:设计并化学合成针对原癌基因ski的3个siRNA分子序列,阳离子脂质体法瞬间转染HepG2细胞,运用实时定量PCR法和Western印迹法检测细胞中ski基因在mRNA水平和蛋白水平的变化.然后利用MTT法和流式细胞术检测转染ski-siRNA的HepG2细胞增殖、细胞周期和凋亡等生物学功能方面指标的变化.结果:3对特异性ski-siRNA均有效地抑制了ski基因的表达,以siRNA-B抑制效果最好,可达到70%,而且随着转染时间的延长,ski的表达呈逐步下降趋势.转染ski-siRNA后HepG2细胞的增殖能力明显受到抑制(P<0.05),S期细胞明显减少,是阴性对照组的2倍以上.结论:靶向ski基因的siRNA分子片段可以有效地抑制人肝癌HepG2细胞的生长,使进入S期的细胞明显减少,其作用与下调ski基因的表达有关,ski可能是肝癌治疗的一个潜在靶点.     

CoCl2 improves epithelial-mesenchymal transition of human papillary thyroid carcinoma cells

目的 研究氯化钻( CoCl2)诱导的低氧对甲状腺乳头状癌NPA细胞上皮间质转化的影响,初步探讨HIF-1α在其中的机制.方法 MTT检测COCl2(50、100、150、200、250 μmol/L)对细胞活力的影响,倒置显微镜观察低氧(150μmoL/L的CoCl2分别作用0、12、24、48 h)对细胞形态的影响,Western blot检测低氧(150 μmol/L的CoCl2分别作用0、3、6、12、24h)对HIF-1α、E-cadherin和Vimentin表达的影响,Transwell法检测低氧(150 μmol/L的CoCl2分别作用0、6h)对细胞侵袭、转移的影响,用免疫荧光对HIF-1α蛋白进行亚细胞定位.结果 低氧模拟剂CoCl2可抑制NPA细胞活力.随着COCl2低氧处理时间的延长,NPA细胞逐渐获得间质细胞的形态特征,HIF-1α、Vimentin表达在0～6h逐渐增加,随后开始下降,E-cadherin表达持续降低,低氧0h与6h相比各蛋白表达均具有统计学差异(P＜0.01).低氧组侵袭、转移细胞数目较对照组明显增加(P＜0.01),同时低氧组细胞HIF-1α发生核转位.结论 CoCl2模拟化学性低氧可促进NPA细胞上皮间质转化及侵袭、转移,其分子机制可能涉及HIF-1α介导的信号通路对E-cadherin、Vimentin基因表达的调控.     

柞蚕抗菌肽对人鼻咽癌细胞CNE 2骨架的作用

目的：探讨柞蚕抗菌肽对癌细胞骨架的破坏作用。方法：用柞蚕抗菌肽对人鼻咽癌细胞CNE2处理12和18h，抗微管蛋白单克隆抗体检测细胞骨架结构的变化。结果：免疫组织化学染色见抗菌肽处理后细胞骨架分布不均匀，形态不规则，散乱，卷缩。结论：柞蚕抗菌肽具有较明显的破坏人鼻咽癌细胞株CNE2细胞骨架的作用。     

RNA干扰p38基因对肾癌786-O细胞生物学特性的影响及对舒尼替尼的增敏作用

目的 探讨RNA干扰p38基因对人肾癌细胞株786 0增殖、侵袭、细胞周期和细胞对舒尼替尼敏感性的影响.方法 构建针对p38的siRNA531和siRNA659两条siRNA,分别将其转染至肾癌786-O细胞株,即为siRNA531组和siRNA659组,同时设置转染无义siRNA的阴性对照组和仅加转染试剂的空白对照组.应用RT-PCR技术检测786-0细胞p38 mRNA的表达,蛋白质印迹法检测p38蛋白的表达.CCK-8法检测细胞的增殖情况和对舒尼替尼的敏感性,流式细胞术检测细胞的周期改变情况,Transwell实验检测细胞的侵袭能力.结果 RT-PCR及蛋白质印迹法检测发现siRNA转染后786-0细胞p38mRNA及蛋白的表达均降低.与空白对照组和阴性对照组相比,siRNA531组和siRNA659组786-O细胞在转染后3～5 d时的增殖率均降低(P＜0.05,P＜0.01),细胞对舒尼替尼的敏感性增加,两组对舒尼替尼的IC50值均低于阴性对照组[(3.2±0.3)、(1.4±0.1) μmol/mL vs (5.4±0.2)μmol/mL,P＜0.05].siRNA531组、siRNA659组G1期细胞数量明显多于对照组,且两组786-O细胞出现G0/G1阻滞.转染24 h后,两组的穿膜细胞数分别为56.43±6.02、34.00±8.12,与阴性对照组(76.27±5.08)相比,两组细胞的侵袭能力均下降(P＜0.01).结论 通过转染p38特异性siRNA可以成功沉默肾癌细胞株786-O的p38基因的表达,抑制肾癌细胞株786-O的增殖、侵袭能力,增加其对舒尼替尼的敏感性,为后续研究肾癌治疗及靶向耐药奠定基础.     

白藜芦醇对人甲状腺乳头状癌IHH4细胞增殖和凋亡的影响

目的:观察白藜芦醇对人甲状腺乳头状癌细胞(IHH4)增殖和凋亡的影响,并初步探讨其可能的机制?方法:采用CCK-8法检测白藜芦醇对IHH4细胞增殖的影响;倒置显微镜?透射电镜?DAPI染色观察细胞的形态学变化;细胞免疫荧光和Western blot法检测细胞内cleaved caspase-3蛋白的表达;应用流式细胞技术(flow cytometry,FCM)观察细胞周期和凋亡的改变?结果:①白藜芦醇可以呈时间和浓度依赖性抑制IHH4细胞增殖;②与正常对照相比,加入白藜芦醇后IHH4细胞皱缩?变圆?脱落,细胞质中出现大小不等的空泡,胞质内容物增多;透射电镜下细胞核的染色质高度凝聚?边缘化;DAPI染色后荧光显微镜下观察,细胞核呈致密浓染;③细胞免疫荧光和Western blot显示,随着白藜芦醇作用浓度和时间的增加cleaved caspase-3蛋白的表达明显增加;④流式Annexin V-FITC/PI双染检测显示白藜芦醇呈浓度依赖性诱导IHH4细胞凋亡?白藜芦醇可引起细胞S期阻滞?结论:白藜芦醇可抑制人甲状腺乳头状癌IHH4细胞增殖,诱导IHH4细胞凋亡?白藜芦醇阻滞细胞于S期,可能是抑制IHH4细胞增殖?促使其凋亡的原因之一?     

NU7026对人肝癌细胞HepG2生物学行为的影响

目的探讨NU7026对HepG2细胞的影响,为治疗肝癌提供理论基础。方法用NU7026作用HepG2细胞,将实验分为空白组、对照组和NU7026组。 CCK8实验检测NU7026对肝癌HepG2细胞存活率的影响。生长曲线实验和克隆实验检测HepG2细胞增殖能力,划痕实验检测HepG2细胞迁移能力,流式细胞术检测HepG2细胞凋亡和周期。结果与0 μmol/L组和DMSO组比较,15 μmol/L和20 μmol/L NU7026作用于HepG2细胞,细胞存活率明显下降(P＜0.05);与DMSO组相比,10 μmol/L NU7026作用于HepG2细胞24、48、72 h后,细胞存活率下降(P＜0.05);10 μmol/L NU7026作用HepG2细胞,细胞增殖能力和迁移能力下降(P＜0.05),细胞凋亡率增加(P＜0.05),细胞周期无明显改变。结论NU7026能抑制HepG2细胞增殖能力和迁移能力可能与促进细胞凋亡有关。