乳腺癌细胞凋亡与HIF-1α的相关性研究

目的：探讨乳腺癌组织中HIF-1α、P53蛋白的表达及与凋亡的关系。方法：采用免疫组化S-P法检测58例乳腺癌中HIF-1α、P53、MDM2蛋白的表达,用末端转移酶介导的dUTP切口末端标记法（TU-NEI法）检测凋亡。结果：乳腺癌组织中HIF-1α、P53、MDM2蛋白阳性率分别为46.6%,61.1%和27.6%。癌组织HIF-1α阳性表达组的凋亡指数（AI）显著高于HIF-la阴性组（P〈0.01）;P53阴性组AI显著高于P53阳性组（P〈0.05）。HIF-la阳性P53阴性表达组AI显著高于HIF-1α阴性P53阳性组（P〈0.01）,HIF-1α与P53表达呈显著负相关（r=-0.33,P〈0.01）。MDM2阳性表达组AI显著低于其阴性组（P〈0.01）。MDM2阳性HIF-1α阴性组AI显著低于MDM2阴性HIF-1α阳性组（P〈0.05）,MDM2与HIF-1α负相关（r=-0.26,P〈0.05）。结论：HIF-1α可诱导乳腺癌肿瘤细胞凋亡,其机制可能与P53和MDM2有关,作为肿瘤早期新标志。     

HIF-1α和P53在细支气管肺泡癌和混合型肺腺癌中的表达

目的探讨细支气管肺泡癌(BAC)与伴有BAC性质的肺腺癌(ADWBF)即混合型肺腺癌中HIF-1α与P53表达差异及相关性。方法收集BAC和ADWBF患者的临床病理资料及石蜡标本并分为BAC组和ADWB组,对两组患者临床病理资料进行比较,采用SP免疫组化法检测HIF-1α与P53在两组中的表达情况,采用χ2检验分析两者在两组病例中的表达差异及相关性。结果 两组在性别构成和肿瘤大小存在差异(P<0.05),HIF-1α、P53阳性表达率分别为25.0%(8/32)和49.3%(34/69),6.3%(2/32)和26.1%(18/69),差异均有统计学意义(P<0.05),HIF-1α和P53表达具有明显的正相关性(P<0.05,rp=0.338)。结论 HIF-1α和P53在肺腺癌的发生和进展中起到重要作用,并且两者之间存在协同作用。     

结直肠肿瘤中缺氧诱导因子-1α表达的Meta分析

目的:研究缺氧诱导因子-1α(Hypoxia-inducible factor 1 alpha,HIF-1α)在人结直肠肿瘤进程中的表达.方法:检索中国生物医学文献数据库、MEDLINE和EMBASE数据库等.收集所有相关的病例对照试验,应用RevMan4.2软件对符合条件的所有研究结果进行Meta分析.结果:符合纳入标准的共1 1篇文献.结直肠癌组与腺瘤组、结直肠癌与正常组异质性检验P<0.05,选用随机效应模型;腺瘤组与正常组异质性检验P>0.05,选用固定效应模型.HIF-1α仅的表达结直肠癌组与腺瘤组相比无统计学差异(OR 2.20;95%C1 0.98,4.97;P>0.05),腺瘤组相对正常组增高(OR 8.60;95%CI 3.60,20.56;P<0.05),结直肠癌相对正常组增高(0R 19.29;95%CI 6.19,60.09;P<0.05).结论:HIF-1 Ot的表达存在于整个结直肠肿瘤癌变的全过程,其在人结直肠腺瘤、结直肠癌中的表达相对正常组织中的表达增高,具有统计学差异;在人结直肠腺瘤与结直肠癌中的表达不具有统计学差异.     

大肠癌中VHL mRNA,FIH-1 mRNA的表达对HIF-1α蛋白水平的影响

目的:检测大肠癌中VHL mRNA,FIH-1 mRNA以及HIF-1α蛋白的表达,探讨VHL,FIH-1对HIF-1α蛋白水平的影响. 方法:采用RT-PCR技术检测42例大肠癌组织和相应的癌旁正常粘膜组织中VHL mRNA,FIH-1 mRNA的表达,采用免疫组化SP法检测HIF-1α蛋白在大肠癌和癌旁正常组织中的表达,Spearman相关关系检验分析其之间的相关性. 结果:大肠癌组织VHL mRNA和FIH-1 mRNA的表达水平显著低于癌旁正常组织(t=-10.14,P=0.00;t=-15.26,P=0.00);二者的表达水平随Dukes分期而降低,DukesA B期显著高于DukesC D期(t=2.84,P=0.01;t=-5.13,P=0.00);它们的表达水平与与肿瘤部位、性别无关. 大肠癌组织HIF-1α蛋白表达阳性率为69.1%(29/42),在癌旁正常组织中均为阴性;DukesC D期(80.0%,24/30)显著高于Dukes A B期(41.7%,5/12),(t=5.89, P=0.02); Spearman相关分析显示,HIF-1α表达水平与VHL mRNA,FIH-1 mRNA的表达水平显著负相关(rs=-0.97,P=0.01,rs=-0.66,P=0.01). 结论:HIF-1α的过表达在大肠癌的发生发展、浸润转移过程中起着重要作用,大肠癌组织中VHL以及FIH-1的水平下降与HIF-1α蛋白水平的升高之间存在密切相关.     

HIF-1α基因miR RNAi慢病毒载体的构建与鉴定

目的 构建人HIF-1α的miR RNAi慢病毒载体.方法 利用已经构建成功的针对人HIF-1α基因的miRNA干扰质粒pcDNATM6.2-GW/EmGFP-HIF-1α miR,通过BP/LR反应,将EmGFP-HIF-1α-miR表达框整合重组到产毒质粒pLenti6/V5-DEST中测序鉴定,用PLP1、PLP2和PLP/VSVG质粒共转染包装293FT细胞产毒,并利用GFP蛋白表达水平进行滴度测定.结果 经测序鉴定证实成功构建针对人HIF-1α基因的miRNA慢病毒干扰载体pLenti6/V5-GW/EmGFP-HIF-1α miR.结论 成功构建针对人HIF-1α基因的miRNA慢病毒RNA干扰载体.     

HIF-1的生物学机制及在肿瘤研究中的进展

(hypoxia-inducible factor-1,HIF-1)是缺氧条件下广泛存在于哺乳动物及人体的一种转录因子.研究证实HIF-1在动物及人体许多肿瘤中大量表达,对肿瘤的生长、血管形成、转移、凋亡及耐药皆有影响.为此,本文就HIF-1的分子生物学机制的研究进展及在肿瘤中的应用作一综述.     

dn HIF-1对宫颈癌细胞生物学行为的影响

目的研究抑制性缺氧诱导因子-1α(dn HIF-1α)对人宫颈癌SiHa细胞生物学行为的影响,探讨HIF-1α在SiHa细胞的血管生成、缺氧保护、凋亡、增殖过程中的作用。方法将表达dn HIF-1α的重组质粒pcDNA3.1-dn HIF-1α转染入SiHa细胞,采用免疫细胞化学法和Western Blotting检测dn HIF-1α转染SiHa细胞后其HIF-1α与血管内皮生长因子(VEGF)表达水平的变化;CoCl2化学缺氧法处理细胞,MTT法测定细胞增殖情况,原位缺口末端标记法检测细胞凋亡情况,同时与pcDNA3.1组和未转染组进行比较。结果重组质粒pcDNA3.1-dn HIF-1α转染SiHa细胞后,其HIF-1α蛋白表达水平与其它两组相比差异无统计学意义,而VEGF蛋白表达水平有较明显的降低(P<0.05)。转染dn HIF-1α的细胞,常氧培养和CoCl2诱导的化学缺氧条件下其增殖能力均低于其他两组(P<0.05),CoCl2处理后细胞凋亡增加,与其他两组相比,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论dn HIF-1α抑制SiHa细胞的增殖并促进CoCl2化学缺氧引起的细胞凋亡,同时能降低VEGF蛋白的表达。提示dn HIF-1α可望在宫颈癌治疗中发挥作用。     

dn HIF-1α对宫颈癌细胞生物学行为的影响

目的 研究抑制性缺氧诱导因子-1α(dn HIF-1α)对人宫颈癌SiHa细胞生物学行为的影响,探讨HIF-1α在SiHa细胞的血管生成、缺氧保护、凋亡、增殖过程中的作用.方法 将表达dn HIF-1α的重组质粒pcDNA3.1-dn HIF-1α转染入SiHa细胞,采用免疫细胞化学法和Western Blotting检测dn HIF-1α转染SiHa细胞后其HIF-1α与血管内皮生长因子(VEGF)表达水平的变化;CoCl2化学缺氧法处理细胞,MTT法测定细胞增殖情况,原位缺口末端标记法检测细胞凋亡情况.同时与pcDNA3.1组和未转染组进行比较.结果 重组质粒pcDNA3.1-dn HIF-1α转染SiHa细胞后,其HIF-1α蛋白表达水平与其它两组相比差异无统计学意义,而VEGF蛋白表达水平有较明显的降低(P<0.05).转染dn HIF-1α的细胞,常氧培养和CoCl2诱导的化学缺氧条件下其增殖能力均低于其他两组(P<0.05),CoCl2处理后细胞凋亡增加,与其他两组相比,差异具有统计学意义(P<0.05).结论 dn HIF-1α抑制SiHa细胞的增殖并促进CoCl2化学缺氧引起的细胞凋亡,同时能降低VEGF蛋白的表达.提示dn HIF-1α可望在宫颈癌治疗中发挥作用.     

臭氧后处理对大鼠肾脏HIF-1α的表达及细胞凋亡的影响

目的:探讨臭氧后处理对大鼠肾脏缺血再灌注损伤(IRI)中缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)及肾小管上皮细胞凋亡的影响。方法:随机将36只SD大鼠分为假手术组、缺血再灌注组和臭氧后处理组,每组12只,进行如下实验:①假手术组:切除大鼠右肾后缝合腹壁;②缺血再灌注组:切除大鼠右肾后,用无创伤血管夹夹闭左肾动、静脉45min进行缺血,然后开放血管夹进行再灌注;③臭氧后处理组:手术步骤与缺血再灌注组相同,但在术后10d内,每天对该组大鼠经直肠吹入氧气和臭氧的混合气体2.5-3.0ml[臭氧浓度为50mg/L,0.5mg/(kg·d)]。全自动生化分析仪检测大鼠血清肌酐和尿素氮,观察大鼠肾组织的病理改变和细胞凋亡情况,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测各组大鼠HIF-1α的含量。结果:与假手术组相比,缺血再灌注组和臭氧后处理组血清尿素氮、肌酐水平均显著升高,而缺血再灌注组的尿素氮、肌酐表达量又明显高于臭氧后处理组。臭氧后处理组的肾组织病理学改变较缺血再灌注组轻。假手术组、缺血再灌注组、缺血后处理组大鼠肾组织的细胞凋亡指数分别为4.32±1.84、39.28±4.06和27.42±2.83,3组间比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。Western Blot结果显示,在假手术组、缺氧再灌注组和臭氧后处理组中HIF-1α表达量依次增加,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:臭氧后处理可能通过显著增加HIF-1α的表达而抑制肾小管上皮细胞的凋亡,从而发挥肾脏保护作用。     

HIF-1α与胃肠道肿瘤的关系研究进展

缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)是介导细胞缺氧反应的关键性转录因子,使细胞产生一系列的反应,以适应缺氧微环境。胃肠道肿瘤的缺氧微环境及HIF-1α的表达与肿瘤的发生发展、浸润转移、治疗及预后方面关系密切,已成为胃肠道肿瘤研究的热点。     

原发性肝癌中HIF-1α、P-gp的表达及相关性的研究

目的：观察HIF-1α和P-gp在原发性肝癌（HCC）中的表达,探讨两者相互作用的关系。方法：采用免疫组织化学法检测36例HCC及20例非肿瘤肝组织中P-gp和HIF-1α的表达,对两者均表达阳性的病例,进行免疫组织化学双标记染色。结果：36例HCC中HIF-1α和P-gp高表达,阳性率分别为58.33%和77.78%,明显高于非肿瘤肝组织（P＜0.001）。两者表达呈正相关（r=0.388,P＜0.05）。18例两者均表达阳性的病例中,免疫双标共表达率为61.1%。结论：HCC中HIF-1α和P-gp的表达密切相关,HIF-1α可通过上调P-gp的表达实现对化疗药物的耐受,HIF-1α有望成为评价及逆转肿瘤多药耐药的新指标。     

HIF-2α及VEGF在结直肠癌组织中的表达及与患者预后的关系

目的 探讨HIF-2α及VEGF在结直肠癌中的表达情况,HIF-2α及VEGF与临床病理间的关系.方法 免疫组织化学技术检测67例结直肠癌及癌旁组织中HIF-2α及VEGF蛋白的表达情况.结果 在结直肠癌组织中HIF-2α、VEGF的表达明显高于癌旁组织;HIF-2α及VEGF的表达率随着肿瘤临床分期、淋巴结转移逐渐增加;HIF-2α的表达率随着肿瘤体积增大逐渐增加,而VEGF表达率与肿瘤体积大小无相关性;HIF-2α及VEGF表达率与患者的年龄、性别、肿瘤发生部位及肿瘤分化程度等无关.HIF-2α与VEGF表达呈正相关;Kaplan-Meier生存分析发现HIF-2α表达与患者生存有关,即高表达患者预后差.结论 HIF-2α参与了结直肠癌生长、浸润及转移过程,这一过程可能与调节VEGF的表达有关.     

缺氧预处理对新生大鼠缺氧缺血性脑细胞凋亡的影响

目的：研究缺氧预处理对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤时脑组织缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)mRNA及脑细胞凋亡的影响。方法：新生7日龄SD大鼠随机分为空白对照组(n=12)、假手术组(n=12)、缺氧缺血组(HIBD组，n=15)和缺氧预处理后缺氧缺血组(HPC组，n=21)，缺氧预处理组在行HIBD模型前24h吸8％浓度氧3h。各组大鼠均于14日龄处死。观察大鼠脑组织神经病理学变化；采用末端脱氧核苷酸介导的X-DUTP缺口末端标记法测定神经元凋亡的情况；采用定量逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)法测定大鼠脑组织HIF-1αmRNA的表达。结果：HPC组脑皮层神经细胞变性坏死较HIBD组减轻，HPC组大鼠脑组织HIF-1α基因的表达较HIBD组下降，HPC组脑细胞凋亡数目较HIBD组减少。结论：缺氧预处理可保护新生大鼠缺氧缺血性脑损伤，减弱HIF-1α mRNA的表达，减少脑细胞凋亡。     

HIF-1α在子宫内膜腺癌中的表达与意义

目的：通过检测缺氧诱导因子-1α（HIF—1α）在子宫内膜腺癌中的表达,探讨它在子宫内膜腺癌发生发展机制中的作用。方法：采用免疫组织化学SP法,分别检测14例正常子宫内膜组织、15例子宫内膜不典型增生组织及56例子宫内膜腺癌组织中HIF-1α 的表达。结果：HIF-1α 在子宫内膜腺癌组织、子宫内膜不典型增生组织、正常子宫内膜组织中的阳性表达率分别为92．86％、53．33％和7．14％,其表达差异有统计学意义（x^2=40．483,P=0．000）。子宫内膜腺癌组织中HIF-1α 的阳性表达率与正常子宫内膜组织及子宫内膜不典型增生组织两两比较,差异具有统计学意义（Z=-4．172,P=0．000;Z=-5．501,P=-0．000）。子宫内膜不典型增生组织中HIF-1α的阳性表达率与正常子宫内膜组织比较,差异亦有统计学意义（Z=-2．679,P=-0．011）。结论：HIF—1α 在正常子宫内膜到子宫内膜不典型增生再发展到子宫内膜腺癌的过程中表达逐渐增高,说明HIF-1α 可能在子宫内膜病变由良性到恶性转变过程中,以及恶性肿瘤的进展中起了一定的作用。     

缺氧通过HIF-1α/PCSK9信号途径诱导神经细胞凋亡

目的研究缺氧是否通过上调缺氧诱导因子1α(HIF-1α)水平而调控前蛋白转化酶枯草溶菌素9(PCSK9)表达并诱导神经细胞凋亡。 方法分别用0、125、250、500 μmol/L氯化钴(CoCl₂)处理PC12细胞,蛋白印迹法检测其PCSK9及HIF-1α表达;Hoechst33258核染色及流式细胞术检测CoCl₂对PC12细胞凋亡的影响。用250 μmol/L CoCl₂处理PC12细胞0、6、12、24 h,蛋白印迹法检测其PCSK9及HIF-1α表达。不同浓度HIF-1α激动剂二甲基乙二酰基甘氨酸(DMOG)或HIF-1α抑制剂利非西呱(YC-1)处理PC12细胞24 h,检测PCSK9、HIF-1α、胱天蛋白酶3(Caspase-3)、Caspase-9的表达及对PC12细胞凋亡的影响。PC12细胞经PCSK9 siRNA转染后与250 μmol/L CoCl₂孵育,检测对PC12细胞凋亡的影响及PCSK9、HIF-1α、Caspase-3、Caspase-9蛋白的表达。 结果PCSK9、HIF-1α的表达及细胞凋亡程度呈CoCl₂浓度与时间依赖性增高。PC12细胞中HIF-1α和PCSK9的表达呈DMOG浓度依赖性增高,Caspase-3、Caspase-9表达及PC12细胞凋亡率呈DMOG浓度依赖性降低;PC12细胞中HIF-1α和PCSK9的表达呈YC-1浓度依赖性降低,Caspase-3、Caspase-9表达及PC12细胞凋亡率呈YC-1浓度依赖性升高。与空白组及无义RNA组比较,PCSK9 siRNA转染组Caspase-3、Caspase-9表达减少,凋亡程度降低。 结论细胞缺氧状态下HIF-1α水平的增高能上调PCSK9表达并调控神经细胞凋亡。     

缺氧诱导因子-1α及P53蛋白在前列腺增生和癌变组织中的表达及对判断预后的意义

目的：探讨缺氧诱导因子-1α（hypoxia—inducible factor-1α,HIF-1α）及P53蛋白在前列腺增生（benign prostatic hyperplasia,BPH）及前列腺癌中的表达情况及两者在前列腺癌发病中的作用及其临床意义。方法：采用免疫组织化学sP法检测40例BPH、40例前列腺癌及10例正常前列腺组织中P53及HIF-1α表达情况。结果：P53在正常前列腺组织中不表达,在BPH、癌性前列腺组织中阳性表达率分别为t0％（4／40）、80％（32／40）,其在BPH组织中表达率高于正常前列腺组织（P〈0．05）,前列腺癌组织中表达率高于BPH组织（P〈0．05）。HIF-1α在正常前列腺组织中不表达,在BPH、癌性前列腺组织中的阳性表达率分别为40％（16／40）、75％（30／40）,在BPH组织中表达率高于正常前列腺组织（P〈0．05）,前列腺癌组织中表达率高于BPH组织（P〈0．05）。P53、HIF-1α与前列腺癌的分期有关（P〈0．01）。前列腺癌组织中HIF-1α与P53表达呈正相关（r=0．648）。结论：HIF-1α、P53的异常表达在BPH和癌变的发病中起重要的作用。它们可以作为判断前列腺癌临床分期和预后的重要指标。     

胃肠道腺癌组织中HIF-1α的表达及意义

目的探讨HIF-1α在胃肠道腺癌组织中的表达及其临床意义。方法本课题以经病理证实的胃肠道腺癌组织21例为研究组,以其胃肠道腺癌淋巴结转移组织21例和正常胃肠道黏膜组织21例为对照组。采用链霉素-生物素（S-P）免疫组化技术,测定胃肠道腺癌、正常胃肠道黏膜、淋巴结转移的癌组织中HIF-1α的表达。采用Wilcoxon秩和检验进行组间比较。结果胃肠道腺癌、胃肠道腺癌淋巴结转移组织中HIF-1α蛋白阳性表达率均明显高于正常胃肠道黏膜组织,差异具有统计学意义;胃肠道腺癌组织淋巴结转移的癌组织中HIF-1α蛋白阳性表达率高于胃肠道腺癌组织,但二者之间差异无统计学意义。结论 HIF-1α在胃肠道腺癌及其淋巴结转移癌的组织中表达水平高于正常胃肠道黏膜,其表达水平与肿瘤的发生、发展、浸润、转移相关,检测上述标志物有一定的临床及病理意义。     

HIF-1对人宫颈癌SiHa细胞增殖和凋亡的影响

目的观察缺氧诱导因子1α(HIF-1α)在缺氧条件下对宫颈癌SiHa细胞的增殖、生长和凋亡的影响,探讨HIF-1α在宫颈癌的发展过程中所起的作用。方法将表达全长HIF-1α的重组质粒pcDNA3.1-full length HIF-1α和空质粒pcDNA3.1转染入SiHa细胞中,分别命名为fLHIF-1α组和pcDNA3.1组,未转染细胞组命名为未转染组。应用Western Blotting和免疫细胞化学法对细胞内的HIF-1α和VEGF表达量进行检测。应用MTT方法检测不同浓度的CoCl2处理后细胞的增殖情况;采用原位缺口末端标记(TUNEL)法检测细胞的凋亡情况。结果免疫细胞化学和Western Blotting结果显示重组质粒pcDNA3.1-full length HIF-1α转染成功,转染细胞内HIF-1α及VEGF表达较未转染细胞和质粒pcDNA3.1转染细胞增高(P<0.05),显示在正常或缺氧条件下,fLHIF-1α组细胞的增殖能力均高于pcDNA3.1组和未转染组(P<0.05),凋亡率小于pcDNA3.1组和未转染组,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论HIF-1α在CoCl2诱导的缺氧条件下可以抑制SiHa细胞的凋亡,减少缺氧对细胞的损伤以及促进细胞的增殖,提示HIF-1α在宫颈癌的发生发展中可能起着重要作用。