三叉神经痛大鼠三叉神经节内谷氨酸表达分布的研究

目的研究三叉神经痛(TN)大鼠时其三叉神经节(TG)内谷氨酸(Glu)表达与分布的关系。方法皮下注射硝酸甘油构建三叉神经痛大鼠模型;应用免疫组化技术检测大鼠三叉神经节Glu含量与分布。结果皮下注射硝酸甘油构建三叉神经痛大鼠的三叉神经节内Glu含量增多且其主要分布在三叉神经节表层。结论 Glu可能与三叉神经痛发生有密切关系。     

P型Na+-K+-ATP酶与偏头痛关系的实验研究

目的 利用硝酸甘油实验性偏头痛模型探讨P型Na+-K+-ATP酶在偏头痛发病机制中的作用.方法 20只SD大鼠(雌雄各半)随机分为生理盐水对照组和模型组.模型组按TassorelliCristina法复制偏头痛大鼠模型(每周1次,连续4次),第4次造模后分别取三叉神经节及三叉颈复合体、大脑额叶组织;RT-PCR及Western印迹法分别测定P型Na+-K+-ATP酶的mRNA和蛋白的表达量,免疫沉淀法测定其活性,同时用Fluo-3/AM荧光法测定细胞内钙离子浓度.结果 模型组大鼠三叉神经节及三叉颈复合体(0.72±0.05,0.59±0.05,5.21±0.51)及大脑额叶组织(0.70±0.05,0.60±0.05,3.61±0.49)的P型Na泵mRNA及蛋白表达和活性均明显低于生理盐水对照组(0.83±0.10,0.67±0.06,6.53±0.73;0.81±0.08,0.71±0.09,6.61±0.73),差异有统计学意义;模型组大鼠三叉神经节及三叉颈复合体(211 182±12 973)及大脑额叶组织(186 511±18 297)的细胞内钙离子浓度均明显高于生理盐水对照组(135 243±18 105,143 289±25 175),差异有统计学意义.结论 P型Na+-K+-ATP酶可能通过其表达量及活性的变化参与了偏头痛的发生发展过程.     

通脉注射液对脑缺血再灌注大鼠兴奋性毒性作用的干预机制

【目的】观察脑缺血再灌注后大鼠皮质谷氨酸(Glu)含量及N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)受体活性变化，旨在探讨通脉注射液对缺血性中风后兴奋性毒性作用可能的干预机制。【方法】采用四血管结扎全脑缺血再灌注模型，以放免法测定皮质中Glu和NMDA受体的活性，观察脑缺血后Glu和NMDA受体变化及比较通脉注射液对二者的影响。【结果】脑缺血再灌注模型组皮质Glu含量显著升高、NMDA受体活性上升，通脉注射液组大鼠皮质Glu的含量和NMDA受体活性与模型组比较显著降低。【结论】脑缺血再灌注后兴奋性毒性作用产生，以黄芪和益母草为主的通脉注射液能够通过减弱缺血再灌注后的兴奋性毒性过程,从而起到保护脑皮质的作用。     

降钙素基因相关肽和腺苷2A受体在偏头痛模型大鼠中的表达及作用机制

【摘要】 目的 通过检测降钙素基因相关肽（calcitonin gene related peptide,CGRP）及腺苷2A受体(adenosine 2A receptor,A2AR）蛋白在偏头痛模型大鼠三叉神经组织中的表达,探讨CGRP和A2AR在大鼠偏头痛发病机制中的作用。 方法 将30只雄性Sprague Dawley（SD）大鼠随机分为对照组和模型组,每组15只。模型组采用每周 1 次皮下注射硝酸甘油法建立无先兆性偏头痛模型,共 5 周;对照组则用生理盐水皮下注射代替硝酸甘油。对两组大鼠进行行为学评分,而后采集两组大鼠颅底三叉神经节,采用免疫组化法检测三叉神经节中CGRP的表达;采用免疫荧光检测法观察三叉神经节中A2AR表达;采用westernblot法检测 A2AR蛋白表达量。结果 三叉神经节组织HE染色结果：模型组和对照组均显示神经元与神经纤维分布正常、无紊乱,解剖结构完整,无异常改变。三叉神经节中A2AR蛋白表达的Western blot量及灰度值测定结果：模型组A2AR蛋白表达量及灰度值高于对照组。差异均有统计学意义（P＜001）。三叉神经组织中A2AR表达蛋白免疫荧光测定结果及A2AR阳性神经元细胞数：模型组中A2AR在三叉神经各神经元中的免疫荧光的表达分布明显多于对照组模型组。模型组表达 A2AR的阳性神经元细胞数高于对照组,差异有统计学意义（P＜001）。三叉神经节CGRP免疫组化表达水平及OD值结果：模型组CGRP及OD值的表达水平明显高于对照组,差异有统计学意义（P＜001）。结论 模型大鼠偏头痛发作时,三叉神经组织无解剖结构上的改变,大鼠行为学改变与三叉神经功能异常有关。A2AR的激活或蛋白上调,CGRP的大量释放。A2AR、CGRP可能在偏头痛的发作中起重要作用。     

参附注射液对脑复苏大鼠海马区NMDA受体表达的影响

目的探讨参附注射液对脑复苏大鼠海马区NMDA受体（NMDAR）表达的影响。方法采用四血管阻塞的方法，复制出大鼠脑复苏模型。采用原位杂交法分别检测假手术组（A组）、全脑缺血再灌注组（B组）、参附注射液治疗组（C组）海马CA1区NMDAR亚单位2A mRNA及2B mRNA表达的变化。结果与A组比较，B组海马CA1区NMDAR亚单位2A mRNA及2B mRNA表达于2h即明显升高（P〈0．01），24h达到高峰，并持续到48h；与B组比较，C组NMDAR亚单位2A mRNA及2B mRNA的表达下降（P〈0．01）。结论在脑复苏救治过程中，参附注射液可减少NMDAR亚单位2AmRNA及2B mRNA的表达，对脑起保护作用。     

Humanin抑制NR1亚基表达和NR2B亚基磷酸化的神经保护作用

目的：探讨Humanin （HN）通过抑制N-甲基-D-天门冬氨酸(NMDA)受体NR1亚基的表达和NR2B亚基的磷酸化在兴奋性神经毒中发挥的保护作用,并阐明其可能的作用机制。方法：利用原代培养的Wistar大鼠皮层神经元建立NMDA诱导的兴奋性神经毒模型,将神经元分为对照组、NMDA组、NMDA+MK-801（MK-801）组和NMDA+HN（HN）
组。流式细胞术荧光定量检测各组神经元膜NMDA受体NR1亚基蛋白的表达,Western blotting法检测各组神经元膜NMDA受体NR2B亚基Tyr1472位点的磷酸化水平。结果： 倒置相差显微镜观察,NMDA组中的神经元胞体肿胀,个别细胞变成圆形,胞体周围光晕模糊,神经元突起大部分消失,表现出明显的神经毒性作用。流式细胞术免疫荧光定量检测,与对照组比较,NMDA组NR1亚基蛋白的平均荧光强度值明显增加（P<0.05）;与NMDA组比较,MK-801组和HN组的NR1亚基蛋白的平均荧光强度值明显降低（P<0.05）。Western blotting法检测,各组神经元的NR2B亚基总蛋白的表达水平无改变;与对照组比较,NMDA组NR2B亚基蛋白Tyr1472位点的磷酸化水平明显升高（P<0.05）;与NMDA组比较,MK-801组和HN组均能降低NR2B亚基蛋白Tyr1472位点的磷酸化水平（P<0.05）。 结论： NMDA受体NR1亚基蛋白表达水平的增加和NR2亚基磷酸化可能参与NMDA诱导的兴奋性神经毒作用;HN可能通过抑制NR1亚基的表达和NR2B亚基的磷酸化而发挥对神经元的保护作用。     

NMDA受体与AMPA受体亚单位在培养海马神经元树突上的表达及共定位

目的 :研究含 NR2 B亚单位的 NMDA受体 (以下简称 NR2 B- NMDAR)与含 Glu R2亚单位的 AMPA受体 (以下简称 Glu R2 - AMPAR)在不同发育阶段的培养海马神经元树突上的表面表达及共定位。方法 :以 FL AG- NR2 B、GFP- Glu R2及 CFP- Actin的表达载体共转染原代培养 5 d的大鼠海马神经元 ,分别用抗 FL AG单克隆抗体和山羊抗鼠二抗 - Cy3(红色荧光 )、抗 GFP多克隆抗体和山羊抗兔二抗 - Alex4 88(绿色荧光 )作活细胞双重染色 ,显示并计数表面表达的 NR2 B- NMDAR受体簇、Glu R2 - AMPAR受体簇以及两者共定位的受体簇。结果 :培养 7d和 19d时 NR2 B- NMDAR受体簇密度分别为 39.7± 5 .0和 6 4.7± 6 .1(P<0 .0 1;n=6 ) ;Glu R2 - AMPAR受体簇密度分别为 5 9.1± 3.3和 99.7± 6 .4 (P<0 .0 1;n=6 ) ;两者共定位的受体簇密度分别为 2 9.9± 4 .5和 37.5± 2 .5 (P<0 .0 5 ;n=6 )。培养 7d和 19d时 ,与 Glu R2 - AMPAR共定位的 NR2 B- NMDAR受体簇占总 NR2 B- NMDAR受体簇的比例分别 75 .4 %和 5 7.9% ,而与 NR2 B- NMDAR共定位的 Glu R2 - AMPAR受体簇占总 Glu R2 - AMPAR受体簇的比例分别为 5 0 .6 %和 37.6 %。结论 :随着海马神经元的发育 ,成熟神经元比未成熟神经元树突表面 NR2 B- NMDAR受体簇、Glu R2 - A     

针刺对急性癫痫大鼠脑电功率及海马氨基酸类递质的影响

【目的】探讨针刺对急性实验性癫痫模型大鼠脑电功率和海马内氨基酸类神经递质含量的影响。【方法】SD大鼠40只随机分为正常组、模型组、针刺组和西药组;针刺组针刺大鼠大椎、丰隆、肝俞透胆俞,西药组以丙戊酸钠灌胃给药,均连续治疗3 d;除正常组外,其他3组均采用腹腔注射青霉素钠法复制急性癫痫大鼠模型,观察造模后70~85 min内顶中线Pz区脑电地形图各频段功率及大脑海马区中兴奋性氨基酸谷氨酸(Glu)、天门冬氨酸(ASP),抑制性氨基酸γ-氨基丁酸(GABA)、甘氨酸(Gly)、丙氨酸(Ala)、牛磺酸(Tau)含量的变化。【结果】模型组δ、θ、α1、α2、β1、β2各频段的功率均高于正常组(P<0.01),而针刺和丙戊酸钠均可显著性降低δ、θ、α1、α2、β1频段的功率(P<0.05或P<0.01);模型组海马区内兴奋性氨基酸Glu、ASP,抑制性氨基酸GABA、Ala、Gly、Tau的含量均高于正常组(P<0.01),而针刺和西药可降低模型大鼠异常升高的兴奋性氨基酸Glu、ASP及抑制性氨基酸Tau的含量(均P<0.05或P<0.01),针刺可升高抑制性氨基酸Ala的含量(P<0.01),但针刺对抑制性氨基酸GABA、Gly的含量及bGABA/bGlu比值无显著性影响。【结论】针刺可通过抑制痫性放电,调节海马内抑制性氨基酸与兴奋性氨基酸的水平而发挥抗癫痫作用。     

缺氧对大鼠皮层、海马NMDA受体NR1亚单位磷酸化的影响

目的 观察缺氧模型大鼠皮层、海马NMDA受体NR1亚单位酪氨酸磷酸化的变化.方法 成年大鼠置于模拟海拔5 500 m高度的低压氧舱内,每天缺氧8 h,分别缺氧3、7、14 d和21 d.采用免疫组化、Western blot 免疫共沉淀方法检测皮层、海马NR1及其酪氨酸磷酸化的变化.结果 免疫组化显示缺氧皮层、海马NR1表达都明显高于对照组(P《0.01).Western blot检测进一步证明NR1的表达显著高于对照组(P《0.01),且随着缺氧时间的延长而增加.缺氧各组酪氨酸磷酸化水平亦显著高于对照组(P《0.01),缺氧14 d后酪氨酸磷酸化达到最高峰,而后开始下降,21 d时仍显著高于对照组(P《0.01).结论 高原缺氧条件下大鼠皮层、海马NMDA受体NR1亚单位表达及酪氨酸磷酸化水平显著增加,酪氨酸磷酸化的变化可能是影响NMDA受体功能的主要原因.     

Aβ诱导大鼠海马磷酸化NMDA受体亚单位突触内表达的改变

<正>Aβ的突触毒性具有NMDA受体依赖性,NMDA受体的转录后磷酸化修饰是一个可逆的调节蛋白活性、定位及蛋白与蛋白间的相互作用过程。基于以前的研究结果,我们进一步探讨了Aβ诱导的大鼠海马磷酸化NMDA受体亚单位在突触内表达的改变。本研究发现在Aβ作用早期阶段,可以诱导大鼠海马p Tyr1472-NR2B及Fyn表达的减少,但是p Tyr1325-NR2A及Src的蛋白表达没有明显改变。这些结果提示大鼠海     

中国医药电子商务发展现状分析

医药电子商务主要是指以医疗机构、医药公司、银行、药品生产商、医药信息服务提供商以及保险公司等为网络成员,通过Internet网络应用平台,为用户提供安全、可靠、开放并易于维护的医药贸易电子商务平台.这样不仅可以增强药品采购的透明度,减少购销环节,降低药品流通的成本,而且对规范我国药品生产、流通、销售中的行为有着重要的意义,是提高我国医药行业的国际竞争力的有效途径.     

电子商务与传统企业相结合的思考

在今天 ,电子商务一词已经被网上网下的人耳熟能详。由1999年的“电子商务年”掀起的中国电子商务热 ,到 2 0 0 0年初美国 Nasdaq股遭遇有史以来最严重的重创 ,动摇了人们对电子商务的信心 ,人们又一次发出了“电子商务是泡沫”的警示。痛定思痛后 ,人们由狂热、浮躁和盲目 ,到现在理智和冷静进行思考 ,如在中国到底应如何搞电子商务 ?采用哪种模式最适合 ?企业搞电子商务离盈利究竟还有多远 ?本文针对我国目前电子商务的境况 ,谈一些自己的看法。1　对电子商务深入的认识和理解　　自 1999年以来 ,中国很少有互联网公司不说自己要搞电子商…     

B2-MG检测对烧伤后患者肾功能的评价

目的 :研究B2 -MG对肾功能的评价。方法 :80例特重烧伤和 2 0人对照血尿B2 -MG含量。结果 :特重烧伤病人肾脏受损B2 -MG含量升高。结论 :B2 -MG可作为估计肾功能状态的指标。     

深圳地区儿童PHOX2B单核苷酸多态性与先天性巨结肠易感性的关系

目的 探讨PHOX2B第二内含子区的单核苷酸多态IVS2+100G/A与先天性巨结肠遗传易感性的关系. 方法 以聚合酶链反应(PCR)和直接测序分析方法,检测58例先天性巨结肠病人和150例正常对照者PHOX2B IVS2+100G/A的基因型,比较不同基因型与先天性巨结肠风险的相关性. 结果 PHOX2B IVS2+100AA基因型频率在先天性巨结肠患者和正常对照中的分布有显著性差异(P=0.04),携带PHOX2B IVS2+100AA基因型者罹患先天性巨结肠的风险是携带PHOX2B IVS2+100GG或是GA基因型者的2.06倍(95%CI,1.00-4.40). 结论 PHOX2B基因单核苷酸多态IVS2+100G/A可能是中国人先天性巨结肠的遗传易感因素.     

高原运动疲劳对大鼠认知能力及海马NR2B的影响

目的 研究高原环境下大鼠运动疲劳后认知能力的改变及海马NR2B的表达.方法 采用跑台运动方式建立大鼠重度运动疲劳模型,高原组大鼠由兰州直接引入到海拔4 767 m的可可西里高原进行疲劳运动;用Morris水迷宫记录大鼠的学习记忆能力;用免疫组化方法检测大鼠海马组织中NR2B的水平.结果 大鼠海马NR2B的阳性表达位于细胞核,高原组较兰州组大鼠海马NR2B的阳性表达明显降低;与安静组相比,重度疲劳组的NR2B的阳性表达也有所降低.高原重度疲劳组、高原安静组及兰州疲劳组大鼠的空间学习记忆能力均受到不同程度的影响.结论 高原环境和重度疲劳均可使大鼠的学习记忆能力受到影响,其机制可能与海马神经元中NR2B表达水平降低有关.     

人类IL-3受体α亚单位与小鼠AIC2B蛋白的相互作用

目的　探索人类IL - 3受体 (IL - 3R)α亚单位与小鼠内源性AIC2B蛋白在诱导细胞增殖信号表达过程中的相互作用。方法　通过PCR扩增技术 ,构建了IL - 3Rα亚单位胞浆域缺失突变子 34、2 2和CD ,然后将野生型和突变型IL - 3Rα亚单位cDNA分别转染到含小鼠IL - 3R基因表达的BaF3细胞 ,并检测了阳性转染子的增殖信号传导和酪氨酸磷酸化。结果　表达野生型hIL - 3Rα/ βc的BaF3阳性对照克隆在生理浓度hIL - 3诱导后即可出现细胞增殖和胞浆信号蛋白 βc、Jak2及Shc磷酸化 ;而含野生型IL - 3Rα亚单位和AIC2B的BaF3细胞可出现高浓度hIL - 3刺激的细胞增殖反应 ,但无信号传导分子的活化 ;共表达突变型IL - 3Rα与AIC2B的BaF3细胞及未转染的BaF3细胞则对各种浓度的hIL - 3刺激均无反应。结论　尽管hIL - 3Rβc亚单位在hIL - 3诱导的信号传导过程中担负关键作用 ,但小鼠内源性AIC2B也可与hIL - 3Rα重建功能性hIL - 3R ,这种功能的表达需要hIL - 3Rα完整受体分子的存在     

骨肉瘤中ephrinB2/EphB4的表达及其与血管生成的关系

目的探讨ephrinB2及其受体EphB4在骨肉瘤中的表达及其与肿瘤发生、发展以及血管生成的关系.方法采用免役组化S-P法检测80例骨肉瘤组织中EphB4、ephrinB2等蛋白表达,并根据CD34和FⅧ-RAg染色结果记数微血管密度.结果 EphB4及ephrinB2的蛋白表达定位于肿瘤细胞和血管内皮细胞胞质,呈异质性分布;两种蛋白在Ⅲ级骨肉瘤中的表达均明显高于Ⅰ、Ⅱ级(P<0.01).EphB4和ephrinB2强表达组中的MVD均显著高于相应的EphB4、ephrinB2弱表达组(P<0.01).结论 EphB4/ ephrinB2在骨肉瘤发生、演进过程中起着重要作用,并与肿瘤血管密切相关.     

CYP2B6基因表达质粒的构建及在大肠杆菌中的表达

目的:构建CYP2 B6基因原核表达质粒,在大肠杆菌[Rosetta2(DE3)pLysS]中高效表达重组蛋白。方法:以质粒为模板,用PCR技术扩增出CYP2 B6基因,并将其分别插入pET-22b( )、pET-28b( )和pET-32a( )质粒中,经PCR、测序鉴定后,转化Rosetta2(DE3)pLysS,并用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达。结果:经PCR、测序鉴定,构建了CYP2 B6基因表达质粒;采用考马斯亮蓝染色法检测重组蛋白表达,pET-22b( )-CYP2 B6未见目的蛋白表达;pET-28b( )-CYP2 B6有目的蛋白表达,约占蛋白总量的5%;而pET-32a( )-CYP2 B6可以高效地表达CYP2 B6,在低浓度(50μmol/L)IPTG诱导3 h后,所表达的CYP2 B6蛋白约占细菌总蛋白的30%;质谱分析结果进一步证实所表达的蛋白为CYP2 B6。结论:成功地使CYP2 B6基因在原核系统中高效表达。     

A2B亚型3例报告

在人的ABO血型系统中,AB血型的人绝大多数为A2B型,而A2B型者极少见。笔者遇到3例,现报道如下：     

大鼠肝微粒体CYP2B1的活性和P450含量的变化

目的研究3种诱导[地塞米松（Dexamethasone，DEX）、苯巴比妥钠（Phenobarbital sodium，PB）、β-奈黄酮（β-naphthoflavone，β-NF）]和丝裂霉素C（Mitomycin，MMC）对雄性SD大鼠细胞色素P450含量、CYP281活性的影响，以及普罗地芬（Proadifen，SKF525A）对不同活性CYP281的抑制作用。方法连续3d给大鼠腹腔注射各种诱导剂和MMC，另设空白对照和溶剂对照，处理结束后制备肝微粒体，测P450含量和CYP281活性；取各诱导组微粒体，用1．25mmol／L SKF525A处理，测CYP281活性。结果PB作用后使P450含量上升（P〈0．05），CYP281活性明显增大（P〈0．01）；DEX、β-NF、MMC作用后，P450含量、CYP281活性变化无统计意义（P〉0．05），但与空白对照组相比，β-NF组的CYP281活性增加显著（P〈0．05）；用SKF525A处理不同组别的微粒体后，CYP281活性均下降（P〈0．05或P〈0．01）。结论在体内一定条件下，PB能够诱导P450含量、CYP281活性，而DEX、β-NF、MMC对它们的作用不显著；1．25mmol／L的SKF525A在体外能够抑制不同水平的CYP281活性。