牙周膜微血管构筑的实验研究

墨汁灌注狗颈总动脉，火棉胶连续切片光镜观察牙周膜微血管构筑，图像分析仪进行半定量分析，甲基丙烯酸甲酯铸型扫描电镜观察。结果，狗的下颌前磨牙牙周膜内微血管分为２层，靠近牙槽骨壁侧主要为纵行的管径较粗的血管，靠近牙根侧为毛细血管网。     

猫尖牙受扭转力后牙周膜微血管改变的实验研究

目的研究猫尖牙牙周膜微血管正常结构及其受正畸扭转力1周后牙周膜微血管的改变。方法5只雄性恒牙列早期家猫，上颌左侧尖牙施加约50g扭转力，右侧作对照。1周后进行动脉墨汁血管灌注，火棉胶连续切片，光镜下观察猫尖牙正常牙周膜微血管结构及受力后改变，并利用图像分析仪牙周膜进行定量分析。结果受正畸扭转力作用1周后，牙周膜宽度在张力区明显变宽，在压力区牙周膜唇侧区域受正畸力作用后血管活化较差，颈部张力区局部出现无细胞区及无血管区，表现出较剧烈变化，根尖区则表现微血管活化。结论猫恒尖牙施加扭转力1周时间，牙周膜的微血管即发生改变；受扭转力的猫尖牙牙周膜不同部位的微血管床的改变不同；正畸力作用后的唇侧接近颈部的牙周膜微血管活化较差。     

健康志愿者中牙周膜麻醉和黏膜下浸润麻醉的效果比较

目的 比较在健康志愿者中使用计算机控制局部麻醉注射仪(C-CLADS)进行的牙周膜麻醉与使用手推注射器进行黏膜下浸润麻醉在注射疼痛、麻醉效果、麻药用量及并发症方面的差异。方法 2012年9月至2013年5月在北京协和医院口腔科招募50例18～56岁志愿者,采用随机自身对照,一侧采用C-CLADS进行牙周膜麻醉,对侧用传统的手推式黏膜下浸润麻醉(对照),比较两侧的起效时间、用药剂量及麻醉效果,并采用语言评价量表(VRS)和视觉模拟量表(VAS)评价注射疼痛程度,记录两种麻醉方式的并发症。结果 采用C-CLADS进行牙周膜麻醉的药物剂量和注射疼痛程度均显著小于传统的手推式浸润麻醉[剂量:(0.34±0.09)ml比(0.55±0.13)ml,P＜0.01;VRS:0.42±0.73比1.38±0.92,P＜0.01;VAS:1.34±1.21比3.10±1.70,P＜0.01]。C-CLADS麻醉成功率与传统黏膜下浸润麻醉比较差异无统计学意义(90.0%比94.0%,P＞0.05)。牙周膜麻醉12例(24%)出现牙周膜麻醉后疼痛。结论 采用C-CLADS进行牙周膜麻醉与传统的手推注射黏膜下浸润麻醉比较,可以减少药物剂量,降低注射疼痛,并达到良好的麻醉效果,但有较大比例出现术后疼痛。     

环孢素A联合脂多糖对牙周膜成纤维细胞生物学活性的影响

 目的 探讨环孢素A(CsA)联合牙龈卟啉单胞菌脂多糖(Pg-LPS)对人牙周膜成纤维细胞(PDLFs)生物学活性的影响。方法 将CsA（100 ng/mL）、LPS（100 ng/mL）分别单独及联合作用于人PDLFs,采用考马斯亮蓝染色、ELISA、Von kossa染色等方法检测其对PDLFs总蛋白量、碱性磷酸酶(ALP)、骨形成蛋白2（BMP-2）及矿化结节形成的影响。 结果 CsA单独及与LPS联合应用可促进细胞总蛋白的合成,增加细胞ALP活性及BMP-2的表达,并促进细胞矿化结节的早期形成;LPS单独应用可增加细胞的ALP活性,但对细胞的总蛋白合成、BMP-2的表达及矿化结节的早期形成无明显影响。。结论 一定浓度的CsA促PDLFs合成、分化作用明显,CsA联合LPS在促进细胞分化方面具有一定的协同作用。     

犬牙周膜细胞与骨髓基质细胞组织再生能力比较的实验研究

目的 比较犬骨髓基质细胞(BMSC)和牙周膜细胞(PDLC)体内成骨及成韧带样组织的能力,为牙周组织工程种子细胞的选择提供实验依据. 方法 将体外培养Beagle犬BMSC及PDLC与脱细胞真皮基质(ADM)膜复合后植入裸鼠皮下,以单纯ADM为对照组,分别于术后4周和8周进行标本组织学及免疫组织化学染色分析,比较骨保护素(OPG)和胶原Ⅻ的表达. 结果 复合物植入4周和8周组织学观察显示,BMSC形成骨样组织多于PDLC,面形成韧带样组织少于PDLC.免疫组织化学染色显示,BMSC组的OPG表达量高于PDLC组,但胶原Ⅻ的表达量低于PDLC组. 结论 BMSC体内成骨能力高于PDLC组,但成韧带样组织能力低于PDLC组.     

EGF对人牙周膜细胞增生与ALP活性表达的影响

探讨表皮生长因子 (EGF)对人牙周膜细胞的增生与碱性磷酸酶 (ALP)活性表达的影响 ,为EGF应用于牙周组织的再生与修复提供实验依据。采用MTT和ALP活性检测法 ,观察不同质量浓度 ( 0 .1～ 1 0 μg/L)EGF第 2 4、4 8和 72h对体外培养的第 3代人牙周膜细胞 (PDLCs)的作用。与对照组比较 ,在 2 4～ 72h ,0 .1～ 5 μg/L的EGF可显著抑制PDLCs的增生 (P <0 .0 1～ 0 .0 5 ) ;1 0 μg/LEGF培养 4 8h对PDLCs有促进增生的作用 (P <0 .0 5 ) ,培养 72h有稳定增生的作用 (P >0 .0 5 )。 0 .1、0 .5 μg/LEGF可显著抑制PDLCs的ALP活性 (P <0 .0 1～ 0 .0 5 ) ;1～ 1 0 μg/LEGF在 2 4h可显著增强PDLCs的ALP活性 (P <0 .0 1～ 0 .0 5 ) ,在培养 4 8和 72h有稳定ALP活性的作用 (P >0 .0 5 )。提示在一定的作用时间内 ,1 0 μg/LEGF对人PDLCs的生长和分化可同时具有促进作用。     

牙槽骨吸收量对牙周膜面积、力学支点和桩核-牙根联合体抗折力学性能的影响

目的探讨牙槽骨吸收量对牙周膜面积、力学支点和桩核-牙根联合体抗折力学性能的影响。方法用108个相同长度、锥度和直径的有机玻璃模拟上中切牙牙根,常规铸造,粘固桩核,分成13组按不同牙槽骨吸收量和力学支点制作加载基底,并根据牙周组织解剖生理特点设计了三种牙周力学方式。以Instron4302力学测试机进行垂直于牙根长轴加载压缩测试,加载速度1 mm/m in,至桩核松动、脱位或牙根折断,记录最大载荷并计算牙周膜面积。结果牙槽骨吸收量和力学支点为0 mm和12/12,1 mm和11/12,2 mm和10/12,3 mm和9/12,3.5 mm和8.5/12,4 mm和8/12,4.5 mm和7.5/12 mm,5 mm和7/12,5.5 mm/和6.5/12,6 mm和6/12,7 mm和5/12,8 mm和4/12,9 mm和3/12组牙周膜面积(mm2)和抗折力均数(N)分别为178.95和232.90±25.93,159.64和195.58±12.46,141.18和173.92±13.51,123.27和154.00±11.74,106.14和132.25±14.29,89.67和96.86±6.20,73.90和59.14±7.28,58.82和52.52±5.82,44.44和45.90±7.40,30.76和58.60±6.63。牙槽骨失量(%)与牙周膜失量(%)呈线性关系、牙槽嵴吸收量与抗折力呈线性关系、牙周膜面积失量(%)与抗折力失量(%)呈线性关系、支点与抗折力失量(%)呈线性关系。结论牙槽骨吸收可引起牙周膜面积减小、力学支点下移和桩核-牙根联合体抗折力下降。     

血小板衍生生长因子-BB对人牙周膜细胞在牙根面上附着和生长的影响

目的:探讨血小板衍生生长因子-BB(PDGF-BB)对人牙周膜(PDL)细胞在离体牙根面上附着、增殖的影响.方法:应用细胞计数法和扫描电镜观察法,观察在细胞因子作用下,离体正常和牙周病患牙根面上PDL细胞附着和增殖的情况.结果:无论是否加入PDGF-BB,PDL细胞在正常牙根面(N组)上的附着数量均明显多于病变(P组)根面(P＜0.01);与对照(C组)相比,PDGF-BB(S组)既能促进PDL细胞在正常根面的附着(P＜0.01),也能促进PDL细胞在牙周病变根面上的附着(P＜0.05).不加PDGF-BB时,PDL细胞在NC上的增殖率为80.0%,PC只有50%;加入PDGF-BB后,NS增殖率为249.4%,PS的增殖率为213.09%,与对照(C)组相比,PDGF-BB既能明显促进PDL细胞在正常根面的增殖(P＜0.01),又能显著提高PDL细胞在病变牙根面上的增殖(P＜0.01);扫描电镜下病变牙根面上生长的PDL细胞数量较少,形态细长,细胞的突起伸展不够充分,边缘皱缩,与根面附着较松散,经PDGF-BB作用后,细胞与根面的附着状态有所改善,较为紧密,数量有所增加.结论:PDGF-BB是一种有效的促PDL细胞生长的因子,可促进PDL细胞在牙根面的附着和增殖.     

牙龈成纤维细胞与牙周韧带细胞在二种玻璃离子水门汀上附着及增？…

目的 比较人类牙龈成纤维细胞（ＨＧＦ）与牙周韧带细胞（ＰＤＬＣ）在两种玻璃离子水门汀（ＧＩＣ）上的附着及增殖情况。方法 利用体外细胞培养技术及＾３Ｈ－ＴｄＲ掺入法检测ＨＧＦ及ＰＤＬＣ在两种ＧＩＣ上的附着及ＤＮＡ合成。结果 ＨＧＦ与ＰＤＬＣ在培养板上的附着及ＤＮＡ合成差异无显著性（Ｐ〉０．０５）,但ＨＧＦ在ＧＩＣ上的附着及ＤＮＡ合成明显强于ＰＤＬＣ（Ｐ〈０．０５）。结论 Ｋｅｔａｃ Ｆｉｌ和Ｆｕｊｉ     

PDGF和EGF对牙周膜细胞增殖、纤维结合蛋白和碱性磷酸酶活性的影响

目的探讨血小板衍生生长因子-BB(PDGF-BB)和表皮生长因子(EGF)对人牙周膜(PDL)细胞增殖、纤维结合蛋白(Fn)和碱性磷酸酶(APLase)活性的影响。方法体外培养人PDL细胞,与不同浓度的PDGF-BB、EGF或PDGF-BB+EGF作用,用噻唑盐(MTT)法观察PDL细胞增殖的情况,ELISA法检测Fn水平,用酶动力学方法检测ALPase的活性。结果PDGF-BB明显促进PDL细胞增殖,在1～50ng/ml和5d范围内,呈浓度-时间依赖关系,最佳效应时间和浓度为3d和10ng/ml,比对照组增加了256.1%(P<0.001),但对PDL细胞Fn水平无明显影响(P>0.05),却显著抑制PDL细胞的ALPase活性(P<0.01)。低浓度的EGF对PDL细胞的增殖没有影响(P>0.05),(10～50)ng/ml的EGF从第3天起,可促进PDL细胞的增殖,差异显著(P<0.05),但10ng/ml与50ng/ml之间无显著性差异(P>0.05),其最佳效应浓度为10ng/ml,最大效应在用药后4d,此时与对照组相比增加了124.1%,EGF可使PDL细胞Fn水平明显提高(P<0.01),但抑制ALPase的活性(P<0.001)。PDGF-BB和EGF二者联合应用,在促进增殖、提高Fn的水平和抑制ALPase活性方面均具有协同效应。结论PDGF-BB、EGF均可促进人PDL细胞的增殖、抑制PDL细胞的ALPase活性,但PDGF-BB对其Fn水平没有明显影响,而EGF可使其Fn水平明显提高,二者联合具有协同效应。     

氧化苦参碱对牙龈卟啉菌内毒素作用下人牙周膜细胞碱性磷酸酶活性的影响

目的 研究氧化苦参碱对牙龈卟啉菌内毒素(Pg-LPS)作用下人牙周膜细胞(PDLC)碱性磷酸酶(ALP)的活性及其表达的影响. 方法 采用细胞培养技术分离PDLC,对照组为仅含1％胎牛血清的细胞培养液,实验组分别加入不同浓度的氧化苦参碱溶液和Pg-LPS.采用细胞培养技术和酶联免疫、实时荧光定量RT-PCR技术,观察Pg-LPS对PDLC的ALP活性及其表达的影响. 结果 在25 μg/mL的Pg-LPS作用下,PDLC的ALP活性及其表达明显减低,加入一定浓度的氧化苦参碱溶液后,PDLC的ALP活性及其表达有一定程度恢复. 结论 氧化苦参碱可以减轻Pg-LPS对PDLC的破坏,对Pg-LPS抑制PDLC的ALP活性及其表达的现象具有拮抗作用.     

p38 丝裂原活化蛋白激酶在炎症微环境作用下对牙周膜干细胞成骨分化的影响

目的 探讨p38丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)在慢性牙周炎组织来源的牙周膜干细胞中的表达及其对炎症微环境作用下牙周膜干细胞成骨分化能力的影响。方法 2012年10月至2013年5月收集中国人民解放军总医院口腔科因治疗需要拔除的无龋前磨牙及慢性牙周炎牙齿,培养正常及炎症微环境下的牙周膜干细胞(H-PDLSCs,P-PDLSCs)。采用酶联免疫吸附试验及实时定量PCR检测肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-1β的分泌及基因表达量,免疫荧光检测p38在细胞内的表达,Western blot法检测两种细胞成骨诱导7 d后p38及磷酸化p38(p-p38)的表达。使用p38 MAPK特异性抑制剂SB-203580干扰后体外成骨诱导7 d,实时定量PCR检测细胞成骨关键基因Runx2和碱性磷酸酶(ALP)的基因表达水平,成骨诱导21 d后茜素红染色检测PDLSCs的矿化结节形成情况。结果 P-PDLSCs的TNF-α和IL-1β分泌量均显著高于 H-PDLSCs(68.80±6.70比34.10±3.07,P=0.001;57.10±4.23比26.90±2.58,P=0.000)。P-PDLSCs中TNF-α的基因表达水平较H-PDLSCs上升1.4倍(P=0.011),IL-1β的基因表达水平也上升1.7倍(P=0.009)。P-PDLSCs的p38表达量高于H-PDLSCs;成骨诱导后两种PDLSCs 中的p-p38表达均升高,但p38表达水平有所降低。SB-203580干扰后PDLSCs 的Runx2和ALP表达水平显著降低(H-PDLSCs:P=0.044、0.036;P-PDLSCs:P=0.017、0.004),矿化结节形成数量减少。结论 在慢性炎症微环境中,p38 MAPK参与细胞的炎性反应,抑制p38后炎症微环境作用下PDLSCs的成骨分化能力也被显著抑制。     

后纵韧带骨化症的MRI初探

目的：探讨后纵韧带骨化症（ＯＰＬＬ）的磁共振成像（ＭＲＩ）信号特点及与病理的相关性。方法：４０例ＯＰＬＬ患者采用ＳＥ序列Ｔ１ＷＩ及快速小角度Ｔ２ＷＩ矢状面扫描，并于Ｔ２ＷＩ观察脊髓内信号强度的变化；９例行ＣＴ扫描。结果：骨化灶一般为无信号、信号不均。连续型９例，分节型９例，局限型１４例，混合型８例。骨化灶信号强度与病理的关系：高信号区为小骨髓腔，等信号区为新生小血管，低信号区为增生的纤维软骨，无信号区为骨细胞。Ｔ２ＷＩ脊髓内高信号９例。结论：ＭＲＩ不仅能显示骨化，还能了解骨化灶的组成成份，并能无损伤地观察脊髓受压的情况。对脊髓本身的变化可以得出病理水平的诊断。     

带牙周夹板弹性义齿修复中老年后牙牙列缺损

目的 :观察带牙周夹板弹性义齿 (FDPS)修复中老年患者后牙牙列缺损的疗效 ,为探索可摘局部义齿修复及牙周治疗的新方法提供临床依据。方法 :采用FDPS和传统可摘局部义齿 (TRPD)分别为 2组中老年后牙牙列缺损患者修复缺损牙列 ,随诊 0 5～ 2年。检查两类义齿的使用情况和患者邻缺隙区余留牙松动度的变化。结果 :共制作义齿 10 3件 ,其中FDPS 4 7件 ,TRPD 5 6件。FDPS修复组 (实验组 )的义齿合格率为89 36 % ,明显高于TRPD修复组 (对照组 )的 6 9 6 4 % ,P <0 0 2 5。邻缺隙区余留牙松动度变化情况 :实验组患者邻缺隙区余留牙松动度有显著改善 ,其治疗总有效率为 85 11% ,而对照组治疗总有效率仅为 6 7 86 % ,两组疗效比较有显著性差异 (P <0 0 5 )。结论 :FDPS具有功能恢复和牙周治疗作用 ,在中老年牙列缺损修复中有较好的运用前景 ,是一种较理想的修复体。     

间歇性张应力对牙周膜成纤维细胞蛋白合成功能的影响

目的:利用四点弯曲细胞力学加载仪对人牙周膜成纤维细胞(humanPeriodontalFibroblastCells,hP DLFs)施加间歇性机械张力,观察细胞内蛋白合成总量的变化,为深入研究机械力介导的牙周组织改建过程奠定一 定的实验基础。方法:体外培养hPDLFs。取第4～7代细胞,分别设计3个加力组,各时间点均增多设计对照组,经 过2,4,6h后收集细胞。考马斯亮蓝微板法测定细胞内蛋白总量。结果:各加力组细胞蛋白合成均增加,增幅与 力值呈相反关系(P<0.01),达峰值后迅速回落。结论:蛋白合成对机械力变化有一较宽的适应范围,提示除细胞 周期影响外,可能还有多种机制参与调控细胞内蛋白合成,同时也反应了蛋白定量只是反应细胞功能的粗略指标。     

PDGF—BB和bFGF对牙周膜细胞增殖的影响

目的：探讨血小板衍生生长因子-BB（PDGF—BB）和碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）对人牙周膜（PDL）细胞增殖的影响。方法：体外培养人PDL细胞与不同浓度的PDGF—BB，bFGF或PDGF—BB＋bFGF作用。用四唑盐（MTT）法观察PDL细胞增殖的情况。结果：PDGF—BB明显促进PDL细胞增殖，第3天最大显效浓度为10ng／ml，比对照组增加34％（P〈0．001），最小显效浓度为1ng／ml，比对照组增加25％（P〈0．001）。PDGF—BB在1d～9d，0．1ng／ml～10ng／ml范围内呈浓度时间依赖关系，峰值位于第9天，10ng／ml处，比对照组增加20％（P〈0．001）。bFGF也能明显促进PDL细胞增殖，第3天最大显效浓度为50ng／ml，比对照组增加71％（P〈0．001），最小显效浓度为1ng／ml，比对照组增加23％（P〈0．001）。bFGF在1d～6d，1ng／ml～50ng／ml范围内呈浓度时间依赖关系，峰值位于第6天，50ng／ml处，比对照组增加79％（P〈0．001）。PDGF—BB与bFGF最大与最小显效浓度联合作用均在1d～9d内呈浓度时间依赖关系，峰值位于第9天，最大显效浓度联合作用比对照组增加46％（P〈0．001），最小显效浓度联合作用比对照组增加17％（P〈0．001）。结论：PDGF-BB和bFGF均可促进人PDL细胞增殖，在一定范围内呈浓度时间依赖关系，二者联合对PDL细胞增殖具有协同效应。