姜黄素对人鼻咽癌CNE-2Z细胞增殖及 凋亡的影响

 目的探讨姜黄素对人鼻咽癌CNE-2Z细胞增殖及凋亡的影响及其相关的分子机制。方法体外培养的 CNE-2Z细胞经不同剂量姜黄素处理后,用MTT法观察对细胞增殖的影响,流式细胞术检测细胞周期和凋亡 率的改变,Western blot检测姜黄素处理后相关蛋白Bcl-2、Bax表达水平的变化。结果姜黄素对CNE-2Z细 胞的生长和增殖都具有一定程度的抑制作用,阻断细胞于S期和G2/M期。姜黄素处理后CNE-2Z细胞凋亡抑 制基因Bcl-2蛋白表达减少,同时促凋亡基因Bax蛋白表达增加。 结论姜黄素可抑制CNE-2Z细胞增殖并促进 其凋亡。     

土槿乙酸诱导人胃癌AGS细胞凋亡机制的研究

目的:研究土槿乙酸诱导人胃癌AGS细胞凋亡的作用机制.方法:采用Hoechst33342/PI核荧光双染色法, DNA片段化分析技术检测细胞凋亡的变化;FCM分析细胞周期的变化; Western 印迹法和RT-PCR法检测与细胞凋亡和细胞周期相关的蛋白及mRNA的表达.结果:土槿乙酸明显诱导人胃癌AGS细胞的凋亡,细胞周期被阻滞在G2/M期;10 μmol/L土槿乙酸作用AGS细胞12 h后p53表达增加,在36 h时达到峰值,24 h后可见p21WAF1/CIP1表达明显增加.土槿乙酸作用于AGS细胞后,增加了Fas/APO-1蛋白表达和促凋亡蛋白Bax mRNA的表达,降低了抑凋亡蛋白Bcl-2 mRNA表达,提高了caspase-3活性. 结论:土槿乙酸可通过p53激活Bcl-2介导的线粒体途径和Fas/APO-1介导的死亡受体途径诱导人胃癌AGS细胞凋亡.     

姜黄素对人胃腺癌细胞株BGC-823生长抑制及诱导凋亡的作用

目的 探讨姜黄素对人胃腺癌细胞BGC-823的生长抑制及诱导凋亡作用。方法MTT法检测不同浓度姜黄素对人胃腺癌BGC-823细胞的生长抑制作用,计算半数抑制浓度（IC₅₀）;将1.2μmol／L姜黄素作用于BGC-823细胞24、48、72h,用DAPI染色检测细胞凋亡;用RT-PCR、Western blotting法分别检测姜黄素对Bax、Bcl-2基因以及Bax、Bcl-2、caspase-3蛋白的影响。结果 不同浓度的姜黄素作用于BGC-823细胞0～72h后,细胞呈不同程度的抑制作用,随着药物浓度的增加,抑制率明显上升,作用48h的IC₅₀为1.2μmol／L。DAPI染色可见典型的凋亡细胞形态学特征。RT-PCR、Western blotting结果显示1.2μmol/L姜黄素可以增加Bax表达、减少Bcl-2表达和激活caspase-3。结论 姜黄素对人胃腺癌BGC-823细胞有生长抑制和诱导凋亡的作用,这可能与增加Bax表达、减少Bcl-2表达、激活caspase-3有关。     

丹参酮诱导人肺癌细胞凋亡及其分子机理

目的 了解丹参酮对人肺癌细胞（SPC-A-1）的凋亡诱导作用，并探讨其可能的分子机理，方法 体外培养的SPC-A-1细胞经无毒剂量的丹参酮ⅡA（0.5mg/L)处理5天，光镜，电镜观察细胞凋亡情况，流式细胞仪检测凋亡指数及凋亡相关基因的蛋白表达，并以全反式维甲酸及顺铂作为对照。结果 SPC-A-1细胞经丹参酮ⅡA处理后，电镜观察可见多量凋亡细胞，流式细胞仪检测；丹参酮组凋亡指数显著高于顺铂组及对照组，而与维甲酸组比较无显著差异。丹参酮组促凋亡基因p53,Fas,Bax表达水平明显升高，而凋亡抑制基因Bcl-2的表达水平则显著降低。结论 丹参酮ⅡA具有诱导肺癌SPC-A-1细胞凋亡的作用。其分子机理可能是上调p53,Bax,Fas及下调Bcl-2的表达。     

PML-RARα表达对细胞凋亡诱导剂敏感性差异的分子机制研究

目的 研究PML-RARα表达阴性的HL-60细胞和表达阳性的NB4细胞对三氧化二砷(As2O3)诱导细胞凋亡敏感性差异的分子机制.方法 经As2O3作用人急性早幼粒细胞白血病HL-60和NB4细胞后,MTT法检测细胞增殖变化,流式细胞术测定细胞凋亡水平的变化,RT-PCR检测Bcl-2、Bax、Fas等基因在mRNA水平的表达变化.结果 As2O3可诱导NIM细胞出现明显的凋亡现象,细胞增殖受到明显抑制(P<0.05),Bcl-2基因表达明显下调(P<0.05),但Bax、Fas基因表达没有明显变化(P>0.05),Bcl-2/Bax比值明显降低(P<0.05).而对于PML-RARa表达阴性的HL-60细胞,经小剂量As2O3作用后,对细胞的增殖抑制作用不明显(P>0.05),未出现明显凋亡现象,Bcl-2、Bax、Fas或Bcl-2/Bax表达水平及比值变化不明显(P>0.05).结论 Bcl-2/Bax表达比值变化与否,可能是小剂量As2O3诱导PML-RARα表达阴性的HL-60细胞和表达阳性的NB4细胞发生凋亡差异的分子机制.     

碘对不同性别大鼠甲状腺细胞凋亡及相关蛋白表达的影响

目的观察短期碘摄入量异常对大鼠甲状腺滤泡上皮细胞凋亡及凋亡相关基因Bcl-2、Bax蛋白水平的表达及其在不同时间段不同性别中的表达差异。方法 90只Wistar大鼠随机分为低碘组、正常组和高碘组,雌雄各半,通过饮食饮水控制使各组碘摄入量分别为0.6μg/d、6.15μg/d和61.5μg/d。分别在饲养7、14和28 d后,处死动物并分离甲状腺。HE染色,光镜下进行形态学观察;免疫组化染色,MIAS-2000型图像分析系统观察分析甲状腺细胞凋亡相关基因Bcl-2、Bax蛋白水平的表达。结果各时间段各组大鼠甲状腺滤泡上皮细胞均未检出细胞凋亡。Bcl-2、Bax在低碘组和正常组均为阴性表达,在高碘组的表达高于正常组,且有随时间延长而有增强的趋势,其中,14 d时Bax表达出现阳性;28 d时Bcl-2、Bax表达均为阳性且高于正常组(P均<0.01)。7、14 d时,高碘组Bax在两性别中均有表达,表达水平在两性别中无统计学差别;28 d时,高碘组Bcl-2、Bax表达水平雄性均高于雌性,且差别均有统计学意义(P均<0.01)。结论短期碘缺乏和碘过量均不引起细胞凋亡,短期碘缺乏对凋亡相关基因无明显影响,短期碘过量既可促进促凋亡基因表达亦可促进抑凋亡基因表达。性别因素对甲状腺细胞凋亡相关基因的表达存在一定的影响。     

甲状腺癌组织中凋亡相关蛋白Fas,FasL,Bcl-2和Bax的表达及意义

目的 研究凋亡相关蛋白Fas,FasL,Bcl-2和Bax在甲状腺癌组织中的表达及意义.方法应用免疫组织化学,采用TUMEL法,检测34例甲状腺癌及10例结节性甲状腺肿、9例甲状腺腺瘤组织病理标本中的细胞凋亡指数(Apoptosis Index, AI);并用通用型二步法对凋亡相关蛋白Fas,FasL,Bcl-2和Bax的表达进行检测.结果 (1)对照组细胞平均AI(%)为12.39±2.21,甲状腺癌细胞平均AI(%)为20.17±2.68,即肿瘤组的细胞凋亡指数高于对照组,二者有显著性差异(t＝4.138＞t(0.05),P＜0.05).(2)甲状腺癌组织中Fas,FasL,Bcl-2和Bax蛋白表达显著高于对照组.(3)Fas,FasL,Bcl-2和Bax蛋白表达的阳性率与其病理类型、临床分期无明显关系(P＞0.05).结论甲状腺癌组织中有较高水平细胞凋亡,Fas,FasL,Bcl-2和Bax的表达均明显增强,并且通过参与调节细胞凋亡而与甲状腺癌的发生有关,但与病理类型、临床分期无明显关系.     

Fas、bcl-2和caspase8在去甲斑蝥素诱导食管癌细胞凋亡中的作用及机制

 目的 探讨去甲斑蝥素诱导人食管癌Eca-109细胞凋亡过程中Fas、bcl-2、caspase 8凋亡调节基因的 相互关系及可能的作用机制。 方法 流式细胞术分析去甲斑蝥素作用后细胞凋亡及增殖的变化,应用免疫细胞化学技术检测用药前 后凋亡相关基因Fas、bcl-2、caspase8表达的变化。 结果 去甲斑蝥素诱导的人食管癌Eca-109细胞发生形态改变。流式细胞仪分析结果发现,食管癌 Eca-109细胞在DNA组方图上出现典型的亚二倍体峰即凋亡峰,在细胞周期中的分布也发生了明 显的变化。免疫细胞化学结果显示,去甲斑蝥素作用后食管癌Eca-109细胞Fas、caspase8蛋白 表达明显升高(P<0.05),Bcl-2蛋白表达明显降低(P<0.05)。 结论 去甲斑蝥素能抑制食管癌Eca-109细胞增殖并诱导凋亡,其作用可能与上调Fas、caspase8蛋白 表达,下调Bcl-2蛋白表达有关。     

红毛五加多糖对胃癌细胞的诱导凋亡作用

目的：研究红毛五加多糖对胃癌的诱导凋亡作用及其作用机制。方法：采用流式细胞术检测凋亡细胞百分比及基因和细胞因子蛋白含量。结果：该多糖使癌基因bcl-2蛋白表达降低,而使抑癌基因p53、bax、Fas、Fas-L及细胞因子TGFβ1蛋白表达增高。结论：该多糖通过降低原癌基因蛋白表达,增高抑癌基因和细胞因子蛋白表达,从而诱导胃癌细胞SGC-7901凋亡。     

siRNA干扰MT1H基因对A549/DDP细胞耐药性的逆转

目的：探讨siRNA干扰金属硫蛋白1H（metallothionein 1H,MT1H）基因逆转A549/DDP细胞耐药的可行性。方法：采用RT-PCR方法检测MT1H基因在A549和其顺铂耐药株A549/DDP细胞中的表达;将针对MT1H的siRNA导入A549/DDP细胞;用RT-PCR和斑点印迹方法分析MT1H基因表达情况;MTT法观察细胞顺铂耐药性;TUNEL、流式细胞术检测顺铂诱导细胞凋亡率;免疫细胞化学分析凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax的表达。结果：MT1H在A549/DDP细胞中高表达但不在A549细胞中表达;A549/DDP细胞转染48 h后,与对照组比较,MT1HsiRNA转染组MT1H mRNA和蛋白表达均明显下调,细胞对DDP的药物敏感性明显提高,DDP诱导凋亡率明显增加,Bcl-2表达明显下降,Bax表达无变化。结论：MT1H基因沉默能降低Bcl-2表达,增强顺铂对A549/DDP细胞凋亡诱导作用,有效逆转A549/DDP细胞耐药。     

姜黄素对人结肠癌细胞PI3-K/Akt和MEK/ERK信号通路的影响

目的:探讨姜黄素对人结肠癌RKO细胞PI3-K/Akt和MEK/ERK通路的影响。方法:MTT法检测细胞活力,Western blot检测p-Akt、Akt、p-ERK,ERK及凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax的表达。结果:姜黄素作用人结肠癌RKO细胞,24h和48h的IC50值分别为51.69μg/ml和36.12μg/ml。选用50μg/ml的姜黄素分别作用24h和48h,RKO细胞凋亡百分比为26.79%和42.16%,与对照组相比有显著差异(P＜0.05)。进一步检测发现姜黄素（50μg/ml）显著下调了p-Akt 和p-ERK的表达,同时Bcl-2与Bax的比值显著下调。结论:姜黄素可能通过抑制PI3-K/Akt和MEK/ERK信号通路的活化、下调Bcl-2与Bax的比值,从而抑制RKO细胞增殖和诱导细胞凋亡。     

姜黄素对三阴性乳腺癌细胞系药物敏感性的影响及其相关机制探讨

目的:研究姜黄素对三阴性乳腺癌细胞系药物敏感性的影响及其相关机制。方法:姜黄素作用三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞24 h后,MTT法检测姜黄素药物毒性;应用Hoechst33342染色及FCM观察姜黄素联合表柔比星对细胞凋亡及细胞周期的影响,应用Transwell实验检测姜黄素对细胞侵袭能力的影响;应用 RT-PCR、Westen blot检测姜黄素对癌基因PTN和凋亡相关基因caspase-9表达的影响。结果:姜黄素能增强表柔比星对MDA-MB-231细胞的促凋亡作用及细胞周期阻滞;Transwell结果显示姜黄素可抑制MDA-MB-231细胞侵袭,这一作用可能是通过下调PTN的表达及促进凋亡相关基因caspase-9的激活,促进了细胞的凋亡。结论:姜黄素能够通过抑制癌基因PTN的表达及上调凋亡相关基因caspase-9活性,对三阴性乳腺癌细胞起到了药物增敏作用。     

姜黄素增强人乳头瘤状甲状腺癌细胞TPC-1放射敏感性的研究

目的 研究姜黄素对人乳头瘤状甲状腺癌细胞TCP-1放射敏感性的影响,并探索姜黄素可能作用的信号通路,为甲状腺癌放射增敏剂的开发提供新的思路。方法 使用姜黄素和放射性碘处理人乳头瘤状甲状腺癌细胞TPC-1,CCK-8法检测细胞增殖,克隆形成实验检测细胞克隆形成能力,流式细胞仪检测细胞凋亡情况,western blot检测p50、p65、凋亡相关蛋白Bcl-2和Bax的表达变化。使用NF-κB信号通路抑制剂PDTC抑制NF-κB信号通路活性,检测细胞增殖、克隆形成和凋亡变化。结果 姜黄素和放射性碘处理人乳头瘤状甲状腺癌细胞TPC-1后,细胞增殖率下降,克隆形成减少,凋亡上升,凋亡抑制蛋白Bcl-2表达下调,促凋亡蛋白Bax表达上调,并呈浓度依赖性。这些结果表明姜黄素可增加TPC-1细胞的放射敏感性。碘放射后TPC-1细胞NF-κB通路活化,姜黄素可以抑制碘放射后TPC-1细胞NF-κB通路的激活。使用抑制剂抑制NF-κB通路的活性,细胞增殖下降,克隆形成减少,凋亡上升,放射敏感性升高。结论 姜黄素可能靶向NF-κB信号通路,通过抑制NF-κB信号通路活性调节甲状腺癌细胞的放射敏感性。     

集缩素NCAPG表达对甲状腺癌细胞增殖和凋亡的影响及可能机制

目的:探讨集缩素NCAPG表达与甲状腺癌B-CPAP细胞增殖和凋亡的关系及可能的调控机制。方法:利用siRNA-NCAPG下调B-CPAP细胞NCAPG的表达，分别采用qRT-PCR、Western blot法检测转染组与对照组的NCAPG基因及蛋白表达量。CCK-8法检测各组细胞的增殖能力，观察NCAPG对细胞增殖的影响。为探讨NCAPG对B-CPAP细胞凋亡的影响，利用流式细胞术检测各组细胞Annexin V／PI双染情况，利用Western blot法检测各组细胞的凋亡相关蛋白Caspase-3、Bax和Bcl-2表达。结果:转染siRNA-NCAPG的B-CPAP细胞成功下调NCAPG的基因及蛋白表达。NCAPG表达下降抑制B-CPAP细胞的增殖。流式细胞术结果显示，下调NCAPG表达可诱导B-CPAP细胞凋亡。Western blot结果表明，下调NCAPG表达促进B-CPAP细胞Caspase-3和Bax的表达，抑制Bcl-2的表达。结论:甲状腺癌细胞B-CPAP中NCAPG促进细胞增殖，抑制其表达后可通过调节线粒体通路诱导细胞凋亡。     

姜黄素对子宫颈癌HeLa细胞增殖抑制作用及其机制的研究

目的:探讨姜黄素(Curcum in)对体外培养人子宫颈癌HeLa细胞抗癌作用及分子机制。方法:MTT法检测细胞增殖,流式细胞仪检测凋亡和细胞周期,PI/Hoechst33258荧光双染法检测细胞凋亡,W estern b lot法检测细胞凋亡相关蛋白Bc l-2和Bax蛋白的表达。结果:姜黄素对HeLa细胞生长有抑制作用,并呈剂量依赖性;流式细胞仪分析证实姜黄素能使HeLa细胞阻滞在S期,并出现亚二倍体凋亡峰;荧光双染法可见凋亡细胞;W estern b lot结果显示Bax蛋白表达均上调,而Bc l-2的表达无明显影响。结论:姜黄素对人子宫颈癌HeLa细胞的增殖具有显著的抑制作用并可诱导细胞凋亡;Bax蛋白的表达上调可能参与了诱导细胞凋亡。     

姜黄素对人甲状腺癌B-CPAP细胞生物学行为的影响

目的:探讨姜黄素对人甲状腺癌B-CPAP细胞生长、凋亡的影响及可能的作用机制。方法:采用含有不同浓度（10 μmol/L、20 μmol/L、40 μmol/L）姜黄素的培养基培养人甲状腺癌B-CPAP细胞12 h、24 h、36 h、48 h、72 h、96 h，应用MTT实验观察姜黄素对B-CPAP细胞生长的影响；采用含有不同浓度姜黄素的培养基培养人甲状腺癌B-CPAP细胞36 h、48 h、72 h、96 h，应用Annexin V/PI染色评价姜黄素诱导B-CPAP细胞凋亡的作用；应用蛋白印迹法检测姜黄素对ERK通路、Bax、Bcl-2表达的影响。结果:浓度为10 μmol/L、20 μmol/L、40 μmol/L的姜黄素培养甲状腺癌B-CPAP细胞，随着培养时间延长，各浓度下细胞生长抑制率、细胞凋亡率均逐渐增高（P＜0.05）；且随着浓度增加，相同时间点的细胞生长抑制率、细胞凋亡率亦逐渐增高（P＜0.05）。与空白组比较，姜黄素培养72 h后，B-CPAP细胞的H-Ras、p-Raf-B、p-ERK1/2、Bcl-2蛋白表达水平明显降低（P＜0.05），Bax蛋白表达水平水平明显升高（P＜0.05）。结论:姜黄素能够抑制人甲状腺癌B-CPAP细胞生长，诱导细胞凋亡，其机制可能与抑制H-Ras蛋白、ERK信号通路蛋白表达及上调Bax表达、下调Bcl-2表达有关。     

Expression of apoptosis-related proteins, p53, and DNA fragmentation in sarcomas of the pulmonary artery

BACKGROUND: Apoptosis is a common feature in a variety of pathologic conditions. Induction of apoptosis through apoptotic stimuli such as, chemotherapy or radiation, presents new insights into tumor biology and therapy. In particular, members of the Bcl-2 family as well as the Fas system are known to be involved in the regulation of apoptosis in different tumor entities. METHODS: In the current study, the expression of the apoptosis-related molecules p53, Bax, Bcl-2, Fas (CD95), Fas-Ligand and perforin was examined in 7 patients with a sarcoma of the pulmonary artery. Furthermore, the TUNEL-method for the detection of apoptotic cells was applied as well as sequencing of the p53 gene. RESULTS: In the TUNEL assay, approximately 10% of the sarcoma cells displayed DNA fragmentation. In addition, Bax was expressed in tumor cells. Accumulation of p53 was evident in 4 of 7 patients (pAB 240 antibody), and 2 of them were positive for the pAB 1801 antibody. Only 1 case had a point mutation in Exon 5 of the p53 sequence. A few tumor cells showed a double labeling of Bax and p53. Bcl-2 could be detected only in tumor-associated lymphocytes. Finally, several lymphocytes could be stained with perforin, but none of the specimens showed a reactivity for Fas or Fas-Ligand. CONCLUSION: The expression of Bax indicated a possible role of this molecule in programmed cell death in pulmonary sarcomas. The limited coexpression of Bax and p53 suggested that induction of Bax can occur independently of p53. The detection of perforin in lymphocytes suggested a possible role for this molecule in apoptosis of the sarcoma cells. In contrast, the Fas system did not seem to play an essential role in sarcomas of the great vessels.     

Curcumin confers radiosensitizing effect in prostate cancer cell line PC-3

Curcumin (Diferuloylmethane) is a major chemical component of turmeric (curcuma longa) and is used as a spice to give a specific flavor and yellow color in Asian food. Curcumin exhibits growth inhibitory effects in a broad range of tumors as well as in TPA-induced skin tumors in mice. This study was undertaken to investigate the radiosensitizing effects of curcumin in p53 mutant prostate cancer cell line PC-3. Compared to cells that were irradiated alone (SF(2)=0.635; D(0)=231 cGy), curcumin at 2 and 4 microM concentrations in combination with radiation showed significant enhancement to radiation-induced clonogenic inhibition (SF(2)=0.224: D(0)=97 cGy and SF(2)=0.080: D(0)=38 cGy) and apoptosis. It has been reported that curcumin inhibits TNF-alpha-induced NFkappaB activity that is essential for Bcl-2 protein induction. In PC-3 cells, radiation upregulated TNF-alpha protein leading to an increase in NFkappaB activity resulting in the induction of Bcl-2 protein. However, curcumin in combination with radiation treated showed inhibition of TNF-alpha-mediated NFkappaB activity resulting in bcl-2 protein downregulation. Bax protein levels remained constant in these cells after radiation or curcumin plus radiation treatments. However, the downregulation of Bcl-2 and no changes in Bax protein levels in curcumin plus radiation-treated PC-3 cells, together, altered the Bcl2 : Bax ratio and this caused the enhanced radiosensitization effect. In addition, significant activation of cytochrome c and caspase-9 and -3 were observed in curcumin plus radiation treatments. Together, these mechanisms strongly suggest that the natural compound curcumin is a potent radiosesitizer, and it acts by overcoming the effects of radiation-induced prosurvival gene expression in prostate cancer.