Induction of apoptosis in glioblastoma cell line U251 of Cinobufacini

目的 研究观察华蟾素(Cinobufacini)对体外培养人胶质瘤细胞U251增殖抑制作用,并初步探讨其诱导U251细胞凋亡的分子机制.方法 平皿克隆形成法测定不同浓度华蟾素对U251细胞锚定依赖性生长能力的影响;使用Wester Blot法观察不同浓度华蟾素处理人胶质瘤细胞48小时后,Bcl-2、Bax蛋白表达变化情况.结果 平皿克隆法显示:华蟾素抑制人胶质瘤细胞U251生长,呈剂量依赖性;Wester Blot显示随着药物浓度升高,华蟾素可以逐渐抑制Bcl-2的蛋白表达,活Bax蛋白表达.结论 华蟾素有诱导人胶质瘤细胞U251细胞凋亡的作用,其机制可能Bcl-2/Bax比值的下调,促进细胞凋亡有关.     

华蟾素诱导人胶质瘤细胞U251凋亡的作用机制研究

目的研究观察华蟾素(Cinobufacini)对体外培养人胶质瘤细胞U251增殖抑制作用,并初步探讨其诱导U251细胞凋亡的分子机制。方法平皿克隆形成法测定不同浓度华蟾素对U251细胞锚定依赖性生长能力的影响;使用Wester Blot法观察不同浓度华蟾素处理人胶质瘤细胞48小时后,Bcl-2、Bax蛋白表达变化情况。结果平皿克隆法显示:华蟾素抑制人胶质瘤细胞U251生长,呈剂量依赖性;Wester Blot显示随着药物浓度升高,华蟾素可以逐渐抑制Bcl-2的蛋白表达,活Bax蛋白表达。结论华蟾素有诱导人胶质瘤细胞U251细胞凋亡的作用,其机制可能Bcl-2/Bax比值的下调,促进细胞凋亡有关。     

蝙蝠葛碱对恶性胶质瘤U87细胞的抑制及分子机制研究

目的 探讨蝙蝠葛碱对恶性胶质瘤细胞增殖和凋亡的影响及机制。方法 以人恶性胶质瘤细胞株U87为研究对象,采用MTT法检测不同浓度蝙蝠葛碱在48h内对U87细胞增殖的作用;平板克隆形成实验检测蝙蝠葛碱对U87细胞克隆形成能力的影响;Hoechst染色法检测不同浓度蝙蝠葛碱对U87细胞凋亡的作用;Western blot检测蝙蝠葛碱对凋亡相关蛋白p53、Bax、Bcl-2、Caspase-3和PARP表达的影响。结果 与对照组相比,蝙蝠葛碱可以浓度依赖性地抑制U87细胞增殖,促进细胞凋亡;增加p53、Bax、Caspase-3和PARP蛋白并下调Bcl-2蛋白表达。结论 蝙蝠葛碱对神经胶质瘤的增殖抑制作用可能是通过调控凋亡相关蛋白实现。     

冬凌草甲素通过抑制Akt通路诱导人雄激素非依赖性前列腺癌细胞DU145细胞凋亡

目的:观察冬凌草甲素对人雄激素非依赖性前列腺癌细胞DU145细胞增殖、凋亡的影响,并分析可能的作用机制。方法:体外培养的DU145细胞,用不同浓度冬凌草甲素(浓度0、10、20、40、80、100μmol/L)处理24、48、72 h,MTT法测定其对DU145细胞增殖的影响;冬凌草甲素(浓度分别为0、20、40、80μmol/L)处理DU145细胞48 h后,采用流式细胞仪检测细胞凋亡,Western blot法检测Akt、p-Akt、p-GSK-3β、Bax及Bcl-2蛋白的表达情况。结果:冬凌草甲素对DU145细胞的增殖具有抑制作用,且呈剂量、时间依赖性;DU145细胞经冬凌草甲素作用48 h后,细胞凋亡率显著增加;Bax表达上调,而Bcl-2表达下调;p-Akt及其下游蛋白p-GSK-3β的表达降低。结论:冬凌草甲素可通过抑制DU145细胞增殖并促进其凋亡,其作用机制可能与抑制Akt信号通路激活,继而上调Bax并下调Bcl-2有关。     

白桦脂酸对脑胶质瘤U251细胞增殖、凋亡的影响

目的 观察白桦脂酸(BA)对人脑胶质瘤U251细胞增殖、凋亡的影响,探讨其可能的作用机制。方法 对数期稳定生长的U251细胞中分别加入不同浓度(0、2.5、5、10、 20、40、80 μg/mL)的BA进行培养。CCK-8法、Annexin V-FITC/PI 双染色法检测培养24、48、72 h 时细胞的增殖、凋亡情况,Western blotting检测凋亡相关蛋白Bcl-2 、Bax及信号通路蛋白Akt及磷酸化Akt(p-Akt)表达变化情况。结果 在0～80 μg/mL范围内,BA可抑制U251细胞增殖并促进细胞凋亡(P＜0.05),且呈浓度及时间依赖性,随着BA浓度的增加、培养时间的延长,U251细胞的Akt表达水平无明显变化(P＞0.05),P-Akt、Bcl-2表达水平逐渐降低(P均＜0.05),Bax 表达水平逐渐升高(P＜0.05)。结论 BA可抑制脑胶质瘤U251细胞增殖并诱导其凋亡,这可能与其参与调控磷脂酰肌醇-3激酶/蛋白激酶(PI3K/Akt)信号通路有关。     

川芎嗪通过Akt信号通路影响前列腺癌PC3细胞的增殖和凋亡

目的 研究盐酸川芎嗪对前列腺癌PC3细胞增殖和凋亡的影响及作用机制.方法 0、0.2、0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0、3.5 mg/mL盐酸川芎嗪处理雄激素非依赖性前列腺癌PC3细胞,MTT法检测各组细胞的增殖能力,荧光显微镜观察细胞核形态学改变,Western blot检测Akt以及下游相关蛋白mTOR、p70S6蛋白及蛋白磷酸化的表达,以及凋亡相关蛋白Bcl-2和Bax的表达.结果 盐酸川芎嗪能有效抑制前列腺癌PC3细胞增殖,且显示浓度时间依赖性(P＜0.05).1.5、2.5 mg/mL的盐酸川芎嗪能够降低Akt和p-Akt的表达,进而下调mTOR、p-mTOR、p70S6及p-p70S6的表达(P＜0.05);同时下调Bcl-2、上调Bax蛋白的表达(P＜0.05).结论 Akt及其下游信号通路介导了盐酸川芎嗪抑制前列腺癌PC3细胞增殖及促凋亡作用.     

瑞芬太尼对胰腺癌BxPC-3细胞增殖、凋亡的影响及其机制

目的观察瑞芬太尼对胰腺癌BxPC-3细胞增殖、凋亡的影响并探讨其作用机制。方法在体外培养BxPC-3细胞,用不同浓度瑞芬太尼(终浓度0、0.5、1、2、4、8 mg/mL)分别处理24、48、72 h,采用CCK-8比色法检测药物处理后细胞活力;瑞芬太尼(0、1、2、4 mg/mL)处理BxPC-3细胞48 h后,采用PI/Annexin V双染法检测细胞凋亡率;采用Western blot法检测药物对细胞Bax、Bcl-2、t-Akt、p-Akt及p-GSK-3β蛋白表达的影响;采用端粒酶重复序列扩增法检测端粒酶活性。结果 CCK-8比色法结果显示,瑞芬太尼处理后可抑制BxPC-3细胞的增殖,且呈剂量、时间依赖性;瑞芬太尼处理后,PI/Annexin V双染后流式细胞仪检测结果显示,随着药物浓度的增加,BxPC-3细胞凋亡率也逐渐增加(P0.05);Western blot结果显示,随着药物浓度的增加,抗凋亡蛋白Bcl-2表达量逐渐降低,且促凋亡蛋白Bax的表达量逐渐增高,BxPC-3细胞Akt总量未发生变化,而p-Akt及其下游蛋白p-GSK-3β的表达逐渐降低(P0.05);端粒酶重复序列扩增法检测结果显示,随着瑞芬太尼浓度的增加,BxPC-3细胞端粒酶活性降低(P0.05)。结论瑞芬太尼在体外能抑制胰腺癌BxPC-3细胞增殖并促进其凋亡,其作用机制可能与抑制Akt通路,上调Bax表达量,降低Bcl-2表达量,进而减弱端粒酶活性有关。     

百里醌诱导膀胱癌细胞凋亡作用机制的研究

目的 探讨百里醌对人膀胱癌细胞株BIU-87细胞凋亡的影响及对其诱导凋亡的潜在作用机制。方法 应用CCK8法检测细胞增殖活性, Hoechst33258染色法检测细胞凋亡, 荧光定量PCR检测基因Bcl-2、Bax、caspase-3、c-myc mRNA的表达水平, Wsetern blot法检测不同浓度百里醌作用后Bcl-2、Bax、c-myc蛋白表达水平的变化。结果 细胞增殖抑制曲线结果显示百里醌能明显抑制BIU-87细胞增殖, 其24、48、72h半数抑制浓度(IC₅₀)分别是38.75±0.58、34.33±1.01和32.43±0.71μmol/ L。百里醌能以剂量依赖性方式诱导膀胱癌细胞凋亡。百里醌作用于BIU-87细胞后, Bcl-2、c-myc mRNA及Bcl-2、c-myc蛋白的表达量呈浓度依赖性降低, 而caspase-3、Bax mRNA及caspase-3、Bax蛋白表达水平呈浓度依赖性递增。结论 百里醌能抑制BIU-87细胞的增殖, 且能诱导BIU-87细胞的凋亡, 其诱导凋亡机制可能与Bcl-2、c-myc表达水平降低及caspase-3、Bax表达水平上调有关。     

二烯丙基二硫诱导人鼻咽癌CNEl细胞凋亡

目的探讨二烯丙基二硫（DADS）诱导人鼻咽癌CNEl细胞凋亡的生物学效应。方法通过MTF法检测DADS对CNEl细胞生长的影响;用光学显微镜、流式细胞仪研究DADS诱导细胞凋亡的作用。免疫组织化学法检测细胞内Bcl-2、Bax蛋白的表达,Westem blot法检测细胞内Caspase-3蛋白的表达。结果DADS能抑制CNEl细胞的生长。DADS处理CNEl细胞后,细胞呈凋亡特征性改变。流式细胞分析显示DADS呈浓度依赖性诱导CNEl细胞凋亡。免疫组织化学结果表明DADS处理细胞后,Bax蛋白表达升高,Bcl-2蛋白表达下降。随药物浓度的增加Caspase-3蛋白表达增强。结论DADS具有诱导CNEl细胞凋亡的作用,其机制可能与Bcl-2／Bax下降,促进Casoase-3活化有关。     

华蟾酥毒基对神经胶质瘤细胞增殖、迁移侵袭及凋亡的影响

目的 探讨华蟾酥毒基对人神经胶质瘤增殖、迁移侵袭及凋亡的影响及机制。方法 以人胶质母细胞瘤U251作为主要研究对象,在不同浓度(0、0.25、0.5、1、2.5、5μmol/L)华蟾酥毒基作用24h后,采用MTT法检测其增殖能力;利用细胞克隆形成实验检测华蟾酥毒基对U251克隆形成能力的影响;通过伤口愈合实验和Transwell实验检测华蟾酥毒基对U251迁移和侵袭能力的影响;运用Western blot技术检测经华蟾酥毒基处理的U251细胞中Bax、Bcl-2蛋白表达水平的变化。结果 华蟾酥毒基呈剂量依赖性抑制U251的增殖、迁移和侵袭;U251细胞中抗凋亡相关蛋白Bcl-2呈剂量依赖性下调趋势,促凋亡蛋白Bax表达呈剂量依赖性增高趋势。结论 华蟾酥毒基能够明显抑制U251细胞的增殖、克隆形成及迁移侵袭能力,并通过调控Bax、Bcl-2蛋白的表达促进神经胶质瘤细胞的凋亡。     

山核桃叶总黄酮诱导人多发性骨髓瘤U266细胞株凋亡作用研究

目的研究山核桃叶总黄酮诱导人多发性骨髓瘤（U266）细胞株凋亡的作用及其作用机制。方法体外培养U266细胞,CCK-8比色法检测细胞增殖活性,流式细胞术定量分析细胞凋亡程度,Western Blot分析不同浓度总黄酮对U266细胞蛋白激酶B（Akt）和p-Akt蛋白表达的影响。结果山核桃叶总黄酮以浓度依赖性方式显著诱导U266细胞株凋亡并抑制p-Akt蛋白的表达。结论山核桃叶总黄酮诱导U266细胞凋亡的作用与其抑制Akt磷酸化相关。     

PI-103对人卵巢癌细胞株SKOV3／DDP顺铂化疗效果的影响

目的：探讨磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）双抑制剂PI-103对卵巢癌耐顺铂株SKOV3/DDP顺铂化疗效果的影响。方法：将PI-103、顺铂及两者联合分别作用于SKOV3/DDP细胞,采用CCK-8法检测细胞生长情况,流式细胞技术检测药物单独或联合作用对细胞凋亡的影响;应用Western blot检测蛋白激酶B（Akt）、磷酸化Akt（p-Akt）、核糖体蛋白（rpS6）、磷酸化rpS6（p-rpS6）以及凋亡相关蛋白Bcl-2与Bax蛋白表达变化。结果：PI-103能够抑制SKOV3/DDP细胞增殖,且呈浓度、时间依赖性;联合用药可以明显增加对细胞生长抑制和凋亡作用。 PI-103能下调Akt和rpS6的磷酸化水平,促DDP上调Bax和下调Bcl-2的表达。结论：PI-103抑制PI3 K/Akt/mTOR信号传导通路,促DDP上调促凋亡蛋白及下调抗凋亡蛋白的表达,从而抑制癌细胞生长,诱导其凋亡,增加卵巢癌耐顺铂株SKOV3/DDP细胞对DDP的化疗效果。     

甲磺酸阿帕替尼对结肠癌HCT-116细胞增殖的抑制作用及其机制

目的 检测阿帕替尼对结肠癌HCT-116细胞的抑制作用,探讨其可能的作用机制及其影响的信号通路.方法 MTT方法检测不同浓度(0、0.5、1、1.5、2 μmol/L)的阿帕替尼对结肠癌HCT-116细胞的毒性作用,并设置卡培他滨阳性对照组;Annexin V-FITC/PI双染法检测上述不同浓度的阿帕替尼处理后结肠癌HCT-116细胞的凋亡情况,实时荧光定量PCR及Western Blotting技术检测其对凋亡相关基因及蛋白Bcl-2,Bax,Caspase-3的影响,Western blotting技术检测其对Akt、p-Akt、Erk 1/2和p-Erk1/2蛋白表达的影响.结果 MTT细胞毒性检测结果表明,阿帕替尼在体外能有效抑制HCT-116细胞的增殖,IC50为1.335 μmol/L.Annexin-V/PI双染法细胞凋亡检测结果表明,阿帕替尼能显著的诱导HCT-116细胞凋亡,并且呈浓度依赖性实时荧光定量PCR和Western blotting结果表明,阿帕替尼可以诱导促凋亡基因 Bax和Caspase-3的表达,并抑制抗凋亡基因Bcl-2的表达.Western blotting检测信号通路蛋白的结果表明,在阿帕替尼处理后p-Akt 和p-Erkl/2的表达显著降低,而Akt和Erk总蛋白水平没有变化.结论 阿帕替尼可通过抑制MAPK/Erk、PI3K/Akt信号转导通路来实现诱导细胞凋亡,从而达到抑制HCT-116细胞增殖的目的.     

氧化苦参碱诱导人肝癌HepG2细胞凋亡的可能机制

目的:观察氧化苦参碱(OM)对人肝癌HepG2细胞凋亡的影响,探讨其可能的作用机制.方法:用不同浓度的OM处理HepG-2细胞,MTT法检测OM对HepG2细胞生长增殖的抑制作用;应用Hochest荧光染色法观察OM处理后细胞形态的变化;流式细胞术(FCM)检测细胞凋亡率;免疫印迹法检测OM处理后细胞凋亡相关蛋白磷酸化Akt、caspase-3、Bax、Bcl-2和Bcl-XL.的表达.结果:OM抑制HepG2细胞的增殖并呈一定的量效和时效关系;HepG2细胞与OM作用后出现典型的凋亡细胞形态改变,细胞凋亡率增高;OM处理HepG2细胞后,磷酸化Akt蛋白表达下降,caspase-3可被蛋白酶水解形成相对分子质量17 000活性片段,Bax蛋白表达增强,Bcl-2和Bcl-xL蛋白表达下调.结论:OM可诱导HepG2细胞凋亡,可能与其调节P13K/Akt信号通路,抑制Bcl-2和Bcl-xL的活性,激活caspase-3有关.     

亲细胞非均质分子脂质抑制人脑胶质瘤U87细胞株增殖的实验研究

目的研究亲细胞非均质分子脂质（cytotropic heterogeneous molecular lipid,CHML）对人脑胶质瘤U87细胞增殖的影响及其可能的作用机制。方法不同浓度CHML不同作用时间处理U87细胞后,采用MTT比色法检测细胞活力,流式细胞术检测细胞周期和凋亡,Western印迹法检测细胞周期相关蛋白和凋亡相关蛋白的表达。结果 CHML作用于U87细胞后,细胞生长受到明显抑制。流式细胞术检测显示,CHML使G0/G1期细胞比例升高,S期和G2/M期细胞比例降低。Annexin V-PI法发现,用药24 h后,U87细胞凋亡比例随着CHM L的浓度升高而上升。Western印迹法检测显示,CHML引起U87细胞的周期相关蛋白Cyclin D1和CDK6表达降低,p21表达升高,凋亡相关蛋白Bax和Caspase 3表达增高,Bcl-2表达下降。结论 CHML可能通过诱导细胞凋亡和G1期细胞周期阻滞抑制U87细胞的增殖。     

原花青素B2保护血管内皮细胞延缓凋亡及机制研究

目的 以H2O2诱导人内皮细胞凋亡为模型,观察原花青素B2 (GSPB2)延缓人内皮细胞凋亡的保护作用及其机制.方法 用0.5 mmol H2O2预处理细胞,分别加入不同浓度的GSPB2(5.0、10.0、20.0 μmol/L)保护细胞,TUNEL法检测细胞凋亡;Western blotting检测凋亡相关分子Caspase-3、Bax、Bcl-2以及影响凋亡的相关分子PI3K、p-Akt、Akt的蛋白表达;Transwell小室检测各组细胞迁移情况.结果 0.5 mmol H2O2致人内皮细胞凋亡明显增加(P＜0.01),GSPB2能明显减轻H2O2所致的人内皮细胞凋亡(P＜0.05),10 μmol/mL的GSPB2就能接近恢复到H2O2未处理的对照组水平.进一步研究发现:Caspase-3、bax蛋白表达上调,Bcl-2表达下调;PI3K、p-Akt、Akt表达上调.结论 不同浓度的GSPB2对H2O2诱导的血管内皮细胞具有保护作用,而且表现为浓度依赖性和时间依赖性,其机制与相关分子PI3K、p-Akt、Akt有关.     

柚皮素- 铜络合物对Hep- G2细胞增殖与凋亡的影响

目的观察柚皮素-铜络合物在体外对人肝癌Hep-G2细胞增殖与凋亡的影响,探究其作用机制。方法将不同浓度柚皮素-铜络合物作用于体外培养的Hep-G2细胞,采用甲基噻唑基四唑法检测细胞生长抑制率;荧光显微镜下观察柚皮素-铜络合物对DAPI染色的Hep-G2细胞凋亡的影响;应用流式细胞仪检测凋亡率;Western blot法检测细胞中Bcl-2、Bax和Caspase-3蛋白表达的变化。结果柚皮素-铜络合物可显著地抑制Hep-G2细胞增殖,且在一定的范围内呈浓度依赖性。荧光显微镜下观察显示,柚皮素-铜络合物作用的Hep-G2细胞出现显著的凋亡特征,呈剂量依赖性地增加细胞凋亡率。柚皮素-铜络合物可上调Hep-G2细胞中Bax、Caspase-3蛋白的表达,抑制Bcl-2蛋白的表达,且呈一定的剂量依赖性。结论柚皮素-铜络合物可抑制Hep-G2细胞的增殖并诱导其凋亡,其作用机制可能与上调Bax、Caspase-3蛋白的表达,抑制Bcl-2蛋白的表达有关。     

大蒜提取物二烯丙基化三硫对人膀胱癌T24细胞凋亡的影响

目的:研究大蒜提取物二烯丙基化三硫(diallyl trisulfide,DATS)在体外对T24细胞凋亡的诱导作用,并探讨其诱导凋亡的分子机制.方珐:应用荧光染色形态学观察DATS作用后T24细胞凋亡形态学改变.并应用流式细胞仪检测细胞凋亡率的变化.采用蛋白质印迹法检测不同浓度DATS作用后T24细胞中caspase-3、PARP蛋白的表达,并进一步研究其分子机理.结果:DATS可明显诱导T24细胞细胞凋亡并呈显著剂量依赖性.DATS作用于T24细胞后,procaspase-3表达减少,同时出现PARP的裂解片段,并呈显著的剂量依赖性.DAlS作用于T24细胞后,p-PDK1,p-Ser 473-Akt的表达逐渐降低,呈剂量依赖性,但t-Akt的表达不受影响.DATS作用于T24细胞后,Bax表达逐渐增高,Bcl-2的表达逐渐降低,呈显著的剂量依赖性.结论:DATS能诱导T24细胞凋亡,凋亡的诱导作用呈显著剂量依赖性.DATS诱导产生凋亡的机理可能通过抑制124细胞PI3K/Akt信号通路的激活从而调节Bcl-2家族蛋白,并最终诱导凋亡发生.     

二烯丙基二硫诱导人鼻咽癌CNE1细胞凋亡

目的 探讨二烯丙基二硫(DADS)诱导人鼻咽癌CNEl细胞凋亡的生物学效应.方法 通过MTT法检测DADS对CNE1细胞生长的影响;用光学显微镜、流式细胞仪研究DADS诱导细胞凋亡的作用.免疫组织化学法检测细胞内Bcl-2、Bax蛋白的表达,Western blot法检测细胞内Caspase-3蛋白的表达.结果 DADS能抑制CNE1细胞的生长.DADS处理CNE1细胞后,细胞呈凋亡特征性改变.流式细胞分析显示DADS呈浓度依赖性诱导CNE1细胞凋亡.免疫组织化学结果表明DADS处理细胞后,Bax蛋白表达升高,Bcl-2蛋白表达下降.随药物浓度的增加Caspase-3蛋白表达增强.结论 DADS具有诱导CNE1细胞凋亡的作用,其机制可能与Bcl-2/Bax下降,促进Caspase-3活化有关.     

人参皂苷Rg3对人宫颈癌Hela细胞凋亡及Bcl-2/bax基因mRNA表达的影响

目的探讨人参皂苷Rg3对人宫颈癌Hela细胞凋亡的影响及对凋亡相关基因的作用。方法培养人宫颈癌Hela细胞,用不同浓度Rg3进行干预,用Giemsa染色观察细胞形态学改变,流式细胞仪方法定量检测细胞的凋亡及细胞周期的变化,用RT-PCR法检测凋亡相关基因Bcl-2/bax表达。结果 Rg3对Hela细胞增殖的抑制率随作用时间的延长和药物浓度的增加而增加;Rg3作用后Hela细胞出现了典型的凋亡形态学变化,可见凋亡小体;不同浓度的Rg3处理细胞48 h后,流式细胞术(FCM)显示细胞的凋亡呈剂量依赖性;同时细胞被阻断在G2/M期,细胞周期发生明显改变;Rg3作用后的Hela细胞的凋亡相关基因Bcl-2表达降低,bax基因表达升高。结论 Rg3能抑制Hela细胞增殖,诱导其凋亡,且Rg3诱导Hela细胞凋亡是通过下调Bc1-2表达和上调bax表达,而达到抗肿瘤的作用。