TAT-tCNTF对CD损伤细胞的作用机制研究

目的：探讨TAT-tCNTF对细胞松弛素D（CD）导致的人脐静脉内皮细胞株（HUVECs）损伤的作用机制。方法：TAT-tCNTF处理经CD损伤的细胞,CCK-8法检测其对细胞活力的影响;荧光显微镜观察罗丹明-鬼笔环肽标记的F-actin的变化;荧光显微镜和流式细胞术（FCM）检测细胞内Fluo 4-AM标记的Ca2＋浓度变化;Western blot检测F-actin蛋白水平变化。结果：10μmol·L-1 CD降低HUVECs的细胞活动度（P＜0.0001）,而10μg·mL-1的TAT-tCNTF明显升高HUVECs的细胞活动度（P=0.003）;荧光显微镜下观察到CD作用后的细胞F-actin断裂且分布减少,而TAT-tCNTF可改善这一现象;TAT-tCNTF可降低由CD引起的细胞内Ca2＋超载;FCM显示CD组Ca2＋荧光强度（MFI）较对照组增强,而（CD＋TAT-tCNTF）组的MFI较CD组减弱。Western blot结果显示各组F-actin表达量无明显差异。结论：TAT-tCNTF对CD引起的细胞损伤有改善作用,其机制与维持细胞骨架结构和缓解细胞内Ca2＋超载有关。     

TAT-tCNTF 对CD 诱导HUVEC 细胞损伤的作用研究（摘要）

CCK-8 法检测TAT-tCNTF 对CD 致HUVEC 生长抑制的作用;荧光显微镜检测CD 诱导HUVEC 的F-actin 的变化,以及在TATtCNTF作用下对细胞微丝的影响;荧光显微镜和流式细胞术检测CD 和TAT-tCNTF 作用后细胞内Ca2+ 浓度;Western blot检测CD 和TAT-tCNTF 作用后F-actin 的蛋白水平的变化。     

高糖对HUVEC功能的影响及机制研究

目的观察葡萄糖对人脐静脉内皮细胞(HUVECs)活性功能的影响及机制研究。方法内皮细胞培养液体外培养HUVEC,用不同浓度(10、20、30、40、50mmol/L)的葡萄糖作用于HUVEC,用NO含量、eNOS活性检测、细胞凋亡测定和细胞内ROS检测方法,观察不同浓度葡萄糖作用后的HUVEC功能活性的影响。结果高糖对HUVEC的增殖活性具有剂量依赖性抑制作用。高糖剂量依赖性抑制HUVEC细胞eNOs活性、NO的产生,增强细胞凋亡和细胞内ROS的生成。结论葡萄糖对人脐静脉内皮细胞(HUVECs)活性功能具有抑制作用,其机制与增强细胞凋亡和增加细胞内ROS有关。     

栀子苷对氧化应激损伤血管内皮细胞的保护作用

目的研究栀子苷对体外培养的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)氧化损伤的保护作用。方法采用过氧化氢(Hy-drogen peroxide,H2O2)建立体外培养的HUVEC细胞氧化应激损伤模型。将细胞分为正常对照组、H2O2氧化损伤组、H2O2加栀子苷低、中、高剂量组,其中后3组给予栀子苷预培养24h后加入400μmol.L-1H2O2,然后继续培养12h。MTT法检测细胞存活率;检测各组细胞内超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、一氧化氮合酶(NOS)水平和培养液中一氧化氮(NO)水平;检测细胞内活性氧簇(ROS)水平;用流式细胞仪检测细胞凋亡及周期改变。结果栀子苷能明显提高H2O2损伤的内皮细胞的存活率,提高细胞内SOD、GSH-Px、NOS活性,使培养液中NO含量增加,降低细胞内ROS水平,减少H2O2诱导的细胞凋亡率,恢复血管内皮细胞增殖。结论栀子苷具有较强的抗氧化能力及内皮细胞保护作用,可减轻血管内皮细胞的氧化损伤。     

丹酚酸A对过氧化氢诱导的人脐静脉内皮细胞损伤的保护作用

目的研究丹酚酸A对人脐静脉内皮细胞(HUVECs)氧化损伤的保护作用。方法采用过氧化氢(H2O2)诱导的HUVECs氧化损伤模型,观察丹酚酸A(10,20和40μg·mL-1)对血管内皮细胞损伤的保护作用,MTT法检测细胞存活率,试剂盒检测细胞上清液中的超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、乳酸脱氢酶(LDH)、一氧化氮(NO),比色法测定Caspase-3的活性。结果丹酚酸A可抑制H2O2诱导的血管内皮细胞的凋亡,同时增加SOD的活性,降低MDA的水平,减少LDH的漏出量,增加NO的释放,降低Caspase-3的活性。且丹酚酸A的上述作用均呈质量浓度依赖性。结论丹酚酸A可以有效保护内皮细胞免受氧化损伤。     

七叶皂苷钠致静脉损伤作用细胞水平机制研究

目的了解七叶皂苷钠（Esc Na）对人脐静脉内皮细胞（HUVEC）活性及细胞周期分布的影响。方法在体外原代培养的HUVEC中加入不同浓度Esc Na及肿瘤坏死因子（TNF α）,孵育24 h后,采用MTT和中性红法对HUVEC活性进行定量分析,流式细胞技术对细胞周期进行分析。结果MTT法和中性红法显示Esc Na的半数抑制浓度（IC50）为（42.89±3.42）和（44.19±3.58） μg•mL 1。10～80 μg•mL 1浓度范围内的Esc Na可不同程度地抑制HUVEC生长,呈浓度依赖性。细胞周期分析结果也显示,Esc Na可阻抑G0/G1期细胞向S期的转变,抑制HUVEC增殖。结论七叶皂苷钠通过降低HUVEC活性,抑制细胞增殖,从而对HUVEC造成损伤。     

绿原酸对过氧化氢诱导内皮细胞凋亡的保护作用

目的探讨绿原酸对体外过氧化氢诱导人脐静脉内皮细胞凋亡的影响及机制。方法体外培养的人脐静脉内皮细胞株传代后进行实验,分为(A)正常对照组、(B)绿原酸组(30μmol.L-1)、(C)H2O2损伤组、(D)绿原酸+H2O2组。检测细胞线粒体膜电位;Hoechst33258荧光染色检测细胞凋亡;RT-PCR检测不同组内皮细胞Caspase-3和Bcl-2基因的表达。结果与正常对照组比较,过氧化氢(400μmol.L-1)能明显的造成内皮细胞的凋亡(P<0.05),绿原酸(30μmol.L-1)可降低过氧化氢引起的内皮细胞凋亡,表现为细胞凋亡率减少(P<0.05),线粒体膜电位增加,Bcl-2的表达增强,Caspase-3的表达减弱。结论绿原酸可抑制过氧化氢引起的内皮细胞凋亡,其作用机制可能与保护线粒体膜电位,促进凋亡抑制基因Bcl-2的表达及抑制Caspase-3的表达有关。     

人参果提取物对H_2O_2诱导人脐静脉内皮ECV304细胞损伤的保护作用

目的:研究人参果提取物对过氧化氢(H2O2)诱导人脐静脉内皮细胞(ECV304细胞)损伤的保护作用。方法:体外培养的ECV304细胞随机均分为正常对照(常规培养液)组、模型(常规培养液)组与人参果提取物1、2、3、4(10、20、40、80μg/ml)组,给予相应药物培养ECV304细胞24 h后,用H2O2(0.3 mmol/L)培养ECV304细胞4 h以复制细胞氧化损伤模型;采用MTT法检测细胞活力以筛选最适质量浓度。体外培养的ECV304细胞随机均分为正常对照(常规培养液)组、模型(常规培养液)组与人参果提取物(80μg/ml)组,给予相应药物培养ECV304细胞24 h后同上复制细胞氧化损伤模型。采用HE染色观察细胞形态;采用流式细胞仪测定细胞周期;检测丙二醛(MDA)含量和乳酸脱氢酶(LDH)、超氧化物歧化酶(SOD)活性。结果:人参果提取物最适给药质量浓度为80μg/ml。与正常对照组比较,模型组细胞部分皱缩,边缘模糊,细胞有融合现象;细胞活力减弱;G1期细胞比例升高,S期和G2期细胞比例降低;SOD活性减弱,MDA含量增加,LDH活性增强,差异有统计学意义(P<0.01)。与模型组比较,人参果提取物组细胞损伤程度减轻;G1期细胞进入S期和G2期的细胞比例升高,G1期细胞比例降低,S期细胞比例升高;SOD活性增强,MDA含量减少,LDH活性减弱,差异有统计学意义(P<0.01)。结论:人参果提取物对H2O2损伤的ECV304细胞具有保护作用,其机制可能与加快细胞周期进程、抗氧化作用有关。     

齐墩果酸对氧化损伤模型人脐静脉内皮细胞的保护作用

目的:研究齐墩果酸对氧化损伤模型人脐静脉内皮细胞(HUVECs)的保护作用。方法:分别以含10%胎牛血清DMEM高糖培养液[含氧化低密度脂蛋白(ox-LDL,质量浓度分别为0、25、50、100、200、400μg/ml)]培养HUVECs,CCK-8法检测细胞活性以筛选复制模型最适质量浓度。以0、10、20、40、60、80、100μmol/L齐墩果酸培养HUVECs,CCK-8法检测细胞活性以考察齐墩果酸试验最适浓度。以5、10、20、40μmol/L齐墩果酸作用于氧化损伤模型HUVECs(100μg/ml ox-LDL诱导),CCK-8法检测细胞活性,测定一氧化氮(NO)、一氧化氮合酶(NOS)、过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)水平。结果:复制模型ox-LDL最适质量浓度为100μg/ml;齐墩果酸试验最适浓度范围为0⁴0μmol/L;5、10、20、40μmol/L齐墩果酸可增加氧化损伤模型HUVECs存活率,增强CAT、GSH-PX、NOS活性,增加NO含量。结论:齐墩果酸能够保护ox-LDL氧化损伤的HUVECs,其保护机制与增强CAT、GSH-PX、NOS抗氧化酶活性有关。     

淫羊藿苷对H_2O_2诱导的人脐静脉内皮细胞氧化损伤的保护作用及机制

目的研究淫羊藿苷(Ica)对H_2O_2诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)氧化损伤的保护作用及其机制。方法 H_2O_2诱导氧化损伤模型。药效学研究分为六组:空白组,模型组(750μmol·L-1 H2O2),Ica-L、M、H组(750μmol·L~(-1) H_2O_2+1×10-8、1×10-7、1×10-6mol·L~(-1)Ica)和溶媒组(0.1%DMSO)。Ica给药12 h后加入H_2O_2,Ica作用时间为24、36和48 h。Ica作用机制研究分为五组:空白组、模型组、Ica-H组、LY组(750μmol·L~(-1) H_2O_2+25μmol·L~(-1)LY294002)、Ica-H+LY组。LY294002为PI3K抑制剂,给予LY294002后2 h加入Ica,12 h后加入H_2O_2,Ica作用时间为48 h。MTT法检测细胞活力,ELISA检测细胞培养液中活性氧(ROS)的含量,显微镜观察细胞形态及存活细胞密度,Annexin V-FITC/PI染色荧光显微镜观察细胞凋亡率,Real time RT-PCR检测Bcl-2、Bax mRNA的表达,Western Blot检测p-Akt和Akt蛋白的表达。结果与空白组相比,模型组细胞活力降低(P<0.01),ROS分泌量和凋亡细胞增加(P<0.01);与模型组相比,Ica-L、M、H组均能提高细胞活力(P<0.01),降低细胞培养液中ROS的含量(P<0.05),其抑制率呈现时间和剂量依赖性。同时,Ica能明显降低细胞凋亡率(P<0.01),上调p-Akt蛋白和Bcl-2 m RNA的表达(P<0.05),下调Bax mRNA的表达(P<0.05);Ica的以上作用被LY294002拮抗。结论 Ica(1×10~(-8)-1×10-6 mol·L~(-1))对H_2O_2诱导的HUVEC氧化损伤有保护作用,能缓解氧化应激诱导的HUVEC凋亡,其机制与PI3K/Akt信号通路有关。     

芍药内酯苷对高糖诱导的人脐静脉内皮细胞损伤的保护作用

目的 研究芍药内酯苷对高糖损伤的人脐静脉内皮细胞（HUVECs）的保护作用及机制.方法 采用33mmol·L-1的高糖培养基建立HUVECs损伤模型,并在造模前给予不同浓度的芍药内酯苷进行预保护,采用MTT法检测细胞活力,流式细胞术检测细胞凋亡,采用试剂盒检测细胞中内源性一氧化氮合酶（eNOS）和半胱天冬酶-3（Caspase-3）活性以及培养液中一氧化氮（NO）和乳酸脱氢酶（LDH）含量.结果 芍药内酯苷能够剂量依赖性增强细胞活力,降低Caspase-3活性和细胞凋亡率（P＜0.05）,并能增强eNOS的活性和NO的释放量（P＜0.05）.结论 芍药内酯苷对高糖诱导的HUVEs损伤具有保护作用,其机制可能与促进eNOS活性提高、NO释放量增加和抑制Caspase-3活性有关.     

多奈哌齐对人脐静脉内皮细胞损伤的防护作用研究

目的 探讨多奈哌齐对过氧化氢诱导人脐静脉内皮细胞(HUVEC)损伤的防护作用,并研究其作用机制.方法 将实验细胞平均分为对照组、模型组、多奈哌齐组,通过过氧化氢建立细胞损伤模型,采用细胞计数试剂盒( CCK-8)法检测细胞存活率,通过光镜观察细胞形态,Hoechst 33258染色观察细胞凋亡的形态学变化,蛋白质印迹测定细胞中锰超氧化物歧化酶(MnSOD)蛋白表达.结果 多奈哌齐组与模型组比较,细胞存活率明显增加,且差异有统计学意义[(60.8±12.2)％比(44.7±9.3)％,P＜0.05];多奈哌齐组皱缩细胞数量介于模型组和对照组处理组之间;而多奈哌齐组细胞凋亡数量和程度均较模型组降低,差异有统计学意义[(30.8±10.4)％比(45.1±14.1)％,P＜0.05];此外,蛋白质印迹试验结果表明,多奈哌齐组细胞MnSOD蛋白表达强于对照组.结论 多奈哌齐可以明显减少过氧化氢诱导的HUVEC损伤,提高细胞存活率.多奈哌齐对于过氧化氢诱导的内皮细胞损伤的防护作用可能通过上调MnSOD的表达来实现.     

Omapatrilat对AngⅡ致人血管内皮细胞损伤的保护作用研究

目的观察Omapatrilat对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)致人脐静脉内皮细胞(HUVECs)损伤的保护作用。方法体外培养HUVECs,随机分为4组:空白对照组,AngⅡ组,Omapatrilat组和AngⅡ+Omapatrilat组。分光光度计测定培养的HUVECs乳酸脱氢酶(LDH)的漏出,流式细胞仪技术检测细胞周期,硝酸还原酶法和放射免疫分析技术分别测定HUVECs上清液中一氧化氮(NO)和内皮素(ET1)含量。结果10-7mol·L-1AngⅡ可增加HUVECsLDH漏出和ET1释放,Omapatrilat(10-6mol·L-1)对此具有明显抑制作用,同时它可促进HUVECs增殖和NO释放。结论Omapatrilat可减弱AngⅡ导致的体外培养HUVECs损伤,对内皮细胞具有保护作用。     

木香乙醇提取物对高糖诱导血管内皮细胞损伤的作用及机制

目的 观察木香乙醇提取物(ESL)对高糖诱导血管内皮细胞损伤的作用及相关机制。方法 将人脐静脉内皮细胞(HUVEC)分为空白组、模型组(25 mmol·L^-1葡萄糖)、不同浓度ESL组(25、50、100、200μg·m L-1 ESL)。ESL预处理2 h后,模型组与ESL组均经葡萄糖诱导24 h,ELISA法检测肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-6、IL-1β及细胞间黏附分子(ICAM)-1、血管细胞黏附分子(VCAM)-1、E选择素(E-selectin)含量。通过单核细胞黏附实验观察HUVEC与人髓系白血病单核细胞(THP-1)黏附情况。采用小干扰RNA(siRNA)转染技术沉默细胞中的血红素加氧酶(HO)-1基因后观察ESL抗炎作用的变化。Western blot法检测细胞中HO-1、NF-E2相关因子2(Nrf2)蛋白表达。结果 与空白组相比,模型组细胞上清液中TNF-α、IL-6、IL-1β、ICAM-1、VCAM-1和E-selectin含量均显著升高(P <0.05)。与模型组相比,不同浓度ESL组TNF-α、IL-6、IL-...     

有机磷诱导HUVEC-12损伤的实验研究

目的观察有机磷农药敌百虫对人脐静脉内皮细胞（HUVEC-12）损伤的时相特征,探讨敌百虫诱导内皮细胞损伤的作用机制。方法将HUVEC-12与含不同浓度敌百虫的DMEM培养基孵24h后,MTT法检测细胞的活性;以IC50浓度的敌百虫处理细胞一定时间后（0、4、6、8、12、24、48h）,观察敌百虫诱导内皮细胞损伤的时相特征;硫代巴比妥法检测细胞上清液中丙二醛（MDA）浓度。结果敌百虫呈时间依赖性地促进内皮细胞凋亡及细胞上清液MDA产生。结论敌百虫刺激HUVEC-12氧化应激,致细胞损伤。     

乙醇诱导人脐静脉内皮细胞凋亡及对ICAM-1蛋白表达影响的研究

目的:研究乙醇体外诱导人脐静脉内皮细胞(HUVEC)凋亡,及对细胞间黏附分子(ICAM-1)蛋白表达的影响。方法:以不同浓度乙醇(50、100和200mmol/L)作用于体外培养的人脐静脉内皮细胞24h,四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法测定各组细胞活力;流式细胞仪检测细胞凋亡率;酶联免疫吸附法检测ICAM-1蛋白表达。结果:乙醇能抑制内皮细胞活力,促进细胞凋亡,增加ICAM-1表达,并呈浓度依赖性。结论:乙醇能诱导内皮细胞损伤,其机制可能与促进细胞凋亡、影响ICAM-1蛋白表达有关。     

阿司匹林对波动高糖诱导内皮损伤过程中血小板活化的影响

目的观察阿司匹林对波动高糖诱导内皮损伤过程中血小板活化的影响。方法体外构建波动高糖损伤人脐静脉内皮细胞模型,并以模型组细胞上清液作为诱导剂,与健康人血小板进行共孵育;体内构建2型糖尿病血糖波动大鼠模型。体内、外实验均分为正常(N)组、稳定高糖(W)组、波动高糖(B)组和波动高糖+阿司匹林(ASA)组。分别应用细胞计数试剂盒测得阿司匹林半数致死量,按实验动物与人体表面积比等效剂量换算表计算阿司匹林体外、体内实验中的剂量。细胞实验中给予ASA(1 mmol·L^-1)干预15 min后加入健康人血小板,测定人血小板最大聚集率、细胞培养上清液s E-selectin和v WF水平;动物实验中给予ASA(60 mg·kg^-1·d^-1)灌胃1次,干预6周后测定大鼠血清s E-selectin和v WF水平,以及大鼠血小板膜蛋白CD62p表达。结果与N组相比,W组和B组细胞上清及2型糖尿病大鼠血清v WF和s E-selectin含量均明显增多(P<0.01),健康人外周血血小板最大聚集率及大鼠血小板膜蛋白CD62p表达均明显增加(P<0.01),且两组间具有明显差异(P<0.05或P<0.01)。ASA干预后,v WF和s E-selectin含量均明显下降(P<0.01),人血小板最大聚集率及大鼠血小板膜蛋白CD62p表达亦明显降低(P<0.01)。结论波动高糖不仅可以导致明显的血管内皮损伤,也可诱发血小板出现过度活化聚集,阿司匹林对此均具有明显抑制效应。     

海嘧啶注射剂对SGC-7901人胃癌细胞凋亡的实验研究

目的：揭示海嘧啶的抗肿瘤作用机理。方法：采用流式细胞仪测定海嘧啶对人胃癌细胞凋亡及细胞周期的影响，采用激光扫描共聚焦技术观测海嘧啶对人胃癌细胞内[Ca^2 ]i的影响及[Ca^2 ]i变化时Ca^2 的来源，结果：海嘧啶可诱导肿瘤细胞凋亡，升高肿瘤细胞内[Ca^2 ]i浓度，[Ca^2 ]i升高来源于细胞外钙内流和细胞内钙释放，结论：海嘧啶的抗肿瘤作用机理为诱导肿瘤细胞凋亡,通过开放细胞膜钙通道和引起细胞内钙释放两条途径升高肿瘤细胞内[Ca^2 ]i，启动细胞凋亡机制，从而诱导肿瘤细胞凋亡。