亚硒酸钠对K562/ADR多药耐药的逆转作用及其机制

本研究探讨亚硒酸钠对白血病耐药细胞株K562/ADR细胞的多药耐药性的逆转作用及其逆转机制。用噻唑蓝（MTT）法检测亚硒酸钠对K562/ADR细胞的生长抑制作用及其对K562/ADR细胞耐药性的逆转作用;应用流式细胞仪检测亚硒酸钠对K562及K562/ADR细胞凋亡率的影响;用半定量RT-PCR法检测K562/ADR细胞中mdr1和bcl-2基因的表达情况。结果表明,10μmol/L亚硒酸钠可以明显增加K562/ADR细胞对阿霉素敏感性,其耐药逆转倍数为2.31;早期凋亡率在10μmol/L亚硒酸钠作用于K562细胞48小时是升高的;而中、晚期凋亡率在亚硒酸钠5、10μmol/L作用48、72小时时均明显升高;两种浓度亚硒酸钠在作用48小时可使K562/ADR细胞早期凋亡率增加,作用48、72小时可使K562/ADR的细胞中、晚期凋亡率增高,10μmol/L的亚硒酸钠所致凋亡率高于5μmol/L,作用72小时的凋亡率高于48小时;亚硒酸钠可使K562/ADR细胞mdr1 mRNA及bcl-2mRNA表达下降。结论：亚硒酸钠可部分逆转K562/ADR细胞的耐药性,其机制可能是增加K562/ADR细胞凋亡率,下调mdr1 mR-NA和bcl-2 mRNA的表达。     

藤黄酸对K562细胞的凋亡诱导及其作用机制研究

本研究探讨藤黄酸（gambogi cacid,GA）对K562细胞的抑制作用及机制。以不同浓度的藤黄酸处理K562和K562／A02细胞;用四甲基偶氮唑盐（MTF）法检测GA对细胞增殖的影响;碘化丙啶（PI）染色分析细胞周期;AnnexinV／PI双染法检测细胞的凋亡;JC-1染色法检测线粒体跨膜电位水平;流式细胞仪检测荧光素激活的caspase-3、caspase-8、caspase-9阳性细胞水平。结果显示：藤黄酸呈时间和浓度依赖性抑制K562细胞增殖。K562／A02细胞（GA〉2μg/ml）比K562细胞（GA〉0．5μg／ml）需要更高的藤黄酸浓度才显示增殖抑制作用。藤黄酸呈浓度依赖性诱导K562细胞凋亡。藤黄酸0、0．5、1．0、2．0μg／ml浓度对K562细胞周期未显示明显影响。藤黄酸作用后的K562细胞的线粒体跨膜电位明显降低。藤黄酸2μg/ml作用24小时激活的caspase3、caspase8、caspase9阳性细胞比例与对照相比分别上升2．19％、-1．95％、34．01％;作用48小时分别上升60．4％、71．3％、77．7％。结论：藤黄酸对K562细胞株有显著的抑制作用,该作用是通过诱导细胞凋亡实现的。藤黄酸不影响K562细胞的细胞周期。藤黄酸通过线粒体跨膜电位途径和胞浆激活途径诱导K562细胞的凋亡。     

蝮蛇毒提取物诱导白血病细胞K562凋亡

本研究探讨皖南蝮蛇毒蛋白提取物对白血病细胞K562增殖的影响及诱导凋亡的作用，采用MTT（四唑氮蓝）法检测不同浓度的蛇毒蛋白提取物对K562细胞生长的影响；应用电子显微镜观察药物作用后K562细胞形态的改变：流式细胞术检测蛋白提取物对K562细胞细胞凋亡作用；Western blot检测细胞增殖酶活性的变化。结果表明：1—20μg/ml蛇毒蛋白提取物明显抑制K562细胞的生长，且对K562细胞增殖的抑制作用呈现剂量依赖的关系；提取物作用48小时后显示明显的细胞毒作用；与对照组相比，蛇毒作用48小时后K562细胞出现典型凋亡特征；1、10、20μg／ml蛇毒作用48小时后的凋亡率分别为21.3％、49、7％、70．1％；蛇毒提取物使ERK活性明显降低。结论：蛇毒蛋白能够抑制K562细胞增殖，诱导其凋亡。     

抗VEGF抗体联合重组人可溶性TRAIL诱导白血病细胞K562凋亡的研究

本研究探讨肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)和抗血管内皮生长因子(VEGF)抗体对人慢性髓系白血病细胞K562的生长抑制和诱导凋亡的协同作用。将TRAIL和抗VEGF抗体单独及联合作用于K562细胞,应用CCK-8法检测各组的细胞抑制率和用流式细胞仪检测各组的细胞凋亡率。结果表明:以TRAIL 75、100和150ng/ml的浓度作用于K562细胞48小时的凋亡率分别为(4.26±0.67)%、(8.91±0.55)%、(11.71±0.78)%;抗VEGF抗体2.5、5和7.5μg/ml的浓度作用于K562细胞48小时的凋亡率分别为(3.95±0.69)%、(7.98±0.74)%和(10.26±0.83)%。以抗VEGF抗体2.5μg/ml+TRAIL 75 ng/ml或抗VEGF抗体5μg/ml+TRAIL100 ng/ml或抗VEGF抗体7.5μg/ml+TRAIL150 ng/ml作用于K562细胞48小时的细胞凋亡率分别为(22.16±0.93)%、(36.32±1.31)%和(49.19±0.71)%。抗VEGF抗体与TRAIL联合作用于K562细胞后,细胞抑制率及凋亡率显著高于单独应用TRAIL组或抗VEGF抗体组(p0.05)。结论:TRAIL和抗VEGF抗体对K562细胞在诱导凋亡过程中具有协同作用。     

紫草素诱导白血病细胞K562凋亡的研究

目的探讨紫草素对人白血病K562细胞的诱导凋亡作用。方法MTT显色法检测紫草素对K562细胞的增殖抑制作用;形态学观察分析DNA琼脂糖凝胶电泳;AnnexinV/PI双标记法检测紫草素对K562细胞的凋亡效应;Caspase检测K562细胞凋亡通路。结果紫草素0.25~8μg/ml浓度即能明显抑制K562细胞的增殖,并具有时间和浓度的依赖性。1μg/ml紫草素作用48h后的K562细胞出现凋亡细胞的特征。1~4μg/ml浓度紫草素诱导K562细胞凋亡具有明显的量效关系,2μg/ml紫草素在0~72h内诱导K562细胞凋亡具有明显的时效关系;DNA凝胶电泳呈现细胞凋亡的典型梯形条带;紫草素诱导K562细胞凋亡经历了Caspase-3、Caspase-6和Caspase-9的激活。结论紫草素能有效地诱导K562细胞凋亡,并主要通过线粒体凋亡通路。     

二硫化二砷联合伊马替尼诱导慢性髓细胞白血病细胞凋亡机制探讨

目的：观察二硫化二砷（As2S2）和伊马替尼（STI571）联合用药对慢性髓细胞白血病（chronic myeloid leukemia,CML）细胞株的作用机制。方法：应用MTT增殖抑制实验、锥虫蓝拒染细胞计数、瑞氏染色细胞形态观察、Annexin V流式细胞仪检测凋亡细胞,RT-PCR检测bcr-abl mRNA的表达及蛋白印迹（Western blot）分析BCR-ABL的表达、细胞色素C（cytoC）和天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶（caspase）蛋白表达,观察As2S2、STI571联合或单独作用于STI571敏感细胞株K562S及耐药细胞株K562R的情况。结果：2.5μmol/LAs2S2＋0.25μmol/LSTI571或4μmol/LAs2S2＋8μmol/LSTI571联合用药对K562S或K562R有明显生长抑制协同作用和促凋亡协同作用;联合用药对K562S或K562R的bcr-abl mRNA的表达无明显影响,但K562S细胞BCR-ABL表达明显减少,K562R细胞BCR-ABL表达略有减少。且联合用药可促进凋亡诱导蛋白cytoC释放增多及caspase9和caspase3前体下调。结论：STI571与As2S2联合用药对K562S和K562R细胞有明显的生长抑制和促凋亡的协同作用,这一作用可能通过减少BCR-ABL表达及凋亡相关蛋白cytoC释放,并下调caspase9和caspase3前体的表达以促进细胞凋亡。     

三氧化二砷抑制K562/ADM细胞 P-糖蛋白表达并提高化疗药物的敏感性

目的 研究三氧化二砷（As2O3)对人多药耐药白血病细胞K562/ADM的诱导凋亡作用和对P-糖蛋白（P-gp)表达及功能的影响。以及As2O3与常规化疗药物对耐药细胞的联合效应。方法 以白血病多药耐药细胞系K562/ADM为As2O3作用的靶细胞，用MTT比色法检测细胞增殖活性。光镜，激光共聚焦显微镜和电镜观察形态学变化，流式细胞术进行细胞周期分析和P-gp表达的检测，激光共聚焦显微镜检测P-gp功能。结果 K562/ADM细胞对阿霉素（ADM）高度耐受，并与柔红霉素（DNR）和足叶乙甙（Vp16)交叉耐药，0.5-20.0μmol/LAs2O3抑制K562/ADM细胞增殖。抑制活性高于K562细胞。经As2O3诱导后K562/ADM细胞出现典型的凋亡形态学变化和亚G1期细胞比例增高等凋亡特征性改变。As2O3下调K562/ADM细胞P-gp的表达并抑制其功能，增加K562/ADM细胞对ADM，DNR和Vp16的敏感性。结论 As2O3能够诱导白血病多药耐药细胞凋亡。并通过抑制耐药细胞P-gp的表达和功能提高耐药白血病细胞对常规化疗药物的敏感性。     

马钱子碱对人白血病细胞株K562细胞的诱导凋亡作用

本研究旨在观察马钱子碱对人白血病细胞株K562细胞的诱导凋亡作用。应用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测马钱子碱对K562细胞生长抑制作用;应用AO/EB荧光染色、Annexin-V/PI细胞凋亡检测法、DNA-ladder片段凝胶电泳法检测马钱子碱对K562细胞凋亡的影响。结果显示:马钱子碱能有效抑制K562细胞的生长,在一定范围内,抑制率随马钱子碱浓度的增高而增高,马钱子碱浓度为400μg/ml作用72小时后对K562细胞抑制作用最为明显,抑制率达94.0%;K562细胞经浓度为400μg/ml马钱子碱作用72小时后大部分细胞核染色质被EB染成桔红色并呈固缩状或圆珠状显示为晚期凋亡的细胞形态;马钱子碱作用72小时可诱导K562细胞凋亡,在马钱子碱浓度为50-400μg/ml范围内随药物浓度的增加,细胞凋亡率也逐渐上升;马钱子碱400μg/ml作用72小时后的K562细胞出现细胞凋亡的典型梯形条带。结论 :马钱子碱能有效抑制K562细胞生长,诱导其凋亡,并且在50-400μg/ml范围内呈剂量效应关系。     

p21WAF1抑制K562细胞生长并降低其对足叶乙甙的敏感性

目的探讨p21WAF1对白血病细胞系K562增殖及其对化疗药物足叶乙甙(Vp16)敏感性的影响.方法构建p21WAF1逆转录病毒表达载体pLXSN-p21WAF1,将pLXSN-p21WAF1和空载体pLXSN-neo通过FuGENETM6介导体外转染p21WAF1表达缺如的K562细胞,经筛选得到G418抗性K562细胞株,用RT-PCR和Western blot证明该基因在转染后的K562细胞中有表达,用锥虫蓝染色法和流式细胞术检测p21WAF1对K562细胞增殖和细胞周期的影响,用活细胞计数法和MTT法检测转染p21WAF1的K562细胞对Vp16敏感性变化.结果表达外源性p21WAF1的K562细胞生长明显慢于对照组细胞,流式细胞术检测显示G0/G1期细胞增多,活细胞计数法和MTT法显示K562-p21WAF1细胞对化疗药物Vp16的药物敏感性明显降低,Vp16对K562-neo细胞的IC50值为(56.4±6.5)μg/ml, 而对K562-p21WAF1细胞的IC50值为(131.0±8.7)μg/ml,两者相比差异有显著性(P<0.01).结论 p21WAF1能抑制K562细胞增殖,但同时降低了K562细胞对Vp16的敏感性.     

K562/Vp16细胞系中边缘细胞对伊马替尼耐药机制的初步研究

目的进一步阐明白血病细胞对伊马替尼耐药的机制。方法经过对K562细胞系长期的鬼臼乙叉甙（Vp16）诱导和克隆筛选，建立了一株耐药细胞系K562／Vp16，利用干细胞高效能将Hoechst 33342荧光染料泵出细胞的特性，采用流式细胞术从K562／Vp16细胞系中分选出一小群细胞，即边缘细胞（Side population，SP），称为K562／Vp16SP细胞，并初步探讨了其对伊马替尼耐药的机制。结果BCR／ABL和ABL蛋白在K562细胞、K562／Vp16SP细胞及K562／Vp16非SP细胞（K562／Vp16 non-SP）中的表达水平差异无统计学意义；P-gP在K562细胞中不表达，在K562／Vp16SP及K562／Vp16non-SP细胞中均高表达且表达水平一致；与K562／Vp16non-SP细胞比较，K562／Vp16SP细胞对伊马替尼的耐药性更强，并且这种耐药性几乎不能被多种多药耐药逆转剂逆转；另外，体内外实验显示，K562／Vp16细胞的致瘤性几乎全部来源于K562／Vp16SP细胞：结论白血病细胞对伊马替尼具有一定的耐药性，可能与数量极少的SP细胞有直接的关系。因此，这类数量极少的SP细胞应当成为有效治疗肿瘤的靶细胞。     

端粒酶活性的抑制对顺铂诱导K562细胞凋亡的影响

目的 利用人类端粒酶逆转录酶（hTERT)基因反义寡核苷酸（ASODN）抑制K562细胞端粒酶活性后,探讨顺铂对K562细胞凋亡的影响。方法 采用聚合酶链反应－酶联免疫吸附法（PCR－ELISA）检测端粒酶活性的变化;以间接免疫荧光标记法通过流式细胞仪检测hTERT蛋白表达含量的变化。琼脂糖凝胶电泳分析细胞凋亡的DNA断裂;用流式细胞仪对细胞凋亡峰进行定量分析。结果 hTERT基因ASODN作用于K562细胞后,hTERT蛋白的表达水平及端粒酶活性下降;ASODN作用于K562细胞24h再加入顺铂作用72h,经琼脂糖凝胶电泳即可见到DNA梯形条带,而正义寡核苷酸（SODN）与顺铂联合作用组及单独应用顺铂均未见到明显的DNA梯形条带。hTERT基因ASODN作用于K562细胞24h,再加入5μmol/L顺铂作用48,72h的凋亡细胞百分率（17．43％和20．34％）分别与SODN联合顺铂作用组（7．43％和9．23％）、单用顺铂作用组（5．49％和7．34％）进行比较,差异有显著性（P＜0．01）。结论 以hTERT基因mRNA起始密码区为靶点的ASODN能特异性地抑制K562细胞的端粒酶活性;端粒酶活性的下调可促进顺铂诱导K562细胞凋亡。     

K562细胞过表达MHC Ⅰ类相关抗原A对树突状细胞吞噬功能的影响

目的观察过表达MHC Ⅰ类相关抗原A(MICA)的K562细胞,体外经诱导凋亡后,对树突状细胞(DC)吞噬功能的影响。方法首先利用脂质体介导的基因转染技术和G418筛选过程,建立稳定表达MICA的K562细胞(K562-MICA)。其次分别取K562、K562-MICA细胞经CFSE标记,并用丝裂霉素C诱导凋亡,与单核细胞系THP1或外周血单核细胞来源的DC共孵育过夜,流式细胞术检测2种细胞吞噬凋亡小体的活性。同时检测THP1细胞表面相关活化性受体的表达,以及DC表面NKG2D受体的情况。最后,在细胞共培养体系中加入NKG2D抗体,观察DC吞噬活性的变化。结果 K562-MICA细胞可刺激THP1细胞上调CD86和MICA的表达,但对HLA-DR及NKG2D的表达无明显影响。与K562细胞相比,来自K562-MICA的凋亡小体更容易被DC吞噬。K562-MICA凋亡小体可诱导DC上调NKG2D表达,NKG2D抗体具有显著拮抗DC吞噬功能的活性。结论 MICA过表达于K562细胞后具有促进DC吞噬功能的活性,这种活性依赖于DC表面NKG2D的表达。     

姜黄素、红霉素逆转K562/A02细胞多药耐药机制的研究

目的研究姜黄素（curcumin，Cur）及红霉素（erythromycin，EM）对多药耐药（MDR）细胞株K562／A02的影响及作用机制。方法MTF法测定Cur、EM作用后K562／A02细胞对阿霉素（ADM）敏感性的变化。流式细胞仪测定细胞内柔红霉素的平均荧光强度（DNR MFI）。免疫组化法检测细胞膜上P—gP的表达。RT—PCR法检测细胞mdr1 mRNA水平：结果Cur、EM均可减低ADM对K562／A02细胞的IC50值，两药合用时逆转倍数可达11．3倍。K562／A02细胞内DNR MFI明显低于K562细胞（P〈0．01），Cur、EM均可明显增加K562／A02细胞内DNR MFI（P〈0．05），以两药合用时作用最为明显，Cur2．5μg／ml处理组细胞内DNR MFI略高于EM120μg／ml处理组，但差异无统计学意义（P〉0．05）。免疫组化检测结果显示K562／A02细胞P—gP表达明显高于K562细胞（P〈0．01），各组药物分别处理后，K562／A02细胞膜P—gP表达减低（P〈0．01），但仍高于K562细胞（P〈0．01）；各药物组处理5d细胞膜P—gP表达均低于3d组（P〈0．01），Cur与EM合用时细胞膜P—gP表达降低最为明湿，低于其它处理组（P〈0．01）。RT—PCR结果显示K562／A02细胞mdr1 mRNA水平明显高于K562细胞（P〈0．01），各组药物处理后，K562／A02细胞mdr1 mRNA水平均减低（P〈0．01），5d组低于3d组，但仍高于K562细胞（P〈0．01）；Cur与EM合用时K562／A02细胞mdr1 mRNA水平降低最为显著，Cur 2．5μg／ml处理5dK562／A02细胞mdr1 mRNA水平低于EM120μg／ml处理5d组（P〈0．01）。结论Cur、EM均可部分逆转K562／A02细胞的MDR，降低其P—gP的表达和功能，逆转作用有时间依赖性；两药联合应用时逆转作用明湿增强，Cur2．5μg／ml逆转作用略强于EM120μg／ml。     

三尖杉酯碱诱导K562细胞凋亡的蛋白质组研究

目的　应用比较蛋白质组技术 ,寻找并鉴定与细胞凋亡相关的蛋白质 ,探讨三尖杉酯碱(HT)促进白血病细胞凋亡的分子机制。方法　应用AnnexinⅤ和PI双染法 ,通过流式细胞术区分HT诱导K5 6 2细胞凋亡早期和凋亡晚期阶段。并进一步运用比较蛋白质组的研究方法 ,对HT诱导K5 6 2细胞凋亡的相关蛋白进行“蛋白差异显示”、质谱鉴定和数据库查询。结果　 10 μg/mlHT作用K5 6 2细胞 5h和 2 4h ,凋亡细胞主群处于凋亡早期和凋亡晚期阶段 ;配比分析对照细胞和凋亡早期及晚期的蛋白图谱 ,统计学分析表明 ,在凋亡晚期组中 3个斑点消失 ,7个斑点表达量显著降低 ,10个斑点表达量显著升高 ;选择 10个表达量改变并且蛋白表达量较大的斑点进行肽指纹谱鉴定 ,其中 5个蛋白斑点鉴定结果比较肯定 ,分别为角蛋白 9、BTF3、色氨酰tRNA合成酶 (tryptophany1 tRNAsyn thetase,TrpRS)、RS和 prohibitin。 结论　在凋亡细胞中TrpRS、RS和 prohibitin表达上调以及BTF3表达下调 ,主要影响核酸转录和蛋白合成。角蛋白 9表达增加是一种凋亡抵抗反应。     

Fas/FasL信号转导通路在DADS诱导K562细胞凋亡中的作用机制研究

本研究旨在探讨二烯丙基二硫化合物(diallyl disulfide,DADS)诱导白血病K562细胞凋亡的作用及Fas/FasL信号转导通路在DADS诱导白血病K562细胞凋亡作用中机制。以K562细胞为研究外培养的细胞分为空白组(2组)及药物处理组(4组),共6小组。空白组包括细胞对照组及溶媒对照组,药物处理组加入不同浓度DADS,DADS终浓度为10、20、40、80mg/L。取对数生长期细胞进行实验。采用Hoechst33258染色法观察细胞凋亡形态学变化;流式细胞术分析不同浓度、不同时间DADS对K562细胞凋亡的诱导作用;RT-PCR法检测Fas、FasLmRNA表达变化。结果表明,DADS在浓度为10、20、40mg/L时,K562细胞以凋亡效应为主。K562细胞出现细胞核缩小,染色质凝集、核膜破裂等凋亡特征;同一时间组(作用细胞24小时),DADS浓度从10mg/L增至40mg/L,K562细胞的凋亡率由(2.10±0.25)%增至(37.94±0.87)%;同一浓度组(40mg/L),DADS作用时间从24小时增至72小时,K562细胞的凋亡率由(37.94±0.87)%增至(47.02±0.66)%,各实验组随时间、浓度增加凋亡率明显增高(p<0.01),呈现K562细胞的凋亡效用与药物浓度、时间明显依赖关系;作用48小时后,FasmRNA表达水平较对照组上调;FasLmRNA较对照组下调,差异具有统计学意义(p<0.05)。当DADS浓度为80mg/L时,K562细胞以坏死效应为主。结论 :DADS能够诱导K562细胞凋亡,其凋亡机制可能与上调Fas,下调FasL,激活Fas/FasL死亡受体通路有关。     

阿霉素对K562细胞Gfi-1表达的影响及其与相关凋亡基因关系的研究

本研究探讨阿霉素体外作用于K562细胞的细胞效应及癌基因Gfi-1和相关凋亡基因表达变化的机制。用不同浓度的阿霉素作用于K562细胞24小时,然后应用DNA电泳和流式细胞术检测K562细胞凋亡;用RT-PCR、流式细胞术检测Gfi-1、Bcl-2、bax基因和蛋白表达的变化。结果表明：当阿霉素浓度在0、0.5、2.0mg/L作用K562细胞24小时,细胞凋亡增加,可见典型的DNA断裂电泳条带;同时,当ADM浓度自0.5增为2.0mg/L时,Gfi-1表达减少,bax表达增加;Bcl-2表达在ADM0.5-2.0mg/L之间变化不明显,mRNA及蛋白水平均无统计学差异;当阿霉素浓度大于2.0mg/L时,细胞凋亡率并不增加,而是下降,且出现细胞坏死。结论：一定浓度阿霉素能诱导K562细胞凋亡,细胞凋亡率表达的变化与阿霉素浓度呈一定的量效依赖关系,阿霉素诱导K562细胞凋亡可能与抑制Gfi-1基因的表达和激活bax基因的表达有一定的关系。     

苦参碱触发的K562细胞胞内钙信号的动态变化

目的 研究苦参碱诱导K562细胞分化的信号转导机制。方法 以Fura 2-AM为荧光探针,定量分析苦参碱作用后K562细胞内钙离子浓度的动态变化。结果 经苦参碱处理后,在胞外有钙的情况下,K562细胞内钙离子浓度由129．02nmol／L升至207．50nmol／L,并维持较长时间;在无胞外钙的情况下,胞内钙离子浓度由129．02nmol／L迅速升至164．22nmol／L,并迅速恢复。两者的增高幅度均与苦参碱浓度呈正相关。结论 在苦参碱诱导K562细胞分化过程中,钙离子浓度的变化是一重要的与细胞的增殖抑制和分化相关的早期信号。     

Bcl-xL可能介导组织蛋白酶D相关的K562细胞凋亡

组织蛋白酶(cathepsin)D在氨基葡萄糖硫酸盐(ducosamine sulfate，GS)诱导的慢性髓系白血病k562细胞凋亡过程中为激活线粒体途径的可能的中介分子。为了探讨Bcl-xL在氨基葡萄糖硫酸盐诱导慢性髓系白血病K562细胞凋亡中的可能作用，在倒置显微镜下动态观察细胞生长变化，采用瑞氏-姬姆萨染色观察细胞加药前后的形态学改变，间接免疫荧光法观察GS诱导K562细胞凋亡过程中cathepsin D和细胞色素(cytoclnrome)C的转位情况，Western blot检测k562细胞凋亡过程中Bcl-xL、Bax、Bitl蛋白的表达变化。结果表明：5mmol／L氨基葡萄糖硫酸盐作用于k562细胞72小时后，细胞增殖受到明显抑制，胞浆出现空泡化；荧光显微镜显示catlaepsin D和cytoclarome C的荧光信号由颗粒状趋向弥散；Bcl—xL蛋白在GS加药组中表达减低，甚至消失，但在抑胃酶肽(pepstatin)A预处理后的加药组中表达没有明显改变，Bax和Bitl蛋白表达在凋亡前后没有明显变化。结论：Bcl-xL蛋白在GS诱导白血病K562细胞凋亡过程中可能介导catlaepsin D与线粒体途径之间的联系。     

木香烃内酯通过JAK/STAT通路抑制K562细胞增殖研究

目的:探讨木香烃内酯对慢性髓系白血病细胞系K562细胞的增殖抑制作用及机制。方法:采用CCK-8法检测木香烃内酯对K562细胞的增殖抑制作用,流式细胞术检测细胞凋亡率及活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平,Western blot检测相关蛋白的表达。结果:木香烃内酯能够明显抑制K562细胞增殖,其24 h半数有效抑制浓度(IC50)约为(15.70±2.13)μmol/L(P<0.05);15μmol/L木香烃内酯分别作用K562细胞0、24和48 h均能够诱导K562细胞凋亡,凋亡率由(1.77±0.59)%分别增加到(17.68±2.84)%、(30.65±4.54)%(P<0.05);木香烃内酯能够明显增加细胞内ROS的水平,由(3.52±1.08)%分别增加到(23.56±3.52)%,(36.68±4.22)%(P<0.05);木香烃内酯能够显著降低BCL-2、p-JAK2、p-STAT3的表达,上调BAX、细胞色素C、cleaved-caspase-3、cleaved-PARP的表达水平。结论:木香烃内酯能够通过JAK/STAT信号通路诱导K562细胞凋亡,从而抑制其细胞增殖。     

雷公藤甲素对K562/A02细胞阿霉素敏感性的影响

本研究旨在探讨雷公藤甲素(TPL)对K562/A02细胞阿霉素敏感性的影响。采用MTT法检测TPL细胞毒性和阿霉素药物敏感性;流式细胞术检测P-糖蛋白表达和细胞内阿霉素浓度;双荧光素酶报告基因系统检测MDR1启动子活性。结果表明:TPL增强K562/A02细胞阿霉素敏感性。TPL作用后,K562/A02细胞P-糖蛋白表达相关平均荧光强度(MFI)由123±13下降到39±13(P<0.05);K562/A02细胞内阿霉素相关MFI由18±5上升到34±6(P<0.05),TPL能够有效抑制K562/A02细胞的药物外排。TPL降低MDR1启动子转录活性约75%。结论:TPL通过下调P-糖蛋白表达增强K562/A02细胞对阿霉素的敏感性,其有可能成为一种耐药逆转剂。