端粒酶活性在食管癌中的表达

1．1对象收集经术前内镜及病理证实的食管癌患36例，其中男19例，女17例，年龄46～68岁，平均60．2岁。在手术中将肿瘤组织及距肿瘤边缘10cm以上的癌旁正常食管组织快速取材，经液氮冷冻后转至超低温冰箱中储存备用。     

大肠癌组织端粒酶活性的定量检测

我们采用在PCR基础上建立的端粒重复扩增-酶联免疫吸附法(TRAP-ELISA)对大肠癌105例及远切端正常组织41例(距癌10cm以上)中端粒酶活性进行定量检测，探讨大肠癌组织和正常的端粒酶活性的意义及其与临床的关系。     

子宫内膜癌中端粒酶活性的表达

近年来研究认为肿瘤的发生与端粒酶的活化有关。本实验利用原位杂交法检测正常子宫内膜和内膜癌中端粒酶TERT mRNA的表达，探讨端粒酶活性是否可成为子宫内膜癌诊疗的分子生物学标志。     

肾癌组织中端粒酶活性表达的临床意义

对肾癌组织中端粒酶活性表达的临床意义探讨如下。 1 对象和方法 1．1 对象 系我院及广州军区总医院、广州市第二人民医院2003-10-2005-12膀胱癌手术肾癌标本91例，男64例，女27例，年龄37-70岁，中位年龄53．5岁。符合1990年《中国常见恶性肿瘤诊治规范》肾癌诊断标准。其中肾细胞癌83例，肾乳头状腺癌8例。手术中提取舯瘤组织，以生理盐水洗掉血污后放入灭菌RPMI-1640培养液中4℃保存送检，同时经病理活检后证实诊断。     

贲门癌组织中端粒酶活性的检测及意义

贲门癌与细胞端粒酶的激活有密切关系。我们应用PCRTRAP法检测了贲门癌组织中端粒酶的活性，现报道如下。     

端粒酶活性的抑制对顺铂诱导K562细胞凋亡的影响

目的 利用人类端粒酶逆转录酶（hTERT)基因反义寡核苷酸（ASODN）抑制K562细胞端粒酶活性后,探讨顺铂对K562细胞凋亡的影响。方法 采用聚合酶链反应－酶联免疫吸附法（PCR－ELISA）检测端粒酶活性的变化;以间接免疫荧光标记法通过流式细胞仪检测hTERT蛋白表达含量的变化。琼脂糖凝胶电泳分析细胞凋亡的DNA断裂;用流式细胞仪对细胞凋亡峰进行定量分析。结果 hTERT基因ASODN作用于K562细胞后,hTERT蛋白的表达水平及端粒酶活性下降;ASODN作用于K562细胞24h再加入顺铂作用72h,经琼脂糖凝胶电泳即可见到DNA梯形条带,而正义寡核苷酸（SODN）与顺铂联合作用组及单独应用顺铂均未见到明显的DNA梯形条带。hTERT基因ASODN作用于K562细胞24h,再加入5μmol/L顺铂作用48,72h的凋亡细胞百分率（17．43％和20．34％）分别与SODN联合顺铂作用组（7．43％和9．23％）、单用顺铂作用组（5．49％和7．34％）进行比较,差异有显著性（P＜0．01）。结论 以hTERT基因mRNA起始密码区为靶点的ASODN能特异性地抑制K562细胞的端粒酶活性;端粒酶活性的下调可促进顺铂诱导K562细胞凋亡。     

hTERT反义寡核苷酸对瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖及端粒酶活性的影响

目的研究hTERT基因反义寡核苷酸(ASODN)对瘢痕疙瘩成纤维细胞生长增殖及端粒酶活性的抑制作用,探讨其在瘢痕疙瘩治疗中的作用。方法应用ASODN封闭瘢痕疙瘩成纤维细胞hTERT基因的表达,不同浓度不同时间以ASODN作用于体外培养的瘢痕疙瘩成纤维细胞,细胞计数和MTT法检测成纤维细胞生长增殖情况,端粒酶PCR-ELISA法检测不同处理浓度和时间成纤维细胞端粒酶活性。结果 ASODN作用于瘢痕疙瘩成纤维细胞72h后,成纤维细胞生长受抑,增殖能力减弱,并具有浓度、时间依赖性。端粒酶活性检测显示:ASODN0.5、1.0和1.5μmol/L作用组OD450-690值分别为0.612±0.038、0.535±0.027、0.423±0.023,与空白对照组(0.898±0.058)比较,差异有统计学意义(P<0.05);正义寡核苷酸1.0μmol/L作用组(OD450-690值为0.893±0.042)与空白对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论 hTERT基因ASODN能抑制瘢痕疙瘩成纤维细胞的生长增殖,降低成纤维细胞端粒酶活性是其重要作用机制之一。通过抑制端粒酶活性进行抗瘢痕疙瘩治疗可能是一个新途径。     

食管病变中端粒酶活性及其hTERT的相关性研究

端粒酶的激活是细胞获得永生化的必要途径 ,亦是细胞恶性转化的基础。人类 70 %～ 95 %恶性肿瘤端粒酶活性 (TA)增高 ,而正常组织端粒酶无或低表达。关于端粒酶逆转录酶蛋白(h TERT)能否反映食管鳞癌组织中端粒酶活性 ,各家报道不一。本实验通过检测食管鳞癌及不典型增生组织的 TA和h TERT的表达 ,探讨食管鳞癌端粒酶活性及端粒酶逆转录酶蛋白的表达及彼此间相关性。1　对象和方法1.1　对象　 38例食管鳞癌组织、15例不典型增生组织及 12例正常食管粘膜组织标本均取自手术切除的新鲜标本 ,患者术前均未经放疗及化疗。标本离体后 1h内采…     

胃癌组织端粒酶活性表达与临床病理特征相关性的研究

目的探讨胃癌组织端粒酶活性表达与其临床病理特征的关系。方法应用端粒酶重复序列扩增（telom-eric repeat amplification protocol,TRAP）银染TRAP-ELISA方法检测25例胃癌组织（实验组）和25例胃不典型增生组织（对照组1）及正常胃组织（对照组Ⅱ）中端粒酶活性的表达,并胃癌组织与临床病理分期、病理分级及预后关系进行分析。结果实验组中端粒酶活性表达率为91.1%,对照组Ⅰ端粒酶活性表达率为20%,对照组Ⅱ无表达,实验组端粒酶活性高于两对照组（P〈0.01）;实验组端粒酶活性在临床病理分期上：T4高于T3,T3高于T2＋T1,但差异均无显著性。实验组端粒酶活性在病理分化程度上：未分化高于高分化（P〈0.05）。结论实验组端粒酶活性高表达,与胃癌临床病理分化程度呈正相关,端粒酶激活可能在胃癌的发生及发展过程中起重要作用,端粒酶可作为胃癌早期诊断及判定预后的分子生物学标记。     

阴道脱落细胞端粒酶及其反转录酶检测在子宫内膜癌诊断中的价值

随着人们寿命的延长和激素替代疗法（HRT）不规范的使用，子宫内膜癌发病率有逐年上升趋势。人们迫切需要一种简便无创的方法对子宫内膜癌进行早期诊断。本研究通过检测子宫内膜癌、子宫内膜增生过长及生理性子宫内膜组织及其对应的阴道脱落细胞端粒酶及反转录酶（hTERT），探讨阴道脱落细胞端粒酶活性及其反转录酶检测埘早期发现子宫内膜病变的临床意义，为更灵敏、更特异的肿瘤标志物的临床应用提供理论依据。     

端粒酶、p21、p53与原发性胆囊癌关系

目的　探讨端粒酶、p2 1和 p53在原发性胆囊癌的发生、转移和浸润中的作用及相互关系。方法　我们应用 TRAP- PCR和免疫组织化学方法对原发性胆囊癌中端粒酶、p2 1和 p53表达进行检测。结果　 1原发性胆囊癌端粒酶、p2 1和 p53阳性表达率为 84.8%、47.8%和 71 .7%。 2端粒酶、p2 1和 p53在胆囊癌旁粘膜阳性表达率为 4.6%、94.5%和 94.5%。 3癌细胞浸润越深 ,端粒酶 p2 1和 p53阳性表达率越高。 4淋巴结转移 ,端粒酶阳性表达率为 1 0 0 % ,而 p2 1和 p53为 2 2 .7%和 63.6%。结论　端粒酶、p2 1和 p53阳性表达与胆囊癌的浸润及在胆囊癌形成和对周围组织浸润 ,淋巴结转移可能起重要作用     

冬凌草甲素对人膀胱癌T24和5637细胞杀伤作用的研究

[目的]探讨冬凌草甲素对不同恶性程度人膀胱癌细胞的抑制作用.[方法]以丝裂霉素为对照,用不同浓度的冬凌草甲素处理人膀胱癌细胞株T24(浸润性,G3)和5637(非浸润性,G2)后,通过MTT法检测细胞增殖抑制率并计算IC50值,应用倒置显微镜观察细胞形态及其抑制情况,采用荧光染色法观察细胞核及细胞凋亡情况.[结果]冬凌草甲素和丝裂霉素对T24和5637细胞均有抑制增殖和杀伤作用,并呈现时间-效应和浓度-效应关系.分别作用T24、5637细胞株12 h和24 h 后,64 μmol/L冬凌草甲素的抑制增殖和杀伤效果均要显著优于150 μmol/L丝裂霉素的效果.低恶性细胞5637较高恶性T24对冬凌草甲素和丝裂霉素处理更敏感.[结论]冬凌草甲素能通过诱导T24和5637细胞凋亡,起到杀伤和抑制增殖的效果,且较丝裂霉素起效快,有进一步研究的价值.     

膀胱移行细胞癌survivin表达及与bcl-2的相关性

目的：探讨凋亡抑制蛋白survivin在膀胱移行细胞癌中的表达及其与bcl-2蛋白表达的相关性。方法：应用免疫组化方法，检测43例膀胱移行细胞癌标本中survivin、bcl-2蛋白的表达，15例正常膀胱黏膜移行上皮进行对照研究。结果：43例膀胱移行细胞癌组织中，survivin蛋白阳性表达率为67．4％，而正常膀胱黏膜组织中未见survivin蛋白阳性表达。survivin蛋白表达与膀胱移行细胞癌临床分期、病理分级相关。survivin蛋白与bcl-2蛋白表达负相关（P〈0．01）。结论：survivin基因可通过抑制膀胱移行癌细胞凋亡，对膀胱移行细胞癌的发生发展起作用。     

联检端粒酶活性和DNA异倍体诊断恶性腹水

目的:评价联检端粒酶活性(TA)和DNA异倍体诊断恶性腹水的价值。方法:良、恶性腹水各57份,应用端粒重复序列扩增-杂交-酶联免疫分析法检测TA、流式细胞术检测DNA异倍体。结果:恶性腹水TA及DNA异倍体的阳性率为84.2%及73.7%,联检TA和DNA异倍体的阳性率为94.7%。结论:联检TA和DNA异倍体可进一步提高诊断恶性腹水的敏感性,更有益于良、恶性腹水的鉴别,联检的临床价值高于单一试验。     

导入RASSF1A基因抑制膀胱癌细胞增殖的研究

[目的]探讨RASSF1A基因的表达对人膀胱癌细胞株体外增殖的影响.[方法]通过脂质体介导的基因转染法将野生型RASSF1A基因的真核表达载体及空载体转染膀胱癌BIU87细胞株.以四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞的增殖程度,原位凋亡细胞检测技术和流式细胞仪检测膀胱癌BIU87细胞凋亡和细胞周期,Western blot检测膀胱癌BIU87细胞Cyclin D1蛋白表达的改变.[结果]成功建立稳定表达野生型RASSF1A基因的膀胱癌细胞株.野生型RASSF1A基因的表达可明显抑制膀胱癌细胞在体外的生长,可以显著降低BIU87细胞的增殖比和增高BIU87细胞的凋亡指数,与对照相组比差异显著( P <0.05).BIU87细胞的细胞周期发生 G1/S期阻滞,Cyclin D1蛋白的表达水平下调.[结论]野生型RASSF1A的重表达通过下调Cyclin D1,抑制膀胱癌BIU87细胞体外增殖.     

酪氨酸激酶Syk在胃癌中的表达及意义

目的：通过研究脾酪氨酸激酶（Syk）在胃癌、癌前病变、慢性胃炎及正常胃黏膜中的表达情况，探讨Syk表达与胃癌生成与转移的关系及意义。方法：采取免疫组织化学法对正常胃黏膜及不同病变胃黏膜组织标本中Syk蛋白进行检测。结果：Syk在胃癌组织中表达明显减弱，其阳性率为35．00%，显著低于正常胃黏膜、慢性浅表性胃炎、慢性萎缩性胃炎伴肠化生和不典型增生胃黏膜组织（100％，95％，86．36％，76．19％；P〈0．05）；Syk蛋白表达缺失与胃癌分期、淋巴结转移有关（P〈0．05）。结论：Syk蛋自在胃癌中表达缺失．Syk表达缺失与胃癌的生长和转移有关。     

DNA倍体分析联合端粒酶活性检测对良恶性腹水的鉴别诊断价值

目的：探讨腹水细胞DNA倍体分析联合端粒酶活性检测对良、恶性腹水的鉴别诊断价值。方法：采用TRAP-PCR-ELISA法对96例腹水（良性腹水47例，恶性腹水49例）进行端粒酶活性半定量测定，用酶标仪（∑960型）测其在波长450nm的吸光度（A），以A〉0．20为阳性判断标准，同时进行腹水细胞DNA倍体分析。结果：（1）恶性腹水组细胞DNA倍体分析阳性率为81．36％（40／47），明显高于良性腹水组的2．13％（1／47），DNA倍体分析区别腹水良、恶性的敏感度为81．36％，特异度为97．87％；（2）恶性腹水组端粒酶活性（平均A值0．745）明显高于良性腹水组（平均A值0．065），端粒酶活性在恶性腹水组阳性率为91．84％（40／49），明显高于良性腹水组的4．26％．端粒酶活性检测区别腹水良、恶性的敏感度为91．84％，特异度为95．74％；（3）DNA倍体分析联合端粒酶活性检测对恶性腹水的诊断率为97．96％（48／49）。结论：DNA倍体分析联合端粒酶活性检测是鉴别良、恶性腹水敏感而特异的方法。     

端粒酶反义寡聚脱氧核苷酸对人胃癌细胞的影响

目的：观察端粒酶反义寡聚脱氧核苷酸对人胃癌细胞株的作用。方法：用端粒酶反义寡聚脱氧核苷酸与人胃癌细胞株共同温育一定时间后，观察细胞形态变化，检测细胞DNA含量的分布，测定端粒酶活性。结果：端粒酶反义寡聚脱氧核苷酸能诱导人胃癌细胞凋亡，抑制端粒酶活性，在形态学上表现为细胞膜起泡、染色质固缩、核碎裂、凋亡小体形成；电泳呈凋亡特征性Ladder带；流式细胞仪分析显示，在G1期前出现亚2倍体凋亡峰；端粒酶活性抑制。结论：端粒酶反义寡聚脱氧核苷酸能诱导胃癌细胞凋亡，抑制端粒酶活性，抑制端合成，从而抑制胃癌细胞的增殖。     

抗端粒酶反义寡核苷酸对人胃癌细胞增殖的影响

目的：观察抗端粒酶反义寡脱氧核苷酸（ASODN）对人胃癌细胞系端粒酶活性的抑制作用及其对癌细胞增殖的影响。方法：合成与人类端粒酶RNA模板区碱基序列互补的ASODN，并用阳离子脂质体转染剂DOSPER介导，作用于人胃癌细胞系FGC85，空白组和正义寡脱氧核苷酸（SODN）作为对照，用以PCR为基础的端粒重复序列扩增法（TRAP）结合ELISA方法检测胃癌细胞的端粒酶活性，台盼蓝拒染法细胞计数，噻唑蓝（MTT）试验观察癌细胞增殖情况，免疫组化方法检测细胞增生抗原Ki-67。结果：脂质体介导的抗端粒酶ASODN对胃癌细胞的端粒酶活性具有抑制作用；细胞坟数和MTT试验显示胃癌细胞增殖速度明显减慢；细胞Ki-67染色阳性率显著降低。结论：特异性抗端粒酶ASODN可运用于抗肿瘤实验性治疗和相关研究。