Effect of lipoxin A4 on interleukin-1β production of human monocytes from severe preeclamptic women and its relationship with cytoplasm free calcium concentration-an in vitro study

Objective To investigate the effect of lipoxin A4(LXA4) on interleukin-1β(IL-1β)production of monocytes in maternal peripheral blood from severe preeelampsia women and its relationship with cytosolic free calcium([Ca2+]i)concentration. Methods Peripheral venous blood was drawn from 15 women with severe preeelampsia(SPE group)and 20 normal pregnant women (control group)who were admitted to the First Affiliated Hospital of Wenzhou Medical College from October 2008 to May 2009.Monoeytes were obtained from peripheral blood with Ficolt density gradient centrifugation and then were suspended in RPMI-1640 culture supplemented with LXA4 at the final concentrations of 0,10 and 100 nmol/L,respectively.IL-1β levels in monocytes supernatant were detected by enzyme-linked immunosorbent assay.The cytoplasma[Ca2+]i of cultured monocytes and its variations affected by LXA4 were measured by laser scanning confocal microscope. Results (1) After incubation with different concentrations of LXA4(0,10,100 nmol/L)for 24 h,the levels of IL-1β in SPE group were(63.16±8.20)pg/L,(53.71±8.08)pg/L and(43.16±6.89)pg/L,respectively, indicating a significant inhibition effect on IL-1β level in a dose-dependent manner (P<0. 05). The IL-1β levels in the control group were (19.22±7.43) pg/L, (16.99±6.32) pg/L and (15. 18±5.24) pg/L, correspondingly (P>0.05). (2) Without LXA4, the [Ca2+ ]i concentrations of monocytes in the SPE group were higher than that of the control (1028.09 ± 160. 52 vs 323.61 ±87.86, P<0. 05). After treatment with 100 nmol/L LXA4, the [Ca2+ ]i concentration of monocytes significantly decreased in the SPE group (409.67± 116.73, P<0. 05). Conclusions In vitro LXA4 may inhibit the IL-1β production in monoeytes of SPE patients through decrease of the cytoplama [Ca2+ ]i concentration.     

Effect of lipoxin A4 on interleukin-1β production of human monocytes from severe preeclamptic women and its relationship with cytoplasm free calcium concentration-an in vitro study

Objective To investigate the effect of lipoxin A4(LXA4) on interleukin-1β(IL-1β)production of monocytes in maternal peripheral blood from severe preeelampsia women and its relationship with cytosolic free calcium([Ca2+]i)concentration. Methods Peripheral venous blood was drawn from 15 women with severe preeelampsia(SPE group)and 20 normal pregnant women (control group)who were admitted to the First Affiliated Hospital of Wenzhou Medical College from October 2008 to May 2009.Monoeytes were obtained from peripheral blood with Ficolt density gradient centrifugation and then were suspended in RPMI-1640 culture supplemented with LXA4 at the final concentrations of 0,10 and 100 nmol/L,respectively.IL-1β levels in monocytes supernatant were detected by enzyme-linked immunosorbent assay.The cytoplasma[Ca2+]i of cultured monocytes and its variations affected by LXA4 were measured by laser scanning confocal microscope. Results (1) After incubation with different concentrations of LXA4(0,10,100 nmol/L)for 24 h,the levels of IL-1β in SPE group were(63.16±8.20)pg/L,(53.71±8.08)pg/L and(43.16±6.89)pg/L,respectively, indicating a significant inhibition effect on IL-1β level in a dose-dependent manner (P<0. 05). The IL-1β levels in the control group were (19.22±7.43) pg/L, (16.99±6.32) pg/L and (15. 18±5.24) pg/L, correspondingly (P>0.05). (2) Without LXA4, the [Ca2+ ]i concentrations of monocytes in the SPE group were higher than that of the control (1028.09 ± 160. 52 vs 323.61 ±87.86, P<0. 05). After treatment with 100 nmol/L LXA4, the [Ca2+ ]i concentration of monocytes significantly decreased in the SPE group (409.67± 116.73, P<0. 05). Conclusions In vitro LXA4 may inhibit the IL-1β production in monoeytes of SPE patients through decrease of the cytoplama [Ca2+ ]i concentration.     

脂氧素A4对缺氧损伤的人脐静脉内皮细胞的保护作用

目的 探讨脂氧素A4(LXA4)对缺氧损伤的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)的保护作用及其机制.方法 体外培养HUVEC,培养后的细胞分别以单纯M199培养基培养(对照组)、氯化钴(CoCl2)诱导细胞缺氧(缺氧组)、不同浓度LXA4(1、10、100 nmol/L)加入缺氧组细胞培养液中(药物干预组);倒置相差显微镜下观察各组HUVEC的形态学变化;四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测不同浓度LXA4培养24 h和100 nmol/L的LXA4作用不同时间(4、8、12、24 h)后缺氧HUVEC存活率;免疫细胞化学法检测细胞胞质内第Ⅷ因子相关抗原抗体(vWF)水平变化(以灰度值表示),细胞质内出现棕黄色颗粒为阳性;激光共聚焦显微镜观察细胞质内游离Ca2+荧光强度变化.结果 (1)细胞形态:缺氧组HUVEC明显失去原有正常细胞形态,细胞变圆,核固缩;药物干预组正常细胞数量增多,加入100 nmol/L浓度的LXA4后,大部分细胞形态与正常细胞形态基本相似.(2)细胞存活率:缺氧组细胞存活率为(40.1±3.9)%,药物干预组细胞培养液中加入1、10、100 nmol/L浓度的LXA4后,细胞存活率分别为(52.9±1.4)%、(64.1±3.3)%、(76.6±1.6)%,分别与缺氧组比较,差异均有统计学意义(P<0.05).药物干预组细胞培养液中LXA4浓度为100 nmol/L时,作用4、8、12、24 h,细胞存活率分别为(68.2±2.3)%、(82.5±1.4)%、(82.9±1.4)%和(72.2±8.5)%,且在12 h时达峰值;药物干预组各时间点细胞存活率分别与缺氧组比较,差异均有统计学意义(P<0.05).(3)vWF水平:随着药物干预组细胞培养液中LXA4浓度的增加,其胞质内vWF水平逐步降低,LXA4浓度为1、10、100 nmol/L时.vWF水平分别为203.9±0.7、204.6±0.9、191.8±0.5,分别与缺氧组比较,差异均有统计学意义(P<0.05).(4)Ca2+荧光强度:激光共聚焦显微镜观察结果显示,LXA4可提高缺氧HUVEC胞质内Ca2+荧光强度.结论 LXA4对缺氧HUVEC维持正常的细胞形态起重要作用,并可提高其细胞存活率及降低细胞质内vWF水平,其保护机制可能是通过降低细胞内钙超载和转移细胞核内Ca2+,使细胞质内Ca2+增加.     

17β雌二醇对子宫腺肌病患者子宫内膜-肌层交界区平滑肌细胞内游离Ca2+浓度的调节作用及机制研究

目的：探讨17β雌二醇（17β-E2）对子宫腺肌病患者子宫内膜-肌层交界区（EMI）平滑肌细胞内游离Ca2+浓度（[Ca2+]i）的调节作用及可能机制。方法选择2011年9月至2012年12月在首都医科大学附属北京妇产医院妇科微创中心因子宫腺肌病行子宫全切除术的患者28例为腺肌病组,选择同期因子宫颈上皮内瘤变（CIN）Ⅲ行子宫全切除术者31例为对照组,对两组患者的EMI平滑肌细胞进行分离及原代培养。应用Ca2+荧光探针Fluo-4/AM负载平滑肌细胞,采用细胞外钙阻断实验、细胞内钙释放阻断实验、细胞膜钙通道阻断实验、细胞膜钙激活钾通道阻断实验阻断引起[Ca2+]i变化的各个环节,利用激光共聚焦显微镜观察17β-E2诱导后的两组患者EMI平滑肌细胞内[Ca2+]i的变化,其变化程度以ΔF[Ca2+]i表示。结果（1）在常规有Ca2+培养基中,17β-E2诱导后腺肌病组和对照组EMI平滑肌细胞内Ca2+荧光强度均明显高于其17β-E2诱导前,腺肌病组ΔF[Ca2+]i为384±26,对照组ΔF[Ca2+]i为235±20,两组比较,差异有统计学意义（P=0.001）;细胞外钙阻断实验显示,细胞外无Ca2+时,腺肌病组ΔF[Ca2+]i为207±17,对照组ΔF[Ca2+]i为221±19,两组比较,差异无统计学意义（P=0.731）。腺肌病组ΔF[Ca2+]i在细胞外有Ca2+时明显高于无Ca2+时,差异有统计学意义（P=0.000）;而对照组两者比较,差异无统计学意义（P=0.060）。（2）细胞内钙释放阻断实验显示,阻断肌质网钙库上三磷酸肌醇（IP3）敏感的钙释放通道、肌质网利阿诺定（Ryanodine）受体（RyR）钙释放通道、肌质网钙泵释放后,腺肌病组和对照组ΔF[Ca2+]i分别与其阻断前相比均明显降低（P<0.05）,且腺肌病组ΔF[Ca2+]i均明显高于对照组（P<0.05）。（3）细胞膜钙通道阻断实验显示,阻断L-型钙通道后,腺肌病组ΔF[Ca2+]i为211±19,对照组为203±16,两组比较,差异无统计学意义（P=0.064）;腺肌病组ΔF[Ca2+]i明显低于其阻断前（ΔF[Ca2+]i为384±28;P=0.001）;而对照组与其处理前（ΔF[Ca2+]i为234±22）比较,差异则无统计学意义（P=0.141）。（4）细胞膜钙激活钾通道阻断实验显示,阻断细胞膜钙激活钾通道后,腺肌病组ΔF[Ca2+]i为357±24,对照组为209±19,两组比较,差异有统计学意义（P=0.000）;腺肌病组和对照组ΔF[Ca2+]i分别与其处理前（腺肌病组ΔF[Ca2+]i为363±21,对照组为237±20）比较,差异均无统计学意义（P>0.05）。结论17β-E2通过内源性钙库释放Ca2+和细胞膜L-型钙通道介导的Ca2+内流导致子宫腺肌病患者EMI平滑肌细胞内游离[Ca2+]i异常增高,[Ca2+]i调节异常导致的子宫收缩功能障碍可能参与子宫腺肌病的发生、发展。     

尼莫地平治疗妊娠高血压综合征及其对血小板细胞内游离钙离子浓度影响的研究

目的　探讨尼莫地平 (nim odipine NIM)治疗妊娠高血压综合征 (简称妊高征 )的临床效果及其对血小板细胞内游离钙离子浓度 (PF[Ca2 ]i)的影响。　方法　将 48例中、重度妊高征患者随机分组 ,给予尼莫地平或硫酸镁治疗 ,观察治疗前后血压、尿蛋白、PF[Ca2 ]i 及自觉症状等变化 ,比较两组妊娠结局。　结果　 (1)尼莫地平治疗 1/ 2、1、2 h时血压较用药前明显下降 ,母心率增快 ,胎心率无明显变化 ;(2 )使用尼莫地平后 PF[Ca2 ]i 从用药前 (188± 30 ) nmol/ L降至用药后 (15 3± 19)nmol/ L(P<0 .0 0 1) ,PF[Ca2 ]i 降低值与平均动脉压下降值之间呈正相关关系 (r=0 .79,P<0 .0 0 1) ;(3)尼莫地平组先兆子患者自觉症状消失时间 (1.3± 1.5 ) h,较硫酸镁组 (3.2± 1.9) h短(P<0 .0 5 )。　结论　 (1)尼莫地平与硫酸镁相比降压效果强且持久 ,能显著扩张脑血管 ,改善脑缺氧 ,快速缓解先兆子患者自觉症状 ,副作用小 ;(2 )细胞内游离钙水平升高可能是妊高征发病的关键因素     

转化生长因子β2对妊娠肝内胆汁淤积症患者胎盘组织分泌肿瘤坏死因子α及γ干扰素的影响

目的 探讨转化生长因子β2(TGF-β2)对妊娠肝内胆汁淤积症(ICP)患者胎盘组织分泌肿瘤坏死因子α(TNF-α)和γ干扰素的影响。方法 选取10例ICP患者(ICP组)和10例正常孕妇(对照组)的胎盘组织,通过体外培养后,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测不同浓度TGF-β2[0浓度、低浓度(1μg/L)、高浓度(10μg/L)]对两组体外培养1、24、48 h的胎盘组织上清液中TNF—α和γ干扰素的水平。结果(1)胎盘组织培养1、24、48 h时,ICP组胎盘组织上清液中的TNF—α水平分别为(771±187)pg/g、(2490±575)pg/g、(3339±1106)pg/g,γ干扰素水平分别为(931 ±148)pg/g、(1888 ±545)Pg/g、(3027±667)Pg/g;对照组胎盘组织上清液中的TNF-α水平分别为(106±40)pg/g、(658±177)Pg/g、(1099 264)pg/g,γ干扰素水平分别为(404 ±155)Pg/g、(936 ±142)pg/g、(1386 ±378)Pg/g。ICP组TNF-α和γ干扰素水平均明显高于对照组,两组比较,差异有极显著性(P<0.001)。(2)不同浓度(0浓度、低浓度、高浓度)TGF-β2抑制ICP组胎盘组织分泌TNF—α[24 h时分别为(2490 ±575)pg/g、(1806±502)pg/g、(1231±238)Pg/g;48 h时分别为(3339±1106)pg/g、(2168±794)pg/g、(1047±183)pg/g]和γ干扰素[24 h时分别为(1888±545)pg/g、(1347±405)pg/g、(91     

重度子痫前期孕妇脂氧素A4及11β羟基类固醇脱氢酶2的表达及意义

目的:检测重度子痫前期孕妇外周血中脂氧素A4(LXA4)水平以及胎盘组织中11β羟基类固醇脱氢酶2(11β-HSD2)表达,探讨LXA4和11β-HSD2参与重度子痫前期发生的机制。方法:选择在本院产前检查并分娩的妊娠妇女共45例,其中正常妊娠组20例,重度子痫前期组25例。ELISA法测定孕妇外周血血浆中LXA4水平;酶化学发光分析法检测孕妇血清中游离皮质醇浓度;免疫组织化学染色法检测胎盘组织11β-HSD2蛋白表达;实时荧光定量RT-PCR法测定胎盘组织11β-HSD2 mRNA的表达;分析LXA4与11β-HSD2蛋白或mRNA、皮质醇与平均动脉压之间的相关性。结果:重度子痫前期组与正常妊娠组相比,LXA4水平明显降低(P<0.05),皮质醇浓度虽有升高,但无显著性差异(P>0.05);胎盘组织中11β-HSD2蛋白及mRNA表达均显著低于正常妊娠组(P<0.05);两组孕妇的LXA4水平与11β-HSD2蛋白表达量、LXA4水平与11β-HSD2 mRNA表达量、皮质醇与平均动脉压均无相关性(P均>0.05)。结论:LXA4和11β-HSD2参与重度子痫前期的发生。     

B族链球菌携带及感染孕妇外周血单核细胞炎症因子的水平变化#br#

目的分离培养B族链球菌(GBS)感染孕妇外周血单核细胞,探究GBS感染后炎症因子的变化。方法选择2017年6月至2018年12月在青岛市海慈医疗集团产科分娩的GBS阳性孕妇和正常孕妇,以及育龄期妇女作为研究对象,分离培养受试者外周血单核细胞,探究IL-1、IL-6、IL-8、TNF-α、CRP的m RNA及蛋白表达量的变化。结果GBS感染组外周血单核细胞IL-6(102.22±98.62)ng/L和IL-8(98.17±87.12)ng/L的水平显著高于正常孕妇组IL-6(24.62±53.14)ng/L、IL-8(20.25±30.11)ng/L和育龄期妇女组IL-6(22.13±56.23)ng/L、IL-8(17.12±20.63)ng/L(P<0.001)。GBS感染组新生儿发病率为20.0%,显著高于正常孕妇组(0.0%;P<0.05)。结论GBS感染阳性孕妇外周血单个核细胞中,IL-6和IL-8炎症因子表达显著上升,且新生儿发病风险增加,临床上应给予重视。     

脂氧素对滋养细胞氧化损伤的保护作用及其机制

目的研究脂氧素(lipoxinA4,LXA4)在孕妇血清中的表达及其对滋养细胞氧化损伤的保护作用和作用机制.方法 细胞实验分为6组,对照组;脂多糖(lipopolysaccharides,LPS)组:10 μg/ml LPS作用24 h;干预组:10 μg/ml LPS+100 nmol/L LXA4作用24 h;LXA4组:100 nmol/L LXA4作用24 h;拮抗组:10 μg/ml LPS+100 nmol/L LXA4+100 μmol/L N-叔丁氧羰基吡咯烷(N-tert-butoxycarbonyl-2-pyrrolidine,BOC-2)作用24 h;BOC-2组:10μg/ml LPS+100 μmol/L BOC-2 作用24 h.采用酶联免疫吸附试验检测正常孕妇与子痫前期患者血清LXA4含量;以2,7-二氢二氯荧光素二乙酸酯为荧光探针检测滋养细胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平;逆转录-聚合酶链反应检测超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD) mRNA的表达;Western印迹分析SOD、转录因子NF-E2相关因子2(NF-E2-related factor,Nrf2)的蛋白表达水平;黄嘌呤氧化酶法测定滋养细胞中SOD活性.结果 (1)子痫前期患者血清LXA4水平为(165.53±18.89) pg/L,与正常孕妇[(545.67±30.91) pg/L]相比明显下降(t=40.64,P<0.01).(2)LPS组与对照组相比,滋养细胞内二氯荧光素(dichlorofluorescein,DCF)密度值明显升高(P<0.01),DCF密度值从53.00±3.08 上升至77.00±5.83( t=8.14,P<0.01);胞核中Nrf2蛋白、SOD mRNA和蛋白表达均显著下降(t分别为34.11、25.61和17.93,P均<0.01);滋养细胞上清中的SOD含量明显下调(t=12.16,P<0.01).(3)干预组与LPS组相比,滋养细胞内DCF密度值明显下降,DCF密度值从77.00±5.83降至62.00±3.39(t=4.97,P<0.01),胞核中Nrf2蛋白、SOD mRNA表达显著上升(t分别为11.74和13.17,P均<0.01),SOD蛋白表达也有所升高(t=4.67,P<0.05),滋养细胞上清中的SOD含量明显增加,酶活力上升至(8.93±0.53) U/ml(t=14.76,P<0.01).(4)拮抗组与干预组相比,滋养细胞上清中SOD含量下降至(6.23±0.41) U/ml(t=9.03,P<0.01),但仍高于LPS组(t=6.10,P<0.01);BOC-2组SOD含量为(4.90±0.32) U/ml,与LPS组相比差异无统计学意义(t=0.79,P>0.05).结论 LXA4可明显减轻LPS引起的胎盘滋养细胞氧化损伤,且LXA4可通过脂氧素受体(lipoxinA4 receptor,ALX-R)激活Nrf2/抗氧化反应元件(antioxidant response element,ARE)信号通路来发挥抗氧化损伤的作用.

Abstract：

Objective To explore lipoxinA4 (LXA4) expression in maternal serum of pregnant women and the protective effect and mechanism of LXA4 on trophoblastic cells from oxidative injury. Methods Trophoblastic cells were randomized into six groups: Control group; Lipopolysaccharides (LPS) group, cells were stimulated by 10 μg/ml LPS for 24 h; Intervention group, cells stimulated by LPS were treated with 100 nmol/L LXA4 for 24 h; LXA4 group, cells were treated with 100 nmol/L LXA4 for 24 h; Antagonistic group, cells stimulated by LPS were treated with 100 nmol/L LXA4 plus 100 μmol/L N-tert-butoxycarbonyl-2-pyrrolidine (BOC-2) for 24 h; BOC-2 group, trophoblastic cells stimulated by LPS were treated with 100 μmol/L BOC-2 for 24 h. The serum concentration of LXA4 in normal group and preeclampsia group was detected by ELISA. The intracellular formation of reactive oxygen species (ROS) was detected by 2,7-dichlorofluorescein diacetate (DCFH-DA) as a fluorescent probe. SOD mRNA was analyzed by RT-PCR. SOD and Nrf2 protein expressions were analyzed by Western blot. The levels of SOD in trophoblastic cells were detected by using detection kit. Results (1) The serum concentration of LXA4 was significantly lower in preeclampsia group (165.53±18.89) pg/L than in the control [(545.67±30.91) pg/L, P<0.01]. (2) Compared with control group, the levels of ROS in LPS group were significantly higher, DCF density of trophoblastic cells increased from 53.00±3.08 to 77.00±5.83 (P<0.01). The expression of nuclear Nrf2 protein, SOD mRNA and protein in LPS group were obviously decreased (P<0.01). The levels of SOD in LPS group were also significantly lower (P<0.01). (3) Compared with LPS group, the levels of ROS in intervention group were significantly lower, DCF density of trophoblastic cells decreased from 77.00±5.83 to 62.00±3.39 (P<0.01). The expression of nuclear Nrf2 protein, SOD mRNA in intervention group were obviously increased (P<0.01), so did the SOD protein expression (P<0.05). The levels of SOD were significantly increased from (4.77±0.34) U/ml to (8.93±0.53) U/ml (P<0.01). (4) The levels of SOD in antagonistic group were lower than in intervention group, but still higher than LPS group. [(6.23±0.41) U/ml vs (8.93±0.53) U/ml (P<0.01) or (4.77±0.34) U/ml (P<0.01)]. No significant difference was found in the levels of SOD between BOC-2 and LPS group (P>0.05). Conclusions LXA4 can significantly reduce the oxidative stress of placental trophoblastic cells stimulated by LPS. LXA4 can bind to lipoxin receptors and activate Nrf2-ARE signaling pathway playing a protective effect. So LXA4 in pregnant women can affect the oxidative stress of placenta.     

妊娠高血压综合征患者外周血单个核细胞产生Th1、Th2型细胞因子失衡的研究

目的　研究妊娠高血压综合征 (简称妊高征 )患者外周血单个核细胞 (peripheral bloodmononuclear cell,PBMC)产生 Th1、Th2型细胞因子的功能变化。　方法　妊高征组 4 3例 ,正常孕妇组 15例 ,健康非孕组 15例 ,采用 EL ISA方法检测外周血 PBMC体外培养上清液中白细胞介素 2(interleukin- 2 ,IL- 2 )、干扰素 γ(interferon- γ,IFN- γ)及白细胞介素 4 (interleukin- 4 ,IL- 4 )水平。　结果　 PBMC体外培养上清液中 ,IL- 2在正常妊娠组为 (14 0 .3± 73.2 ) ng/ L,与健康非孕组 (2 5 9.5± 114 .4 ) ng/ L 相比水平下降 (P<0 .0 1) ;在妊高征组为 (2 34.6± 10 7.2 ) ng/ L,与正常妊娠组相比水平升高 (P<0 .0 1)。IFN- γ在正常妊娠组为 (30 7.5± 10 6 .4 ) ng/ L,与健康非孕组 (4 83.7± 177.8) ng/ L相比水平下降 (P<0 .0 1) ;在妊高征组为 (4 13.5± 14 9.7) ng/ L,与正常妊娠组相比水平升高 (P<0 .0 1)。IL- 4在正常妊娠组为 (4 1.9± 11.4 ) ng/ L,与健康非孕组 (2 7.4± 8.3) ng/ L 相比水平升高 (P<0 .0 0 1) ;在妊高征组为 (32 .1± 12 .0 ) ng/ L,与正常妊娠组相比水平下降 (P<0 .0 1)。IL- 2 / IL- 4比值在正常妊娠组为 3.5± 1.9,与健康非孕组 10 .1± 4 .8相比比值下降 (P<0 .0 0 1) ;在     

妊娠高血压综合征血浆叶酸同型半胱氨酸和内皮素浓度变化

目的　了解妊娠高血压综合征 (妊高征 )患者血浆叶酸 (FA)、同型半胱氨酸 (Hcy)和内皮素 (ET 1)浓度的变化。方法　采用放免法检测 4 3例妊高征患者 (妊高征组 )分娩前后及 67例正常晚孕妇女 (正常晚孕组 )和15例正常非孕妇女 (正常非孕组 )血浆FA、维生素B12 (VB12 )及ET - 1含量。用荧光标记免疫检测法测定血浆Hcy的含量。 结果　①正常晚孕组血浆叶酸浓度 [( 11 3 6± 5 3 8)nmol/L]明显低于正常非孕组 [( 2 7 77± 7 75 )nmol/L ,P <0 0 5 ];妊高征组分娩前血浆叶酸浓度 [( 6 4 3± 2 4 0 )nmol/L]明显低于正常非孕组及正常晚孕组(P <0 0 1,P <0 0 5 ) ;妊高征组分娩后血浆叶酸 [( 2 0 85± 8 80 )nmol/L]明显高于分娩前 (P <0 0 5 ) ;②正常晚孕组血浆同型半胱氨酸浓度 [( 7 89± 3 2 7) μmol/L]明显高于正常非孕组 [( 6 63± 1 0 7) μmol/L ,P <0 0 5 ];妊高征组分娩前血浆同型半胱氨酸浓度 [( 12 0 0± 4 5 9) μmol/L]明显高于正常非孕组及正常晚孕组 ( P <0 0 1,P <0 0 1) ;妊高征组分娩后血浆同型半胱氨酸浓度 [( 7 63± 3 2 9) μmol/L]明显低于分娩前 ( P <0 0 0 1) ;③妊高征组分娩前血浆内皮素 - 1质量浓度 [( 13 8 4 7± 3 0 0 3 )ng/L]明显高于正常晚孕组 [( 10 3 7     

血清LIF、TNF-α、E2、P、β-HCG在异位妊娠早期诊断中的作用

目的 探讨血清白血病抑制因子(LIF)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、雌二醇(E2),孕酮(P)、β--人绒毛膜促性腺激素(β-HCG)在异位妊娠早期诊断中的作用.方法 选取2005年12月至2006年7月间在深圳石岩医院妇科住院的异位妊娠(EP)、先兆流产(TA)和正常宫内妊娠(NIUP)患者各32例,采用放射免疫法(RIA)检测血清中LIF、TNF-α、E2、P、β-HCG.结果 EP组与TA组、NIUP组血清LIF[(2.37±2.13)ng/L对(8.83±6.96)ng/L,(8.29±6.70)ng/L],E2[(416.80.4±308.83)pmol/L对(2 186.37.4±722.23)pmol/L,(2 592.89±485.57)pmol/L]及β-HCG[(7 726.60±2 313.52)U/L对(24 077.90±7 536.69)U/L,(35 444.50±34 634.88)U/L]比较差异有统计学意义(P<0.05).P在EP与TA组、NIUP各组间差异均有统计学意义[分别为(12.90±6.12)nmol/L,(45.90±12.39)nmol/L,(87.11±12.24)nmol/L,P<0.05)].结论 单次检测血清B-HCG对早期异位妊娠鉴别诊断意义可能不大;TNF-α尚不能作为早期异位妊娠诊断指标;检测LIF、E2、P对早期异位妊娠诊断可能有一定的临床价值;联合单次检测血清LIF、E2、P、β-HCG可能为临床早期诊断异位妊娠提供一个指标.     

褪黑素对新生儿脐带血单个核细胞产生细胞因子的影响

目的 探讨褪黑素(melatonin,MLT)对新生儿脐带血单个核细胞(cord blood mononuclear cells,CBMC)产生细胞因子的影响. 方法 体外培养10例健康足月新生儿CBMC,取10例健康成人外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMC)作正常对照,不同浓度MLT(50 pg/ml～50 ng/ml)作为刺激物与CBMC或PBMC共培养,测定培养上清中IL-β、IL-2、IL-4、IL-6、IL-8、IL-10、IL-12、IFN-γ及TNF-α水平. 结果 500 pg/ml MLT可刺激CBMC产生较高水平的IL-2[(12.18±7.31)pg/ml]、IL-6[(2091.08±968.58)pg/ml]、IL-8[(2779.04±1168.49)pg/ml]、IL-12[(15.29±6.88)pg/ml]及IFN-γ[(52.22 17.77)pg/ml],与对照组[分别为(6.99±4.94)pg/ml、(1017.06±452.60)pg/ml、(1293.33±791.34)pg/ml、(6.84±2.26)pg/ml、(22.24±10.38)pg/ml]相比,差异有统计学意义(P<0.05);与对照组[(175.63±62.10)pg/ml]相比,不同浓度MLT(50 ng/ml、5 ng/ml、500 pg/ml、50 pg/ml)均可降低CBMC培养上清中TNF-α水平,分别为(24.87±11.21)pg/ml、(18.14±9.44)pg/ml、(31.38±15.28)pg/ml和(28.18±17.35)pg/ml,差异均有统计学意义(P<0.05).5 ng/ml MLT可诱导PBMC产生IL-2、IL-12及IFN-γ,抑制TNF-α的分泌,与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05).比较各自最佳效应浓度的MLT对CBMC(MLT最佳效应浓度为500 pg/ml)和PBMC(MLT最佳效应浓度为5 ng/ml)释放细胞因子IL-2、IL-12、IFN-γ的诱导作用及对TNF-α的抑制作用,除TNF-α外,差异均有统计学意义(P<0.01). 结论 MLT不但可调节PBMC细胞因子的释放,也可调节CBMC细胞因子的释放,且MLT对CBMC分泌细胞因子IL-12、IFN-γ等的调节作用强于其对PBMC的作用.因此,MLT有可能提高新生儿的免疫功能,为临床应用提供了实验依据.     

脂氧素对子痫前期患者巨噬细胞增殖和分泌功能的影响

目的 探讨脂氧素对子痫前期患者巨噬细胞增殖和分泌功能的影响.方法 对温州医学院附属第一医院产科2007年3-7月收治的24例子痫前期孕妇(子痫前期组)和24例正常孕妇(正常妊娠组)的腹腔巨噬细胞进行体外培养.采用酶联免疫吸附试验(ELISA)测定不同浓度脂氧素(0、10、100 nmol/L)作用两组孕妇腹腔巨噬细胞48 h后,上清液中肿瘤坏死因子α(TNF-α)的水平.用细胞生长抑制实验法检测两组不同浓度脂氧素(0、10、100 nmol/L)作用24 h后的巨噬细胞增殖抑制率.结果 (1)TNF-α水平:子痫前期组0、10、100 nmol/L浓度的脂氧素作用下,TNF-α水平分别为(1867.5±47.3)、(1836.9±4.5)、(1800.5±2.7)ng/L.正常妊娠组0、10、100 nmol/L浓度的脂氧素作用下,TNF-α水平分别为(791.3±62.2)、(789.4±2.3)、(781.5±1.9)ng/L.子痫前期组TNF-α水平显著高于正常妊娠组,两组比较,差异有统计学意义(P＜0.05).脂氧素对子痫前期组TNF-α水平的影响呈剂量依赖性抑制(P＜0.05),而其对正常妊娠组TNF-α水平变化无明显影响(P＞0.05).(2)增殖抑制率:子痫前期组0、10、100 nmol/L浓度的脂氧素作用下,增殖抑制率分别为(14.8±6.3)%、(32.9±3.6)%、(36.7±3.8)%.正常妊娠组0、10、100 nmol/L浓度的脂氧素作用下,增殖抑制率分别为(16.8±6.9)%、(16.7±5.4)%、(15.9±2.1)%.子痫前期组增殖抑制率比正常妊娠组明显升高,两组比较,差异有统计学意义(P＜0.05),脂氧素呈剂量依赖性抑制子痫前期组孕妇腹腔巨噬细胞的增殖抑制率(P＜0.05),而对正常妊娠组的增殖抑制率则无明显影响(P＞0.05).结论 脂氧素呈剂量依赖性地抑制子痫前期患者的巨噬细胞增殖和TNF-α分泌.     

核因子kB诱捕脱氧寡核苷酸对异位内膜基质细胞RANTES含量及趋化能力的影响

目的 探讨核因子(NF)kB诱捕脱氧寡核苷酸(ODN)对子宫内膜异位症(内异症)患者异位内膜基质细胞中正常T淋巴细胞表达和分泌调节活化因子(RANTES)的含量,及其对单核细胞趋化能力的影响.方法 分离、培养11例内异症患者的卵巢异位内膜基质细胞.实验分为3组,即刺激组[用10μg/L白细胞介素(IL)1β刺激培养]、转染后刺激组(NF-kB诱捕ODN转染异位内膜基质细胞后,用10μg/L IL-1β刺激培养)和空白对照组.各组刺激培养4、8、12、24、36 h后分别取上清液,采用酶联免疫吸附试验检测RANTES蛋白的含量;采用Boyden小室趋化实验检测上清液中RANTES对单核细胞的趋化能力.另对刺激组培养24 h后,在上清液中加入不同浓度(0.5、1、2、4、8 mg/L)的抗RANTES抗体,采用Boyden小室趋化实验检测上清液中RANTES对单核细胞的趋化活性.结果 (1)培养8、12、24、36 h后RANTES蛋白的含量,刺激组分别为(58±10)、(150±35)、(360±46)、(586±42)ng/L,均高于空白对照组[分别为(32±6)、(32±7)、(31±6)、(33±8)ng/L],两组分别比较,差异均有统计学意义(P<0.05);培养12、24、36 h后RANTES蛋白的含量,转染后刺激组分别为(86±16)、(128±28)、(183±32)ng/L,均低于刺激组,两组分别比较,差异均有统计学意义(P<0.05).(2)刺激培养12、24、36 h后RANTES对单核细胞的趋化指数,转染后刺激组分别为10.3±0.9、13.7±1.1、18.6±1.2,均低于刺激组(分别为15.3±1.2、24.3±1.4、32.4±1.6),两组分别比较,差异均有统计学意义(P<0.05).(3)刺激组培养24 h后加入抗RANTES抗体浓度为0.5、1、2、4、8 mg/L时,单核细胞的趋化抑制率分别为5%、23%、40%、62%和61%.结论 NF-kB诱捕ODN可抑制IL-1β所诱导的异位内膜基质细胞中RANTES的含量,并降低其对单核细胞的趋化能力.在内异症病灶中,RANTES是单核.巨噬细胞的主要趋化因子.     

妊娠期糖尿病孕妇血清肿瘤坏死因子α水平变化与胰岛素抵抗关系的研究

目的　探讨妊娠期糖尿病孕妇血清肿瘤坏死因子α(TNF α)水平变化与胰岛素抵抗的关系。方法　采用酶联免疫吸附试验测定 4 2例妊娠期糖尿病孕妇 (GDM组 )、4 0例正常妊娠晚期孕妇 (正常妊娠组 )空腹血清TNF α水平 ;同时测定两组孕妇空腹血糖、C肽、胰岛素、糖化血红蛋白(HbA1c)水平。并且根据公式计算两组孕妇的胰岛素敏感指数 (ISI) ,以评价胰岛素抵抗程度。结果(1)GDM组孕妇空腹血清TNF α水平为 (5 2± 1 6 )ng/L ,正常妊娠组孕妇为 (4 5± 0 5 )ng/L ,两组比较 ,差异有极显著性 (P <0 0 1) ;GDM组孕妇ISI为 - 4 3± 0 4 ,正常妊娠组为 - 3 8± 0 3,两组比较 ,差异有极显著性 (P <0 0 1)。 (2 )GDM组孕妇空腹血糖、胰岛素、C肽水平分别为 (5 5± 0 7)mmol/L、(13 4± 3 8)mU/L、(1 6± 0 4 )nmol/L ,正常妊娠组孕妇空腹血糖、胰岛素、C肽水平分别为(4 9± 0 4 )mmol/L、(9 3± 2 5 )mU/L、(1 2± 0 3)nmol,两组比较 ,差异有极显著性 (P <0 0 1) ;GDM组孕妇HbA1c为 (5 6± 0 5 ) % ,正常妊娠组孕妇为 (5 3± 0 5 ) % ,两组比较 ,差异有显著性(P <0 0 5 )。 (3)GDM组孕妇空腹血清TNF α水平与ISI呈显著负相关 (r=- 0 70 3,P <0 0 1) ,分别与空腹血糖、C肽、HbA1c呈显著正相关 (r     

多囊卵巢综合征患者卵泡液LIF、IL-1β及性激素水平与IVF-ET结局关系的研究

目的:探讨多囊卵巢综合征(PCOS)患者卵泡液中白血病抑制因子(LIF)、白细胞介素-1β(IL-1β)及性激素水平与IVF-ET结局的关系。方法:用酶联免疫双抗夹心法和时间分辨免疫荧光法前瞻性研究了行IVF-ET的11例PCOS患者、14例对照组患者卵泡液中IL-1β、LIF及雌二醇(E2)和孕酮(P)的定量表达。结果:PCOS组卵泡液中LIF为21.1±11.1pg/mL,P为191.9×103nmol/L,明显低于对照组(33.5±11.8pg/mL,305.9×103nmol/L,P<0.05);而PCOS组卵泡液IL-Iβ为39.9±11.5pg/mL,E2浓度为3334.00nmol/L,明显高于对照组(28.3±10.6pg/mL,2138.1nmol/L),P<0.05。PCOS组胚胎种植率为8.8%,临床妊娠率为18.2%,明显低于对照组(16.7%,42.9%),P<0.05;PCOS组OHSS发生率为27.3%,明显高于对照组(7.1%,P<0.05)。LIF与E2在两组患者呈负相关(r=-0.442,P=0.027)、LIF与LH/FSH比值在PCOS组呈负相关(r=-0.682,P=0.021);IL-Iβ与E2在PCOS组呈正相关(r=0.612,P=0.045);LH/FSH比值与P在PCOS组呈负相关(r=-0.780,P=0.005);LIF与IL-Iβ水平两者间无明显相关性。结论:LIF可能是PCOS患者低种植率的关键因子;IL-Iβ可能是PCOS患者在控制性超排卵过程中易发生OHSS的一个致病因子;卵泡液IL-Iβ、LIF受卵巢激素调控。     

胚胎移植术后14天妊娠患者血清β-HCG水平对妊娠结局的预测价值

目的评估在胚胎移植(ET)后14d血β-HCG水平对妊娠结局的预测价值。方法选择同济医学院附属同济医院2005-2009年间行ET的2169例病例,比较ET后14d生化妊娠、异位妊娠(Ep)、早期流产(Pa)、正常单胎妊娠(P1)、双胎妊娠(P2)各组的血清β-HCG值。结果 (1)生化妊娠、Ep、Pa、P1、P2组的血清β-HCG平均浓度依次为(61.17±48.14)U/L,(182.21±127.27)U/L,(273.51±177.5)U/L,(532.65±241.32)U/L,(861.69±236.36)U/L,各组间均有明显差异(P<0.05)。(2)生化妊娠,异位妊娠,早期流产,单胎,双胎组血清β-HCG值的主要波动范围分别位于<50U/L,<200U/L,100～500U/L,300～800U/L,>1000U/L。(3)通过ROC曲线分别确定生化妊娠和活胎妊娠、P1和Pa、P1和P2之间的临界点分别为134U/L、375U/L、690U/L。(4)年龄、原发或继发不孕对ET后正常单胎妊娠组血β-HCG值无明显影响;PCOS患者β-HCG值呈最高值,卵巢功能不良和子宫内膜异位症患者β-HC...     

Th17/Treg平衡与正常妊娠及子痫前期关系的研究

目的:探讨Th17及CD4+CD25+Foxp3+调节性T(regulatory T,Treg)细胞介导的免疫反应在子痫前期发病中的作用。方法:选取在山东大学齐鲁医院进行产前检查的子痫前期患者25例及正常晚孕期妇女27例,并选取育龄期健康未孕妇女20例。利用流式细胞技术检测3组患者血样中分泌IL-17的Th17及CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞亚群占CD4+T淋巴细胞的百分比,并计算Th17/Treg比率,比较其在子痫前期与正常妊娠时的变化;再用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测3组患者外周血中IL-17、IL-10、TGF-β1等细胞因子的表达并进行比较。结果:(1)与正常未孕组及正常妊娠组相比,子痫前期患者外周血中分泌IL-17的Th17细胞占CD4+T淋巴细胞百分比明显升高(P<0.01),CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞占CD4+T淋巴细胞百分比明显降低(P<0.01);与正常未孕组相比,正常妊娠组Th17细胞的比例明显降低(P<0.01),Treg细胞比例明显升高(P<0.05);(2)子痫前期患者外周血中Th17/Treg比率明显高于正常未孕组及正常妊娠组(P<0.01),正常妊娠组外周血中Th17/Treg比率与健康未孕组相比明显降低(P<0.01);(3)子痫前期患者外周血中IL-17及TGF-β1的TGF-β1表达明显高于正常未孕组及正常妊娠组(P<0.05),而IL-10的表达未见明显差异(P>0.05);与正常未孕组相比,正常妊娠组外周血中IL-17、IL-10及TGF-β1的水平均未见明显变化(P>0.05)。结论:正常妊娠可能依赖于Treg细胞介导的免疫耐受状态,子痫前期患者外周血中Th17/Treg之间的平衡失调而倾向于Th17介导的促炎状态,这一机制可能参与了子痫前期的发生发展。     

达那唑体外对子宫内膜异位症患者腹腔巨噬细胞释放细胞因子的影响及其与胞浆游离钙浓度的关系

目的　了解达那唑体外对子宫内膜异位症 (内异症 )患者腹腔巨噬细胞释放细胞因子的影响及与胞浆游离钙 ([Ca2 ]i)浓度的关系。方法　将浓度分别为 10 μg/L、10 0 μg/L、10 0 0 μg/L的达那唑加入 14例内异症不孕患者和 11例盆腔正常的不孕患者 (对照 )的腹腔液中进行培养 ,用双抗体夹心法检测腹腔巨噬细胞培养上清液中肿瘤坏死因子α(TNF α)和白细胞介素 6 (IL 6 )的水平。同时应用Frua 2测定另 10例内异症、8例对照患者的腹腔巨噬细胞 [Ca2 ]i水平。结果　与对照者相比 ,内异症患者腹腔巨噬细胞释放TNF α和IL 6的能力明显增强 (P <0 .0 1) ,其 [Ca2 ]i水平也明显升高(P <0 .0 1)。体外达那唑浓度达到 10 0 μg/L时 ,内异症患者腹腔巨噬细胞培养上清液中TNF α和IL 6的水平显著降低 (P <0 .0 1) ,其 [Ca2 ]i也显著降低 (P <0 .0 1)。结论　达那唑体外能明显抑制内异症患者腹腔巨噬细胞活性。其作用与降低细胞内 [Ca2 ]i水平有关。