ATP敏感性钾通道开放剂吡那地尔增高Bcl-2表达而抑制PC12细胞缺血性凋亡

目的探讨ATP敏感性钾通道开放剂吡那地尔对缺血缺氧PC12细胞凋亡及对Bcl-2 mRNA和蛋白表达的影响。方法取传代后3d的PC12细胞,分为正常对照组、缺血对照组、吡那地尔处理组、吡那地尔+格列吡嗪处理组共4组。吡那地尔处理组在PC12细胞缺血缺氧前20min加入浓度为100μmol·L-1的吡那地尔;吡那地尔+格列吡嗪处理组则加入浓度100μmol·L-1的吡那地尔和浓度为500μmol·L-1的KATP通道阻断剂格列吡嗪。采用Annexin-V FITC/PI双染流式细胞分析仪检测凋亡率;应用免疫荧光染色和Western blot检测Bcl-2蛋白表达水平;应用RT-PCR检测Bcl-2 mRNA表达水平。结果缺血缺氧后缺血对照组、吡那地尔处理组、吡那地尔+格列吡嗪处理组细胞凋亡率随时间增加而增加,24h达高峰。吡那地尔组与其余组比较差异均有显著性(P<0.01)。缺血对照组、吡那地尔处理组、吡那地尔+格列吡嗪处理组细胞Bcl-2 mRNA及蛋白表达各时间点均增加,12h达高峰。吡那地尔组与其余组比较差异均有显著性(P<0.05,或P<0.01)。缺血对照组和吡那地尔+格列吡嗪处理组比较差异均无显著性(P>0.05)。结论ATP敏感性钾通道开放剂可能通过提高Bcl-2 mRNA及蛋白表达来减轻缺血缺氧后PC12细胞凋亡,发挥保护作用。     

瓜子金皂苷己对连二亚硫酸钠致氧糖剥夺/复供诱导PC12细胞凋亡的抑制作用

目的观察瓜子金皂苷己(polygalasaponin F,PGSF)对氧糖剥夺/复供(oxygen-glucose deprivation and reperfusion,OGD/R)所诱导的PC12细胞凋亡的作用及其机制。方法以连二亚硫酸钠合并无糖Earle’s液造成氧糖剥夺,继而恢复为完全培养基以建立体外OGD/R模型,以Hoechst33342/PI双染及流式细胞术观察细胞受损和凋亡情况;以JC-1荧光染色法测定细胞线粒体膜电位(mitochondrial membranepotential,MMP);以Western blot法检测凋亡相关蛋白的表达。结果 PGSF可明显改善细胞形态并降低细胞受损和凋亡百分率,抑制MMP水平的降低,增加Bcl-2/Bax表达比值。结论 PGSF对OGD/R诱导的PC12细胞凋亡具有明显抑制作用,机制与其调节Bcl-2和Bax的表达及稳定MMP有关。     

积雪草苷对Aβ25～35诱导PC12细胞凋亡的影响

目的:探讨积雪草苷对Aβ25～35诱导PC12细胞凋亡的影响。方法:Aβ25～35 20μmol.L-1刺激PC12细胞,同时分别给予积雪草苷160,80,40,20μg.mL-1,CCK-8法检测细胞活力,Annexin-V/FITC双染后流式细胞仪检测细胞凋亡率,荧光显微镜观察细胞形态,Western blot方法检测凋亡相关蛋白Bcl-2的表达。结果:与模型组比较,积雪草苷剂量依赖性地提高Aβ25～35诱导的PC12细胞存活率,增加Bcl-2的表达,降低PC12细胞的凋亡率,差异有统计学显著性(P<0.05)。结论:积雪草苷对Aβ25～35诱导的PC12细胞凋亡有保护效应,可能与增加Bcl-2表达有关。     

毛蕊异黄酮抑制氧糖剥夺/复氧复糖PC12细胞凋亡研究

目的研究毛蕊异黄酮对氧糖剥夺/复氧复糖PC12细胞凋亡的影响。方法将对数生长期PC12细胞随机分为4组:正常对照组(Control)、模型组(Model)、毛蕊异黄酮组(Calycosin,0.07μmol·L~(-1))和尼莫地平组(Nimodipine,5.00μmol·L~(-1),阳性对照药组)。用CCK-8检测细胞存活率;流式细胞术和TUNEL染色检测细胞凋亡率和凋亡指数;免疫荧光染色检测细胞Bax/Bcl-2比值;Western blot检测细胞凋亡蛋白caspase-3表达。结果与Control组相比,Model组细胞存活率明显降低(P<0.05),细胞凋亡率和凋亡指数明显升高(P<0.05),Bax/Bcl-2比值和caspase-3蛋白表达明显升高(P<0.05);与Model组相比,Calycosin组和Nimodipine组细胞存活率均明显升高(P<0.05),细胞凋亡率和凋亡指数均明显降低(P<0.05),Bax/Bcl-2比值和caspase-3蛋白表达均明显降低(P<0.05),差异有统计学意义。结论毛蕊异黄酮可明显提高氧糖剥夺/复氧复糖PC12细胞存活率,抑制细胞凋亡,其作用机制与毛蕊异黄酮调控凋亡蛋白Bax、Bcl-2、caspase-3表达有关。     

盐酸埃他卡林对H2O2所致PC12细胞损伤的保护

目的:研究KATP 通道开放剂盐酸埃他卡林(iptakalimhydrochloride ,Ipt)对H2 O2 所致PC12细胞损伤的保护作用及其作用机制。方法:采用培养的PC12细胞,MTT法测定细胞存活率,HPLC法测定细胞培养液中谷氨酸(Glu)的含量,荧光法测定胞内钙离子([Ca2 ]i)浓度。结果:Ipt可浓度依赖性的拮抗H2 O2 介导的细胞毒性,提高细胞生存率,降低胞外Glu的释放以及胞内Ca2 浓度。该保护作用可被2 0 0 μmol·L- 15 - HD(线粒体KATP通道阻断剂)部分拮抗。结论:Ipt可拮抗H2 O2 介导的细胞损伤作用,该保护作用可能与线粒体ATP敏感性钾通道相关。     

KATP开放剂埃他卡林对高K+刺激PC12细胞释放谷氨酸的影响

目的：研究KATP开放剂埃他卡林（iptkalim,IPT)对高K^ 刺激PC12释放谷氨酸（Glu)的影响及其作用机制。方法：以培养的PC12细胞为模型细胞，应用HPLC法测定细胞培养液中Glu含量。结果：IPT以浓度依赖方式抑制高K^ 刺激PC12细胞释放Glu，格列苯脲（Gli)增强高K^ 刺激PC12细胞释放Glu的效应，并部分逆转IPT的抑制效应，PKC抑制剂HA-100和钙调素（CaM)拮抗剂三氟拉嗪不影响高K^ 刺激PC12细胞释放Glu，也不拮抗Gli的增强效应。结论：IPT抑制Glu释放与开放KATP有关，Gli拮抗IPT的抑制效应并非由PKC或CaM信号传导途径介导。     

蒺藜皂苷对PC12细胞凋亡的保护作用及机制

目的探讨蒺藜皂苷(gross saponin tribulus terrestris,GSTT)对过氧化氢(H2O2)诱导的大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞(pheochromocytoma cells,PC12)凋亡的保护作用及其机制。方法PC12细胞分为对照组、模型组及蒺藜皂苷高(GSTT1)、低(GSTT2)剂量组。用H2O2刺激PC12细胞使其发生凋亡,MTT法检测PC12细胞活性,倒置相差显微镜观察细胞形态,Hoechst 33258荧光核染色,流式细胞仪检测PC12细胞亚二倍体峰比率及Western blot方法检测与凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax。结果与模型组比较蒺藜皂苷组随着剂量的增加PC12细胞存活率提高(P<0.01),凋亡细胞减少,凋亡比率下降(P<0.01),Bcl-2表达增加(P<0.05),而Bax的表达降低(P<0.05)。结论蒺藜皂苷可抑制H2O2诱导的PC12细胞凋亡,其机制可能与抑制线粒体途径的细胞凋亡及影响凋亡相关蛋白的表达有关。     

银杏内酯对NaCN及缺糖引起的PC12细胞凋亡的保护作用

利用ＭａＣＮ及缺糖引起的ＰＣ１２细胞的损伤模型,研究了银杏内酯（ｇｉｎｋｇｏｌｉｄｅｓ）对神经细胞损伤的保护作用。结果表明,该药物对ＰＣ１２细胞损伤有显著的改善作用并能显著降低凋亡细胞比率。提示银杏提取物（ＥＧｂ）中银杏内酯在对神经系统的保护机制中起重要作用。     

活性多肽GRGDS对氧糖剥夺诱导PC12细胞损伤的保护作用及其机制研究

目的 研究活性多肽GRGDS对氧糖剥夺(OGD)损伤模型中大鼠神经细胞(PC12细胞)的保护作用,并探讨其作用机制.方法 将PC12细胞分成对照组、ODG组、活性多肽GRGDS治疗组,通过氧糖剥夺模拟体外脑缺血建立损伤模型.用噻唑蓝(MTT)比色法和流式细胞仪检测氧糖剥夺后细胞凋亡情况,酶联免疫吸附试验法(ELISA)...     

梓醇对缺糖缺氧诱导PC12细胞损伤的保护作用研究

目的探讨梓醇对抗缺糖缺氧诱导的PCI2细胞损伤作用。方法梓醇预处理PCI2细胞,加入含连二亚硫酸钠的无糖Earle’s液制备损伤模型,检测细胞存活率,乳酸脱氢酶、超氧化物歧化酶、谷胱甘肽过氧化物酶、丙二醛水平,检测细胞内游离Ca2＋浓度。结果与模型组比较,梓醇可剂量依赖性的提高细胞存活率（P〈0．01）,减少乳酸脱氢酶漏出率（P〈0．05或〈0．01）,提高超氧化物歧化酶、谷胱甘肽过氧化物酶活性,拮抗丙二醛水平升高,降低细胞内游离Ca2＋浓度（P〈0．05或〈0．01）。结论梓醇对缺糖缺氧诱导的PCI2细胞损伤具有保护作用,作用机制可能与其清除自由基和抑制钙超载有关。     

Stevioside enhances apoptosis induced by serum deprivation in PC12 cells

In the laboratory, using a PC12 cell system, studies have been conducted on the effects of various chemicals on apoptosis, as it is considered to be an essential part of normal development, maintenance, and defense in organisms. Stevioside is a natural sweetener extracted from the leaves of Stevia rebaudiana. Since it is widely used as a sugar replacement, it was decided to evaluate the toxicological effects of low concentrations of stevioside on apoptosis induced by serum deprivation using the PC12 cell system. It was found that based on data from DNA electrophoresis and TUNEL signal assays stevioside enhanced apoptosis induced by serum deprivation. This enhancement was caused by increased expression of Bax and of cytochrome c released into the cytosol. These findings suggest that stevioside affects the regulation of the normal apoptotic condition. Further investigation will be needed to clarify the detailed mechanism of the enhancement due to the treatment with stevioside.     

Effects of scutellarin on PKCγ in PC12 cell injury induced by oxygen and glucose deprivation

Aim： To evaluate the neuroprotective effect and mechanisms of scutellarin （Scu） against PC12 cell injury after oxygen and glucose deprivation followed by reperfusion （OGD-Rep）. Methods： Undifferentiated rat pheochromocytoma PC12 cells, exposed to oxygen and glucose deprivation followed by reperfusion （OGD- Rep）, used as an in vitro model of ischemia/reperfusion. Cell survival was evaluated by diphenyltetrazolium bromide （MTT） assay and the amount of LDH release was determined using assay kits. [Ca^2＋]i was monitored using a fluorescent Ca^2＋ - sensitive dye Fura-2 acetoxymethyl ester. Cell apoptosis was detected by a DNA ladder and by flow cytometric detection. The expression of protein kinase C （PKC）T was determined usiiag both RT-PCR and Western blotting. The translocation of PKCT was assayed by subcellular fractionation and Western blotting. Results： OGD-Rep injury significantly elevated the level of LDH release, [Ca^2＋]i, mRNA expression and the translocation of PKCγ compared in the PC12 cells with those of the normal group. Scu （10-100 μmol/L） exerted a protective effect against OGD-Rep injury by reducing LDH release, [Ca^2＋]i, the percent of apoptosis, and the translocation of PKCγ. Conclusion： Scu inhibits the increase of [Ca^2＋]i and the activation of PKCγ, exerting protective effects against PC12 cell injury induced by OGD-Rep.     

大豆异黄酮活性组分对H2O2诱导的PC12细胞损伤的影响

目的:探讨大豆异黄酮活性组分对H2 O2 诱导的PC12细胞损伤的保护作用。方法:以H2 O2 损伤PC12细胞为氧化应激损伤的模型,采用光学显微镜观察细胞形态,MTT法判断细胞的存活率,LDH法检测细胞的损伤程度。结果:不同浓度大豆异黄酮能明显改善H2 O2 导致的细胞甲瓒减少,大豆异黄酮处理组细胞存活率明显高于H2 O2 处理组(P <0 .0 1) ;而LDH漏出率则明显低于H2 O2 处理组(P <0 .0 5 )。结论:大豆异黄酮活性组分对H2 O2 诱导的PC12细胞损伤具有保护作用。     

Mechanism of apoptosis induced by copper in PC12 cells

Copper, an essential trace element, induces apoptosis in mammalian cells. However, the precise mechanism of copper-induced apoptosis is still unclear. In this study, to determine the apoptotic pathway initiated by copper treatment, apoptotic factors such as Bax, Bad and Bcl-2, and the caspase family in PC12 cells treated with copper were measured by Western blot and RT-PCR analyses. The expression of Bax, Bad, cytochrome c and caspases 3 and 9 were increased by copper treatment. From these results, two pathways for copper-induced apoptosis were suggested. At first, an increase of Bax induces the release of cytochrome c from the mitochondria into the cytoplasm owing to binding to apoptotic activating caspase 9 leading to the activation of caspases 3. In the other pathway an increase of Bax and reactive oxygen species activates the release of AIF from the mitochondria. The AIF induces apoptosis via a caspase-independent pathway.     

黄芩素对过氧化氢致PC12细胞损伤的保护作用研究

目的:研究黄芩素(BAI)对过氧化氢(H2O2)损伤的神经细胞的保护作用。方法:用体外细胞培养法,预先孵育24h,以500μmol·L-1H2O2复制大鼠肾上腺髓质嗜铬瘤分化细胞株(PC12)不可逆氧化损伤模型,观察BAI对其影响,并在损伤时分为移除药物和不移除药物2种情况进行分析;通过MTT微量比色法测定细胞活度,并测定培养液中乳酸脱氢酶(LDH)的含量。结果:预先给予BAI作用24h后,在造模时不论是否移除药物,BAI对损伤细胞均有显著的保护作用,尤以不移除药物的效果更为显著。镜下观察,BAI组细胞形态出现一定程度上的边缘模糊,单个细胞体积变大,有少许细胞融合的状态发生;MTT法测定细胞活度升高,培养液中LDH含量降低,与模型组比较差异显著。结论:BAI能显著减轻PC12细胞损伤,其作用机制可能在氧化-抗氧化环节,与BAI能够减轻呼吸链阻断造成的自由基堆积、抗氧化和清除自由基的能力有关。     

蝙蝠葛苏林碱对PC12细胞内游离钙浓度的影响

目的进一步探讨蝙蝠葛苏林碱（Dau）的抗脑缺血／缺氧损伤与其钙拮抗作用间的关系。方法：培养的PC12细胞用Fura－2／AM负载，用AR－CM－MIC阳离子测定系统观测Dau对单细胞内游离钙（[Ca(2+)]_i）升高的影响。结果：Dau（0．1～100μmol·L(－1)）可浓度依赖性抑制高钾和caffeine引起的[Ca(2+)］_i增加，对肌浆网钙泵抑制剂cy－clopiszonicacid引起的[Ca(2+)]_i升高也有抑制作用。结论：Dau不仅抑制电压依赖性钙通道开放引起的细胞外钙内流和caffeine引起的内钙释放．而且对钙泵也可能有影响，这可能是其抗脑缺血／缺氧损伤的重要机制。