烫伤延迟复苏大鼠组织白细胞介素18mRNA表达的变化

目的 探讨烫伤延迟复苏后不同组织白细胞介素18（IL－18）mRNA的动态表达规律。方法 采用大鼠TBSAⅢ度烫伤延迟复苏模型,54只大鼠随机分为正常对照组、烫伤延迟复苏组、选择性消化道脱污染（SDD）预防组,分别在伤前及伤后2、8、16、24h,采用逆转录聚合酶链式反应,检测肠、肺、肝、肾等组织IL－18 mRNA含量。结果 烫伤延迟复苏后体循环内毒素水平显升高,8、24h达高峰（P＜0．01）,给予SDD预防治疗可显降低内毒素峰值（P＜0．05）;另一方面,烫伤后2h,肺、肝、肾等组织IL－18 mRNA含量表达较伤前值有显升高,烫伤后8h达高峰（P＜0．01）,且一直持续至伤后24h,给予SDD预防后可不同程度抑制IL－18 mRNA的表达（P＜0．05－0．01）。相关分析显示,体循环内毒素水平同肠、肺、肝组织IL－18 mRNA呈显正相关（r值分别为0．298、0．290、0．365,P＜0．05－0．01）。结论 肠、肺、肝、肾等组织IL－18 mRNA表达在烫伤早期即显增多,并呈逐渐升高的趋势,创伤后内毒素血症对机体多种组织IL－18 mRNA基因表达具有重要影响。     

烫伤大鼠组织肿瘤坏死因子mRNA表达与内毒素血症的关系

目的探讨烫伤后不同组织肿瘤坏死因子(TNF-α)mRNA 的动态表达及其与内毒素血症的关系。方法采用大鼠35%体表面积Ⅲ度烫伤模型,实验动物随机分为正常对照组、烫伤组、多粘菌素 B 治疗组。血浆内毒素水平采用改良过氯酸预处理血浆偶氮显色法鲎试验定量测定;组织 TNF-α mRNA 含量采用逆转录聚合酶链反应检测。结果烫伤后门静脉及体循环内毒素水平均显著升高,8h 达高峰,24h 则逐渐下降。给予低剂量多粘菌素 B 治疗可显著降低门静脉内毒素峰值(P<0.05)。另一方面,烫伤后2h 肺、肝、肠、肾等组织 TNF-α mRNA 表达较伤前值即有显著升高(P<0.05～0.01),烫伤后8h 达高峰,约为伤前值的1.7～2.6倍,且一直持续至伤后24h。给予多枯菌素 B 抗内毒素治疗后可不同程度抑制 TNF-α mRNA 的表达(P<0.05～0.01)。相关分析显示,门静脉内毒素水平同肺、肠、肾组织 TNF-α mRNA 呈显著正相关关系(r 值分别为0.365,0.381,0.484,P<0.05),但与肝组织无显著相关。结论肺、肝、肠、肾等组织 TNF-α mRNA 表达在烫伤早期即显著增多,并呈一逐渐升高的趋势。创伤后内毒素血症对机体多种组织 TNF-α基因表达具有重要影响。     

重组腺病毒对烫伤大鼠肝组织核因子—kB活性的调控

目的 探索腺病毒介导IkBα基因对烫伤大鼠肝组织核转录因子NF－kB活性的调控作用。方法 应用重组缺陷型腺病毒载体（AdIkBα)预处理大鼠，烫伤后不同时相点取肝组织，提取组织核蛋白，与r^-32PATP标记的NF－kB特异性探针共同反应，利用凝胶电泳迁移率改变分析方法（EMSA）检测NF－kB/DNA结合性；提取肝组织总RNA，用RT－PCR法检测IL－1β,TNFα mRNA的表达。结果 与正常对照组相比，烫伤组致伤后0．5hNF-kB/DNA结合活性显增强，致伤后24h，仍保持较强结合活性。AdIkBα预处理组，大鼠NF－kB/DNA结合活性略高于正常，但显低于烫伤组。RT－PCR分析，大鼠烫伤后0．5h与对照组相比，IL－1β，TNFα表达显升高，持续致伤后24h;AdIkBα预处理组，IL－β和TNFα表达显低于烫伤组。结论 大鼠严重烫伤后，肝组织细胞内NF－kB迅速活化，IL－1β和TNFα的表达随之显增强，经AdIkBα预处理能显抑制大鼠严重烫伤后肝组织NF－kB的活化，并下调IL－1β、TNFα的表达。     

肠源性内毒素血症对组织脂多糖结合蛋白mRNA表达的影响

目的探讨烫伤后肠源性内毒素血症对不同组织脂多糖结合蛋白(LBP)mRNA表达的影响。方法采用大鼠35％体表面积Ⅲ度烫伤模型,观察门、体循环内毒素含量及肝、肺、肠、肾等组织LBP mRNA表达的改变。结果烫伤后血浆内毒素水平(门、体循环均值分别为0.707EU/ml与0.342EU/ml)及细菌移位率(37.1％)较伤前值均有显著升高(P<0.01)。同时,肝、肺、肠、肾等组织LBP mRNA表达亦显著增多(P<0.01)。给予杀菌/通透性增加蛋白(BPI)治疗后可明显降低门、体循环血浆内毒素水平及肺、肠、肾等组织LBP mRNA表达(P<0.05～0.01),其中以肠道改变最为显著(治疗组与烫伤组均值分别为0.990与1.729,P<0.01)。相关分析显示,肺组织LBP mRNA表达与血浆内毒素水平呈显著正相关(r=0.594,P<0.05)。结论创伤后肠源性内毒素血症可显著影响不同组织LBP mRNA的表达,LBP mRNA在局部组织表达增多可能与增敏内毒素血症的组织器官损伤有关。     

烫伤后脂多糖受体CD14和肿瘤坏死因子-α基因表达的变化规律

目的 观察烫伤后机体主要脏器脂多糖受体ＣＤ１４（ＣＤ１４）和肿瘤坏死因子－α（ＴＮＦ－α）ｍＲＮＡ的表达的变化规律及二者的相互关系。方法 采用大鼠３５％Ⅲ度烫伤模型,分别于伤前,伤后１２,２４,４８,７２小时活杀动物,留取组织标本或分离腹腔巨噬细胞,检测组织或巨噬细胞ＣＤ１４,ＴＮＦ－αｍＲＮＡ表达。结果 烫伤后肝,肺,肾,肠等组织ＣＤ１４ｍＲＮＡ水平均有不同程度增高,分别于伤后１２小时和４８小时     

严重烫伤后高迁移率族蛋白-1基因表达的改变及意义

目的　观察烫伤后肝、肺组织高迁移率族蛋白-1（HMG-1）mRNA表达的变化规律及其与器官功能损害的关系。　方法　采用大鼠35%Ⅲ度烫伤模型,动物随机分为正常对照组、烫伤组和重组杀菌/通透性增加蛋白(rBPI21)治疗组,留取组织和血标本分别检测组织内毒素含量、HMG-1mRNA表达及器官功能指标。　结果　严重烫伤后早期肝、肺组织HMG-1基因表达改变不明显（正常对照组肝组织0.202±0.097;肺组织0.263±0.091）,伤后24h则明显增多(肝组织0.487±0.189;肺组织0.513±0.069,P＜0.05,0.01),且一直持续至伤后72h(肝组织0.687±0.142;肺组织0.520±0.076,P＜0.01)。给予rBPI21治疗可有效抑制肝和肺中内毒素水平的升高,并显著抑制肝、肺组织HMG-1mRNA水平(P＜0.01)。相关分析结果显示,肝组织HMG-1mRNA表达与血清谷丙转氨酶、谷草转氨酶水平、肺组织HMG-1mRNA表达与髓过氧化物酶活性呈显著正相关（P＜0.05,0.01）。　结论　严重烫伤后肝、肺组织HMG-1表达显著增多,且持续时间较长,局部组织HMG-1诱生与烧伤后内毒素介导的重要器官功能损害关系密切。     

肿瘤坏死因子—α单抗对烫伤大鼠组织脂多糖结合蛋白mRNA表达 …

探讨肿瘤坏死因子－α单抗治疗对烫伤后组织ＴＮＦ－α及脂多糖结合蛋白ｍＲＮＡ表达、不同器官功能改变的影响。方法采用大鼠３５％体表面积Ⅲ度烫伤模型,检测伤后肺,肝,肠肾等组织ＴＮＦ－α及ＬＢＰｍＲＮＡ水平。结果烫伤后肺,肝,肠,肾等组织ＴＮＦ－α及ＬＢＰＭｒｎａ表达前水平均有显著升高,约为正常对照地１．７－２．５倍。     

高迁移率族-1 蛋白在烫伤后金葡菌脓毒症中的改变与意义

目的 探讨高迁移率族－1（HMG－1）蛋白在烫伤后金黄色葡萄球菌（简称金葡菌)脓毒症中的变化规律及其调控机制。方法 采用大鼠20％体表面积Ⅲ度烫伤复合金葡菌攻击所致脓毒症模型。70只动物随机分为正常对照组（n=10）、烫伤对照组（n＝10）和烫伤后金葡菌感染组（n＝50）,留取肝、肺组织检测HMG－1及脂多糖结合蛋白（LBP）mRNA表达 ,同时测定组织中金葡菌肠毒素B（SEB）和内毒素含量。结果 烫伤后金葡菌感染可导致动物肝、肺组织HMG－1基因表达明显升高,于伤后6－12h达峰值（P＜0．05－0．01）,至24h仍持续于较高水平。相关分析显示,肝、肺组织LBP基因表达与相应脏器HMG－1mRNA表达呈显著正相关（分别为r＝0．800,P＝0．031和r＝0．942,P＝0．002）,但内毒素与之无明显相关性。结论 烫伤后金葡菌感染可导致动物体内HMG－1基因表达上调,后者作为“晚期炎症介质”可能参与了脓毒症的发病过程。     

神农33对急性肺损伤大鼠白介素—1β因素表达的影响

目的：观察白介素－1β（IL－1β）在内毒素（LPS）所致急性肺损伤（ALI）发病过程中的作用及神农33（SN33）注射液对ALI大鼠的保护作用。方法：Wistar大鼠尾静脉注射LPS,建立ALI模型。分别采用ELISA和Northern Blotting方法检测不同时相血清中IL－1β含量及肺组织IL－1βmRNA水平的变化;同时以地塞米松为对照,观察SN33对IL－1β基因表达的影响。光镜、电镜观察大鼠肺病理形态学变化。结果：LPS诱发大鼠ALI过程中血清IL－1β水平显著高于正常对照组（P＜0．01）,峰值为LPS攻击后2h;肺组织IL－1βmRNA表达明显增高,峰值为LPS攻击后1h;以SN33保护的大鼠,IL－1β和mRNA表达均明显低于相应时相LPS攻击组;且肺损伤程度减轻,结论：IL－1β在LPS诱导的ALI过程中起着重要作用;SN33注射液可以抑制IL－1β的释放和表达,对肺脏有一定的保护作用。     

烫伤合并金葡菌感染大鼠组织CD14 mRNA的改变

目的　探讨细菌脂多糖受体CD14在烫伤合并金黄色葡萄球菌 (金葡菌 )感染中的变化规律及其意义。　方法　采用大鼠 2 0 %总体表面积Ⅲ度烫伤合并金葡菌攻击造成脓毒症模型 ,动态检测心、肝、肺、肾等重要器官中CD14mRNA表达的改变 ,同时观察内毒素在动物循环及主要脏器内的分布特点。　结果　烫伤合并金葡菌脓毒症早期 ,各脏器内毒素含量即明显高于正常对照组 ,并于2～ 6h达峰值 ,其中以肝、肺组织内毒素水平升高幅度最为显著 (P <0 .0 5 )。而血浆内毒素水平亦于伤后 2h显著高于正常对照组 (分别为 0 .30 5 6EU/ml和 0 .12 5 0EU/ml,P <0 .0 5 )。与此同时 ,小肠组织中二胺氧化酶的活性明显降低 (P <0 .0 5 )。烫伤合并金葡菌感染后 ,各组织CD14mRNA的表达亦呈不同程度升高 (P <0 .0 5 ) ,其中肺脏改变尤为显著 ,伤后 6、2 4h肺脏CD14mRNA表达分别为正常对照组的 1.80和 1.81倍。　结论　烫伤合并金葡菌攻击可导致内毒素移位和组织CD14mR NA表达不同程度升高 ,CD14基因表达的上调可能与移位内毒素的刺激作用有关。     

Selective decontamination of the digestive tract in severely burned pediatric patients.

Infection is still one of the leading causes of morbidity and mortality in severely burned patients. Evidence suggests that many of the responsible organisms are endogenous. Systemic antibiotic prophylaxis is not effective, and produces resistant strains of microorganisms. SDD has been postulated to be beneficial for controlling and decreasing infections in critically ill patients. Its efficacy in severely burned patients, however, remains controversial. In order to analyze the efficacy of selective decontamination of the digestive (SDD) tract, to decrease the bacterial colonization of the aerodigestive tract and burn wounds, and the incidence of septic complications in severely burned children, 23 pediatric patients affected of severe burns were prospectively randomized in a double-blinded study. Eleven patients received SDD (Polymyxin E, Tobramycin, and Amphotericin B), and 12 placebo. Demographics, hospital course, microbiology results, complications, infectious episodes, and serum levels of IL-1beta, IL-6, IL-10, and TNF-alpha were compared to determine the efficacy of SDD. Colonization rates to the wound, sputum, nasogastric aspirates, and feces were similar. Pneumonia, sepsis and other complications had similar incidence in both groups. Serum levels of all cytokines studied were also comparable, suggesting a similar inflammatory status in all patients, regardless of the treatment received. Patients in the SDD group, however, had a significantly higher incidence of diarrhea (P=0.003). We can conclude that selective decontamination of the digestive tract with Polymixin E, Tobramycin and Amphotericin B is not effective to decrease bacterial colonization and infectious episodes in severely burned pediatric patients.     

烫伤大鼠细胞免疫抑制与肠源性内毒素血症的关系

采用大鼠４０％ＴＢＳＡⅢ度烫伤模型，将动物随机分烫伤对照组和选择性消脱污染防治组，探讨烫伤大鼠全身性细胞免疫抑制与肠源性内毒素血症的关系。结果显示，大鼠４０％Ⅲ度烫伤后脾细胞对促有丝分裂原增殖应答反应、诱生白介素－２（ＩＬ－２）活性及Ｔ细胞亚群（Ｔｈ／Ｔｓ）比值明显下降，预防性进行ＳＯＤ动物，内毒素血症发生率显著降低，脾细胞增殖应答反应和ＩＬ－２活性的诱生能力均明显恢复（Ｐ〈０．０５￣０．０１），     

Selective decontamination of the digestive tract: a stratified, randomized, prospective study in a mixed intensive care unit.

To evaluate the use of selective decontamination of the digestive tract (SDD) (polymyxin, amphotericin, tobramycin, and intravenous cefotaxime) in a mixed intensive care unit, we performed a stratified, randomized, prospective study. The 331 patients were recruited over an 18-month period, with 256 patients remaining more than 48 hours. Stratification by acute physiology and chronic health evaluation (APACHE II) preceded randomization to control (standard antibiotic therapy) or treatment (SDD) groups. Nosocomial infection was significantly reduced in the SDD group (16.7%; 21 of 126 patients) compared with the control group (30.8%; 40 of 130 patients; p = 0.008). No difference was found in overall mortality rate or length of stay between the two groups. Those patients with admission APACHE II scores 10 to 19 demonstrated the most significant reduction in nosocomial infection (23 of 70 control vs 13 of 76 SDD; p = 0.03) and mortality (15 of 70 control vs 8 of 76 SDD; p = 0.07). Emergence of multiresistant microorganisms was not a clinical problem, but a definite change occurred in the ecology of environmental and colonizing bacteria. With the exception of cefotaxime, a reduction was noted in systemic antibiotic usage in the SDD group. We conclude that SDD is useful in selected patients in a mixed intensive care unit.     

同种异基因组织工程骨修复骨缺损IFN -γ和IL -10的表达

[目的]通过检测同种异基因组织工程骨(tissue engineering bone,TEB)修复骨缺损血清IFN -γ、IL - 10水平和脾内IFN-γmRNA、IL-10mRNA的表达,探讨同种异基因TEB的免疫原性.[方法]Ficoll - Hypaque梯度密度离心法分离出成年兔骨髓间充质干细胞(MSCs),培养扩增.取第3代细胞,化学法诱导成成骨细胞(ODC).将ODC按1×109/L密度接种至羟基磷灰石/磷酸三钙(HA/TCP),共同培养,构建TEB.动物随机分三组(TEB,HA/TCP组,自体骨组),每组24只,人为造成兔左桡骨处1.0 cm左右长创伤性骨缺损,植入TEB、HA/TCP、自体骨.观察伤口愈合情况;于术后第4、10 d、6周,麻醉下取下腔静脉血ELISA法测血清IFN -γ、IL - 10水平;取脾行HE染色观察;RT- PCR测IFN -γ、IL - 10 mRNA表达.[结果]各组动物IL - 10、IL - 10 mRNA比IFN -γ和IFN-γ mRNA高,其中TEB组IFN -γ和IFN -γ mRNA较其他两组稍高,IL - 10和IL - 10 mRNA较其他两组稍低,IFN -γ、IL - 10水平和IFN - γmRNA、IL - 10 mRNA表达同组前后比较有统计学差异(P＜0.05),组间比较没有差异(P＞0.05).[结论]由同种异基因MSCs诱导而成的ODC与HA/TCP构建的TEB免疫原性极低,可以用于修复骨缺损.     

Th1/Th17细胞在肺部感染中的作用

目的：观察Th1、Th17型细胞因子在肺部感染性疾病中的动态变化,深入探讨机体抵抗肺部感染的免疫机制,为肺部感染性疾病的特异性诊治提供实验依据。方法：收集临床肺部感染患者血清、外周血淋巴细胞样本,分别用ELISA方法检测血清中Th1型细胞因子（IFN-γ）及Th17型细胞因子白细胞介素-17（IL-17）的表达水平,用FACS检测外周血中CD4＋IFN-γ＋Th1及CD4＋IL-17＋Th17细胞的比例变化,同时用Realtime-PCR方法检测外周血中Th17型细胞因子IL-17在基因水平的表达变化。以上指标的检测均以临床公认的CRP水平的变化作为参考。结果：ELISA结果显示,肺部感染患者血清IFN-γ的水平较健康对照组显著升高,动态检测结果显示IFN-γ变化水平与反映临床疾病状态的CRP出现显著的相关性。而IL-17的表达在不同的疾病过程未出现显著的变化。FACS及Real-time-PCR结果均显示CD4＋IFN-γ＋Th1的活性变化与疾病状态相关,而CD4＋IL-17＋Th17细胞在肺部感染不同阶段未出现显著的变化。结论：相对于Th17细胞而言,Th1细胞在机体防御肺部感染的过程中发挥更为关键的作用。Th17细胞在该类感染性疾病中的作用尚需进一步探讨。     

重组人肿瘤坏死因子治疗急性出血坏死性胰腺炎的实验研究

本研究采用重组人肿瘤坏死因子(rhTNF)腹腔注射和选择性肠道清洁加小剂量多粘菌素B皮下注射二种不同方法治疗大鼠实验性急性出血坏死性胰腺炎(AHNP)。结果显示外源性肿瘤坏死因子能有效地降低AHNP动物死亡率,其机理可能是诱导机体对内源性肿瘤坏死因子产生耐受。选择性肠道清洁加小剂量多粘菌素B皮下注射能抑制肠道G_-杆菌,最大限度地减小肠道游离内毒素来源,并能依靠多粘菌素B直接对抗内毒素,降低血中内毒素和肿瘤坏死因子水平,对AHNP亦有一定治疗作用。     

Treatment outcome of selective digestive decontamination and enteral nutrition in patients with severe acute pancreatitis

Background/Purpose Sepsis due to infected pancreatic necrosis is the most serious complication in the late phase of severe acute pancreatitis (SAP). Bacterial translocation from the gut is thought to be the main cause of pancreatic infection. The possibility has recently been reported that selective digestive decontamination (SDD) and enteral nutrition (EN) may alleviate the complications and reduce the mortality rate in patients with SAP. We analyzed the treatment outcome of SDD and EN in patients with SAP. Methods We divided 90 patients with SAP into three groups: SDD(−)EN(−),group A; SDD(+)EN(−), group B; and SDD(+)EN(+), group C. Clinical outcome was analyzed retrospectively. The effect of SDD was compared in groups A and B, and the effect of EN was compared in groups B and C. Results The background of patients was not significantly different between the groups. SDD reduced the incidence of organ dysfunction (from 70% to 59%) and the mortality rate (from 40% to 28%), but the differences were not significant. EN reduced the incidence of infected pancreatic necrosis (from 31% to 24%) and the frequency of surgery for pancreas (from 28% to 18%), and further reduced the mortality rate (from 28% for SDD to 16%), but the differences were not significant. The peripheral lymphocyte count was significantly increased in patients with EN. Conclusions SDD and EN did not significantly affect the treatment outcome in SAP. However, the results in this study raise the possibility that SDD and EN may decrease the complications and reduce the mortality rate in SAP. The efficacy of SDD and EN for SAP should be evaluated in a randomized controlled trial.     

RNA干扰抑制大鼠T淋巴细胞CD28基因表达的实验研究

目的：探讨RNA干扰（RNAi）后对大鼠T淋巴细胞共刺激分子CD28基因的表达及其对细胞功能的影响。方法：设计针对目标基因的小干扰RNA（siRNA）,转染大鼠T淋巴细胞。以FCAS检测CD28水平,MTT检测转染后T淋巴细胞对异体淋巴细胞增殖能力的影响。Reahime-PCR及ELISA法检测细胞因子水平。结果：siRNA转染大鼠T淋巴细胞后可抑制CD28的表达,T细胞增殖能力、IL-2、IFN-γ平明显低于空白对照组（P〈O．05）。结论：siRNA可特异性抑制大鼠T淋巴细胞共刺激分子CD28的表达,降低大鼠T细胞的增殖能力,抑制IL-2、IFN-γ细胞因子的基因水平表达和分泌水平．从而产生免疫耐受效应,为器官移植免疫研究提供实验依据。     

选择性肠道脱污染预防急性坏死性胰腺炎继发感染的实验研究

目的　通过急性坏死性胰腺炎(ANP)动物模型,探讨选择性消化道脱污染(SDD)预防胰腺继发感染的作用。方法　Wistar大鼠60只,向总胆胰管逆行输入人工胆汁复制ANP模型,随机设立正常对照组、假手术对照组、ANP组和SDD治疗组,观察胰肠组织学、胰淀粉酶、肠道菌群、脏器细菌移位率和死亡率的变化。结果　SDD使ANP动物胰腺和小肠粘膜病理改变减轻,胰淀粉酶水平下降(P＜0.05),并使ANP时肠道菌群的紊乱状态得以恢复,肠粘膜和肠内容物双歧杆菌/大肠杆菌比值(B/E)分别由-0.37±0.72升至1.73±1.23(P＜0.01)和由0.88±0.77升至无穷大。SDD组72h脏器细菌移位率由59.5%降至33.3%(P＜0.05),72h死亡率由58.8%降至14.3%(P=0.005)。结论　SDD通过减轻肠道菌群紊乱状态,减少细菌移位,有利于预防ANP继发感染。