胎儿血红蛋白用于分选孕妇外周血中胎儿有核红细胞的研究

目的研究胎儿血红蛋白(HbF)对单个核细胞的标记情况,并用于孕妇外周血中胎儿有核红细胞(NRBCs)的分选,同时探讨NRBCs的比例与孕周的关系。方法2003-10-2004-04深圳市人民医院选用胎儿特异性抗体HbF对90例正常孕妇外周血、15例未孕妇女和15例胎儿脐血单个核细胞进行标记,并结合流式细胞技术(FACS)对胎儿有核红细胞进行分选。结果孕8~41周的孕妇外周血中HbF阳性标记率为(4·62±3·42)%,与未孕组及胎儿脐血组比较,差异均有极显著性意义(P<0·01)。经流式细胞仪分选出的孕妇外周血中的胎儿NRBCs数在孕12~18周、19~23周最高,分别为412·4±135·5和454·2±153·4。结论早、中、晚期孕妇外周血中均存在胎儿有核红细胞,单抗HbF可以有效地进行识别,利用该细胞进行无创伤性产前诊断的最佳时间宜在妊娠12~23周左右。     

孕妇外周血中胎儿细胞及胎儿DNA的检测

目的　建立从孕妇外周血中分离有核红细胞 (NRBC)及DNA的可靠方法 ,并鉴定其来源。方法　对88例孕妇外周血分别通过密度梯度离心法 ,流式细胞术 (FCM )和荧光激活细胞分离技术 (FACS)分离NRBCs。应用套式PCR技术对 6 5例孕妇血浆DNA进行正常男性SRY基因检测。结果　①NRBCs:2 7例样品经密度梯度离心 ,其中 14例分选到 1～ 10个NRBCs。FACS技术对 6 1例样品进行转铁蛋白受体阳性细胞 (CD71+ )分选 ,所有样品均有CD71+ 细胞 ,其浓度为 (0 35± 0 2 5 )× 10 -2 。②胎儿DNA :4 6例怀男胎孕妇血浆DNA中SRY基因检测出率为 6 5 2 2 % (30 / 4 6 ) ,怀女胎的 19例样品SRY基因未检出率为 94 74 % (18/ 19)。结论　从孕妇外周血中分选胎儿NRBCs和血浆中胎儿DNA的方法已取得较大进展。利用母血中胎儿细胞及DNA诊断遗传性疾病可望成为最佳非创伤性产前诊断技术     

孕妇外周血中胎儿有核红细胞的富集纯化及在产前诊断中的应用

孕妇外周血中的胎儿细胞主要有三种:滋养叶细胞、有核红细胞和淋巴细胞。最适于富集纯化用于产前诊断的是胎儿有核红细胞。密度梯度离心富集结合胎儿有核红细胞特异性抗原标记CD71,γ珠蛋白阳性选择和白细胞抗原CD45阴性选择纯化是目前从孕妇外周血中分离胎儿有核红细胞的理想方法。已用于产前诊断胎儿性别和一些疾病。     

应用磁珠细胞分离仪从母血中分离胎儿细胞的研究

目的 研究利用免疫磁珠细胞分离仪分离孕妇血中胎儿细胞的效率。方法 孕妇血采自孕龄为21－40周，初孕的孕男性单胎正常孕妇16例。脐血来自胎龄38－40周的男性新生儿10例。标本根据CD71抗体的效价标记磁珠后效在磁场中进行磁珠细胞分离。分离后的脐血标本在流式细胞仪上检测分离效率，孕妇血标本经套式PCR方法鉴定男性SRY基因片段，根据CD71－FITC抗体效价标记脐血中的单个核细胞。同时利用流式细胞仪检测和分离脐血中的胎儿细胞。结果 利用磙珠细胞分离仪分离孕妇血中的胎儿有核红细胞，经套式PCR技术寻找男性胎儿SRY基因片段，经第一次扩增有效率87.5%，第二次扩增有效率100.0%。脐血中胎儿有核红细胞在分离前占53.2%－74.9%；分离后，流式细胞仪富集为99.2%－99.8％，免疫磁珠细胞分离仪富集为99.2%－99.8%，免疫磁珠细胞分离仪富集为97.3%-99.4%。结论 免疫磁珠细胞分离仪可富集到98.3%的胎儿有核红细胞，经套式PCR技术在分离后的孕妇血中可确定100％的男性胎儿SRY基因片段，项技术简单，价廉，高效更适用于临床。     

运用流式细胞术分析孕妇外周血中胎儿有核红细胞的比例与孕周的关系

目的 :探讨母亲外周血中胎儿有核红细胞 (NRBCs)的比例与孕周的关系。方法 :分离纯化孕 11～ 34周、2 1～ 35岁的 6 1例孕妇外周血中的胎儿细胞 ,采用荧光激活细胞分离技术 (FACS)分选表达转铁蛋白受体的阳性细胞 (CD71+ 细胞 )。将孕妇组、未孕组及新生儿脐血组进行对照。结果 :孕 11～ 34周孕妇外周血中CD71+ 细胞的比例为 (0 .35± 0 .2 5 )× 10 -2 ,与未孕组及新生儿脐血组差异均有高度显著性 (P <0 .0 1)。CD71+ 细胞在外周血中的比例在孕 17、18周达峰值 ,分别为 (0 .6 4± 0 .2 5 )× 10 -2 和 (0 .5 4± 0 .35 )×10 -2 。结论 :早、中、晚期孕妇外周血中存在胎儿有核红细胞。利用母血循环中的胎儿细胞进行产前诊断的最佳时间应在妊娠 17～ 18周     

运用流式细胞技术分析孕妇外周血中胎儿有核红细胞的比例与孕周的关系

目的 :探讨母亲外周血中胎儿有核红细胞 (NRBCs)的比例与孕周的关系。方法 :对 6 1名孕龄为 11～ 34周、年龄为 2 1～ 35岁的妇女的外周血中的胎儿细胞进行分离纯化 ,采用荧光激活细胞分离技术 (FACS)分选表达转铁蛋白受体的阳性细胞 (CD71+细胞 )。将孕妇组、未孕组及新生儿脐血组进行对照。结果 :孕 11～ 34周的孕妇外周血中 CD71+细胞的比例为 (0 .35± 0 .2 5 )× 10 - 2 ,与未孕组及新生儿脐血组均有极显著性差异。CD71+细胞在外周血中的比例在孕 17～18周达峰值 ,分别为 (0 .6 4± 0 .2 5 )× 10 - 2和 (0 .5 4± 0 .35 )× 10 - 2。结论 :早、中、晚期孕妇外周血中存在胎儿有核红细胞。利用母血循环中的胎儿细胞进行产前诊断的最佳时间应在妊娠 17～ 18周     

孕妇外周血中胎儿有核红细胞的富集纯化及在产前诊断中…

孕妇外周血中的胎儿细胞主要有三种：滋养叶细胞、有核红细胞和淋巴细胞，最适于富集纯化用于产前诊断的是胎儿有核红细胞，密度梯度离心富集结合胎儿有核红细胞特异性抗原标记ＣＤ７１，γ株蛋白阳性选择和白细胞抗原ＣＤ４５阴性选择纯性是目送目前从孕妇外周血中分离胎儿有核红细胞的理想方法。已用于产前诊断胎儿性别和一些疾病。     

孕妇外周血中胎儿细胞分选法在产前诊断中应用的研究进展

在母体外周血循环中，胎儿有核红细胞是最理想的研究指标，其相应的单克隆抗体中，以血型糖蛋白Ａ（ｇｌｙｃｏｐｈｏｒｉｎＡ，ＧＰＡ）特异性最强。目前常用的分选胎儿细胞方法有流式细胞技术、磁性分离法、抗体结合柱法、显微操作分离法、细胞培养等，前两者已广泛使用。通过多聚酶链反应，荧光原位杂交技术可将所得胎儿细胞进行性别预测及染色体异常的产前诊断     

从孕妇外周血中分离胎儿有核红细胞方法学初探

从孕妇外周血中分离胎儿细胞进行无创性产前诊断成为新的研究热点,胎儿有核红细胞被认为是最理想的研究对象［１］。本研究采用简单的不连续密度梯度离心法分离富集孕妇外周血中有核红细胞,进行Ｙ染色体特异性ＤＹＺ１基因的聚合酶链反应（ＰＣＲ）扩增以预测胎儿性别,探讨胎儿有核红细胞用于无创性产前诊断的一些问题一、资料和方法　　１．研究对象孕龄６～１４周,年龄２１～３０岁的孕妇共４５例,分为细胞制片组１５例,包括早孕８例,中孕７例;胎儿性别预测组３０例,包括早孕１８例,中孕１２例。此外,以未婚、无妊娠史的２例女…     

胎儿有核红细胞与无创性产前诊断

自妊娠妇女外周血中发现并分离到XY核型的胎儿细胞以来，发现运用母体外周血中胎儿细胞可以进行无创性产前诊断，目前发现妊娠妇女外周血中的胎儿细胞有：胎儿有核红细胞（nucleated red blood cells，NRBCs）、滋养细胞、胎儿淋巴细胞和粒细胞。越来越多的研究发现，胎儿有核细胞，尤其是NRBCs以其独特的细胞学特点倍受关注，就近十年来无创性产前诊断的最佳候选细胞——胎儿NRBCs的细胞学特点、富集、分离和鉴定方法、在临床产前诊断中的应用等综述。     

检测孕妇血循环中胎儿DNA进行无创产前诊断的研究进展

孕妇血循环中胎儿DNA以两种形式存在，一是存在于进入母体血循环中的胎儿的完整细胞内，二是游离于母体血浆中。分析孕妇外周血循环中完整胎儿细胞DNA或游离DNA，是无创性产前诊断领域的一个日益引人注目的技术，这一技术可以单独使用或与其他无创性检查方法，如超声诊断、孕妇血清学分析等联合应用，使无创性产前诊断技术提高到一个新的水平。近年采用先进的磁珠细胞分选法(magnetic cell sorting，MACS)、流式细胞分选术和激光捕获显微分离(1aser capture microdissection，LCM)技术富集分离。     

密度梯度离心和免疫磁珠分选相结合分离脐血中胎儿有核红细胞

目的研究密度梯度离心和免疫磁珠分选相结合方法富集脐血中胎儿有核红细胞。方法对5例脐血首先用密度梯度离心和免疫磁珠分选依次进行胎儿有核红细胞分离,用流式细胞检测和细胞染色对分选前后细胞进行分选纯度分析。结果 1.通过流式细胞仪检测发现CD71单克隆抗体磁珠用于脐血中胎儿有核红细胞分选(CD71+,CD45-),分选后的纯度可以达到81%,而分选前CD71阳性细胞只占23.2%。2.分选前脐血涂片可见大量的成熟红细胞,含少量有核红细胞;密度梯度离心后可见绝大多数细胞为单个核细胞(淋巴细胞、单核细胞和有核红细胞),含少量红细胞;CD71单克隆抗体磁珠分选后阳性细胞多为胞浆丰富略嗜碱性的有核红细胞。结论密度梯度离心和免疫磁珠分选相结合可以有效提高脐血中胎儿有核红细胞的分选纯度。     

胎儿幼稚红细胞产前遗传学诊断的研究

目的：探讨利用早期孕妇血中胎儿幼稚红细胞，进行无创伤性胎儿染色体异常产前诊断的可行性。方法：对１３例孕早期（８～１４周）已知孕男性胎儿孕妇外周血中糖蛋白Ａ（ＧＰＡ）表达阳性的细胞，进行荧光激活细胞分离（ＦＡＣＳ）及Ｙ染色体特异的引物介导原位标记（ＰＲＩＮＳ）检测，同时在测定４１例正常孕妇孕早期（８～１４周）血清妊娠相关血浆蛋白Ａ（ＰＡＰＰ┐Ａ）作为正常参考值的基础上，对５例可疑孕Ｄｏｗｎ′ｓ综合征胚胎的高龄孕妇进行ＰＡＰＰ┐Ａ检测、ＧＰＡ阳性细胞的ＦＡＣＳ及２１号染色体ＰＲＩＮＳ检测。结果：１３例孕男性胎儿的孕妇血ＧＰＡ阳性细胞中，胎儿幼稚红细胞的平均含量达到１４．５％；５例高龄孕妇血清ＰＡＰＰ┐Ａ均在正常范围内，ＧＰＡ阳性细胞中胎儿幼稚红细胞的２１号染色体ＰＲＩＮＳ检测未见异常。结论：早期孕妇血中存在胎儿幼稚红细胞，并可利用这些细胞对胎儿染色体非整倍性异常进行产前分子┐细胞遗传学诊断。     

应用套式聚合酶链反应技术检测孕妇与胎儿巨细胞病毒 …

评价套式聚合酶链反应中限制酶分析在孕妇与胎儿人巨细胞病毒感染倘 的应用价值。方法应用ＮＴ－ＰＣＲ及限制酶分析，病毒分离，电镜观察和特异性抗体测定，对各孕期孕妇３６７例的外周血，部分孕妇脐血及死胎组织进行ＨＣＭＶ检测。     

从孕妇外周血中分离胎儿细胞进行产前诊断的研究进展

孕妇外周血中存在的微量的胎儿细胞是进行非创伤性产前诊断最理想的样本来源之一。目前常用的分选胎儿细胞方法有流式细胞术、磁激活细胞分离法等 ,其中单细胞分离法的建立是一个新的途径。利用分析胎儿细胞的遗传信息 ,可以进行遗传病的产前诊断 ,如诊断多种染色体病和基因病等     

孕妇外周血中胎儿有核红细胞的富集方法的比较

目的 从孕妇外周务右分离胎儿有核红细胞（ＮＲＢＣＳ）,并对富集的方法进行比较,搪塞利用此法进行无创性前前诊断的可行性。方法 对５７例５－４０孕周的妇女外周血分别通过单密度梯度离心、免疫细胞化学检测、以及在此基础上流式细胞术分选第三种方法,富集ＮＲＢＣＳ。结果 密度梯度离心后的２７６例样本中,１４例以１－１０个ＮＲＢＣＳ,占５１．８５％。细胞化学检测到ＣＤ７１细胞。流式细胞仪分选出包含ＮＲＢＣＳ的Ｃ     

孕妇外周血胎儿有核红细胞在产前诊断中的作用

目前对遗传性疾病的产前诊断有数种方法。根据采样途径或诊断方法是否构成对胎儿的影响可分为侵入性产前诊断和非侵入性产前诊断。前者包括羊膜腔穿刺术、绒毛细胞吸取术及胎儿脐血穿刺等，虽然诊断精确度较高，但可导致流产等并发症，只能在高危孕妇中实施；后者的优点是既能行产前诊断又无危险性，适用于低风险的孕妇大群体筛选，尽早发现和杜绝异常胎儿，达到优生目的。许多学者致力于利用胎儿细胞进行产前诊断。利用孕妇外周血的胎儿细胞进行产前基因诊断三个关键性技术为：(1)证实母血中存在胎儿细胞和DNA。(2)建立可靠稳定的方法分离胎儿细胞和DNA。(3)应用灵敏性、特异性强的技术以微量胎儿细胞和DNA为模板诊断遗传性疾病。这是最具潜力的非侵入性产前诊断方法之一。     

孕妇血浆中游离胎儿DNA测定在产前诊断中的应用

传统的羊膜腔穿刺和绒毛吸取是目前许多医院较为常用的产前诊断技术，因其操作易导致流产、胎儿损伤或死亡、宫内感染、羊膜破裂等，使其在临床上的推广和应用受到了限制。利用孕妇外周血中的胎儿细胞进行遗传学诊断一直是无创性产前诊断的重要探索途径。但由于孕妇外周血中的胎儿细胞数量少，而且存在个体差异，目前很难从外周血中分离出完整的胎儿细胞，这无疑限制了这种方法在临床上的应用。1997年，有学者研究发现，孕妇血液循环中存在较丰富的游离胎儿DNA，这一发现为无创性产前诊断和筛查开辟了新领域。     

孕妇外周血中胎儿细胞的分离、纯化及在无创性产前诊断中的应用

目前,获取胎儿细胞进行产前诊断的方法主要有羊膜腔穿刺、绒毛采取和脐静脉穿刺。这些手段对于胎儿有一定的风险性,有导致流产发生的可能。而从孕妇外周血中分离、纯化胎儿细胞用于产前诊断,则属无创性手段,不仅取材方便,易于为孕妇所接受,且风险小,不会对胎儿造成...     

母血中分离检测胎儿细胞的研究进展

进入母体血循环的胎儿细胞有4种.使用有效的方法从正常与异常妊娠母血中分离富集极少量的胎儿有核红细胞、滋养细胞、淋巴细胞和粒细胞.目前国外采用较多的有荧光激活细胞分选法、磁活化细胞分选法、免疫磁珠分离法、密度梯度离心法.分子生物学方法的引入.特别是聚合酶链反应及其衍生技术和荧光原位杂交技术提供了从母血中检测胎儿细胞敏感的方法并在无创伤性产前诊断方面得到一定的应用.