BRCA1、BRCA2和DBC2基因突变与华东地区早发性乳腺癌发病关系

目的检测华东地区早发性乳腺癌患者BRCA1、BRCA2和DBC2基因突变情况,探讨其基因多态性与早发性乳腺癌发病风险的关系。方法研究对象为40例家族史阴性的早发性乳腺癌患者（发病年龄≤40岁）,中位发病年龄37岁（24～40岁）;30名年龄匹配的健康志愿者作为对照。提取外周血DNA,对BRCA1基因第11和第24外显子、BRCA2基因第11外显子以及DBC2基因第5外显子的编码序列进行PCR扩增,通过直接测序法鉴定DNA突变位点。结果研究组和对照组均没有发现BRCA1基因第24外显子、BRCA2基因第11外显子突变。在BRCA1基因第11外显子发现exon11＋3232A〉G突变18例,其中乳腺癌患者13例（包括5例纯合性突变）,健康志愿者5例。研究组和对照组突变频率分别为32.50%（13/40）和16.67%（5/30）,两者差异没有统计学意义（P〉0.05）。研究组和对照组G等位基因携带率分别为22.50%和8.30%,两者差异具有统计学意义（P〈0.05）。在DBC2基因第5外显子发现exon5＋382C〉T突变8例,均为乳腺癌患者,突变频率为20.00%,两组差异具有统计学意义（P〈0.05）。结论BRCA1第24外显子、BRCA2第11外显子突变可能在华东地区人群中不常见,与该地区早发性乳腺癌发病风险无关。BRCA1基因exon11＋3232A〉G突变、DBC2基因exon5＋382C〉T突变,可能增加该地区早发性乳腺癌发病风险,值得今后进一步研究验证。     

宁夏地区回族女性散发性乳腺癌易感基因BRCA1/BRCA2突变的研究

摘要：目的：研究宁夏地区回族女性散发性乳腺癌中BRCA1/BRCA2基因 (breast cancer susceptibility gene 1/2)的突变位点及携带情况。 方法：收集60例回族居民乳腺癌石蜡包埋组织标本及15例乳腺小叶增生或纤维腺瘤标本。PCR和DNA直接测序法检测BRCA1基因第2、11和20号外显子和BRCA2基因第11号部分外显子突变情况。 结果：60例乳腺癌BRCA1基因有10例突变,突变率为16.7%,突变位点均位于BRCA1基因。15例对照均未检出突变且淋巴结转移与未转移组间BRCA1基因突变率差异（30.8%与5.9%）有统计学意义（P＜0.05）。 结论：BRCA1基因突变可能与宁夏回族女性乳腺癌发生相关。     

变性高效液相色谱-测序技术在检测乳腺癌BRCA1基因突变中的临床诊断价值

目的探讨变性高效液相色谱（DHPLC）-测序技术在早期检测乳腺癌BRCA1基因突变的临床意义。方法用聚合酶链反应（PCR）扩增BRCA1基因，该扩增产物经琼脂糖凝胶电泳鉴定后，直接进行DHPLC分析；有峰型改变的样本作测序分析，以确认突变。结果从124例乳腺癌患者中共发现9种突变。包括7种错义突变，其中，1例Stop598，1例A807E合并E809L，1例A807E，2例Y856H，1例T967S，2例11170F，1例R1203G；一种存在于一号内含子的突变，即IVS101—10T〉C17例；一种2号外显子的5’非翻译区突变，即A118T2例。此外，在乳腺癌标本和正常对照标本中都发现有几处常见的单核苷酸多态性位点。结论本研究确定了9种乳腺癌患者可能发生的突变类型，为今后临床应用DHPLC对高危人群BRCA1基因进行早期基因检测提供了9个位点。DHPLC一测序技术可快速、方便地区分带有碱基替换和小片段缺失的DNA片段，是一种可用于早期临床诊断乳腺癌BRCA1基因改变的高效、灵敏和操作简便的方法。     

新疆地区维吾尔族乳腺癌中职甜7基因突变及P53蛋白的表达

目的：了解新疆地区维吾尔族乳腺癌患者BRCA1基因突变及P53蛋白的表达情况。方法：选择2000-01/2004-06石河子大学医学院第一附属医院、喀什地区第一人民医院病理科收集的70例维吾尔族乳腺癌根治标本。其中维吾尔族早发性乳腺癌（≤35岁，即定为早发性乳腺癌）22例。51例患者淋巴结转移。2例为双侧乳腺癌。另选32例维吾尔族乳腺癌旁非癌组织及乳腺良性病变（纤维腺病及纤维腺瘤）作对照；上述标本为甲醛溶液固定石蜡包埋组织及少量新鲜冰冻组织。运用聚合酶链反应-单链构象多态性分析和DNA序列测定的方法检测BRCA1基因突变及用Evision二步法检测P53蛋白的表达。结果：①70例维吾尔族乳腺癌中发现9例BRCA1突变的12个新位点。②70例维吾尔族乳腺癌中BRCA1的突变率为12.86％（9／70）；其中22例维吾尔族早发性乳腺癌（≤35岁）BRCA1突变率为31.82％（7／22），高于维吾尔族晚发性乳腺癌（2／48），差异有显著性（χ^2=10．295，P〈0．01）。③2例双侧乳腺癌中均检测出BRCA1基因的突变。④70例维吾尔族乳腺癌中发现9例BRCA1基因核苷酸多态性位点。⑤BRCA1基因突变相关性乳腺癌中P53蛋白阳性表达率高于对照组，其淋巴结转移率高于对照组，其发病年龄小于对照组。结论：BRCA1基因突变与新疆维吾尔族早发性乳腺癌及双侧乳腺癌的发生密切相关，且BRCA1突变相关性乳腺癌具有P53阳性率高、发病午龄趋于年轻化、淋巴结转移率高的趋势，这些特点有可能为基因检测前的筛选提供参考依据。     

靶向高通量测序检测卵巢癌患者易感基因突变与临床特征的相关性研究

目的　探讨卵巢癌易感基因突变与临床特征的关系。方法　采用靶向高通量测序技术对35例卵巢癌患者的外周血进行BRCA1,BRCA2,CHEK2,PALB2,BRIP1,TP53,PTEN,STK11,CDH1,ATM,BARD1,MLH1,MRE11A,MSH2,MSH6,MUTYH,NBN,PMS1,PMS2,RAD50和RAD51C共21种易感基因进行测序,结合临床资料分析基因突变与卵巢癌的相关性。结果　卵巢癌患者多以高级别浆液性卵巢癌晚期为主。35例卵巢癌患者中共检出已知致病突变19例,突变率54.3%,其中BRCA1基因突变7例（20.0%）,BRCA2基因突变4例（11.4%）,RAD51C基因突变2例（5.7%）,CHEK2,ATM,RAD50,MSH2,MRE11A和TP53基因突变各1例。BRCA1/2基因突变和高级别浆液性卵巢癌相关（P=0.034）,和家族史显著相关（P=0.003）,与年龄、FIGO分期无显著相关性（P>0.05）。另外,发现两种新的基因突变,包括BRCA1基因c.438delC和RAD51C基因c.390_391delAA。结论　BRCA1和BRCA2是卵巢癌最主要的胚系突变基因,该基因突变与遗传性卵巢癌显著相关。高通量基因测序技术可有效检测卵巢癌胚系易感基因的突变情况,为卵巢癌的早期诊断和预防提供科学依据。     

新疆地区维吾尔族乳腺癌中BRCA1基因突变及P53蛋白的表达

目的:了解新疆地区维吾尔族乳腺癌患者BRCA1基因突变及P53蛋白的表达情况。方法:选择2000-01/2004-06石河子大学医学院第一附属医院、喀什地区第一人民医院病理科收集的70例维吾尔族乳腺癌根治标本。其中维吾尔族早发性乳腺癌(≤35岁,即定为早发性乳腺癌)22例。51例患者淋巴结转移。2例为双侧乳腺癌。另选32例维吾尔族乳腺癌旁非癌组织及乳腺良性病变(纤维腺病及纤维腺瘤)作对照;上述标本为甲醛溶液固定石蜡包埋组织及少量新鲜冰冻组织。运用聚合酶链反应-单链构象多态性分析和DNA序列测定的方法检测BRCA1基因突变及用Evision二步法检测P53蛋白的表达。结果:①70例维吾尔族乳腺癌中发现9例BRCA1突变的12个新位点。②70例维吾尔族乳腺癌中BRCA1的突变率为12.86%(9/70);其中22例维吾尔族早发性乳腺癌(≤35岁)BRCA1突变率为31.82%(7/22),高于维吾尔族晚发性乳腺癌(2/48),差异有显著性(χ2=10.295,P<0.01)。③2例双侧乳腺癌中均检测出BRCA1基因的突变。④70例维吾尔族乳腺癌中发现9例BRCA1基因核苷酸多态性位点。⑤BRCA1基因突变相关性乳腺癌中P53蛋白阳性表达率高于对照组,其淋巴结转移率高于对照组,其发病年龄小于对照组。结论:BRCA1基因突变与新疆维吾尔族早发性乳腺癌及双侧乳腺癌的发生密切相关,且BRCA1突变相关性乳腺癌具有P53阳性率高、发病年龄趋于年轻化、淋巴结转移率高的趋势,这些特点有可能为基因检测前的筛选提供参考依据。     

406例肺癌小活检标本中表皮生长因子受体基因的突变分析

目的探讨肺癌小活检标本中表皮生长因子受体（epidermal growth factor receptor,EGFR）基因的突变情况。方法采用蝎形探针扩增阻滞突变系统（Scorpions ARMS）检测406例肺癌小活检标本中EGFR基因第18、19、20和21外显子的突变情况。结果在406例肺癌小活检标本中,检测到190例存在EGFR突变（占46.8%）,其中80例为第19外显子框内多核苷酸缺失、88例为第21外显子L858R突变、4例为第21外显子L861Q突变、9例为第18外显子G719X突变、2例为第20外显子S768I突变、1例为第20外显子T790M突变;此外,发现6例存在双位点突变。肺腺癌EGFR突变率为55.5%（186/335）,鳞状细胞癌突变率为5.8%（3/52）,5例腺鳞癌中有1例检测到EGFR基因突变,其它类型肺癌均未检测到EGFR基因突变（0/14）。女性患者EGFR基因突变率（62.4%）明显高于男性患者（32.1%,P〈0.01）,非吸烟患者EGFR基因突变率（59.8%）明显高于吸烟患者（24.7%,P〈0.01）。结论 EGFR基因突变多见于女性、非吸烟和肺腺癌患者;Scorpions ARMS是检测活检小标本EGFR基因突变的可靠方法。     

三阴性乳腺癌患者BRCA1和BRCA2基因突变的 临床特征及预后因素

目的:探究三阴性乳腺癌患者BRCA1和BRCA2基因突变检测的临床意义及预后因素分析。方法:研究对象选取为2003年1月至2015年12月之间的三阴性乳腺癌156例,所有患者均通过PCR法和DNA序列测定检验BRCA1和BRCA2基因突变情况,分析乳腺癌患者BRCA1和BRCA2基因突变特点。应用LogR ank检验对BRC A1和/或BRC A2基因突变的三阴性乳腺癌患者的各项指标如年龄、ECOG状态、临床分期、淋巴结阳性数、月经状态和给药方式进行单因素分析。应用Cox风险比例回归模型分析患者年龄、ECOG状态、临床分期、淋巴结阳性数、肿瘤大小、月经状态和给药方式等多因素分析。结果:三阴乳腺癌患者发生基因突变21例,总体发生率13.46%,BRCA1突变15例,BRCA2突变6例。Log-Rank检验结果显示,发病年龄越大,ECOG评分越高,临床分期越晚,淋巴结阳性数越多,预后越差(P0.05),而发病时月经状态和给药方式与预后无关。COX风险比例回归模型显示,肿瘤大小(相对危险度,3.163;95%CI:1.455~9.287;P0.05)和淋巴结转移数(相对危险度,1.859;95%CI:1.254~6.875;P0.05)是BRCA基因突变三阴性乳腺癌独立的预后因素。结论:BRCA1和BRCA2基因突变可能与乳腺癌尤其是三阴乳腺癌可能有着密切的相关性,发病年龄、ECOG评分,临床分期和淋巴结阳性数及肿瘤大小与BRCA基因突变的三阴乳腺癌预后有关。     

高通量测序技术检测乳腺癌患者BRCA1、BRCA2基因的意义

目的采用高通量测序技术检测乳腺癌易感基因(BRCA)1和BRCA2,并探讨BRCA1、BRCA2在家族性乳腺癌筛查中的意义。方法选取7例女性乳腺癌患者及12名健康女性,采用高通量测序技术对BRCA1、BRCA2基因进行测序分析,用Sanger测序法验证检出的位点并对新发BRCA1基因突变位点携带者的家庭成员进行检测。结果 7例乳腺癌患者中,检测出1例致病性突变BRCA2(c.5073dupA),1例可能致病的突变BRCA1(c.3343GT)及1例临床未明意义的突变BRCA2(c.1211AT);12名健康女性中均未检测出BRCA1、BRCA2基因的可疑致病突变位点;携带BRCA1(c.3343GT)突变的家系中有2名乳腺癌患者。结论BRCA1(c.3343GT)是首次发现的遗传性乳腺癌的可能致病性变异位点,其携带者家系中乳腺癌发病率明显升高,建议对其他携带者加强随访,尽早进行手术或药物干预。     

29例汉族马凡综合征患者的FBN1基因突变分析

目的对29例汉族马凡综合征（Marfan syndrome,MFS）患者的原纤蛋白-1（fibrillin-1,FBNI）基因进行突变筛查,探讨MFS与FBN1基因突变的关系。方法提取29例患者外周血全基因组DNA,应用PCR技术对FBN1的65个外显子进行扩增,应用变性高效液相色谱（denaturing high perfommce liquid chromatography,DHPLC）对患者FBNI的65个外显子进行突变筛查,对DHPLC检测出图形异常的PCR扩增片段用DNA测序鉴定突变位点和类型。结果在12例MFS患者中发现12种FBN1突变。其中有8种为新的突变,分别为2359A〉T（S787C）、3380G〉T（G1127V）、4151T〉C（M1384T）、4244G〉A（C1415Y）、6071G〉T（C2024F）、IVS2＋1G〉T、IVS37＋5G〉A和7970C〉G＋7971delC。另外4种为已报道突变,包括3037G〉A（G1013R）、6049T〉C（C2017R）、4429G〉T（E1477X）和4930C〉T（R1644X）。结论FBN1基因突变可能是12例MFS患者的致病因素。     

原发性肝癌患者血浆循环核酸p53基因突变情况探讨

目的了解原发性肝癌患者血浆循环核酸p53基因突变情况,探讨其临床意义。方法提取57例原发性肝癌患者和40例乙型肝炎患者血浆循环核酸,应用聚合酶链反应（PCR）方法扩增p53基因5-8外显子,用单链构象多态性（SSCP）方法检测其突变情况。结果检出原发性肝癌患者p53基因突变率为40.3%,显著高于对照组乙型肝炎的5%,二者存在显著差异（χ2=15.35,P〈0.05）。结论p53基因突变可能是肝细胞癌的病因之一,聚合酶链反应-单链构象多态性方法可以作为肝癌诊断一种辅助手段,为基因治疗的开展提供依据。     

钼／铑靶片簇状微钙化诊断乳腺癌的价值

目的：探讨钼／铑靶乳腺片簇状微钙化对乳腺癌的诊断价值。材料与方法：57例乳腺癌和32例乳腺良性疾病，经手术病理证实，在其钼／铑靶乳腺片中皆见到簇状微钙化，对簇状微钙化的特征作了回顾性分析。结果：57例乳腺癌中簇状微钙化主要呈细棒状，泥沙状，针尖状和混合状。簇状分布，直径〈0．5mm，中低密度47例（82．46％），局限于一象限度46例（80．7％），沿导管分布9例（15．79％），伴有肿块37例（64．91％），微钙化数目〉20枚51例（89．47％），10-20枚6例（10．53％）。结论：乳腺片簇状微钙化的特征对诊断乳腺癌有重要价值，并有助于良恶性病变的鉴别。     

高甘油三酯血症患者脂蛋白脂肪酶基因检测意义

目的探讨脂蛋白脂肪酶（1ipoproteinlipase,LPL）基因突变与高甘油三酯血症的相关性。方法采用Primer5．0软件针对I。PI,基因分片段设计特异性引物。高甘油三脂血症患者12例,抽取外周静脉血提取基因组DNA,扩增LPI。基因1～9号外显子及相邻部分内含子,进行核苷酸测序,并与LPI。基因全序列进行比对分析。结果12例患者中1例LPL基因第4外显子存在错义杂合突变;1例I。PL基因第8外显子存在同义杂合突变;8例LPI。基因第6内含子5’端的几个位点处发生相同的碱基置换（1388＋73T〉G,1388＋108G〉A,1388＋82C〉A）;2例患者未检出核苷酸变化。结论I．PL基因缺陷与高甘油三脂血症密切相关,LPL基因检测可用于临床上有遗传倾向的严重高甘油三脂血症患者的基因诊断。     

新辅助化疗对非小细胞肺癌组织ERCC1和BRCA1表达影响

目的探讨非小细胞肺癌（NSCLC）组织核苷酸切除修复基因1（ERCC1）和乳癌易感基因1（BRCA1）的表达以及新辅助化疗对两者表达的影响。方法应用免疫组化PV二步法检测110例NSCLC组织（50例术前行新辅助化疗,60例行常规手术而术前未经化疗）ERCC1、BRCA1的表达。结果ERCC1主要在NSCLC组织细胞核表达,细胞浆有少量表达,总阳性表达率为59.09%。BRCA1在细胞核表达,总阳性表达率为74.55%。ERCC1、BRCA1表达强度与性别、年龄、组织学类型、肿瘤细胞分化程度、临床分期及有无淋巴结转移均无关（u=-1.557～-0.032,H=0.003～3.151,P〉0.05）。新辅助化疗组ERCC1、BRCA1总阳性表达率为68.00%、80.00%,单纯手术组为51.67%、70.00%,两组比较差异有显著性（u=-2.365、-3.011,P〈0.05）。ERCC1与BRCA1的表达强度呈显著正相关（r=0.264,P〈0.01）。结论新辅助化疗可以影响NSCLC组织中ERCC1、BRCA1的表达,从而影响肿瘤对顺铂化疗的敏感性,在肿瘤化疗中应予重视。     

SOCS基因单核苷酸多态性与典型骨髓增殖性肿瘤的研究

本研究探讨细胞因子信号转导抑制蛋白（suppressorofcytokinesignaling，SOCS）突变和单核苷酸多态性（SNP）对典型骨髓增殖性肿瘤（myeloproliferativeneoplasms，MPN）的作用及其机制。采用实时定量PCR和直接测序法等方法，在100例MPN患者中分别检测SOCSl、SOCS2、SOCS3基因突变和SNP发生情况。结果表明，SOCS315号外显子第63位核苷酸的A-c多态性（SNP库无报道）21例；SOCS315号外显子第1779位核苷酸的A-c多态性18例；SOCS315号外显子第2249位核苷酸的A-G多态性（SNP库无报道）49例；SOCs315号外显子第2366位核苷酸的T-C多态性（SNP库无报道）39例；SOCS215号外显子第2016位核苷酸的T-C多态性（SNP库无报道）9例。4组SOCs3SNP患者平均年龄高于野生型患者，白细胞计数及血小板水平均高于野生型患者，87．65％SNP均存于JAK2突变。结论：SOCS可能是抗癌治疗的一个重要靶点．SOCSSNP可能参与MPN的发病机制。     

成人T细胞急性淋巴细胞白血病中NOTCH1突变的特征研究

本研究旨在阐明NOTCH1突变在成人T细胞急性淋巴细胞白血病（T-ALL）中的特征及临床意义。通过对42例成人T-ALL患者外显子（exon）26／异二聚体N末端（HD-N）、exon27／异二聚体c末端（HD-C）、exon28和exon34／脯氨酸-谷氨酸-丝氨酸-苏氨酸（PEST）区域进行扩增、克隆和测序,研究NOTCH1突变的发生率、突变位点和类型、突变与临床和实验室指标的相关性及其预后意义。结果显示,本组成人T-ALL中NOTCH1突变率66．7％（28／42）,共发现45种NOTCH1突变,最多见于HD-N（48．9％,22／45）和PEST（40．0％,18／45）;HD-N结构域突变最多位于氨基酸位点1575（L1575P）（25．O％,7／28）,PEST结构域突变最多位于氨基酸位点2443（14．3％,4／28）;初诊时白细胞计数大于10×10^9／L者NOTCH1突变组显著高于无突变组（91．7％vs 54．5％,P=0．021）;骨髓原始及幼稚淋巴细胞比例超过50％者突变组显著高于无突变组（95．8％vs 57．1％,P=0．006）;流式免疫表型CDl0阳性表达率突变组显著高于无突变组（51．9％vs0％,P=0．006））,CD15和CD11b阳性表达率突变组显著低于无突变组（分别为5．3％vs 42．9％,P=0．047和0％vs57．1％,P=0．002）。结论：成人T-ALL的NOTCH1突变具有不同于儿童的突变特征和预后意义,而且中国成人T-ALL的NOCH1突变与西方国家相比可能存在差异。     

伴有NPM1基因突变的急性髓细胞白血病患者的临床特征

目的分析急性髓细胞白血病（AML）的NPM1（Nucleophosmin）基因第12外显子突变,探索伴有NPM1基因突变的AML患者的临床特征。方法随机选择98份临床确诊的急性白血病和骨髓增生异常综合征（MDS）患者的冻存骨髓细胞标本,其中78份AML、10份急性淋巴细胞白血病（ALL）和10份MDS提取DNA,行多重PCR,同时扩增NPM1基因第12外显子及FLT3基因第14、15外显子,PCR-毛细管电泳同时检测NPM1和FLT3-ITD基因突变。结果 78例AML患者共检出21例（26.9%）具有NPM1基因突变,10例ALL和10例MDS均未检测出该突变。78例AML中52例核型正常,NPM1阳性19例（36.5%）,26例异常核型AML患者NPM1阳性仅2例（7.7%）,两组间差异有统计学意义（P〈0.05）。AML-M2、M5患者NPM1基因突变发生率高于其他组。NPM1突变型AML患者WBC中位数为42.0（16.3～102.0）×10^9/L,野生型为14.0（3.4～67.2）×10^9/L,两组间差异有统计学意义（P〈0.05）。21例NPM1突变型AML中12例（57.1%）同时伴有FLT3-ITD,57例NPM1野生型患者13例（22.8%）出现FLT3-ITD突变,两组间差异有统计学意义（P〈0.05）。NPM1阳性FLT3阴性患者9例中8例（88.9%）获得CR1,NPM1阳性FLT3阳性12例中3例（25%）获得CR1,NPM1阴性FLT3阴性33例中16例（48.5%）获得CR1,NPM1阴性FLT3阳性13例中2例（15.4%）获得CR1,组间差异有统计学意义（P〈0.05）。结论 NPM1基因突变是AML患者常见的一种突变,尤其是染色体核型正常AML患者发生率较高。伴有NPM1突变的AML患者的临床特征为年龄高,外周血白细胞高,更常见于M2和M5中,伴随FLT3-ITD突变发生率高,CR1率较高。     

马凡综合征FBN1基因的一个全新突变

目的：检测1例马凡综合征（MFS）患者的原纤维蛋白-1（FBN1）基因，探讨其基因突变。方法：利用聚合酶链反应（PCR），对1例符合“根特标准”的MFS患者FBN1基因65个外显子中的9个（24～32）进行扩增，并直接测序。结果：在该MFS患者的第24外显子检测到新突变3069G〉T．该突变以往无报道。结论：该患者FBNI基因第24外显子存在点突变3069G〉T，可能为该MFS患者的发病原因。