三氧化二砷对小鼠肺癌移植瘤治疗作用的研究

目的探讨三氧化二砷(As2O3)对小鼠肺癌移植瘤的抗肿瘤作用及可能机制。方法建立C57BL/6皮下肺癌移植瘤模型,随机分为三组:对照组、As2O3治疗组、顺铂(DDP)治疗组,观察肿瘤生长情况计算抑瘤率,免疫组织化学法检测肿瘤组织内增殖细胞核抗原(PCNA)、血管内皮细胞因子(VEGF)的表达。结果实验表明As2O3组肿瘤生长明显抑制,VEGF和PCNA的表达显著下降。结论 As2O3对小鼠肺癌移植瘤有显著的抑制作用;抑制VEGF、PCNA的表达可能是三氧化二砷的抗肿瘤机制之一。     

三氧化二砷对前列腺癌PC—3细胞周期的阻滞作用

目的：研究三氧化二砷(As2O3)诱导前列腺癌PC-3细胞生长抑制、周期阻滞的作用。方法：实验于2003-10／2004-05在解放军第四军医大学唐都医院中心实验室完成。应用体外细胞生长抑制试验(MTT比色法)研究As2O3对细胞生长的影响；流式细胞仪检测细胞周期分布的情况；Western blotting检测细胞周期调节分子周期素依赖性激酶(CDKs)、周期素依赖性激酶抑制素(CDKI)和周期素的变化。结果：As2O3抑制人前列腺癌细胞系PC-3生长具有时间、剂量依赖性，MTT比色试验显示1，2，5μmol／L的三氧化二砷处理1～6d，各组之间吸光值差异有显著性意义(F=22．220，P&;lt;0．001)；流式细胞术检测细胞周期分布见As2O3(1，2，5μmol／L)处理72h后，随着浓度的增加，聚集G1期的细胞增加[(51．8&;#177;2．4)％～(58．8&;#177;2．3)％]，各组之间比较，差异有显著性意义(x^2=15．846，P=0．01)，说明可诱导PC-3细胞G1期阻滞；免疫印迹试验提示As2O3可诱导PC-3细胞Cip1／p21和Kip1／p27呈计量依赖性增加，而CDK2，6和周期素E，A下调。结论：As2O3通过调节细胞周期调节素的表达来阻滞前列腺癌．PC-3细胞周期进程、抑制细胞生长，有必要进一步研究，为其在临床上用于治疗前列腺癌提供依据。     

三氧化二砷对小鼠肾组织RNA的损伤

目的:通过检测活性氮族引起的核酸损伤标志物8-硝基鸟嘌呤在砷暴露小鼠肾脏组织中的表达情况,分析三氧化二砷对肾组织RNA损伤的作用途径。方法:实验于2005-11/2006-01在大连医科大学毒理学实验室完成。选用昆明种健康小鼠40只,按体质量随机分为4组,即正常对照组、5μmol/L、10μmol/L和20μmol/L三氧化二砷染毒组,每组10只。各染砷组小鼠通过饮用含不同剂量三氧化二砷自来水的方式使小鼠暴露砷,连续染砷60d。正常对照组每天摄入相同剂量的生理盐水。染砷60d后处死各组小鼠,立即取肾脏皮质,应用苏木精-伊红染色法进行肾皮质组织病理学观察;应用免疫组织化学及图像分析的方法检测肾组织内8-硝基鸟嘌呤的表达,根据8-硝基鸟嘌呤表达的吸光度值进行定量分析。结果:40只小鼠全部进入结果分析,无脱失。①各染砷组小鼠肾脏皮质区肾小管细胞出现肿胀,胞质内有空泡变性,核固缩、溶解等明显的病理学变化;而正常对照组小鼠的肾脏细胞未见上述病理变化。②5μmol/L、10μmol/L和20μmol/L三氧化二砷染毒组小鼠肾组织细胞的抗8-硝基鸟嘌呤免疫染色平均吸光度显著大于正常对照组(0.027±0.014,0.039±0.015,0.043±0.014,0.004±0.002,P<0.05),20μmol/L三氧化二砷染毒组与5μmol/L三氧化二砷染毒组相比,吸光度明显增加(P<0.05)。结论:活性氮族可能参与了砷对肾脏细胞核酸的损伤作用,8-硝基鸟嘌呤可能是砷致肾损伤的标志物。     

三氧化二砷对前列腺癌PC-3细胞周期的阻滞作用

目的:研究三氧化二砷As2O诱导前列腺癌PC-3细胞生长抑制、周期()3阻滞的作用。方法:实验于2003-10/2004-05在解放军第四军医大学唐都医院中心实验室完成。应用体外细胞生长抑制试验(MTT比色法)研究As2O3对细胞生长的影响;流式细胞仪检测细胞周期分布的情况;Westernblotting检测细胞周期调节分子周期素依赖性激酶CDKs)、周期素依赖(性激酶抑制素(CDKI)和周期素的变化。结果:As2O抑制人前列腺癌细胞系PC-3生长具有时间、剂量依赖性,3MTT比色试验显示1,2,5μmol/L的三氧化二砷处理1～6d,各组之间吸光值差异有显著性意义(F=22.220,P<0.001);流式细胞术检测细胞周期分布见As2O(1,2,5μmol/L)处理72h后,随着浓度的增加,3聚集G1期的细胞增加犤(51.8±2.4)%～(58.8±2.3)%犦,各组之间比较,差异有显著性意义(χ2=15.846,P=0.01),说明可诱导PC-3细胞G1期阻滞;免疫印迹试验提示As2O可诱导PC-3细胞Cip1/p21和3Kip1/p27呈计量依赖性增加,而CDK2,6和周期素E,A下调。结论:As2O通过调节细胞周期调节素的表达来阻滞前列腺癌PC-3细3胞周期进程、抑制细胞生长,有必要进一步研究,为其在临床上用于治疗前列腺癌提供依据。     

三氧化二砷抑制人胆囊癌细胞生长及对细胞周期的影响

目的:观察三氧化二砷(As_2O_3)对人胆囊癌细胞体内外生长的抑制作用及对细胞周期的影响。方法:不同浓度As_2O_3作用于人胆囊癌GBC细胞,用MTT法检测细胞生长情况,流式细胞仪检测细胞周期分布;20只BALB/c裸鼠皮下接种GBC细胞,随机分为0.9%氯化钠(NS)组(n=10)和As_2O_3组(n=10)。腹腔注射0.9%氯化钠0.2ml·只~1(NS组)或As_2O_3 10 mg·kg~(-1)(As_2O_3组),每周2次,连续7周,测量肿瘤的体积。结果:As_2O_3能抑制体内、外GBC细胞生长.体外实验中As_2O_3作用呈时间、剂量效应关系;流式细胞仪检测发现As_2O_3可将增殖过程中的GBC细胞阻滞于G1期。结论:As_2O_3能明显抑制体内外人胆囊癌GBC细胞的生长及引起G1期阻滞。     

海龙基因酶注射液抑制结肠癌细胞生长的研究

目的:观测海龙基因酶注射液对体外培养的人结肠癌细胞株HT-9、SW480的抑制效应,并初步探明其发挥抑制作用的机制。方法:体外培养HT-9、SW480细胞,使用MTT法检测海龙基因酶对正常细胞增殖的抑制作用。利用报告基因技术,检测转染荧光素酶报告基因后的SW480细胞内NF-κB相对活性,观察海龙基因酶对细胞NF-κB活性的影响。分离细胞胞质蛋白,使用免疫蛋白印迹技术检测各组细胞内NF-κB抑制蛋白(IκBα)的含量,观察海龙基因酶对IκBα的影响。结果:海龙基因酶注射液可以有效地抑制两种结肠癌细胞的增殖,并具有良好的剂量-效应关系。荧光素酶报告基因检测结果表明TNF-α可明显增强NF-κB活性(P<0.05),而海龙基因酶可抑制这种激活作用(P<0.05);免疫蛋白印迹实验表明,海龙基因酶可有效抑制细胞内IκBα的降解。结论:海龙基因酶注射液可以抑制IκBα的降解,从而抑制NF-κB活性并影响结肠癌细胞增殖。     

高热合并化疗放疗对人结肠癌细胞的作用

为探讨高热、羟基喜树碱（ＯＰＴ）、放射线联合对人结肠低分化粘液腺癌细胞系ＨＴ－２９的作用，我们将４２℃高热持续６０分钟、ＯＰＴ １０μｇ／ｍｌ、Ｘ射线６Ｇｙ，单独或联合作用于ＨＴ－２９细胞。其结果，三种因子对ＨＴ－２９细胞均有致死作用；其中任意两因子联合可产生协同致死作用；三因子联合时对ＨＴ－２９细胞的毒性作用最强。结果提示高热、ＯＰＴ、Ｘ射线的协同作用给临床提供了细胞学基础。     

三氧化二砷对正常人外周血淋巴细胞姐妹染色单体互换的影响

目的 研究临床应用浓度的三氧化二砷（As2O3)是否具诱变致癌性。方法 应用姐妹染色单体分化染色技术,检测不同浓度的As2O3对正常人外周血淋巴细胞姐妹染色单体的影响。结果 As2O3的浓度≥10^-6mol/L时,淋巴细胞姐妹染色单体互换（SCE）频率与对照组相比显著升高（P＜0．01）,细胞生长停滞于M1期,细胞分裂明显减少,并呈剂量效应关系;As2O3的浓度≤10^-7mol/L时,淋巴细胞的SCE频率、细胞周期和细胞分裂指数与对照组相比差异无显著性（P＞0．05）。结论 As2O3在临床应用时有以下两个潜在风险：①可能诱发第2次肿瘤;②可能影响淋巴细胞的免疫功能。     

9-顺式-维甲酸联合8-cl-cAMP对人肺癌细胞生长和凋亡的影响

目的:探讨9-顺式-维甲酸(9-cis-RA)联合8-cl-cAMP对H460和H292细胞的生长抑制和凋亡诱导作用。方法:应用MTT法检测9-cis-RA和8-cl-cAMP分别以及联合对H460和H292细胞的生长抑制作用;应用流式细胞术分析9-cis-RA和8-cl-cAMP对H460和H292细胞的凋亡诱导作用;应用RT-PCR法检测Fas、FasL基因的表达以及应用比色法测定caspase-3的活性。结果:9-cis-RA明显抑制H460细胞的生长并诱导其凋亡,H292细胞对9-cis-RA不敏感。9-cis-RA联合8-cl-cAMP明显抑制H292细胞生长,且诱导其凋亡。9-cis-RA联合8-cl-cAMP作用后,H460细胞FasmRNA表达水平较单药组提高;H292细胞FasmRNA的表达也有提高,说明二者联合对Fas的转录具有协同作用。在FasmRNA表达水平提高时,caspase-3的活性明显提高,二者具有显著相关性。结论:H460和H292细胞对9-cis-RA的敏感性不同,9-cis-RA联合8-cl-cAMP对H460和H292细胞的生长抑制和凋亡诱导具有协同作用;且Fas参与了...     

三氧化二砷对人食管癌细胞裸鼠移植瘤的抑制

目的:观察三氧化二砷对人食管癌细胞株Eca-109细胞裸鼠体内移植瘤生长的影响。方法:实验于2005-07/2006-07在解放军第四五八医院肿瘤中心实验室完成。①实验材料及方法:将体外培养的人食管癌细胞系Eca-109接种于裸鼠皮下,建立移植瘤模型。将20只裸鼠按随机数字表法分为4组(n=5),即生理盐水对照组、1μmol/L三氧化二砷组、4μmol/L三氧化二砷组和8μmol/L三氧化二砷组。各组均于瘤块移植后48h取不同剂量的药物0.2mL腹腔注射,给药5周。②实验评估:检测各组实体肿瘤生长情况并行常规病理观察。结果:20只Eca-109细胞移植裸鼠全部进入结果分析,无脱失。①裸鼠移植瘤生长情况:8μmol/L三氧化二砷组裸鼠对Eca-109细胞移植瘤的抑制率明显高于1μmol/L,4μmol/L三氧化二砷组和生理盐水对照组(P<0.05),其他各用药组之间移植瘤体积差异无显著性意义(P>0.05)。移植后4周和5周时,8μmol/L三氧化二砷组裸鼠Eca-109细胞移植瘤的抑制率分别为68.5%和80.7%,抑制作用呈剂量依赖性。②移植瘤组织病理学变化:生理盐水对照组细胞呈多角形,核圆形,核浆比例大,核分裂多见,可见异常核分裂。用药组瘤细胞孤立,核分裂少见,可见核染色质固缩,核边聚,核碎裂等凋亡现象。结论:三氧化二砷对人食管癌裸鼠移植瘤具有明显的抑制作用,并且呈一定的剂量依赖性。     

格列卫联合亚砷酸对骨髓瘤细胞作用机制的研究

目的研究亚砷酸(As2O3)、STI571联用对多发性骨髓瘤(MM)细胞周期及其调节蛋白表达的影响,为As2O3和STI571联合应用于临床提供理论依据。方法用MTT法检测细胞生长抑制率;Western blot方法检测二者对细胞周期负性调控因子P16蛋白的表达情况;用流式细胞仪对干预72 h的SP2/0细胞进一步进行细胞周期分析,以明确该蛋白所影响的细胞周期调控点。结果在As2O3和(或)STI571作用下SP2/0细胞生长受抑伴随活力下降,Western blot方法检测出P16蛋白表达呈时间剂量依赖关系,流式细胞仪DNA含量分析发现As2O3、STI571使SP2/0细胞主要阻滞于G1期,未出现凋亡峰。结论 As2O3和STI571均有抑制SP2/0细胞增殖和上调细胞周期抑制蛋白P16的表达,两药联用效果更佳。     

As2O3对慢性粒细胞白血病原代细胞BCR-ABL蛋白水平及信号转导的影响

目的：阐述As2O3对慢性粒细胞白血病（CML）原代细胞BCR－ABL及信号转导的影响。方法：采用免疫沉淀、蛋白酪氨酸激酶（protein tyrosine kinase,PTK)活性测定和Western印迹、实时定量PCR等方法。结果：1．0μmol/L和2．0μmol/L As2O3作用48h,CML患者骨髓单个核细胞BCR／ABL蛋白含量下调,0．5μmol/L时无明显改变。在0．5μmol/L As2O3作用下STAT1蛋白下调,1．5μmol/L和2．0μmol/L时下调更明显。P27蛋白无变化。As2O3作用60h,可使CML患者骨髓单个核细胞BCR－ABL蛋白PTK活性轻度下降。As2O3对bcr-abl融合基因的mRNA表达无明显影响。结论：As2O3下调BCR－ABL蛋白STAT1蛋白水平,减弱BCR－ABL信号的下传。As2O3下调PTK活性。     

高压氧和三氧化二砷对K562细胞增殖抑制及相关机制研究

本研究旨在探讨高压氧联合三氧化二砷(As2O3)对K562细胞增殖、凋亡及低氧诱导因子-1a(HIF-1a)、血管内皮生长因子(VEGF)及caspase-3 mRNA表达的影响。用MTT法检测各组K562细胞在药物作用各时间点(24、48、72 h)的增殖率;AnnexinⅤ/PI荧光标记法检测K562细胞的凋亡率;实时荧光定量PCR检测K562细胞HIF-1a、VEGF、caspase-3 mRNA的表达。结果表明:与单用As2O3比较,As2O3联合高压氧可使K562细胞的增殖抑制率增加,凋亡作用明显加强,并可明显下调HIF-1a、VEGF的表达,上调caspase-3的表达,两者联用具有协同作用,效果明显优于单用As2O3(P<0.05)。结论:高压氧联合As2O3对K562细胞抑制增殖及加速凋亡的作用优于单独应用As2O3;二者联合后HIF-1a、VEGF mRNA的表达减弱,而Caspase-3 mRNA的表达增强。HIF-1a、VEGF、caspase-3mRNA表达的变化可能是As2O3与高压氧联合产生抗白血病细胞协同作用的分子机制之一。     

慢病毒介导的RNA干扰抑制PAR2表达影响结肠癌细胞SW620增殖与迁移

目的构建人蛋白酶激活受体2(protease-activated receptor 2,PAR2)RNA干扰(RNAi)的重组慢病毒表达载体,探讨PAR2在结肠癌细胞SW620增殖与迁移中的作用。方法根据PAR2基因信息,设计4条PAR2 RNAi片段及1条阴性对照片段,western blotting筛选有效干扰片段,于293T细胞进行病毒包装,采用real-time PCR及western blotting检测干扰效率。PAR2激动剂(PAR2-AP)刺激感染后的SW620细胞,通过流式细胞仪、Transwell试验分别检测细胞周期及细胞迁移能力。结果构建的PAR2-RNAi慢病毒颗粒感染SW620细胞后,PAR2 mRNA及蛋白表达均被明显抑制。与对照相比,PAR2-AP不能促进感染后的SW620细胞增殖,细胞各周期比率未见明显差异,迁移试验结果显示穿膜细胞数也未见明显增多。结论成功构建的PAR2-RNAi慢病毒颗粒能显著抑制结肠癌细胞SW620的PAR2表达,进而阻断PAR2-AP对细胞增殖与迁移的促进效应,证明PAR2在SW620细胞增殖与迁移过程中发挥重要作用。     

三氧化二砷联合TPA对K562细胞作用的实验研究

本研究旨在观察三氧化二砷（As2O3）单独或联合12-氧-十四烷酰佛波醇-13-乙酸酯（TPA）对髓系白血病细胞系K562细胞的细胞周期、分化和凋亡的影响,并探讨其可能的作用机制.采用TPA、As2O3、TPA联合As2O3分别作用于K562细胞株,在倒置显微镜下观察细胞形态改变,应用CCK-8法检测细胞增殖抑制率,Annexin V法及琼脂糖凝胶电泳观察K562细胞凋亡情况,集落形成实验检测K562集落形成率,流式细胞术检测K562细胞分化及细胞周期改变,Western b1ot检测P38及p-P38蛋白的表达.结果表明,TPA联合As2O3对K562细胞的促凋亡作用较单药组明显增强;As2O3使K562细胞集落形成能力降低;TPA促使K562细胞向单核巨噬细胞分化;TPA使K562细胞阻滞于G1期,As2O3使K562细胞阻滞于G2期,TPA可增强As2O3对细胞周期的影响;TPA与As2O3联用增强As2O3促磷酸化P38蛋白表达的作用.结论：TPA与As2O3联合作用能增强As2O3对K562细胞的促凋亡作用及对其细胞周期的影响.     

Effects of deoxycholate on human colon cancer cells: apoptosis or proliferation

BACKGROUND: Deoxycholic acid has long been attributed as a tumour promoter in the colon. It exerts its growth-related actions in a phorbol ester-like manner, by stimulating protein kinase C. The aim of this study was to investigate the effect of deoxycholic acid on proliferation and apoptosis in the colon, by exposing colon cancer cells to it in increasing concentrations. METHODS: Human colon cancer cells (Caco-2 and HT-29) were treated with deoxycholate or its two structural isomers, 3-beta-12-alpha-dihydroxy-5-beta-cholan-24-oic acid and 3-alpha-12-beta-dihydroxy-5-beta-cholan-24-oic acid. Proliferation was evaluated by cell counting, and apoptosis by estimating percentage cell survival and assessment of nuclear morphology. RESULTS: Within the concentration range of up to 20 microM, deoxycholate stimulated growth of both human colon cancer cell lines. Its growth-promoting effect was abolished after inhibition of protein kinase C. At concentrations above 100 microM, deoxycholate induced apoptosis in both cell lines. Epimers of deoxycholate were significantly less potent in stimulating growth. CONCLUSION: Low-dose deoxycholate stimulates colon cancer cell proliferation while > 100 micromol L(-1) of this secondary bile acid induces apoptosis in colon cancer cells. Deoxycholate might promote the likelihood of malignant transformation by increasing epithelial cell turnover in the colon.     

三氧化二砷对K562/ADM耐药细胞凋亡抑制的逆转作用

目的:研究三氧化二砷(As2O3)诱导白血病K562/ADM耐药细胞凋亡的分子机制。方法:采用MTT比色法检测K562/ADM耐药细胞增殖活性,细胞形态学和annexinV /PI双染色检测细胞凋亡,RT-PCR检测mdr1、bcl-2和caspase-3基因mRNA的表达水平,流式细胞法(FCM)测定P-糖蛋白(P -glycoprotein,P-gp)和bcl-2蛋白表达及caspase-3活性。结果:As2O3显著抑制K562/ADM耐药细胞的增殖;经 As2O3处理后细胞形态上出现典型的凋亡改变,annexinV /PI双染显示凋亡细胞明显增加;mdr1mRNA表达和P-gp合成明显降低,凋亡抑制基因bcl-2mRNA及其蛋白bcl-2表达下调, caspase-3mRNA表达和caspase-3活性显著增强。结论:As2O3诱导K562/ADM耐药细胞凋亡,其主要机制可能为As2O3抑制 mdr1和bcl-2基因表达,逆转耐药白血病细胞因bcl-2和P-gp高表达所介导的凋亡抑制。     

纳米As2O3磁性脂质体磁感应加热治疗裸鼠人宫颈癌移植瘤

目的 研究纳米As2O3磁性脂质体联合磁感应加热治疗异种移植性宫颈癌的作州及机制。方法建立裸鼠人宫颈癌移植瘤模型，将纳米As2O3脂质体、纳米磁性脂质体和纳米As2O3磁性脂质体等分别局部注射到裸鼠人宫颈癌移植瘤中，交变磁场（AMF）作用30d后俭测抑瘤牢、裸鼠移植瘤凋亡、增殖指数、Bcl-2和Bax胥白表达及其对肝、肾功能的影响等。结果 在AMF作用下，各组移植瘤的质量抑制率分别为57．06％（P〈0．05）、49．44％（P〈0．05）和80．84％（P〈0．01）。凋亡相关指标（AI、PI、Bcl-2、Bax）与对照组相比差异均有统计学意义（P〈0．05）；各组血清AST、ALT、BUN技Cr的均值之间相比，差异无统计学意义（P〉0．05）。实验组肿瘤组织有明显坏死，而瘤旁和内脏组织均未见明显损伤。结论 纳米As2O3磁性脂质体是一种较理想的靶向治疗肿瘤的复合载体，可以问时发挥药物和磁感应加热的联合定向治疗作用，且对肝、肾功能没有明显的毒性，极可能成为一种宫颈癌治疗新途径。     

TRAIL对人喉癌Hep-2细胞生长及凋亡的影响

目的:研究TRAIL对人喉癌Hep-2细胞生长及凋亡的影响,并探索其相关机制.方法:用MTT法和流式细胞仪检测不同浓度TRAIL对喉癌细胞Hep-2,成纤维细胞MRC-5生长及凋亡率的影响.用western blotting对比两种细胞DR-4,DR-5的表达情况.检测Hep-2细胞TRAIL干预前后caspase-8,caspase-3,caspase-9表达的变化.结果:随着TRAIL浓度的升高,Hep-2细胞存活率逐渐降低,而凋亡率逐渐提高.MRC-5细胞对TRAIL不敏感.Western blotting检测发现Hep-2细胞DR-4、DR-5表达明显高于MRC-5.TRAIL干预Hep-2细胞后caspase-8、caspase-3、caspase-9活化分解明显增多.结论:喉癌细胞Hep-2由于DR-4、DR-5的高表达,对TRAIL促凋亡作用具有特异敏感性,其促凋亡作用是通过激活线粒体依赖性通路实现的.     

VPA和As2O3对Molt-4细胞的协同作用及可能机制

本研究探讨丙戊酸钠（sodium valproate，VPA）单药或与亚砷酸（arsenie trioxide，As2O，3）联用对人急性T细胞白血病细胞株Molt-4增殖活力的抑制、去甲基化作用及其可能机制。用MTT法检测药物对细胞增殖的抑制作用，利用金氏公式观察两药联用体外抗癌的协同作用。采用半巢式甲基化特异PCR（hnMS—PCR）检测p15INK4B基因甲基化，RT—PCR方法检测p15基因、DNA甲基转移酶DNMT-1、DNMT3A、DNMT3B的表达。结果表明：VPA和As2O3均可明显抑制细胞增殖，二者联用在体外有相加作用（Q值均大于0．85），在5mmol／LVPA与10μmol／LAs2O3联用时抑制率达（70．31±2．54）％。Molt-4细胞p15基因因高甲基化而失表达，经VPA和As2O3联合作用后p15基因甲基化程度明显下降，p15基因表达增强，两药联用时DNMT-1、DNMT-3A、DNMT3B mRNA的表达都有下降。结论：VPA可能通过抑制DNA甲基转移酶DNMT-1和（或）DNMT3B使p15INK4B基因去甲基化，使p15基因表达上调，恢复其活性。VPA和As2O3均可明显抑制Mol-4细胞增殖，两药合用有协同相加作用，可减少砷剂的副作用。