新一代抗组胺药对变应性接触性皮炎小鼠3种细胞因子影响的比较研究

目的:研究咪唑斯汀、氯雷他定及西替利嗪对变应性接触性皮炎(allergiccontactdermatitis,ACD)小鼠产生干扰素(IFN)、肿瘤坏死因子(TNF)及白介素(IL)-4的影响,探讨抗组胺药治疗ACD的作用机制。方法:建立小鼠ACD模型,采用ELISA法检测ACD小鼠产生IFN-γ、TNF-α和IL-4的水平及3种药物分别对它们的作用。结果:ACD小鼠血清及脾淋巴细胞IFN-γ水平均明显升高(P<0.01);血清TNF-α水平明显升高(P<0.01),腹腔巨噬细胞产生TNF-α水平无明显变化(P>0.05);血清及脾淋巴细胞产生IL-4水平无明显变化(P>0.05)。咪唑斯汀对血清及细胞培养液中3种细胞因子的水平均有显著或不同程度的抑制作用,而氯雷他定、西替利嗪仅对部分细胞因子产生一定的抑制作用。结论:咪唑斯汀对ACD小鼠产生的3种细胞因子的抑制作用强于氯雷他定和西替利嗪。它们对ACD小鼠3种细胞因子的抑制作用与临床疗效的关系有待进一步研究。     

咪唑斯汀抑制小鼠变应性接触性皮炎机制的研究

目的 研究咪唑斯汀对小鼠变应性接触性皮炎(ACD)的抑制作用,探讨其作用机理.方法 建立小鼠ACD模型,观察口服不同剂量咪唑斯汀对小鼠耳肿胀的抑制作用.采用ELISA法检测ACD小鼠产生干扰素γ(IFN-γ)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白介素4(IL-4)的水平及咪唑斯汀对这3种细胞因子的作用.结果 口服各剂量咪唑斯汀均能明显抑制ACD小鼠耳肿胀(P<0.05);ACD小鼠血清及脾淋巴细胞IFN-γ水平均明显升高(P<0.01).ACD小鼠血清TNF-α水平明显升高(P<0.01),腹腔巨噬细胞产生TNF-α水平无明显变化(P>0.05).ACD小鼠血清及脾淋巴细胞产生IL-4水平无明显变化(P>0.05).不同剂量咪唑斯汀对3种细胞因子均有显著或不同程度的抑制作用.结论 咪唑斯汀对小鼠ACD疗效可能通过其对细胞因子的抑制而发挥作用.     

瑶浴清消方对急性湿疹小鼠模型Th1/Th2调节平衡的作用

目的探讨瑶浴清消方(YYQXF)对急性湿疹小鼠模型的干预治疗效果及作用机制。方法 KM小鼠60只,随机分为空白组、模型组、皮肤康洗液组、瑶浴清消方高、中、低剂量组,每组各10只。建立耳部湿疹模型并同时外用给药干预治疗,观察小鼠耳廓皮肤损伤程度、肿胀度、HE染色病理切片以及小鼠血清中TNF-α、IFN-γ、IL-4的变化。结果瑶浴清消方各组与模型组相比小鼠耳廓急性湿疹症状有所缓解,体现在耳廓皮肤损伤评分、肿胀度的降低和HE染色病理切片组织内炎症细胞的减少,以及TNF-α、IL-4含量表达的降低,IFN-γ含量表达升高,以上差异均有统计学意义(P0.01),其中瑶浴清消方中剂量组干预效果最佳。结论瑶浴清消方能有效缓解急性湿疹造成的小鼠耳廓皮肤损伤及肿胀度,减轻湿疹急性期炎症症状,其作用机制或是通过降低TNF-α、IL-4表达含量,升高IFN-γ表达含量,从而恢复Th1/Th2细胞平衡状态,达到治疗急性湿疹的目的。     

霉酚酸酯对过敏性紫癜小鼠T-bet、GATA3表达及Th1/Th2平衡的影响

目的探讨霉酚酸酯对过敏性紫癜小鼠T-bet、GATA3表达及Th1/Th2平衡的影响。方法建立过敏性紫癜小鼠模型60只,随机分为模型组、霉酚酸酯低(100mg/kg)、中(200 mg/kg)、高(300 mg/kg)剂量组、西咪替丁组(1 g/kg),另取12只BALB/c小鼠设为对照组,药物处理组于建模成功后每天灌胃治疗,持续3周。末次给药24 h后处死小鼠,采用印度墨水小鼠碳粒廓清法检测各组小鼠单核巨噬细胞系统(MPS)功能,计算吞噬系数(K值)与吞噬指数(α值),采用微量聚乙二醇沉淀法测定各组小鼠血清循环免疫复合物(CIC)含量,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测各组小鼠血清中干扰素γ(IFN-γ)、白介素-2(IL-2)、白介素-4(IL-4)、白介素-10(IL-10)的水平,以流式细胞术检测各组小鼠外周血中T淋巴细胞Th1/Th2比值,以免疫印迹法(Western blot)检测各组小鼠外周血单核细胞中蛋白T-bet、GATA3的表达情况。结果与对照组比较,模型组小鼠K值、α值、IFN-γ、IL-2水平、Th1/Th2比值、T-bet蛋白表达均明显降低(P 0. 05),IL-4及IL-10水平、CIC含量、GATA3蛋白表达均明显升高(P 0. 05);与模型组比较,药物处理组小鼠K值、α值、IFN-γ、IL-2水平、Th1/Th2比值、T-bet蛋白表达均升高(P 0. 05),IL-4及IL-10水平、CIC含量、GATA3蛋白表达均降低且霉酚酸酯各组呈剂量依赖性(P 0. 05);霉酚酸酯高剂量组与西咪替丁组相比差异无统计学意义(P 0. 05)。结论霉酚酸酯可能通过调控T-bet/GATA3表达,恢复过敏性紫癜小鼠Th1/Th2平衡,减轻过敏性紫癜小鼠症状。     

地氯雷他定对皮肤划痕症患者组胺及Th1/Th2细胞平衡的影响

目的观察地氯雷他定对皮肤划痕症患者组胺以及Th1/Th2细胞的影响,并探讨其相关的临床意义。方法收集北华大学附属医院皮肤性病科2012年6月-2014年1月治疗的皮肤划痕症患者40例,另取北华大学附属医院体检中心的健康体检者40例作为正常对照。Th1和Th2细胞使用流式细胞仪检测,组胺、Ig E,IL-4,IL-2,IFN-γ因子表达使用ELISA法检测。结果治疗前皮肤划痕症患者组胺含量、Ig E和IL-4表达水平显著高于对照组(P0.01),Th1/Th2细胞比值、IL-2和IFN-γ表达水平显著低于对照组(P0.01),治疗后组胺含量、Ig E和IL-4表达水平出现显著减低(P0.01),Th1/Th2细胞比值、IL-2和IFN-γ表达水平显著升高(P0.01)。Ig E表达与IL-4呈显著正相关(r=0.522,P0.05),与IL-2呈显著负相关(r=-0.361,P0.05),与IFN-γ呈显著负相关(r=-0.403,P0.05)。地氯雷他定治疗皮肤划痕症临床有效率为85.0%,不良反应发生率为7.5%。结论皮肤划痕症患者中存在组胺高表达及Th1/Th2细胞的失衡,地氯雷他定可以抑制组胺表达,调节Th1/Th2细胞的失衡,安全、高效的治疗皮肤划痕症。     

咪唑斯汀对小鼠接触性变态反应模型的作用研究

目的探讨咪唑斯汀对小鼠变应性接触性皮炎(ACD)的治疗作用及可能机制。方法以2,4-二硝基氟苯(DNFB)诱发的小鼠ACD为模型,设立两个不同阶段用药组观察3种剂量咪唑斯汀对小鼠耳肿胀、真皮内炎性细胞浸润、血清IL-4,IL-12和IFN-γ水平的影响。结果两个不同阶段用药组咪唑斯汀均能显著抑制ACD小鼠的耳肿胀及真皮炎症细胞浸润,并呈剂量依赖性。咪唑斯汀可降低诱发后24h和72h小鼠血清IL-12和诱发后72hIFN-γ水平。结论咪唑斯汀对小鼠ACD具有治疗作用,这种作用可能与下调致炎性细胞因子的水平有关。     

尖锐湿疣患者血清IL-8、IL-12、TNF-α和IFN-γ水平的研究

探讨IL-8、IL-12、TNF-α、IFN-γ住尖锐湿疣中的发病机制。采用ELISA双抗体夹心法，测得40例尖锐湿疣患者血清IL-8、IL-12、IFN-γ水平显著低于正常对照组，而TNF-α水平显著高于正常对照组：IL-8与IL-12水平、IL-8与IFN-γ水平、IL-12与TNF-α水平、IL-12与IFN-γ水平、TNF-α与IFN-γ水平均呈正相关，IL-8与TNF-α水平无相关性。尖锐湿疣患者体内存在细胞因子表达异常，尤其足Th1、Th2细胞因子失衡。     

健脾养血祛风方对脾虚型湿疹豚鼠模型Th(Th1/Th2)细胞因子水平的影响

目的探讨健脾养血祛风方对脾虚型湿疹豚鼠血清中Th细胞因子(IFN-γ及IL-4)水平的影响。方法取健康雄性豚鼠60只,随机分为6组,正常对照组、慢性湿疹组、脾虚慢性湿疹空白对照组、脾虚慢性湿疹中药治疗低剂量和高剂量组、脾虚慢性湿疹西药治疗组。中药组以健脾养血祛风方进行治疗,西药组以盐酸西替利嗪治疗,检测各组外周血中的IFN-γ和IL-4的水平。结果脾虚慢性湿疹豚鼠模型存在不同程度的血清IFN-γ水平下降、IL-4水平上升,中药治疗高剂量组及西药治疗组能上调血清中IFN-γ水平、下调血清中IL-4水平,但中药治疗高剂量组及西药治疗组之间差异无统计学意义(P>0.05)。结论健脾养血祛风方对于脾虚湿疹豚鼠模型Th(Th1/Th2)细胞因子水平有一定的影响。     

消风胶囊对小鼠迟发型超敏反应的影响及其作用机制研究

目的观察消风胶囊对小鼠迟发型超敏反应(DTH)的影响,并探讨其作用机制。方法采用2,4-二硝基氯苯(DNCB)背部皮下致敏、耳廓发敏的方法建立DTH小鼠动物模型,以双抗夹心ELISA法检测其血清中白介素2(IL-2)、γ干扰素(IFN-γ)、巨噬细胞培养液中肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平。结果消风胶囊能明显抑制DNCB诱导的小鼠DTH(P<0.01),降低DTH小鼠血清中IL-2、IFN-γ水平(P<0.01,P<0.05),并能明显抑制腹腔巨噬细胞产生TNF-α(P<0.01),各剂量组间无明显的剂量相关性。结论消风胶囊有抑制小鼠DTH的作用,其机制可能与抑制了IL-2、IFN-γ、TNF-α等细胞因子的产生和(或)分泌有关。     

建立免疫调节剂体外诱导小鼠脾细胞生成Th1型细胞因子的反应模式

目的 建立小鼠脾细胞体外生成Th1型细胞因子的反应模式,以适应研究免疫治疗药物作用机制的要求.方法 ELISA检测单核/巨噬细胞系统活化剂脂多糖(LPS)或T细胞丝裂原伴刀豆球蛋白A(ConA)在不同剂量或两种诱导剂不同剂量组合的条件下,诱导BALB/c小鼠脾细胞分泌的白介素12(IL-12)、干扰素γ(IFN-γ)和白介素4(IL-4)的产量.结果 LPS能诱导BALB/c小鼠脾细胞分泌IL-12.ConA诱导BALB/c小鼠脾细胞分泌IFN-γ的最低质量浓度是0.25mg/mL.不同浓度LPS与0.25mg/mLConA联合诱导BALB/c小鼠脾细胞分泌IFN-γ时,LPS表现出协同效应,IL-12与IFN-γ呈正相关,IL-4与IFN-γ呈负相关.结论 LPS和ConA体外联合可诱导鼠脾细胞向Th1型细胞反应方向发展.     

两种变应原致小鼠变应性接触性皮炎的研究

目的 建立两种变应性接触性皮炎(ACD)小鼠模型,并探讨其机制。方法 分别以二硝基氟苯和荧光素-5-异硫氰酸盐作为致敏剂,以腹部致敏、耳部激发的方法建立两种ACD小鼠模型。激发前后测量耳廓厚度,计算耳肿胀度;H-E染色观察耳组织病理改变。用免疫组化法检测局部皮损中及用ELISA法检测淋巴结细胞分泌的Th1型/Th2型细胞因子水平。结果 ①成功建立两种ACD小鼠模型。②两种模型的局部皮损中细胞因子的表达有差异。二硝基氟苯组以白介素2表达为主;异硫氰酸荧光素组以白介素4表达为主。③二硝基氟苯组淋巴结细胞分泌干扰素酌的量是异硫氰酸荧光素组的5倍多;异硫氰酸荧光素组淋巴结细胞分泌白介素4的量是二硝基氟苯组的约2倍。结论 二硝基氟苯诱导以Th1型细胞因子占优势的ACD,异硫氰酸荧光素诱导以Th2型细胞因子占优势的ACD。     

外用茶油对变应性接触性皮炎发生的影响

目的 观察茶油对小鼠变应性接触性皮炎发生的影响。方法 建立二硝基氟苯致小鼠变应性接触性皮炎模型,外用药物进行治疗,观察发生皮炎的小鼠耳片的组织学变化（HE染色）,RT-PCR检测组织中炎症细胞因子IL-2、IFN-γ mRNA的表达水平。结果 成功建立二硝基氟苯致小鼠变应性接触性皮炎的动物模型,且皮肤中IL-2、IFN-γ mRNA的表达显著增高。哈西奈德溶液组和茶油组的耳片组织肿胀明显减轻,炎症反应轻微,炎性细胞浸润数目少,组织病理变化轻。在茶油和哈西奈德溶液的干预下,炎性组织IL-2、IFN-γ的mRNA表达均不同程度下降。结论 茶油减轻二硝基氟苯致小鼠变应性接触性皮炎的病理损害,下调了炎症因子的表达。     

染料木黄酮对致敏小鼠引流淋巴结细胞因子的抑制作用

目的研究染料木黄酮(genistein,GEN)对致敏小鼠引流淋巴结细胞细胞因子分泌水平的影响,探讨GEN抑制小鼠接触性皮炎(contact dermatitis,CD)的机制。方法建立二硝基氟苯(Dinitrofluoro-benzene,DNFB)致敏小鼠模型,用Lum inexTM100检测小鼠引流淋巴结细胞培养上清液IFN-γ,IL-2,TNF-α及IL-4,IL-10的水平。结果 GEN可显著抑制致敏小鼠引流淋巴结细胞培养上清液IFN-γ,IL-2,TNF-α,IL-4,IL-10的上调(P0.05)。结论 GEN对致敏小鼠引流淋巴结细胞IFN-γ,IL-2,TNF-α及IL-4,IL-10等细胞因子的抑制作用可能是GEN抑制小鼠接触性皮炎的机制之一。     

变应性接触性皮炎模型鼠体内Th17细胞活性变化

目的:研究变应性接触性皮炎(allergic contact dermatitis,ACD)模型鼠外周血及皮损处Th17细胞活性变化情况及其意义。方法:利用2,4-二硝氟苯(DNFB)诱导构建ACD小鼠模型,分别于激发前及激发后的第3、6、9、12、24 h取小鼠耳组织及外周血,评估小鼠耳组织炎症情况,采用实时荧光定量PCR法检测小鼠皮损处IL-17及RORγt mRNA的表达水平,利用酶联免疫吸附试验检测血清中IL-17水平。结果:激发后24 h内小鼠耳组织肿胀程度逐渐加重,皮损中IL-17和RORγt mRNA表达量也逐渐升高,激发后各组与激发前组比较差异有统计学意义(均P<0.05);耳组织IL-17和RORγt mRNA表达量与其肿胀程度呈正相关;激发后小鼠血清中IL-17水平升高,在6小时达到最高,随后逐渐下降。结论:在ACD小鼠的急性炎症期,皮损及外周血中Th17细胞活性增强,并且局部皮损处的Th17细胞活性与炎症程度密切正相关。     

Evaluation of the profile of inflammatory cytokines,through immunohistochemistry,in the skin of patients with allergic contact dermatitis to nickel in the acute and chronic phases

Background: Allergic contact dermatitis to ion nickel (Ni+2) is an inflammatory dermatosis, common in industrialized countries. It involves the activation of nickel-specific T-cells, followed by proliferation and induction of a mixed profile of both proinflammatory and regulatory cytokines, suggesting that several T-cell subtypes (helper - Th and cytotoxic - Tc) are involved. A broader understanding of the cytokine profile may lead to new therapeutic approaches.Objectives: This study aimed to analyze the cytokines TNF-α, INF-γ, IL-2, IL-4, IL-10, IL-13, IL-17 and IL-23 using the immunohistochemistry technique in order to try to identify their prevalence in chronic and acute eczema of patients with allergic contact dermatitis to Ni+2.Methods: We performed an immunohistochemical study for eight cytokines in 20 patients with Ni+2 allergic contact dermatitis, biopsied at the site of chronic eczema, triggered by the patient’s daily contact with Ni+2, and at the site of acute eczema caused by nickel sulfate, 48 hours after applying the contact test.Results: The stained samples showed positive results for the eight cytokines studied. TNF-α, IFN-γ, IL-4, IL-13 and IL-17 had a higher prevalence in chronic eczema, IL-2 and IL-23 in acute eczema, and IL-10 presented a similar prevalence in both acute and chronic eczema. However, these prevalences were statistically significant only for IL-4 and IL-13.Study Limitations: Small sample size.Conclusions: In chronic and acute eczema, we observed the presence of a mixed cytokine profile of the T cell subtypes (Th/ Tc), suggesting that the responses are expressed at the same time.     

饱和氢氯化钠溶液对小鼠变应性接触性皮炎的影响

目的 探讨饱和氢氯化钠溶液对变应性接触性皮炎（ACD）的治疗作用及相关机制。方法 将40只小鼠随机分为四组：对照组、对照 + 饱和氢氯化钠溶液组、ACD组和ACD + 饱和氢氯化钠溶液组。将二硝基氟苯搽在小鼠外耳建立二硝基氟苯致小鼠变应性接触性皮炎模型,腹腔注射饱和氢氯化钠溶液5 ml/kg进行治疗。评估皮损,计算耳厚度差、耳肿胀度,酶联免疫吸附试验检测皮损组织肿瘤坏死因子α（TNF-α）、白介素（IL）-6、IL-17和干扰素γ（IFN-γ）水平,并计数皮损中炎性细胞数量。采用SPSS 18.0统计软件进行数据分析,各组间比较采用单因素方差分析,两两比较采用LSD分析法。 结果 与对照组比较,ACD组皮损评分（7.33 ± 1.53）、耳厚度差［（0.73 ± 0.15） mm］和耳肿胀度［（18.67 ± 3.05） mg］增加,左耳皮损组织TNF-α［（1475.52 ± 233.81） ng/g］、IL-6［（184.65 ± 78.39） ng/g］、IL-17［（628.56 ± 201.44） ng/g］和IFN-γ［（197.72 ± 37.81） ng/g］水平和炎性细胞数量［（752.00 ± 166.06）个/mm2］亦增加（均P < 0.05）;与ACD组比较,ACD + 饱和氢氯化钠溶液组皮损评分（3.33 ± 0.58）、耳厚度差［（0.46 ± 0.11） mm］、耳肿胀度［（11.00 ± 2.64） mg］、左耳皮损组织TNF-α［（817.72 ± 101.13） ng/g］、IL-6［（95.86 ± 36.65） ng/g］、IL-17［（373.38 ± 126.74） ng/g］和IFN-γ［（63.31 ± 17.38） ng/g］水平和炎性细胞数量［（384.00 ± 97.35）个/mm2］均降低（均P < 0.05）。结论 饱和氢氯化钠可以减轻ACD中炎症因子的释放。     

5种“发物”对小鼠变应性接触性皮炎模型的影响

目的研究羊肉、青椒、香菇、带鱼、竹笋5种"发物"对小鼠变应性接触性皮炎(ACD)模型的影响,探讨可能的作用机制。方法用2,4-二硝基氟苯(DNFB)诱导建立小鼠ACD模型后,随机分成5个"发物"组和对照组,观察各种"发物"对小鼠模型耳厚度、炎症细胞浸润影响及外周血清γ-干扰素(IFN-γ)、白细胞介素(IL)-17水平的变化。结果与对照组比较,羊肉、青椒组激发后小鼠耳厚度差及炎症细胞计数明显增加,外周血IFN-γ、IL-17表达升高,48 h时差异有统计学意义(P0.05);竹笋组与对照组小鼠耳厚度差及炎症细胞计数差异无统计学意义(P0.05),IFN-γ、IL-17表达下降(P0.05);香菇、带鱼组各观察指标与对照组比较差异均无统计学意义(P0.05)。结论羊肉、青椒有加重小鼠ACD作用,其机制可能与上调IFN-γ、IL-17表达有关。竹笋、带鱼、香菇对小鼠ACD无影响。     

斑秃患者外周血单一核细胞中Th1/Th2型细胞因子的表达

【摘　要】:目的:探讨斑秃患者外周血单一核细胞(PBMC)中Th1/Th2型细胞因子的表达状况与斑秃发病的关系。方法:用逆转录—聚合酶链反应(RT-PCR)分别检测18例轻型斑秃、24例重型斑秃患者及20例正常人外周血单一核细胞(PBMC)经PHA刺激后具有代表性的Th1型细胞因子：γ干扰素（IFN-γ）和肿瘤坏死因子β（TNF-β）和具有代表性的Th2细胞因子白介素4（ IL-4）、白介素10（IL-10）的表达水平。结果:经PHA刺激后轻型斑秃患者PBMC中Th1型细胞因子(IFN-γ、TNF-β)基因表达水平明显升高,与正常对照组比较有显著性差异(P<0. 05);Th2型细胞因子(IL-4、 IL-10)基因表达水平下降,显著低于正常对照组(P<0. 05);重型斑秃患者PBMC中Th1型细胞因子(IFN-γ、IL-12)基因表达不仅显著高于正常对照组(P<0. 05),而且还高于轻型斑秃病人(P<0. 05);Th2型细胞因子(IL-4、IL-10)基因表达显著低于正常对照组(P<0. 05),与轻型斑秃病人比较有显著性差异。结论:斑秃患者PBMC中Th1/Th2型细胞因子基因表达失衡,表现以Th1型细胞因子基因过度表达为特征的Th1型反应,可能参与了斑秃的发病机制。 关键词:斑秃;细胞因子;基因表达; γ-干扰素; 肿瘤坏死因子-β; 白介素-4 ; 白介素-10 ;外周血单个核细胞;     

神经生长因子在特应性皮炎小鼠模型Th1/Th2类细胞因子免疫失衡中的作用

目的探讨神经生长因子(NGF)在特应性皮炎小鼠Th1/Th2类细胞因子免疫失衡中的作用。方法将雌性BALB/c小鼠随机分为四组:正常对照组、特应性皮炎组(AD组)、NGF干预组(NGF组)及抗NGF抗体干预组(NGF阻断组),每组6只。用卵清蛋白经皮肤致敏建立小鼠AD模型。ELISA测定血清中总IgE水平,RT-PCR半定量检测皮肤组织中IL-4和IFN-γmRNA的表达。结果NGF处理组中血清总IgE水平和皮肤组织IL-4mRNA表达水平均高于未处理AD组[(7292.154±1352.654)pg/mL和(4782.145±1132.121)pg/mL;(78.50±3.94)%和(60.67±3.56)%](P<0.01),而IFN-γmRNA表达呈现反相变化[(24.33±2.94)%和(43.17±5.46)%](P<0.01)。NGF抗体干预处理,能阻断NGF诱导IgE和IL-4mRNA的表达[(1475.532±512.476)pg/mL;(39.83±2.64)%](P<0.01)。结论NGF通过诱导Th1型向Th2型免疫应答偏移来参与特应性皮炎Th1/Th2类细胞因子免疫失衡效应。