乙肝疫苗无应答者外周血Treg细胞的PD-1表达研究

目的:检测乙肝疫苗无应答者外周血Treg细胞的PD-1表达情况及PD-1在Treg中发挥的作用.方法:用流式细胞术检测乙肝疫苗无应答者外周血Treg细胞的PD-1表达情况.结果:乙肝疫苗无应答者外周血Treg细胞的PD-1表达率为(48.7±2.9)%,显著高于乙肝疫苗应答者外周血Treg细胞的PD-1表达率(16.3+1.4)%.结论:乙肝疫苗无应答者外周血Treg细胞的PD-1表达率的显著上调,有可能参与了Treg的抑制机制.     

PD-1基因多态性和肾癌患者血清PD-1、PD-L1水平及临床特点的相关性

目的 探讨程序性死亡受体-1(Programmed cell death 1,PD-1)基因多态性和肾癌患者血清PD-1、PD-L1水平,及病理分型、临床分期相关性.方法 2012年2月至2015年8月纳入本院肾癌患者84例,同时纳入健康人群50例为对照组.PCR扩增测肾癌组和对照组PD-1基因多态性,ELISA测定血清PD-1、PD-L1浓度.结果 肾癌组血清PD-1、PD-L1高于对照组(P＜0.05).肾癌患者基因突变率为16.07％,对照组为6.00％,差异有统计学意义(P＜0.05).PD-1基因T/T亚组血清PD-1、PD-L1明显高于C/C、C/T两个亚组.PD-1 rs41386349位点野生型和突变型和肾癌的病理类型、临床分期密切相关(P＜0.05);和性别、年龄无明显相关性(P＞0.05).结论 PD-1基因突变和透明细胞肾癌具有相关性,和透明细胞肾癌的发病、转移及病程密切相关.     

药物基因多态性对PD-1/PD-L1抑制剂抗肿瘤疗效及不良反应影响的研究进展

目前,靶向PD-1/PD-L1轴的免疫检查点抑制剂已成为各种肿瘤的热点治疗方法。尽管一些患者接受PD-1/PD-L1抑制剂治疗显著提高了长期生存率,但患者之间存在着较大的个体差异,一部分患者对其表现出原发性耐药,总体有效率大概仅在20%~30%。药物基因组学研究表明,单核苷酸多态性是影响药物疗效和药物不良反应的最关键因素之一。本文综述了基因多态性对PD-1/ PD-L1抑制剂的抗肿瘤疗效及免疫相关不良反应的影响,为今后的研究提供参考。

     

人红细胞生成素基因在小鼠体内的表达

将构建的重组逆转录病毒载体ＰＮ２－ＥＰＯ导入包装细胞ＰＡ３１７中，整合了病毒基因组的ＰＡ３１７细胞能稳定地分泌ＰＮ２－ＥＰＯ病毒颗粒。将经５－氟脲嘧啶处理的供体小鼠骨髓细胞，在ｐｏｌｙｂｒｅｎｅ条件下，与产病毒的ＰＡ３１７包装细胞共同培养４８ｈ后，取悬浮细胞静脉注入受致死剂量照射的同系小鼠体内，１０￣１４天后取脾脏细胞，提取ＲＮＡ。ＲＮＡ点杂交表明，ＥＰＯ基因已在小鼠体内的造血细胞中得到转录表达。     

可溶性PD-1在类风湿关节炎患者表达差异的研究北大核心CSCD

目的分析可溶性PD-1(s PD-1)在类风湿关节炎(RA)患者中表达的差异性。方法将103例RA患者分为试验A组46例(慢性缓解期RA患者)和试验B组57例(急性活动期RA患者),另取50例健康志愿者为对照组。用酶联免疫吸附法检测s PD-1水平,用流式细胞术检测可溶性OX40配体(s OX40)水平。结果试验A组、试验B组和对照组的sPD-1分别为(39.02±4.80),(50.01±6.38)和(19.97±1.31)ng·mL^(-1),s OX40分别为(6.18±1.84)%,(7.94±2.17)%和(4.02±0.83)%,试验A组和试验B组的上述指标比较,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论 RA患者外周血sPD-1表达水平和患者临床症状、临床分期有关。     

皮肤鳞状细胞癌患者外周血PD-L1和PD-1表达与肿瘤免疫逃逸相关

目的 探究PD-L1在皮肤鳞状细胞癌（cSCC）中的表达,并探讨它们在肿瘤免疫逃逸中的可能作用。方法 首先采用免疫组化方法检测年龄匹配的正常健康人、癌前病变患者和临床诊断为cSCC的皮肤组织样本中PD-L1分子的表达。免疫荧光法检测PD-L1在原代上皮细胞和皮肤鳞状细胞系A431中的表达。此外,我们还采用流式细胞术检测了cSCC患者外周血CD14阳性细胞中PD-L1的表达情况以及外周血T细胞中PD-1的表达情况,并分析了PD-L1在不同人群中的表达水平差异。结果 免疫组化结果显示,PD-L1在光化性角化组织和鳞状细胞癌组织中表达显著上调,在正常皮肤组织中表达显著下调。免疫荧光结果显示PD-L1在原代上皮细胞和皮肤鳞癌细胞间差异有统计学意义。此外,PD-L1的增加与性别、年龄和肿瘤危险因素无相关性（P>0.05）。我们的研究结果还证实了cSCC外周血CD14阳性细胞中PD-L1等共抑制分子以及PD-L1配体PD-1在外周血T细胞中显著高表达。结论 PD-L1在cSCC的发生和肿瘤的免疫逃逸中发挥重要作用,这为PD-L1分子作为cSCC早期诊断和免疫治疗的潜在靶点提供了可能。     

PD-1抑制剂在B细胞非霍奇金淋巴瘤中的应用研究进展

以程序性死亡受体-1(PD-1)免疫检查点为靶点的PD-1抑制剂在血液系统恶性肿瘤中的应用已经取得显著进展。肿瘤细胞可通过PD-1及其配体1(PD-L1)通路抑制T细胞的增殖来阻断免疫应答,从而实现免疫逃逸,促进肿瘤发生和侵袭。部分淋巴瘤的发生已证实与该通道关系密切。PD-1/PD-L1抑制剂并不是对所有的B细胞非霍奇金淋巴瘤(B-NHL)有效,但对特定类型的B-NHL可起到良好的疗效。该文主要就PD-1抑制剂在B-NHL中的应用情况进行了综述。     

逆转录病毒载体介导iNOS基因转染人CD3AK细胞的初步研究

目的　构建免疫细胞性一氧化氮供体CD3AK/iNOS细胞。方法　用脂质体介导重组逆转录病毒质粒 pLNC iNOS转染入包装细胞PA317中 ,经G4 18筛选出抗性克隆。用NIH3T3细胞测定病毒上清滴度。用病毒上清感染人CD3AK细胞。测定CD3AK/iNOS细胞培养上清中iNOS活性及NO含量。结果　脂质体转染后G4 18筛选出 38个抗性克隆 ,能稳定合成并分泌重组逆转录病毒颗粒。NIH3T3细胞测定病毒滴度为 1 2× 10 5cfu/ml。CD3AK/iNOS细胞合成并分泌的NO含量及iNOS活性比CD3AK细胞明显增高。结论　成功构建CD3AK/iNOS细胞 ,并能分泌高浓度NO。     

体外转染Kiss-1基因对人黑色素瘤细胞A375生长增殖的影响

目的 探讨转染Kiss-1基因对人黑色素瘤细胞A375生长增殖的影响,筛选出有意义的肿瘤治疗的生物学靶标.方法 在人黑色素瘤细胞A375中转染Kiss-1基因,经G418筛选,建立稳定高表达Kiss-1蛋白的细胞系.Western blot方法 检测Kiss-1蛋白以证实转染成功.流式细胞术检测Kiss-1基因对A375生长增殖的影响.结果 稳定转染Kiss-1基因的A375细胞中不仅Kiss-1蛋白稳定表达（1.20±0.21）高于对照组（0.60±0.41）,Kiss-1基因转染A375细胞48 h后对其具有凋亡的作用（凋亡率为28.42%）高于对照组（2.12%）.结论 外源性Kiss-1基因导入A375细胞后,可诱导A375细胞其凋亡,从而抑制肿瘤细胞增殖.     

NES1基因在结肠癌细胞中表达及意义

目的：探讨NES1基因在结肠癌细胞中表达及意义。方法用RT-PCR方法检测NES1mRNA在正常结肠细胞、结肠癌细胞株HT29、HCT116表达情况。结果 NES1在结肠癌细胞株中表达较正常结肠黏膜细胞明显增高。结论 NES1基因在结肠癌的发生发展中起重要作用,这为选用NES1作为结肠癌治疗靶点提供了实验依据及理论基础。     

人胰岛素样生长因子-1基因的克隆及其表达

目的获得大量高纯度、具有生物学活性的人胰岛素样生长因子 1(hIGF 1) ,构建hIGF 1原核表达载体 ,并进行表达与纯化。方法以pUCIGF质粒为模板 ,PCR扩增了hIGF 1基因。经适当酶切后 ,构建表达载体pRSET IGF ,转入大肠杆菌BL2 1(DE3)进行表达 ,并经阴离子交换色谱、疏水色谱和凝胶过滤纯化。结果带有重组质粒pRSET IGF的大肠杆菌经IPTG诱导后 ,以可溶性形式表达 7.8kD大小的蛋白 ,其表达量占菌体总蛋白量的10 %～ 2 0 % ,纯化后目的蛋白纯度达 95 %以上 ,Western印迹表明重组蛋白具有hIGF 1抗原活性。结论构建了pRSET IGF重组质粒 ,并成功地在大肠杆菌中获得可溶性表达 ,为获得大量基因工程产品奠定了基础     

顺铂联合吉西他滨对肺癌PD-1/PD-L1途径的影响

目的 探讨PD-1/PD-L1途径在肺癌中表达情况及顺铂联合吉西他滨的干预效果.方法 将就诊于丽水市中心医院的80例肺癌患者随机分为对照组(A组)、顺铂治疗组(B组)、吉西他滨治疗组(C组)和顺铂联合吉西他滨治疗组(D)组,每组20例,收集各组患者手术切除的肿瘤组织,再以10例良性肺部疾病患者(E组)的手术切除组织作参照,采用Western blot法检测各组组织中PD-1、PD-L1的表达.选择10例同期来医院体检的健康人员(F组)外周血为空白对照,采用流式细胞仪检测B、C、D、F组治疗前后外周血中PD-L1+ CD68+巨噬细胞的表达,ELISA法检测B、C、D、F组治疗前后血清中IL-2、IL-4、IL-10的含量.结果 E组PD-1、PD-L1未见表达,A组PD-1、PD-L1的表达较E组上调(P＜0.01),B、C、D组较A组显著降低(P＜0.05),B、C组比较差异无统计学意义,D组与B、C组相比差异均有统计学意义(P＜0.05);B、C、D、F组均可检测到PD-L1+ CD68+巨噬细胞的表达,但B、C、D组中PD-L1+ CD68+巨噬细胞的比例显著高于F组(P＜0.01).B组和C组均可降低PD-L1+ CD68+巨噬细胞的比例(P＜0.05),而D组PD-L1+ CD68+巨噬细胞比例显著下调(P＜0.01).B、C、D组治疗前外周血血清中IL-2和IL-4含量较F组低(P＜0.01),IL-10含量较F组高(P＜0.01),治疗后B、C、D组外周血血清中IL-2和IL-4的含量较治疗前均有一定程度的上升(P＜0.05),IL-10含量有一定程度的降低(P＜0.05).结论 顺铂联合吉西他滨可下调肺癌组织中PD-1/PD-L1的阳性表达率及表达量,降低PD-L1+ CD68+巨噬细胞阳性表达,恢复PD-L1对IL-2、IL-4,IL-10所产生的影响,较单独用药效果明显.     

PD-1/PD-L1 pathway inhibitors in advanced prostate cancer

Introduction: Pharmacological inhibition of immune checkpoint receptors or their ligands represents a transformative breakthrough in the management of multiple cancers. However, immune checkpoint inhibitors have yet to be FDA-approved for the management of metastatic prostate cancer (PCa), the commonest non-cutaneous malignancy in men.

Areas covered: We review our current understanding of the PD-1/PD-L1 pathway in cancer, the use of anti-PD-1/PD-L1 therapeutics in PCa, and potential subgroups of PCa patients who may derive the greatest benefit from these agents (such as men with tumors that have expression of PD-L1 and/or high mutational load). We also review the prior and current clinical trials evaluating the blockade of PD-1/PD-L1 in PCa, highlighting some of the key ongoing studies of greatest relevance to the field.

Expert commentary: Clinical trials investigating PD-1/PD-L1 inhibitors should be encouraged in patients with PCa. While it is unlikely that immune checkpoint monotherapies will produce long-lasting responses in a substantial proportion of patients, there is early evidence of activity in some patient subsets. These subgroups may include those with high PD-L1 expression, those with hypermutated or microsatellite-unstable tumors, and those enriched for germline and/or somatic DNA-repair gene mutations (e.g. intraductal/ductal histology, primary Gleason pattern 5, and perhaps AR-V7-positive tumors).     

Investigational PD-1 inhibitors in HL and NHL and biomarkers for predictors of response and outcome

Introduction: Inhibitors against the PD-1/PD-L1 pathway are revolutionizing the treatment and management of malignancies.

Areas covered: We summarize our current understanding of the function of PD-1, its role in immune evasion, the clinical data available that support the use of PD-1 antagonist in Hodgkin and non-Hodgkin lymphomas, and potential predictors of response.

Expert opinion: We anticipate that in the next 10 years, agents that modulate the immune system such as PD-1 antagonists will be increasingly used in favor over traditional cytotoxic chemotherapeutic agents. PD-1 antagonists will be combined with future immunotherapies or used as adjuncts to cellular therapy to boost tumor-specific immune responses.     

携带反义MDR1基因的逆转录病毒载体的构建和表达

目的　建立逆转录病毒介导的反义多药耐药MDR1基因转移体系 ,探讨反义RNA封闭白血病耐药细胞中MDR1基因表达的能力。方法　逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR)法从白血病耐药细胞株HL 6 0 /VCRmRNA中扩增出含有启始密码子ATG的 5 2 4bp的MDR1基因cDNA片段 ,反向插入逆转录病毒载体 pLXSN ,通过脂质体转和乒乓感染单、双噬型包装细胞GP +E86和GP +envAM 12 ,以双嗜型病毒上清感染白血病耐药细胞K5 6 2 /MDR ,半定量RT PCR和流式细胞术(FCM)分析MDR1基因转录和P 糖蛋白 (P gp)的表达。 结果　酶切、PCR和DNA测序证实反义MDR1基因重组逆转录病毒载体 pLASSN构建正确 ;双嗜型病毒生产细胞的滴度为 1 3× 10 5CFU/ml,巢式PCR和补救分析均未检测到辅助病毒存在 ;PCR和RT PCR分析证实病毒生产细胞和反义修饰的耐药细胞K5 6 2MDR/LASSN中均有反义MDR1基因整合和MDR1基因反义RNA的转录 ;FCM分析K5 6 2MDR/LASSN细胞中P gp表达强度和表达率比对照细胞均有明显下降。 结论　逆转录病毒介导的反义基因转移系统安全有效 ,可用于肿瘤耐药逆转的研究     

PD-1/PD-L1抑制剂在新辅助化疗中的应用进展

PD-1/PD-L1抑制剂在肿瘤的辅助治疗、晚期肿瘤治疗中都有较好的疗效,然而目前对于PD-1/PD-L1抑制剂在新辅助治疗中的作用尚不明确,本文就PD-1/PD-L1抑制剂在新辅助治疗中应用的最新进展进行综述。     

5-氮杂-2′-脱氧胞苷诱导卵巢癌细胞系p16基因去甲基化及其表达

目的观察去甲基化制剂5-氮杂-2′-脱氧胞苷(5-Aza-CdR)对体外培养的卵巢癌细胞CAOV3p16基因启动子区甲基化状态及表达的影响,探讨卵巢癌细胞p16基因失活的机制及去甲基化制剂对p16基因表达的调控。方法应用不同浓度的5-Aza-CdR(1×10-7mol/L,5×10-7mol/L,1×10-6mol/L,5×10-6mol/L)处理体外培养的卵巢癌细胞CAOV3后,甲基化特异性聚合酶链反应(PCR)(MSP)法检测用药前后细胞中p16基因的甲基化状态,RT-PCR法及Western-blot法检测用药前后细胞中p16 mRNA及蛋白表达的变化。结果p16基因在卵巢癌细胞系CAOV3中启动子区呈异常甲基化状态,在 mRNA及蛋白水平低表达。经过5-Aza-CdR处理后,p16基因启动子区呈去甲基化状态,其 mRNA及蛋白表达显著增强(P<0.01)。结论启动子区异常甲基化是卵巢癌细胞p16基因失活的主要原因之一,去甲基化制剂-5-Aza-CdR能逆转p16基因甲基化状态,从而调控p16基因表达。     

Characterization of B cell-mediated PD-1/PD-L1 interaction in pancreatic cancer patients

Pancreatic ductal adenocarcinoma (PDAC) is a common type of pancreatic cancer with one of the worst survival rate of all malignancies. Recent studies have identified that immunosuppressive B cells could employ the PD-1/PD-L1 pathway to suppress antitumour T cell responses; hence, we examined the expression and function of PD-L1 in B cells. We found that the PD-L1 expression was significantly enriched in tumour-infiltrating (TI) B cells than in peripheral blood (PB) B cells from the same patients. Additionally, the PB B cells from stage III and stage IV PDAC patients presented significantly higher PD-L1 than the PB B cells from healthy controls. High PD-L1 expression in PB B cells could be achieved by stimulation via CpG and less effectively via anti-BCR plus CD40L, but not by coculture with pancreatic cancer cell lines in vitro. Also, STAT1 and STAT3 inhibition significantly suppressed PD-L1 upregulation in stimulated B cells. CpG-stimulated PB B cells could inhibit the IFN-γ expression and proliferation of CD8 T cells in a PD-L1-dependent manner. Also, TI CD8 T cells incubated with whole TI B cells presented significantly lower IFN-γ expression and lower proliferation, than TI CD8 T cells incubated with PD-L1⁺ cell-depleted TI B cells, suggesting that PD-L1⁺ B cells could also suppress CD8 T cells in the tumour. Overall, this study identified that B cells could suppress CD8 T cells via PD-L1 expression, indicating a novel pathway of immuno-regulation in pancreatic cancer.