影响HMME在不同溶液中光漂白速率的主要因素分析

目的 分析在不同溶液体系中,影响国产光敏剂血卟啉单甲醚(HMME)光漂白速率的主要因素.方法 首先从理论上,根据光漂白速率方程分析了可能影响光漂白速率的主要因素.然后测定不同溶液中不同浓度HMME的光漂白(充氧),通过绘制光漂白曲线(HMME浓度-照光时间)比较HMME漂白速率.结合理论推导结果与实验结果分析各因素对漂白速率的影响.结果 HMME的光漂白速率在白蛋白悬液中快于DMSO中,DMSO中快于细胞悬液和PBS中,后两种溶液中HMME的光漂白速率相近.HMME对532 nm光的摩尔消光系数:εDMSO＞εcells-suspension＞εalbumin-buffer＞εPBS.结论 光敏剂溶液条件会影响光敏剂光漂白速率.其中摩尔消光系数、光敏剂浓度、溶液微环境对光漂白速率影响较大.摩尔消光系数增加HMME光漂白速率,蛋白、DMSO的存在可以加速HMME的光漂白.     

血卟啉单甲醚在生理盐水溶液中光漂白的研究

目的观察在光动力学反应过程中血卟啉单甲醚(HMME)的光漂白现象,探讨其影响因素。方法通过本研究建立的光敏剂荧光分析系统,应用光学多通道分析仪对生理盐水溶液中HMME介导的光动力反应过程中光漂白的情况进行监测。HMME的浓度分别为1、10μg/ml。Nd∶YAG倍频532nm激光作为光动力的照射光源,同时利用其作为荧光激发光源。在光动力反应过程中采集溶液的荧光光谱,并进行分析处理。结果光敏剂HMME在一定的浓度范围内,初始浓度越高,光漂白的速率越快。在HMME的光漂白过程中于639nm处出现新的荧光峰。根据漂白造成的自体背景的变化,HMME的光漂白可以分为两个阶段:(1)在0～45min阶段,随着照光过程的持续,HMME在613nm与674nm处的荧光特征峰强度下降,同时在639nm处出现新的荧光峰,且其强度持续增强,自体背景强度起伏很小,稳定在HMME初始荧光强度的0.16倍左右;(2)而45～90min阶段,随着照光时间延长,在613、674和639nm处荧光峰的强度均下降,自体背景强度呈接近于线性持续增强,到照光结束时增至HMME初始荧光强度的约0.45倍。结论HMME的光漂白是一个较复杂的过程,初始浓度影响其漂白的速度,并伴有光漂白产物的生成及其再漂白的现象。     

血卟啉单甲醚在不同溶液体系中光漂白途径的研究

目的:研究血卟啉单甲醚(HMME)在不同溶液体系中的光漂白途径,为HMME-PDT治疗微血管病变的数学建模研究提供实验依据。方法:选择4种HMME溶液体系:磷酸盐缓冲液(PBS)、二甲基亚砜(DMSO)、白蛋白缓冲液、细胞悬液。HMME浓度5μmol/L,532nm激光照射(80mW/cm2、60min),每10min测定溶     

两亲性光敏剂血卟啉单甲醚在不同溶液体系中的存在状态

目的测定血卟啉单甲醚(HMME)在不同浓度、不同溶液体系中的存在状态,以分析其对HMME-光动力学疗法(PDT)的影响。方法按所用溶剂实验分为以下4种溶液体系:HMME-磷酸盐缓冲液(PBS)、HMME-二甲基亚砜(DMSO)、HMME-白蛋白缓冲液和HMME-细胞悬液,每种溶液配成2、4、8、10、20、40、60、80和100μmol/L等9个浓度。首先分别测定其吸收光谱和荧光激发光谱,根据光谱形态特征定性分析HMME在前述9个浓度的4种溶液体系中的存在状态,然后对形成聚集体的溶液利用公式定量分析HMME的缔合数、聚集平衡常数及各浓度下的缔合度。结果通过光谱特征的定性分析发现,浓度为2~10μmol/L时,HMME在DMSO、白蛋白缓冲液、PBS和细胞悬液中均以单体为主;浓度为20~100μmol/L时,除DMSO溶液外在其他3种溶液中都有HMME聚集体出现。通过绘制浓度为20~100μmol/L的HMME在PBS、白蛋白缓冲液和细胞悬液中的状态图,聚集数取2时,状态图线性关系较好,HMME在此3种溶液中形成二聚体。缔合度计算结果显示:浓度为20μmol/L的PBS、细胞悬液和白蛋白缓冲液中部分HMME分子开始形成聚集体,但整个溶液仍以单体为主(HMME单体百分数分别为92·3%、90·7%和95·5%);40~100μmol/L溶液中HMME单体含量随浓度增加而减少,100μmol/L的PBS溶液和细胞悬液中70%~75%HMME为单体,近30%的HMME分子发生了聚集,而白蛋白缓冲液中83%的HMME为单体,20%的HMME分子发生了聚集。HMME在PBS和细胞悬液中的聚集平衡常数近似,而且大于在白蛋白缓冲液中的聚集平衡常数,说明HMME的聚集程度在PBS溶液和细胞悬液中比在白蛋白缓冲液中大。与疏水性血卟啉衍生物(HpD)比较结果显示,在PBS溶液中HMME在60μmol/L开始出现明显聚集,而疏水性HpD在20μmol/L即开始出现明显聚集;定量比较各溶液体系中HpD的聚集平衡常数均明显大于HMME,且各浓度时的单体含量明显小于HMME,说明HMME在PBS、蛋白缓冲液和细胞悬液中的聚集趋势明显小于HpD。结论两亲性光敏剂HMME在PBS、蛋白缓冲液和细胞悬液中聚集性显著低于疏水性的HpD。浓度低于20μmol/LHMME在4种溶液中均以单体为主,HMME在40~100μmol/L的白蛋白缓冲液、PBS和细胞悬液中都有不同比例HMME分子发生聚集,且都形成二聚体。HMME在不同溶液中的聚集程度不同,按由难到易依次为:DMSO、白蛋白缓冲液、PBS≈细胞悬液。在常规给药条件下,HMME在体液中的存在形式以单体为主,但在高浓度给药时,部分HMME会聚合成聚集体,应注意聚集对HMME-PDT的影响。     

光动力治癌新药血卟啉单甲醚（HMME）的研究

本文报道了一种单体卟啉血卟啉单甲醚的合成及其光敏化力、人癌细胞光灭活作用、动物移植瘤光动力疗效和有关的临床前药理毒理学研究资料。实验结果表明,与临床应用的混合卟啉制剂血卟啉衍生物(HpD)相比,HMME具有光敏化力强、肿瘤选择性摄入率高、光动力效应强、毒性低、无致突变和致畸胎作用等优点,是一种较理想的光动力治癌新药。     

不同活性氧成分在血卟啉单甲醚-PDT诱导HeLa细胞死亡中的作用

目的探讨不同活性氧成分在血卟啉单甲醚(HMME)-PDT诱导HeLa细胞死亡中的作用。方法将接种人宫颈癌HeLa细胞的培养皿随机分成单纯HMME-PDT组、HMME-PDT加叠氮钠(单线态氧淬灭剂)与HMME-PDT加甘露醇(羟自由基淬灭剂)组。以功率密度为15mW/cm2,能量密度为5.4J/cm2、波长为510.6mm的激光照射。用膜联蛋白(annexin)V-碘化丙啶(PI)双染法检测激光照射后第6和24h三组中HeLa细胞的凋亡率和坏死率。结果PDT后第6小时,单纯HMME-PDT组和HMME-PDT加入叠氮钠组的坏死率17.68%±1.05%和4.15%±2.19%(P=0.0006),单纯HMME-PDT组和HMME-PDT加D-甘露醇组的HeLa细胞凋亡率分别为11.48%±3.42%和3.19%±1.01%(P=0.0158)。PDT后第24小时,单纯HMME-PDT组的HeLa细胞凋亡率和坏死率分别为48.51%±2.85%和19.26%±1.57%,加入叠氮钠组为40.45%±3.56%和13.12%±2.75%,加入D-甘露醇组为39.43%±4.37%和21.00%±4.31%。结论HMME-PDT产生的单线态氧以导致HeLa细胞坏死为主,而羟自由基则以导致细胞凋亡为主。     

光动力学疗法辅助显微技术治疗脑胶质瘤

目的 观察血卟啉单甲醚光动力学疗法辅助手术治疗脑胶质瘤的近期疗效和随访效果。方法 1999～2001年，应用光动力学疗法辅助手术治疗脑胶质瘤34例。术中暴露肿瘤前，静脉推注血卟啉单甲醚5mg／kg。显微镜下切除肿瘤后，以能量密度200J／cm^2 He-Ne激光照射肿瘤残腔。术后避光3d，观察近期临床表现，出院后定期随访2.4年。结果 大部分患者术后临床症状缓解或消失；出院时Karnofsky记分升高者28例，无变化者6例，改善率82.4％(28／34)；全部病例无皮肤光敏反应；术后1年生存率为76.5％(26／34)；术后2年生存率为52.9％。结论 激光光动力学疗法是一种有效的脑胶质瘤辅助治疗方法，近期临床效果满意，有利于提高生存率和生存质量，延长患者生命。     

角膜新生血管光动力学疗法的实验研究

目的研究角膜新生血管的治疗方法,观察不同浓度的光敏剂血卟啉单甲醚(hematoporphyrinmonomethylether,HMME)所介导的光动力作用对兔角膜新生血管的影响,为探讨光动力学疗法治疗角膜新生血管的可行性和有效性提供初步的实验依据。方法采用角膜缝线的方法,诱导18只荷兰大耳白兔36只眼角膜新生血管形成。缝线后的第7天,将18只兔随机分成9组,将不同浓度的HMME分别注射于兔眼球结膜下,30min后用波长为632.8min的He-Ne激光照射不同的时间(即能量密度不同),观察每眼角膜新生血管损伤情况及角膜组织病理学改变。结果在HMME浓度为7.5mg/ml时,激光功率密度为30mW/cm2,能量密度为108,(?)m2,照射时间60min,兔角膜新生血管密度减低率(67.97±2.20)%,不但高于激光照射时间分别为15、30和45min,能量密度分别为27.54和81J/cm2时的新生血管密度减低率,其统计学差异有显著意义(P=0.001,P=0.002,P=0.031),而且高于HMME浓度为2.5mg/ml和5mg/ml2时的角膜新生血管的减低率,其统计学差异有显著意义(P<0.01,P<0.01);而HMME浓度为10m/ml时,睑球结膜损伤较大,不宜用于治疗眼部。PDT后组织病理学检查,电镜下见新生血管内皮细胞变性;HE染色角膜标本光镜下见新牛血管退缩。结论采用结膜下注射HMME,并用波长为632.8nm的He-Ne激光照射,     

钙在血卟啉单甲醚-光动力学疗法处理后HeLa细胞中的变化及作用

目的 了解钙离子在血卟啉单甲醚-光动力学疗法(HMME-PDT)处理后HeLa细胞中的变化和作用。方法 Fura-2／AM孵育荧光分光光度计检测细胞质游离钙浓度[Ca^2 】i的变化，MTT法分析PDT及钙离子对HeLa细胞存活率的影响，Western印迹法分析HMME-PDT后HeLa细胞的肌浆／内质网钙泵(SERCA2)蛋白的降解情况。结果 HMME-PDT处理后即刻HeLa细胞内【Ca^2 】i就开始增高，且与PDT剂量成正相关用，BAPTA／AM拮抗【Ca^2 】i的升高可增加HeLa细胞的存活率。同时HMME-PDT可引起SERCA2蛋白的降解。结论 HMME-PDT处理后HeLa细胞内【Ca^2 】i可迅速增高，【Ca^2 】i，升高可能与SERCA2蛋白的降解相关，并可促进HeLa细胞的死亡。     

血卟啉单甲醚-光动力学疗法对兔移植静脉再狭窄的抑制作用

目的探讨局部灌注血卟啉单甲醚(HMME)结合血管外激光照射的方法对移植静脉吻合口处内膜增生的抑制作用。方法采用兔颈外静脉颈总动脉移植模型，将实验动物随机分为光动力学治疗组、单纯激光照射组、单纯光敏剂灌注组、空白对照组，每组4只兔。光动力学治疗组局部应用血卟啉单甲醚HMME(15／μg／ml)溶液充盈在移植静脉段，再以532nm波长半导体激光器在吻合口(每只兔2处吻合口)附近进行血管外照射5min，功率密度100mW／cm^2，能量密度30J／cm^2；单纯激光照射组以生理盐水充盈移植静脉段，再用激光照射；单纯光敏剂灌注组仅用HMME(15μg／ml)溶液充盈移植静脉段5min；空白对照组应用生理盐水充盈移植静脉段5min.术后第4周于各实验组移植静脉的动静脉连接都及其两侧0.5cm处的动脉端、静脉端取材，常规石蜡包埋切片HE染色，组织病理观察，采用IMAGE-Pro Plus生物医学图像分析系统，观察不同处理组内膜增生程度的差异。     

血管平滑肌细胞对血啉甲醚吸收特性的研究

目的 探讨血管平滑肌细胞（ＳＭＣ）对光敏剂血啉甲醚（ＨＭＭＥ）的吸收特点及影响因素,为进一步建立动脉粥样硬化和血管成形术后再狭窄的光动力治疗方法提供实验依据。方法 培养兔主动脉ＳＭＣ并接种至９６孔培养板。首先,培养液中分别加入ＨＭＭＥ和血卟啉衍生物（ＨＰＤ）,浓度分别为２０、４０、６０、８０、１００μｇ／ｍｌ,采用荧光分析法测定细胞内光敏剂含量,绘缺点ＳＭＣ吸收光敏剂的浓度－含量和时间－含量关系曲     

光动力疗法治疗鲜红斑痣的基础研究—血啉甲醚与血卟啉衍生物吸收特性的比较

目的　观察新型光敏剂——血啉甲醚(HMME)在鸡冠皮肤组织和血管内皮细胞(EC)的吸收特点。 方法　莱亨鸡12只,分为HMME组和血卟啉衍生物(HpD)组,每组6只。分别静脉注射HMME或HpD10mg/kg,每隔10min取血2.5ml和鸡冠皮肤组织2.5g。培养新生儿脐带EC,培养液中加入HMME或HpD,孵育浓度分别为20、40、60、80和100 μg/ml,孵育时间为即刻、15、30、60、120、180和240min。采用荧光分析法测定光敏剂含量,并绘制EC吸收光敏剂的浓度—含量和时间—含量关系曲线。 结果　静脉注射HMME或HpD后,其血清浓度的峰值出现在注射后10min,以后随时间迅速下降,二者的曲线形态基本一致。HMME在鸡冠组织中的含量于注射后10min显著高于HpD（P＜0.01）,以后虽然下降速率较快,但在注射后80min仍显著高于HpD（P＜0.05）。培养EC可迅速吸收HMME和HpD,30min达峰值的89%以上;其吸收量与孵育浓度呈线性关系,对HMME的吸收量显著高于HpD（P＜0.01）。 结论　HMME较HpD更容易被皮肤微血管EC摄取,这将有利于鲜红斑痣的治疗。     

血啉甲醚用于光动力疗法治疗鲜红斑痣的初步临床研究

经六年大量临床验证，光动力疗法已成为具有高度选择性和稳定可靠疗效的无瘢痕治疗鲜红斑痣的新方法。为解决治疗后的较长时间皮肤光敏反应这一主要副作用，本文对２１例志愿鲜红斑痣患者的２６个病灶应用血啉甲醚（ＨＭＭＥ）为光敏剂进行了治疗，对ＨＭＭＥ的作用进行了临床观察，发现ＨＭＭＥ具有良好的疗效、较轻的局部反应、较短的避光期和可行重复治疗的间隔期等优点，值得对其进行深入的研究。     

血啉甲醚对体外培养的类风湿关节炎滑膜细胞光动力杀伤作用的初步研究

探讨血啉甲醚（hematoporphyrin monomethyl ether,HMME)对体外培养的类风湿关节炎患者滑膜细胞的光动力杀伤作用。方法：用四唑盐化色法（MTT）检测了不同能量的铜蒸气激光,不同浓度的HMME对体外培养的类风湿关节炎滑膜细胞的杀伤效应,并与血卟啉衍生物（hematoporphyrin derivative,HpD)进行比较。结果：（1）单纯照光及单加HMME,HpD对细胞存活率均无明显抑制作用。（2）各种浓度的HMME在不同剂理的激光作用下对细胞均有杀伤作用,浓度越高其杀伤作用越明显;HMME浓度一定,随着照光剂量的增大杀伤作用增强;不同浓度HMME介导的光动力杀伤作用所能产生的最大抑制率不同,此时所需的光剂量也不同。（3）HMME介导的光动力效应对滑膜细胞的杀伤作用受照光前孵育时间的影响。（4）相同浓度的HMME介导的光动力杀伤效应较HpD更强。结论：HMME介导的光动力效应对滑膜细胞的杀伤作用受光敏剂的浓度及照光能量密度的影响,且明显强于HpD,临床应用于滑膜切除术可能具有更大的优势。     

瘢痕成纤维细胞对血卟啉单甲醚的吸收特性及其光动力效应

目的探讨增生性瘢痕成纤维细胞（HSF）对光敏剂血卟啉单甲醚（HMME）的吸收特性和光动力疗法（PDT）的杀伤效应。方法取原代培养的HSF,经流式细胞仪（FCM）检测HMME浓度（0～40μg/ml）和孵育时间（0～120 min）对HSF细胞吸收HMME的影响;MTT法检测HMME-PDT对HSF细胞存活率的影响。结果在一定HMME浓度范围内（0～40μg/ml）,HSF细胞对HMME的吸收量随HMME浓度和孵育时间的增加而增大。实验范围内的HMME-PDT对HSF细胞的杀伤效应与HMME浓度和激光能量密度正相关。结论 HSF对HMME的吸收随HMME浓度和孵育时间的增加而增大,HMME-PDT处理HSF时,光敏剂HMME浓度和激光能量密度是影响细胞存活率的重要因素。     

血啉甲醚体外光敏反应机制研究

目的：探讨血啉甲醚（HMME）及血卟啉衍生物（HpD)体外光敏化反应的机制。方法：采用HMME及HpD光敏引起还原型辅酶I（NADH）氧化为中介的鲁米诺(luminol)化学发光法（CL），探讨HMME及HpD光敏反应特点，选择性应用单态氮（^1O2)及活性氧物质（ROS）的专一清除剂，研究^1O2及RSO在HME及HpD光敏反应中的作用。结果:^1O2专一清除剂几乎完全抑制了HMME和HpD的化学发光，ROS清除剂对化学发光没有明显影响。HMME化学发光值最高可达509595mV，反应持续时间48s,^1O2的总产量12230280。HpD的化学发光值最高49000mV，反应时间235s,^1O2的总产量5757500。结论：HMME及HpD的光敏化产物主要是^1O2，HMME光敏化产生^1O2的光量子产率高于HpD，^1O2生成速度比HpD快，HMME自敏光氧化速度也比HpD快。在鲜红斑痣的的治疗中，当血供正常时，HMME光敏损伤作用可能更强，组织选择性可能更好。     

血啉甲醚的光漂白特性

目的 研究新型光敏剂血啉甲醚（hematoporphyrin monomethyl ether,HMME)在肿瘤诊断应用中的光漂白特性。方法 采用组织光学模型对HMME原液在暗室避光条件下进行稀释,样品溶液中HMME的浓度分别为1、2、3、4和5μg/ml。盛装在计数盘上的样品溶液在Kr^ 激光照射下,利用检测装置实时记录反映样品中光敏剂浓度的荧光强度。结果 激发光功率相同时,HMME的光漂白时间随着光敏剂浓度的增大而增加。光敏剂浓度相同时,其光漂白时间随着激发光功率的增大而减小。无论光敏剂浓度和激发光功率多大,光敏剂的光漂白规律都基本一致。实验结果与理论分析相符合。结论 HMME的光漂白特性能满足临床诊断肿瘤的要求,是一种性能优良的新型光敏剂。