独立生长因子1在内毒素耐受小鼠肺组织中的作用研究

目的:研究独立生长因子1(Gfi1)在内毒素耐受小鼠接受大剂量内毒素(LPS)刺激后的表达。方法:74只C57BL/6小鼠随机分两组,对照组用0．9%NaCl注射后用大剂量LPS刺激,内毒素耐受组用小剂量LPS预处理后用大剂量LPS刺激。比较两组小鼠存活率,各时间点肺组织病理。用ELISA法检测肺组织TNF-α,RT-PCR检测肺组织Gfi1 mRNA,免疫组化法检测肺组织Gfi1蛋白表达。结果:内毒素耐受组小鼠存活率高,肺组织炎症反应轻,LPS刺激后TNF-α水平未见上升;LPS刺激后2h,6h小鼠肺组织Gfi1的mRNA表达较对照组高(P＜0．01);LPS刺激后6h、12h免疫组化显示小鼠肺组织Gfi1表达比对照组高(P＜0．01)。结论:内毒素耐受时,大剂量内毒素引起的肺部炎症反应较轻可能与肺部Gfi1高表达有关。     

新生小鼠全身炎症反应综合征时肺组织糖皮质激素受体的表达及意义

目的 检测小鼠全身炎症反应综合征(SIRS)时肺组织糖皮质激素受体(GR)的表达,探讨GR在内毒素引起SIRS过程中的作用.方法 40只新生小鼠随机分为4组,每组10只:实验组A、B、C及对照组D.实验组以尾静脉注射脂多糖(LPS)法建立SIRS模型,其中实验组A予麻醉后尾静脉注射LPS(5 mg/kg);实验组B、C均先予LPS预处理:实验组B予腹腔注射LPS(0.25 mg/kg),24 h后处理同实验组A;实验组C予腹腔注射LPS(0.25 mg/kg),24 h后再次腹腔注射LPS(0.5 mg/kg),第2次注射24 h后处理同实验组A;对照组D仅予以麻醉.各组末次注射24 h后采集肺脏标本,行HE染色肺组织病理评分,免疫组化检测GR蛋白、逆转录聚合酶链反应法(RT-PCR)检测GR mRNA的表达.结果 (1)小鼠肺组织病理评分实验组A(6.44±1.16)、B(4.12±1.07)和C组(4.10±1.31)均高于对照组D(2.52±0.93,P均＜0.05);LPS预处理组B、C的肺组织病理评分明显低于实验组A(P均＜0.05).(2)对照组D小鼠肺组织GR蛋白及GR mRNA的表达水平高于实验组A,低于预处理组B和C,差异有统计学意义(P均＜0.01).结论 新生小鼠SIRS时肺组织GR表达减少,其与SIRS的发展、转归相关;LPS重复刺激可使新生小鼠产生耐受性,耐受性的产生与GR的表达调高相关.     

NG-硝基-L-精氨酸对脂多糖诱导大鼠肺损伤炎症反应和核因子-κB信号通路的影响

目的 观察非选择性一氧化氮合酶(NOS)抑制剂NG-硝基-L-精氨酸(NG-nitro-L-arginine, L-NA)对脂多糖诱导大鼠肺损伤炎症反应和核因子-κB(NF-κB)信号通路的影响.探讨L-NA对肺组织损伤的保护作用及其机制.方法 健康雄性SD大鼠随机分为正常对照组、模型组(LPS组)和L-NA治疗组(L-NA组).模型组和L-NA组静脉注射脂多糖(LPS)5 mg/kg复制内毒素性肺损伤模型,3 h和6 h后腹腔注射L-NA(L-NA组)和生理盐水(对照组及LPS组),治疗3 h.免疫组化染色分析肺组织中核因子-κB(NF-κB)的核移位和肺组织细胞间黏附分子-1(ICAM-1)表达;放射免疫法分别测定肺组织中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素-6(IL-6)的含量;光镜、电镜观察肺组织病理变化.结果 与对照组比较,大鼠肺损伤后NF-κB活化,明显从细胞浆移位于细胞核,表达量也显著增加;ICAM-1蛋白表达上调;肺组织中TNF-α、IL-6含量明显升高.肺损伤3 h用L-NA治疗3 h后, NF-κB从细胞浆向细胞核的移位被明显限制,NF-κB的表达量、肺组织中ICAM-1的表达明显低于相应的LPS组,肺组织病理改变减轻;但TNF-α、IL-6含量没有明显的变化,肺损伤6 h用L-NA治疗3 h对LPS引起的ICAM-1的表达和TNF-α、IL-6含量变化没有明显影响.结论 肺损伤3 h后给予L-NA可减轻内毒素性肺损伤、抑制核因子的活化,在一定程度上阻断NF-κB相关信号通路的传导是其机制之一.     

角质细胞生长因子受体转基因对急性肺损伤时肺泡上皮细胞钠离子通道的影响

目的 观察角质细胞生长因子受体(KGFR)腺病毒表达载体在大鼠急性肺损伤前后对肺泡Ⅱ型上皮细胞钠离子通道表达的促进作用,从而验证基因治疗急性肺损伤的效果.方法 将雄性SD大鼠40只分成4组:正常对照组(n=8),致伤对照组(n=10),正常转基因组(n=10),致伤转基因组(n=12).用脂多糖(LPS)造成急性肺损伤模型,以肺组织明显肿大病变为制模成功标准.正常转基因组和致伤转基因组均通过大鼠尾静脉注射KGFR基因的腺病毒表达载体应用液1 mL,72 h后致伤转基因组和致伤对照组分别通过大鼠尾静脉以5 mg/kg注射LPS,正常转基因组和正常对照组则注射等量的生理盐水.过48 h后,断头处死所有实验组大鼠,取肺组织进行实验.通过免疫组化和免疫电镜检测各组大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞钠离子通道的表达情况.数据采用完全随机区组设计的方差分析,行LSD-t检验,以P<0.05为差异具有统计学意义.结果 肺泡Ⅱ型上皮细胞钠离子通道表达水平(免疫组化)由高到低依次为:正常对照组(PU值=47.7±3.33),正常转基因组(PU值=46.9±5.21),致伤转基因组(PU值=29.19±4.11)和致伤对照组(PU值=5.1±2.3);致伤转基因组的钠离子通道表达水平低于正常转基因组(t=9.134,P<0.001)和正常对照组(t=10.601,P<0.001),但明显高于致伤对照组(t=16.466,P<0.001).结论 KGFR腺病毒表达载体转基因效果明显,能够在LPS致伤情况下有效促进钠离子通道的表达,缓解肺泡腔内钠水潴留,达到转基因治疗肺损伤的效果.     

脂氧素A4对内毒素性肺损伤小鼠的保护作用

目的探讨脂氧素A4对脂多糖诱导小鼠急性肺损伤的影响。方法36只雄性C57BL/6小鼠,随机分为对照组、脂氧素A4组、ZnPP组、内毒素组、脂氧素A4治疗组(LXA4 LPS)和ZnPP 脂氧素A4治疗组(ZnPP LXA4 LPS),每组6只。雾化吸入脂多糖8h后,测定肺泡灌洗液白细胞计数、中性粒细胞计数和TNF-α含量。测定肺组织髓过氧化物酶(MPO)活性、HO-1的蛋白表达和活性。结果与LPS组比较,脂氧素A4治疗组肺组织中性粒细胞浸润减少,MPO活性、TNF-α浓度均降低(P<0·01),肺组织损伤减轻,而HO-1的蛋白表达和活性明显升高,HO-1抑制剂ZnPP减弱脂氧素A4的保护作用。结论脂氧素A4能减轻内毒素诱导的急性肺损伤。     

过氧化物酶增殖体激活受体αmRNA在急性肺损伤大鼠肺组织表达的变化

目的观察内毒素(LPS)复制的急性肺损伤(ALI)大鼠肺组织过氧化物酶增值体激活受体α(PPARα)mRNA表达的变化,探讨PPARα在ALI中可能的作用.方法将40只雄性Wistar大鼠随机分为对照组,LPS致伤1、2、4、8 h组.用LPS(5 mg/kg)静脉注射复制大鼠ALI模型,分别在LPS致伤后1、2、4、8 h时处死大鼠,采用RT-PCR与ELISA法检测肺组织中PPARα和肿瘤坏死因子α(TNFα)mRNA的表达及肺组织匀浆中TNFα浓度.结果LPS致伤后2、4、8 h肺组织病理积分较对照组明显升高(P均＜0.01);LPS致伤后2、4 h PPARα mRNA表达(IOD值)较对照组显著降低(P＜0.05);LPS致伤后1、2、4、8 hTNFα mRNA(IOD值)和蛋白水平表达均较对照组显著升高(P均＜O.01).结论PPARα mRNA在ALI大鼠肺组织表达降低;而肺组织TNFα mRNA和蛋白水平均升高.PPARα在ALI的发病机制中具有一定的作用.     

依达拉奉对内毒素致急性肺损伤大鼠肺组织bcl-2、fas表达的影响

[目的]探讨依达拉奉在急性肺损伤治疗中的作用及其机制.[方法]健康雄性Wistar大鼠,股静脉注射内毒素（lipopolysacchairde,LPS）复制急性肺损伤（acute lung injury,ALI）动物模型.采用单独给甲基强的松龙（甲强龙）（A组）,甲强龙联合依达拉奉（B组）.观察两组病理形态及肺损伤相关指标,并用免疫组化等技术观察其肺组织细胞凋亡相关基因bcl-2、fas表达情况.[结果]A组肺损伤指标（肺系数、蛋白含量和肺泡通透指数）、肺组织病理学改变显著改变.而B组病变局限且程度较A组轻,渗出比A组明显减少.免疫组化结果显示应用依达拉奉后肺组织表达bcl-2呈阳性.[结论]依达拉奉对内毒素致急性肺损伤大鼠能够有效阻抑内毒素导致的炎症反应,同时可以改善肺泡毛细血管血流灌注状态;影响肺组织表达bcl-2、fas,可能是其有效减轻肺损伤的基础.     

血必净对内毒素诱导的急性肺损伤大鼠肺血管通透性的保护

目的:探讨血必净对内毒素诱导的急性肺损伤大鼠肺血管通透性的影响.方法:SD大鼠144只随机分为正常对照组、内毒素(LPS)组和血必净(LPS+XBJ)组,每组分肺泡灌洗和伊文思蓝2个亚组.分别于给药后1、2、4 h处死大鼠.采用静脉注射LPS(5 mg/kg)建立急性肺损伤模型.观察各组肺组织病理学变化,检测各组肺泡灌洗液白细胞计数和中性粒细胞比例、肺血管通透性(伊文思蓝含量).结果:LPS组1、2、4 h各时间点白细胞计数和中性粒细胞比例较正常对照组显著升高(P<0.01);LPS+xBJ组1、2、4 h各时间点白细胞计数和中性粒细胞比例较LPS组显著降低(P<0.01).LPS组1、2、4 h各时间点伊文思蓝含量较正常对照组显著升高(P<0.01);LPS+XBJ组1、2、4 h各时间点伊文思蓝含量较LPS组显著下降(P<0.01或P<0.05).染毒后4 h,LPS组大鼠肺损伤明显,LPS+XBJ大鼠肺损伤较LPS组有所减轻.结论:血必净可降低肺血管通透性,对LPS诱导的肺损伤有保护作用,可能与血必净拮抗肺损伤时中性粒等炎性细胞在肺内浸润有关.     

角质细胞生长因子-2对脂多糖所致大鼠急性肺损伤的保护作用

目的：观察静脉注射不同剂量角质细胞生长因子-2（keratinocyte growth factor 2,KGF-2）对脂多糖（lipopolysaccharide,LPS）所致大鼠急性肺损伤的保护作用.方法：采用气道内滴注LPS（5 mg/kg）的方法建立大鼠急性肺损伤模型,以相同体积磷酸盐缓冲液（PBS）气道内滴注作为对照.LPS滴注完毕1 h后,经尾静脉注射KGF-2（5、10及20 mg/kg）;LPS气道内滴注24 h后,进行动脉血气分析,检测肺组织湿/干质量比、肺泡灌洗液总蛋白浓度、肺泡灌洗液炎性因子水平,并行肺泡灌洗液白细胞计数、白细胞分类计数以及肺组织病理检查.结果：LPS致伤组动脉血氧分压较对照组显著降低,而其肺泡灌洗液总蛋白浓度、肺泡灌洗液白细胞数及中性粒细胞数、肺组织湿/干质量比均较对照组显著升高,差异均有统计学意义（P＜0.05）.肺组织病理检查结果提示,LPS致伤组炎性细胞浸润、肺组织实变、间质水肿等损伤表现显著.不同剂量KGF-2静脉注射对LPS所致急性肺损伤均有不同程度的保护作用,但剂量为10 mg/kg时保护作用最明显.LPS致伤组肺泡灌洗液中巨噬细胞炎性蛋白2（macrophage inflammatory protein 2,MIP-2）、白细胞介素-6（interleukin 6,IL-6）水平均较对照组显著升高（P＜0.05）,而KGF-2给药组MIP-2、IL-6水平均较LPS致伤组明显降低,差异均有统计学意义（P＜0.05）.结论：KGF-2对LPS所致急性肺损伤有明显的保护作用,KGF-2在急性肺损伤的治疗中可能有应用前景.     

内毒素致急性肺损伤大鼠肺组织信号转导和转录激活因子1的调控作用

目的 探讨信号转导和转录激活因子1(STAT1)在内毒素致急性肺损伤(ALI)大鼠肺组织中的表达及其调控作用.方法 静脉注射内毒素脂多糖(LPS)制备大鼠ALI模型.将动物随机分为对照组、LPS组、地塞米松(DEX)干预组;DEX干预组灌胃DEX 0.135 mg/kg,对照组和LPS组分别灌胃等量生理盐水,连用5 d后LPS组和DEX干预组经尾静脉注射LPS 5 mg/kg,对照组以生理盐水1 ml替代.于致伤后1、2、4、8、16 h各处死6只大鼠,取肺组织,用蛋白质免疫印迹法(Western blotting)测定STAT1表达的动态变化,光镜下观察肺组织病理学改变.结果 与对照组比较,LPS组STAT1的活化从1 h开始增高,4 h达高峰,然后逐渐下降;2、4、8 h时STAT1表达显著升高(P均<0.01);DEX干预组STAT1表达趋势同LPS组,但2、4、8 h时STAT1表达显著低于LPS组(P均<0.05).结论 内毒素致ALI中存在STAT1异常表达;STAT1参与了肺组织炎症的形成.     

二烯丙基三硫对急性肺损伤小鼠肿瘤坏死因子-α表达及核转录因子-kB活性的影响

目的 探讨二烯丙基三硫（DATS）对脂多糖（LPS）致急性肺损伤（ALI）小鼠肿瘤坏死因子-α（TNF-α）表达及核转录因子-kB（NF—kB）活性的影响。方法 复制LPS致ALI小鼠模型。实验动物按随机数字表法分为生理盐水对照组、ALI模型组、DATS预防组、DATS治疗组和DATS对照组。采用酶联免疫吸附法（ELLSA）测定各组血清和肺组织匀浆上清液中TNF—α浓度；用逆转录-聚合酶链反应（RT—PCR）检测各组肺组织TNF-α mRNA表达；凝胶电泳迁移率改变分析（EMSA）检测肺组织NF—kB活性。结果 ALI模型组2h血清及肺组织TNF—α含量明显升高（P均〈0．01），6h有所降低，但仍高于生理盐水和DATS对照组（P均〈0．01）；DATS预防组2h和6h血清及肺组织TNF—α含量较ALI模型组均明显降低（P〈0．05或P＜0．01），但DATS治疗组无明显效果（P均〉0．05）。ALI模型组2h肺组织TNF—α mRNA表达较生理盐水对照组和DATS对照组均明显升高（P均〈0．01），DATS预防组可明显抑制肺组织中TNF—α mRNA表达（P〈0．05），但DATS治疗组无明显效果。ALI模型组肺组织NF～kB活性较生理盐水对照组和DATS对照组均明显升高（P均〈0．05），DATS预防组可明显抑制肺组织NF—kB活性（P〈0．05），但DATS治疗组的抑制效果不明显。结论 预先给予DATS可抑制LPS诱导的ALI小鼠肺组织NF—kB活性和TNF—α mRNA表达，减少血清及肺组织中TNF—α的生成，具有一定的抗ALI作用。     

Effects of combined naloxone and methylprednisolone on nuclear factor-kappaB expression in the lung in acute lung injury in rats]

OBJECTIVE: To investigate the effects of a combination of naloxone and methylprednisolone on nuclear factor-kappaB (NF-kappaB) p65 expression in the lung tissue in lipopolysaccharide (LPS)-induced acute lung injury (ALI) in rats. METHODS: ALI models were reproduced by intratracheal instillation of LPS (3 mg/kg). Four hours after LPS instillation, rats were randomly divided into five groups: normal saline group, LPS group, methylprednisolone group, naloxone group (LPS+naloxone) and combined drug group (LPS+naloxone+methylprednisolone). The level of interleukin-8 (IL-8) in serum was measured by immunoassay. Meanwhile, the expression of NF-kappaB p65 in the lung tissue was determined with immunohistochemical staining. RESULTS: Naloxone and methylprednisolone significantly reduced the LPS-induced increase in IL-8 concentrations in serum in vivo, and suppressed the activation of NF-kappaB p65 in the lung tissue. CONCLUSION: NF-kappaB activation is involved in the LPS-induced ALI in rats. Combination of naloxone and methylprednisolone could suppress the increase of IL-8 content and NF-kappaB activation in the lung tissue of rat in vivo in our experiment.     

氨溴索对急性肺损伤的保护作用

目的 通过建立急性肺损伤大鼠模型和体外肺泡巨噬细胞培养体系,观察急性肺损伤中,肺泡巨噬细胞在氨溴索干预前后细胞因子表达的情况,探讨氨溴索可能的肺损伤保护机制.方法 一、体内实验:大鼠24只,随机分成3组,每组8只:(1)正常对照组;(2)急性肺损伤组:采用腹腔注射酵母悬液方法复制大鼠急性肺损伤模型;(3)氨溴索治疗组:建立ALI大鼠模型后用氨溴索干预.观察指标主要有:肺部病理学改变、测量大鼠肺系数、血氧分压,肺泡巨噬细胞TNF-α、IL-10、IL-24 mRNA的表达则采用通过逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)技术检测.二、体外实验:收集肺泡巨噬细胞后分3组:(1)正常对照组:肺泡巨噬细胞中加无菌生理盐水;(2)LPS组:予LPS 10 mg/L刺激肺泡巨噬细胞;(3)LPS+氨溴索组:予LPS10 mg/L和氨溴索180 μmol/L刺激肺泡巨噬细胞.分别于刺激前(0 h),刺激后(6、12、24 h)留取细胞.通过RT-PCR技术检测肺泡巨噬细胞TNF-α、IL-10、IL-24 mRNA的表达变化.结果 氨溴索治疗组在病理改变,肺系数,动脉血氧分压等各项指标均优于急性肺损伤组,氨溴索干预治疗组,TNF-α、IL-10、IL-24 mRNA表达水平均明显下降,与急性肺损伤组比较差异有统计学意义(P＜0.05),但仍高于正常对照组.体外实验也得出了相同的结论.结论 氨溴索可抑制急性肺损伤或LPS刺激的肺泡巨噬细胞TNF=α、IL-10、IL-24细胞因子mRNA的表达水平.     

酸敏感离子通道-3在急性肺损伤大鼠肺组织中的表达

目的 探讨酸敏感离子通道-3(ASIC3)在急性肺损伤肺组织中的表达.方法 24只雄性SD大鼠随机分为4组(每组6只):脂多糖(LPS)刺激组(LPS 2 h,LPS 4 h,LPS 6 h),分别为LPS刺激后2,4,6 h;生理盐水对照组;LPS组静脉注射LPS复制大鼠急性肺损伤模型,对照组静脉注射同等剂量生理盐水,以肺部特征性病理改变作为ALI模型成功的主要指标.各组检测动脉血气,留取肺组织标本,观察肺湿/干质量比、肺组织病理,免疫组化检测肺组织ASIC3的表达.统计数据用均数±标准差表示,采用SPSS 13.0统计软件行单因素方差分析、Dunnett-t检验和Kendall秩相关系数(Kendall'stau_b)检测其相关性,以P<0.05为差异具有统计学意义.结果 LPS 2 h,4 h,6 h组大鼠的动脉血氧分压(PaO2)分别为(67.47±6.01)mmHg,(59.17±7.18)mmHg,(52.54±7.62)mmHg,比对照组(98.15±1.06)mmHg低,差异有统计学意义(P<0.01);pH值LPS4 h(7.28±0.04),6 h(7.24±0.03)组显著低于对照组(7.35±0.01)(P<0.01).光镜下见肺组织内的炎性细胞逐渐增多,肺泡隔增宽,肺间质水肿,肺结构破坏逐渐加重;LPS注射后4 h,6 h肺泡上皮细胞内ASIC3的表达分别是(205.91±10.12),(196.51±18.60),显著低于对照组(220.23±10.11)(P<0.05);肺的湿/干质量比6 h组(5.18±0.21)亦明显高于对照组(4.45±0.18)(P<0.05).结论 LPS诱导的大鼠急性肺损伤肺泡上皮细胞和支气管黏膜上皮有ASIC3表达.     

角化细胞生长因子对内毒素诱导急性肺损伤的保护作用

目的 初步研究角化细胞生长因子(KGF)对脂多糖(LPS)诱导大鼠急性肺损伤(ALI)的保护作用及可能的机制.方法 将36只SD大鼠按随机数字表法分为3组,每组12只.模型组尾静脉注射LPS 5 mg/kg建立ALI动物模型.对照组和KGF组注射等量生理盐水.KGF组在注射LPS后气道给予KGF 5 mg/kg.8 h后处死各组大鼠观察肺组织病理改变,并测量肺血管通透性、肺上皮细胞通透性、肺湿/干重(W/D)比值以及Ⅱ型肺泡上皮细胞(ATⅡ)增殖、修复功能改变.结果 光镜下观察显示KGF可有效减轻LPS所致ALI的肺组织病理改变,表现为肺血管充血、水肿减轻,几乎无炎性细胞浸润.与模型组比较,KGF组肺血管通透性[(0.026±0.049)%比(0.087±0.027)%]和肺泡上皮通透性[(0.692±0.017)%比(0.931±0.029)%]及W/D比值(4.778±0.243比6.869±0.153)均明显降低(P<0.05或P<0.01),ATⅡ细胞增殖及修复功能则明显提高[ATⅡ数量(个):6.083±1.781比4.666±1.923,损伤面积(mm2):2.946±0.453比6.181±0.975,P<0.05和P<0.01].结论 KGF可减轻LPS所致ALI,其机制可能是通过增强ATⅡ细胞的增殖及修复能力从而起到有效的保护作用.     

大黄对急性肺损伤大鼠热休克蛋白70表达的影响

目的探讨脂多糖(LPS)致急性肺损伤(ALI)中热休克蛋白70(heatshockprotein,HSP)的表达以及大黄对ALI的保护作用机制。方法用Wistar大鼠复制ALI的动物模型,动物随机分成四组:对照组、ALI组、大黄预防用药组、大黄治疗用药组,每组15只。大黄采用腹腔注射给药,分别于注射LPS或生理盐水后2h处死动物。用HE染色观察组织病理学改变,对ALI组和大黄用药组测定肺系数和动脉血氧分压(PaO2),并应用免疫组织化学和蛋白印迹方法检测组织中HSP70的表达。结果ALI组肺间质水肿,肺泡腔内可见大量中性粒细胞浸润和血浆蛋白渗出,肺血管内皮细胞损伤。ALI组HSP70的表达量较少,大黄用药组HSP70表达量增强。大黄用药组肺系数测定明显降低,PaO2明显升高。ALI组肺系数测定升高,PaO2降低。结论大黄对ALI的肺组织起保护作用,并且预防组强于治疗组。大黄能增加LPS诱导ALI组织中HSP70的表达,表明大黄对ALI的肺组织起保护作用与HSP70相关。     

Expression of triggering receptor-1 in myeloid cells of mice with acute lung injury

BACKGROUND:

Myeloid cell (TREM-1) is an important mediator of the signal transduction pathway in inflammatory response. In this study, a mouse model of acute lung injury (ALI) by intraperitoneal injection of lipopolysaccharide (LPS) was established to observe the expression pattern of TREM-1 in lung tissue and the role of TREM-1 in pulmonary inflammatory response to ALI.

METHODS:

Thirty BALB/C mice were randomly divided into a normal control group (n=6) and an ALI group (n=24). The model of ALI was made by intraperitonal injection of LPS in dose of 10 mg/kg. Specimens from peripheral blood and lung tissue were collected 6, 12, 24 and 48 hours after LPS injection. RT-PCR was used to detect TREM-1 mRNA, and ELISA was employed for detection of TREM-1 protein and TNF-a protein, and HE staining was performed for the pathological Smith lung scoring under a light microscope.

RESULTS:

The expressions of TREM-1 mRNA in lung tissue and blood of the ALI group 6, 12, 24, and 48 hours after injection of LPS were higher than those in the control group. The levels of TREM-1 protein and the levels of TNF-a protein in lung tissue of the ALI group 6, 12, 24, and 48 hours after LPS injection were higher than those of the control group; the level of TREM-1 protein peaked 12 hours after LPS injection, but it was not significantly correlated with the expression of TREM-1 mRNA (P=0.14); the TNF-a concentration was positively correlated with TREM-1 levels in lung tissue and with Smith pathological score (r=0.795, P=0.001:r=0.499, P=0.034), but not with the expression of TREM-1 mRNA (P=0.176).

CONCLUSIONS:

The expression of TREM-1 mRNA in lung tissue of mice with ALI is elevated, and the expression of TREM-1 mRNA is related to the level of TNF-a and the severity of inflammatory response to ALI. The expressions of the TREM-1 gene are not consistent with the levels of TREM-1 protein, suggesting a new functional protein involved in immune regulation.KEY WORDS: Acute lung injury, Triggering receptor-1, Myeloid cell, Expression, Tumor necrosis factor, Pathological scoring     

Inhibitory effect of melatonin on the expression of nuclear factor-kappaB during acute lung injury in rats

OBJECTIVE: To investigate the protective effect of melatonin (MT) on lung tissue during acute lung injury (ALI) in rats and its possible mechanism. METHODS: Ninety-six Sprague-Dawley (SD) rats were randomly divided into four groups: control group, lipopolysaccharide (LPS) group, dexamethasone (DEX) and MT treatment group, with 24 rats in each group. Rat model of ALI was established by instilling LPS intratracheally, and DEX and MT were injected intraperitoneally. All rats in each group were sacrificed at 3, 6 and 12 hours after intratracheal instillation of LPS, and lung tissue samples were harvested. Myeloperoxidase (MPO) activity, superoxide dismutase (SOD) activity and malondialdehyde (MDA) contents in lung tissue samples were detected in each group. In addition, the expression of nuclear factor-kappaB (NF-kappaB) was assessed with immunohistochemistry staining in lung tissues. RESULTS: Compared with control group, SOD activity in LPS group decreased at different time points significantly (P<0.05 or P<0.01), but MPO activity, MDA content and the expression of NF-kappaB increased obviously (P<0.05 or P<0.01); the administration of MT and DEX could mitigate above values significantly (P<0.05 or P<0.01). The changes in above each indexes were most obvious at 6 hours, either reaching the peak or the trough, respectively. CONCLUSION: MT possesses protective effect on lung tissues during ALI through scavenging free radicals and inhibiting the activation of NF-kappaB.     

肌球蛋白轻链激酶抑制剂对急性肺损伤的保护作用

目的 探讨肌球蛋白轻链激酶(MLCK)抑制剂ML-7对细菌脂多糖(LPS)诱导的人肺动脉内皮细胞(HPAEC)和急性肺损伤(ALI)的影响.方法 体外培养HPAEC,待4～6代予ML-7(10 μmol/L)孵育60 min后,再给予LPS刺激60 min,四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测HPAEC活性;荧光显微镜下观察磷酸化肌球蛋白轻链激酶(p-MLCK)免疫反应细胞.20只雌性BALB/c小鼠随机分组,LPS组鼻内注入LPS(1 μg/g);ML-7组在LPS滴鼻前进行ML-7干预.观察小鼠肺湿/于重(W/D)比值、支气管肺泡灌洗液(BALF)蛋白含量、肺组织髓过氧化物酶(MPO)活性和病理学改变;用免疫组化法检测肺组织MLCK和CD11b阳性免疫反应细胞,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测肺组织MLCK mRNA表达,蛋白质免疫印迹法(Western blotting)检测肺组织MLCK蛋白表达.结果 与LPS组比较,HPAEC在ML-7孵育下吸光度(A)值增加(P<0.01),p-MLCK免疫反应细胞明显减少(P<0.05).肺W/D比值、肺组织MPO活性、BALF蛋白含量均明显降低(P<0.05或P<0.01).病理结果显示,LPS组小鼠肺部炎症反应明显,以中性粒细胞浸润为主,肺泡充血、水肿;ML-7组肺部炎症及充血明显改善.免疫组化显示位于内皮的MLCK免疫反应细胞和位于炎性细胞的CD11b在ML-7组均较LPS组明显减少.ML-7组肺组织MLCK的mRNA和蛋白表达均较LPS组降低(P均<0.05).结论 MLCK特异性抑制剂ML-7能提高LPS诱导的HPAEC生长活性,降低p-MLCK表达;减轻LPS诱导的中性粒细胞在肺内浸润、肺水肿及MLCK、CD11b蛋白和MLCK mRNA的表达.表明抑制MLCK活性可能通过减弱MLCK磷酸化而达到稳定血管屏障功能,防治ALl的作用.     

丹参酮对脂多糖性急性肺损伤大鼠肺组织ACE2表达的影响

目的:探讨血管紧张素转换酶2(ACE2)在脂多糖性急性肺损伤大鼠中的表达变化和作用机制及丹参酮IIA磺酸钠(STS)干预的影响.方法:45只健康雄性Wistar大鼠随机分为正常生理盐水对照组(NS组)、急性肺损伤组(LPS组)、丹参酮IIA磺酸钠干预组(STS组),LPS组和STS组通过股静脉注射LPS(5 mg/kg)建立急性肺损伤模型.STS组在注射LPS前30 min静脉给药10 mg/kg,NS组和LPS组给予等量NS.3组又分为6 h、12 h、24 h 3个时间点亚组,每组5只,检测血气分析、肺组织湿/干重比(W/D)、苏木精-伊红染色、ACE2免疫组织化学表达.结果:与LPS组相比,STS组急性肺损伤的程度明显减轻,PaO2显著改善(P<0.05),肺W/D比值降低(P<0.05),苏木精-伊红染色显示肺组织损伤减轻.免疫组织化学检测ACE2表达明显上升(P<0.05).结论:肺组织中ACE2表达的下降在急性肺损伤的发病机制中起到重要作用,而丹参酮可以改善急性肺损伤大鼠的肺损伤程度,其机制可能与增加ACE2的表达有关.