肾上腺髓质素对局灶性脑缺血再灌注大鼠神经元凋亡、梗死体积及Egr-1的影响(英文)

目的探讨肾上腺髓质素(adrenomedullin, ADM)对局灶性脑缺血再灌注大鼠神经元凋亡、梗死体积及早期生长反应基因Egr-1 mRNA表达的影响,进一步研究ADM在局灶性缺血再灌注脑损伤中的作用。方法采用线栓法制成大鼠大脑中动脉缺血再灌注(MCAO)模型,阻断血流2 小时后进行再灌注。TTC染色法测定梗死体积,TUNEL法检测神经元凋亡,原位杂交法检测Egr-1 mRNA阳性细胞表达。结果大鼠局灶性脑缺血再灌注后脑梗死体积为269 ± 20 mm3,股静脉、颈动脉、侧脑室注射ADM 后,梗死体积分别缩小为239 ± 17mm3(减少11.2%),214 ± 14 mm3 (减少20.4%),209 ± 13 mm3 (减少22.3%)。颈动脉注射ADM和侧脑室注射ADM在减少脑梗死体积方面明显优于股静脉注射ADM(P < 0.05)。缺血再灌注组大鼠缺血侧大脑皮质、海马CA1区TUNEL染色阳性细胞明显多于假手术组(P < 0.01)。给予ADM后缺血侧大脑皮质、海马CA1区TUNEL染色阳性细胞显著少于缺血再灌注组,以颈动脉给予ADM组和侧脑室给予ADM组更明显(P < 0.01)。假手术组大鼠大脑皮质有少量Egr-1mRNA阳性细胞表达,缺血再灌注后缺血侧大脑皮质、海马Egr-1mRNA阳性细胞表达多于假手术组(P < 0.01),应用ADM后三组大鼠大脑皮质、海马Egr-1 mRNA阳性细胞的表达明显高于缺血再灌注组(P < 0.01),但以颈动脉给予ADM组和侧脑室给予ADM组Egr-1 mRNA阳性细胞表达增高最明显(P < 0.01)。结论股静脉、侧脑室和颈动脉给予外源性ADM能减少神经元凋亡,减少梗死体积,激活Egr-1 mRNA的表达。     

成年大鼠局灶脑缺血/再灌注后海马BDNFmRNA和bFGF mRNA的动态变化研究

目的观察局灶脑缺血/再灌注大鼠海马脑源性神经营养因子(brain derived neurotrophic factor,BDNF)mRNA和碱性成纤维生长因子(basic fibroblast growth factor,b FGF)mRNA的动态表达。方法将108只雄性Wistar大鼠随机分为正常组(NC组)、假手术组(SC组)、模型组(I/R组),每组再于缺血1h后再灌注于1,3,7,14,21,28d六个时间点进行观察,正常组和假手术组于相应时间点同步观察。采用线栓法制备大鼠右侧大脑中动脉局灶脑缺血/再灌注模型。应用原位杂交法检测大鼠缺血再灌注后1,3,7,14,21,28d缺血侧海马BDNF mRNA和b FGF mRNA表达。结果正常海马区可见少量BDNF mRNA和b FGF mRNA的阳性表达。BDNF mRNA阳性反应主要集中于齿状回颗粒细胞以及CA2、CA3中的锥体细胞胞浆中,b FGF mRNA主要位于海马锥体细胞层、CA1、CA2区。局灶脑缺血/再灌注后,I/R组缺血侧海马BDNF mRNA表达增加,主要见于齿状回颗粒细胞层和锥体细胞层。缺血/再灌注后1d时BDNF mRNA阳性反应即有增多,3d时达到高峰(P0.01),阳性产物染色较深,7d后迅速下降(P0.01),28d时接近正常水平。局灶脑缺血/再灌注后,I/R组缺血侧海马可见b FGF mRNA的强阳性表达,1d时开始增加(P0.05),3d即达一小高峰(P0.01),7d开始下降,21d时明显下降,28d时降到正常水平(P0.05)。结论局灶脑缺血/再灌注可上调BDNF mRNA和b FGF mRNA的表达,有利于脑缺血后神经功能恢复,具有神经保护作用。     

电刺激小脑顶核对成年大鼠局灶脑缺血再灌注后脑内神经营养因子bFGF mRNA的影响

目的 观察对局灶脑缺血再灌注大鼠进行电刺激小脑顶核(FNS)后,侧脑室和海马神经营养因子bFGF mRNA的动态变化.方法 将雄性Wistar大鼠随机分为正常组(NC组)、假手术组(SC组)、模型组(I/R组)、小脑顶核假刺激组(I/RFs组)、小脑顶核刺激组(I/RF组),每组于缺血再灌注后1 d,3 d,7 d,14 d,21 d,28 d 6个时间点进行观察(n=6).采用线栓法制备大鼠右侧大脑中动脉局灶脑缺血/再灌注模型.应用原位杂交检测缺血侧侧脑室和海马bFGF mRNA随缺血再灌注后的动态变化规律.结果 (1)在侧脑室区域,局灶脑缺血/再灌注后1 d,I/R组缺血侧bFGF mRNA 3 d时达一小高峰(P<0.01),7 d开始下降(P<0.01),14 d后迅速下降,28 d时下降到略高于正常水平(P<0.05);局灶脑缺血/再灌注后再给予FNS,I/RF组1 d时bFGF mRNA即明显增加(P<0.01),3 d时增加更明显(P<0.01),7 d才达到高峰(P<0.01),14 d后缓慢下降,28 d时虽已明显下降,但仍高于其他各组水平(P<0.05).(2)在海马,局灶脑缺血/再灌注后,I/R组缺血侧bFGF mRNA 1 d时开始增加(P<0.05),3 d即达一小高峰(P<0.01),7 d开始下降;局灶脑缺血/再灌注后再给予FNS,缺血侧海马bFGFmRNA的表达更加强烈,1 d时明显增加(P<0.01),3 d后bFGFmRNA继续升高(P<0.01),到7 d时才达高峰(P<0.01),峰值更高,14 d时缓慢下降(P<0.01).结论 FNS能够持续上调bFGF mRNA的表达,使其反应更迅速、表达更高,并使其高峰延迟,表达时程更长,提示FNS对缺血性脑损伤具有较持久的脑保护作用.     

3-硝基丙酸预处理对大鼠局灶性脑缺血Bcl-2和Bax mRNA表达的影响

目的探讨3-硝基丙酸(3-NPA)预处理对大鼠局灶性脑缺血半暗带Bc l-2和Bax mRNA表达的影响。方法将大鼠腹腔注射3-NPA 20 mg/kg,3 d后制作局灶性脑缺血再灌注模型;采用逆转录聚合酶链反应,观察3-NPA预处理对脑缺血再灌注1 h、6 h、12 h、24 h及48 h额顶部皮质Bc l-2和Bax mRNA表达的影响,并与假手术组和缺血再灌注组比较。结果与假手术组比较,缺血再灌注组和3-NPA预处理组各时间点Bc l-2和Bax mRNA表达极显著增强(均P<0.01);与缺血再灌注组比较,3-NPA预处理组各时间点Bc l-2mRNA表达显著增强(均P<0.05),再灌注12~48 h Bax mRNA的表达显著降低(均P<0.05)。结论增强Bc l-2的表达、抑制Bax的表达,可能是3-NPA预处理抑制细胞凋亡、诱导脑缺血耐受的机制之一。     

银杏叶制剂对大鼠脑缺血再灌注后N-甲基-D-天冬氨酸受体表达的影响及脑保护作用

目的研究局部脑缺血再灌注后N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)受体I型亚单位(NR1)mRNA表达与细胞凋亡的关系及银杏叶制剂(Egb)对其影响。方法140只SD大鼠被随机分成假手术组、缺血再灌组,即MCAO组和Egb治疗组。每组大鼠再随机分成4组:分别在再灌注后6,24,48,96 h处死。进行TUNEL染色检测缺血区细胞凋亡情况,并用原位杂交方法检测NR1 mRNA。结果MCAO组大鼠大脑皮质梗死灶的凋亡细胞和NR1mRNA表达与假手术组比较明显增强(P<0.01),而Egb治疗组这两项指标的表达明显低于MCAO组(P<0.01)。结论再灌注后脑组织中NR1mRNA表达增强,与细胞凋亡密切相关。银杏叶制剂可以明显抑制NR1mRNA的表达,减轻细胞凋亡。     

大鼠局灶性脑缺血再灌注后瞬时感受器电位C1、M7的表达变化

目的 研究大鼠局灶性脑缺血再灌注后瞬时感受器电位(TRP)C1和TRPM7的表达变化,进一步探讨局灶性脑缺血再灌注损伤的分子病理机制.方法 将50只Wistar大鼠按照随机数字表法分为假手术组、缺血2h再灌注3 h组、缺血2h再灌注12h组、缺血2h再灌注24h组、缺血2 h再灌注72 h组,每组10只.线栓法建立大鼠大脑中动脉阻塞再灌注模型,应用RT-PCR、Western blot和免疫组化染色方法分别检测再灌注后不同时相缺血侧皮层TRPC1和TRPM7 mRNA和蛋白水平的表达.结果 假手术组TRPC1和TRPM7均有均有少量表达.脑缺血2 h再灌注3 h TRPC1表达开始增加,随再灌注时间的延长表达逐渐增强,至再灌注12 h达高峰,然后逐渐减弱,再灌注72 h时仍高于假手术组水平,差异均有统计学意义(P<0.05).TRPM7表达也随再灌注时间的延长而增加,高峰在再灌注24h.结论 TRPC1和TRPM7参与了局灶性脑缺血再灌注损伤的病理过程.     

大鼠脑缺血再灌注后海马CA1区AS与Syp相关性分析

目的研究大鼠脑组织缺血再灌注后星形胶质细胞与Syp变化的关系。方法建立局灶性脑缺血再灌注模型,72只大鼠随机分为假手术组、缺血再灌注组,各时间点处死取脑,应用免疫组化法检测海马CA1区GFAP、Syp的表达。结果不同时间点缺血再灌注组GFAP、Syp表达均高于同时期假手术组(P<0.01);缺血再灌注组GFAP与Syp高度相关(P<0.01)。结论脑缺血再灌注后,海马CA1区星形胶质细胞与Syp变化具有高度相关性。     

大鼠局灶性脑缺血预处理后XBP-1表达的变化

目的 观察缺血预处理对大鼠脑缺血再灌注后X盒结合蛋白1(XBP-1)mRNA及其蛋白表达的影响.方法 SD大鼠60只,随机分为假手术组(SO)、脑缺血再灌注组(MCAO)、脑缺血预处理组(BIP)3组,每组按照再缺血后12h、1d、2d、3d4个时间点分为4个亚组.采用二次线栓法制备大鼠局灶性脑缺血预处理模型,用实时荧光定量PCR和Western blot法观察再缺血后各个时间点XBP-1 mRNA及其蛋白的表达变化.结果 MCAO组XBP-1 mRNA及其蛋白表达均于缺血再灌注后12h开始明显上升,24h达高峰(P＜0.01),随再灌注时间延长其表达逐渐下降,但仍保持较高表达水平(P ＜0.01);BIP组较MCAO组XBP-1 mRNA及其蛋白表达明显升高(P＜0.05,P＜0.01).结论 脑缺血预处理可能通过诱导XBP-1表达发挥其神经保护作用.     

垂体腺苷酸环化酶激活肽对大鼠脑缺血再灌注后诱导性一氧化氮合酶表达的影响

目的 探讨大鼠局灶性脑缺血再灌注时氧化氮合酶(iNOS)在PACAP脑保护机制中的作用.方法 采用大脑中动脉线栓法建立局灶性脑缺血再灌注模型,对36只大鼠随机分为假手术组、缺血再灌注组和PACAP组,在大鼠脑缺血2h后进行24h、48h再灌注,应用免疫组化法检测脑组织iNOS的表达.结果 脑缺血再灌注后,与假手术组比较,iNOS的表达量显著增加,阳性细胞数分别为60.02±4.23、80.36±6.24,P<0.01;应用PACAP后与缺血再灌注组比较,iNOS表达的峰值明显降低,分别为30.47±5.24、40.56±4.84,P<0.01.结论 PACAP能抑制大鼠局灶性脑缺血再灌注时iNOS的表达,这可能是其脑保护作用之一.     

垂体腺苷酸环化酶激活肽对大鼠脑缺血-再灌注后IL-1β表达的影响

目的 探讨PACAP对大鼠局灶性脑缺血-再灌注损伤后脑保护作用及保护机制.方法 采用大脑中动脉线栓法建立局灶性脑缺血-再灌注模型,对36只大鼠随机分为假手术组、缺血-再灌注组和PACAP组,在大鼠脑缺血2h后进行12h、24h再灌注,比较光镜下细胞损伤变性程度,应用免疫组化法检测IL-1β的表达.结果 PACAP组大鼠脑标本光镜下细胞损伤变性程度与缺血-再灌注组相比明显减轻;IL-1β灰度值PACAP组分别为120±5、114±4,与缺血-再灌注组178±4、162±6比较,有显著性差异(P<0.01).结论 PACAP能抑制大鼠局灶性脑缺血-再灌注时IL-1β的表达,可能是其脑保护作用之一.     

大鼠局灶性缺血再灌注后大脑皮质ADM及其mRNA的表达

目的探讨肾上腺髓质素（ADM）与脑缺血再灌注损伤的关系。方法采用线栓法制成大鼠大脑中动脉缺血再灌注模型，阻断血流2h进行再灌注。应用免疫组织化学法和RT—PCR法检测不同时间段大鼠局灶性脑缺血再灌注后大脑皮质ADM及其mRNA的表达，并进行动态观察。结果正常大鼠大脑皮质有ADM及其mR—NA的表达，假手术组ADM及其mRNA表达略高于正常组，P〉0．05；大鼠脑缺血再灌注后大脑皮质ADM及其mRNA过表达，与正常对照组及假手术组相比差异显著，P〈0．05。动态观察发现，脑缺血2h再灌注2h，大脑皮质ADM及其mRNA即表达，再灌注22h达高峰，至1w仍明显多于正常对照组，P〈0．05。结论脑缺血再灌注后ADM及其mRNA呈现规律性过表达。     

大鼠脑缺血再灌注PAF、PAF受体基因表达的变化

目的探讨大鼠局灶性脑缺血再灌注后血浆血小板活化因子(PAF)、PAF受体基因表达的变化.方法线栓法建立大鼠大脑中动脉闭塞(MCAO)及再通模型,应用RT-PCR技术检测MCAO及再通后缺血半暗带皮质PAF受体基因表达,同时用ELISA法检测对应血浆PAF值.结果单纯脑缺血24 h时缺血区皮质PAF受体mRNA含量并无显著变化,密度比值为0.98±0.13,再灌注6 h明显降低(0.63±0.08),24 h最低(0.44±0.06),随后逐渐回升.对应时相血浆PAF值单纯脑缺血组为(848±80)(pg/ml),再灌注12 h为最高,48 h降至对照组水平(568±45)(pg/ml).结论脑缺血再灌注可致PAF受体基因表达异常,推测与内源性PAF水平升高有关.     

重组人促红细胞生成素对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的保护作用

目的 探讨重组人促红细胞生成素(EPO)对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤所致炎性反应的保护机制。方法采用线拴法制备大鼠局灶性大脑中动脉缺血再灌注模型,应用TTC染色法、干湿重法、常规HE染色法观察EPO治疗前后再灌注24h脑梗死体积、脑组织含水量以及组织学变化,应用RT- PCR方法检测EPO治疗前后再灌注lh、3h、6h、12 h、24h、72 h缺血侧脑皮质IL-1β、TNF-α基因表达的变化。结果与假手术组相比,EPO可显著缩小缺血再灌注24h所致的脑梗死体积(P＜0.01),降低梗死侧脑组织含水量(P＜0.01),减轻病理学变化。缺血再灌注各时相点缺血侧皮层IL -lβ mRNA和TNF -α mRNA表达均显著上调(P＜0.01),12 h达高峰。EPO治疗后lh、3h、6h缺血侧皮层IL - 13 mRNA表达显著下降,与病理组相应时间点相比,分别降低了63％、55％和84％(P＜0.01)。EPO治疗后lh、3h、6h缺血侧皮层TNF -α mRNA表达亦显著下降,与病理组相应时间点相比,分别降低了75％、76％和95％（P＜0.01）。结论EPO可能通过抑制IL - 1β、TNF-α的基因表达,降低缺血再灌注的炎性反应损伤而改善脑组织的结构和功能。     

大鼠局灶性脑缺血后再灌注期caspase—9 mRNA及Apaf—1mRNA表达的动态变化

目的探讨大鼠局灶性脑缺血后再灌注期caspase-9 mRNA及Apaf-1 mRNA表达的动态变化.方法采用线栓法制作大鼠局灶性脑缺血后再灌注模型,以逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)技术检测caspase-9 mRNA及Apf-1 mRNA的表达.结果缺血2 h后再灌注,缺血皮质中caspase-9 mRNA的表达在再灌注后24h达高峰,48h仍保持高水平,而Apaf-1 muRNA的表达无明显改变.结论局灶性脑缺血后再灌注48h内caspase-9 mRNA表达增强.     

氯沙坦对局部脑缺血大鼠脑血管紧张素Ⅱ 1型受体mRNA表达的影响

目的研究大鼠局部脑缺血后血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)1型受体mRNA(AT1RmRNA)基因的表达及氯沙坦对其影响。方法将36只SD雄性大鼠按时间段随机分为2组(每组各18只),每组再随机分为假手术组、缺血组和氯沙坦用药组3个亚组(每组各6只)。采用尼龙线栓塞大鼠大脑中动脉而造成局部脑缺血模型,应用RTPCR方法检测脑组织缺血24、48h后缺血侧及非缺血侧大脑皮层AT1RmRNA的表达水平。结果脑缺血24h各组缺血侧及非缺血侧大脑皮层AT1RmRNA表达水平无差异(p>0.05);脑缺血48h后与假手术组比较,缺血组缺血侧及非缺血侧大脑皮层AT1RmRNA表达水平升高(P均<0.05);而与缺血组比较,氯沙坦用药组缺血侧及非缺血侧大脑皮层AT1RmRNA表达水平降低(P均<0.05),但仍高于假手术组(P均<0.05)。结论氯沙坦能降低局部脑缺血后AT1RmRNA表达水平,AT1R在局部脑缺血中起着重要的作用,它可能成为缺血性脑卒中的一个治疗靶点。     

银杏叶提取物后处理对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤保护作用的研究

目的 探讨银杏叶提取物EGb761对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的保护作用及其机制.方法 制作大鼠右侧大脑中动脉闭塞再灌注模型.将30只清洁级雄性SD大鼠随机分为3组,即假手术组（n-10）：给予5 ml生理盐水腹腔注射;对照组（n-10）：缺血90 min,再灌注24 h,5 ml生理盐水腹腔注射;实验组（n-10）：缺血90 min,再灌注24 h,在再灌注即刻20 mg/kg银杏叶提取物生理盐水稀释成5 ml腹腔注射.再灌注24 h后采用四分法测定大鼠的神经功能障碍评分（NDS）;实验结束后断头取脑采用TTC染色法测定脑梗死面积（以其同侧大脑半球体积的百分比表示）;采用western blot测定脑组织微管相关蛋白2（MAP2）的表达水平.结果 与假手术组比较,对照组、实验组小鼠NDS评分均显著升高,分别为（2.49±0.85）分和（1.58±0.62）分,3组间比较差异均明显（P＜0.05）;对照组、实验组脑梗死面积均显著增大（P＜0.05）,实验组脑梗死面积较对照组显著减小（P＜0.05）;与假手术组比较,与假手术组比较,对照组、实验组缺血侧MAP2蛋白的表达水平均显著降低（P＜0.05）,实验组缺血侧MAP2蛋白的表达水平较对照组显著升高（P＜0.05）.结论 银杏提取物EGb761对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤具有显著的保护效应,其效应与MAP2蛋白表达水平升高有关.