肝癌组织特异性小鼠IL—3,TNF逆转录病毒载体的构建及在肝癌细胞…

从ＰＳＶ２３ＳＭＴＮＦ和ＰＳＰＭＯＩＬ－３质粒分别切下小鼠肿瘤死因子和小鼠白细胞介素３（ｍＩＬ－３）ｃＤＮＡ，并切除ｍＩＬ－３ｃＤＮＡ３＇端ＡＴＴＴＡＴＴＴＡ不稳定序列，以两种细胞因子ｃＤＮＡ作为目的基因，分别克隆到逆转录病毒载体ＰＭＮＳＭ多克隆位，再于目的基因上游分别插入小白蛋白启动子增强子序列，构建成功能两种肝癌组织特异表达性细胞因子逆转录病毒载体，经磷酸钙共沉淀法导入包装细胞ＰＡ３１７中包     

IL02和TNF特异性基因治疗后肝癌组织病理及免疫组化分析

目的；探讨ＴＮＦ和ＩＬ－２基因治疗后实验性肝癌瘤瘤体内细胞水平的改变。方法；应用病理检查和免疫组化分析对ＩＬ－２和ＴＮＦ转基因治疗后的实验性肝癌病理改变及免疫细胞浸润进行分析。结果；发现受白蛋白增强子／启动子转录调控的ＩＬ－２和ＴＮＦ基因在原位感染实验性肝癌可使肝癌逐渐缩小，ＴＮＦ基因可使肝癌组织内广泛出血坏死，Ｍａｃ－１炎细胞浸润为主；ＩＬ－２基因可使肝癌组织内大片坏死，Ｌｙｔ２炎细胞浸润，两组     

IL－2和TNF特异性基因治疗后肝癌组织病理及免疫组化分析

目的：探讨ＴＮＦ和ＩＬ－２基因治疗后实验性肝癌瘤体内细胞水平的改变。方法：应用病理检查和免疫组化分析对ＩＬ－２和ＴＮＦ转基因治疗后的实验性肝癌病理改变及免疫细胞浸润进行分析。结果：发现受白蛋白增强子／启动子转录调控的ＩＬ－２和ＴＮＦ基因在原位感染实验性肝癌可使肝癌逐渐缩小。ＴＮＦ基因可使肝癌组织内广泛出血坏死，Ｍａｃ－１＋炎细胞浸润为主；ＩＬ－２基因可使肝癌组织内大片坏死，Ｌｙｔ２＋炎细胞浸润，两组治疗后期均出现明显的纤维化。结论：ＩＬ－２或ＴＮＦ肝癌特异性原位基因治疗介导免疫抗肿瘤反应，但机理有所不同。     

携带HuIL-3基因的人肝癌特异性逆转录病毒载体的构建

目的:构建携带人白细胞介素3（HuIL－3）cDNA的人肝癌特异性逆转录病毒载体。方法和结果：将HuIL－3cDNA克隆到逆转录病毒载体pMNSM的PL位点，构建SV40早期启动子驱动的载体pMNS－IL－3；从质粒pGEM．7Zf－AFPe中游离人甲胎蛋白（AFP）增强子核心序列，先克隆到pMNSM的PL位点上，再将HuIL－3cDNA片段克隆到PL位点上，构建出SV40早期启动子和AFP增强子驱动的人肝癌特异性表达载体PMNSA－IL－3。结论：该载体为肝癌特异性转基因治疗提供了一条途径。     

携带HuIL-3基因的人肝癌特异性逆转录病毒载体的构建

应用HA方案（三尖杉酯硷联合阿糖胞苷）剂量个体化治疗23例老年人慢性粒细胞白血病（慢粒），完全缓解（CR）率为69．6％，CR平均所需15．4天，平均持续CR时间为34.3月，均显著高于单用马利兰／羟基脲组；骨髓抑制发生率为34.8％，但经间歇期后均恢复正常．bcr／ablmRNA阳性病例的CR率为85．7％（12／14）优于bcr／ablmRNA阴性病例（0／3）．本资料显示：HA方案剂量个体化治疗老年人慢粒缓解率高，CR所需时间短，维持CR时间长，副作用小，是老年人慢粒治疗较满意方案．     

肝癌患者血清IL—10，IL—12和TNFα水平的变化

OBJECTIVE: To study the relationship and clinical significance between level change of serum Interleukin 10 (IL-10), interleukin 12 (IL-12), tumor necrosis factor-alpha (TNF alpha) and primary hepatic carcinoma (PHC). METHODS: Serum IL-10, IL-12, TNF alpha in 40 patients with PHC, 36 cases with hepatocirrhosis and 33 normal controls were measured with ELISA. RESULTS: The higher serum levels of IL-10, IL-12, TNF alpha were observed in patients with hepatocirrhosis than in controls (P < 0.01), although IL-12, TNF alpha in the serum of patients with PHC were in the proximity of that of controls (P > 0.05), the IL-10 level was significantly higher than that of control (P < 0.01), further more, IL-10 being opposed to IL-12, TNF alpha is higher in patients with tumor above 5.0 cm in diameter than below 5.0 cm, IL-12 and TNF alpha were declined and IL-10 increased with tumor enlargement. CONCLUSION: The immune dysfunction in patients with PHC may be related to level increase of IL-10. The level decrease of IL-12, TNF alpha and increase of IL-10 is helpful to clinical differential diagnoses between cirrhotic nodule and PHC, and this suggests cancerous tendency.     

TRAF3在肝细胞肝癌中的表达及意义

目的探讨肿瘤坏死因子受体相关因子3(TRAF3)在肝细胞癌(简称肝癌)发生、发展中的意义。方法采用免疫组化方法检测50例原发性肝癌组织、12例癌旁肝组织及10例正常肝组织中TRAF3蛋白的表达,分析其与肝癌的临床病理参数的关系。Western blot法检测TRAF3在肝癌高分化细胞系HepG2、低分化细胞系SMMC7721和人正常肝细胞系L-02中的表达差异。结果 TRAF3主要定位于细胞质,其阳性率在正常肝组织(100%)及癌旁组织(91%)明显高于肝细胞癌组织(52%)。TRAF3在肝癌的表达与临床分期相关,与患者性别、年龄、癌灶数目、肿瘤大小、瘤栓有无、乙肝表面抗原(HBsAg)阴阳性、甲胎蛋白(AFP)、肿瘤包膜是否完整均无关。TRAF3总蛋白在正常肝细胞系中的表达量明显高于肝癌细胞系,且在肝癌高分化的细胞系中表达量高于低分化细胞系。结论 TRAF3在肝癌中的表达明显下调,且在肝癌中的表达水平与肝癌的侵袭程度相关,提示TRAF3可能抑制肝癌的浸润和转移。     

癌症患者血浆IL—1活性和TNF含量的测定

目的：探讨癌症发病机理。方法应用同位素掺入法、酶联法检测了癌症患者血浆白细胞介素１（ＩＬ－１）活性和肿瘤坏死因子（ＴＮＦ）含量。结果：癌症患者血浆ＩＬ－１活性显著低于对照组，而血浆ＴＮＦ含量却显著高于对照组。结论：肿瘤患者巨噬细胞活性抑制，ＴＮＦ可能部分来自肿瘤细胞自分泌。     

烧伤患者血清IL—6,IL—8,TNF—α测定及其临床意义

目的 探讨细胞因子白介素－６（ＩＬ－６）,白介素－８（ＩＬ－８）,肿瘤坏死因子－α（ＴＮＦ－α）与烧伤的关系。方法 应用ＥＬＩＳＡ法检测４２例烧伤患者及２０例正常人血清ＩＬ－６,ＩＬ－８,ＴＮＦ－α水平。结果 入院时患者的血清ＩＬ－６,ＩＬ－８,ＴＮＦ－α明显高于正常对照组,烧伤后第３天与入院时比较,ＩＬ－６无明显变化（Ｐ〉０．０５）,ＴＮＦ－α增高（Ｐ〈０．０１）,而ＩＬ－８在烧伤面积≤３０％者     

IL—8及TNF—α在体外循环中的动态变化及临床意义

体外循环（ｃａｒｄｉｏｐｕｌｍｏｎａｒｙｂｙｐａｓｓ,ＣＰＢ）心脏直视手术的病人术后会出现系统性炎症反应,多形核白细胞（ｐｏｌｙ－ｍｏｒｐｈｏｎｕｃｌｅａｒｌｅｕｋｏｃｙｔｅｓ,ＰＭＮ）在系统性炎症反应的组织损伤中起重要作用。白细胞介素－８（ｉｎｔｅ...     

逆转录病毒转染的小鼠IL－3基因在NIH／3T3细胞中的表达

将小鼠白细胞介素３（ＩＬ－３）ｃＤＮＡ重组到逆转录病毒载体ｐＮ２Ａ质粒上，用电穿孔法将此重组子转染包装细胞系（ＰＡ３１７），经用Ｇ４１８（ｇｅｎｅｔｉｃｉｎ）选择培养基筛选，得到产病毒效价为每ｍｌ５×１０４～２×１０５ＣＦＵ（ｃｏｌｏｎｙ－ｆｏｒｍｉｎｇｕｎｉｔ）的Ｇ４１８抗性细胞克隆。然后取其培养上清液转染ＮＩＨ／３Ｔ３细胞。通过检测被病毒转染的ＮＩＨ／３Ｔ３细胞培养上清液对小鼠骨髓细胞的增殖反应（ＭＴＴ法）和促分化作用（ＣＦＵ培养法），表明转染的ＮＩＨ／３Ｔ３细胞克隆能分泌ＩＬ－３。此结果为进行ＩＬ－３转基因治疗研究奠定了实验基础。     

人重组IL—2G与TNFα抗肿瘤的实验研究

观察ｒｈＩＬ－８和ＴＮＦα对肿瘤的作用。用ＭＴＴ法检测ｒｈＩＬ－８和ＴＮＦα体外对ＥＬ－４，Ｂ１６瘤细胞的细胞毒作用；小鼠体内抑瘤试验。结果：ｒｈＩＬ－８对ＥＬ－２，Ｂ１６瘤细胞体外无直接杀伤作用，ｔｈＩＬ－８和ＴＮＦα联合运用可有效抑制同种异体ＥＩＬ－４，Ｂ１６瘤细胞在Ｃ５７小鼠成瘤及生长。     

银耳多糖对小鼠IL－2、IL－6、TNF－α活性及其mRNA表达的影响

目的：观察银耳多糖（ＴＰ）对小鼠脾细胞ＩＬ－２、ＩＬ－６和ＴＮＦ活性及其ｍＲＮＡ表达的影响。方法：分别用ＣＴＬＬ、７ＴＤ１和ＷＥＨＩ－１６４细胞株测小鼠脾细胞ＩＬ－２、ＩＬ－６和ＴＮＦ-α活性，用Ｎｏｒｔｈｅｒｒｎｂｌｏｔ印迹杂交法测上述细胞因子的ｍＲＮＡ表达。结果：银耳多糖（ＴＰ）１００ｍｓ／Ｌ可促进ＣｏｎＡ诱导的脾细胞培养上清１Ｌ－２的活性，该作用１２ｈ即可出现，２４ｈ达到高峰。单用仅呈现类似但较弱的作用。ＴＰ１００ｍｇ／Ｌ从１２ｈ起明显增强ＬＰＳ活化的小鼠腹腔巨噬细胞产生ＩＬ－６的能力。ＴＰ２５、１００ｍｇ／Ｌ可明显增强小鼠腹腔巨噬细胞ＴＮＦ－α的活性。ＴＰ可促进小鼠脾细胞中细胞因子ＩＬ－２、ＩＬ－６ＴＮＦ－ａｍＲＮＡ的表达量，并且具有一定的剂量反应关系和时效关系，最适剂量为２００ｍｇ／ｋｇ，给药９ｄ，表达量最高。结论：ＴＰ通过促进ＩＬ－２、ＩＬ－６和ＴＮＦ－ａｍＲＮＡ表达，而促进上述细胞因子的生成。     

前列腺液中细胞因子（IL—6,TNF—α）在慢性前列腺炎中的意义

探讨前列腺液中细胞因子与慢性前列腺炎的关系。方法：对５５例患者按Ｍｅａｒｅｓ－Ｓｔａｍｅｙ法分慢性细菌组、非细菌组，前列腺痛组，１２例健康人为对照组，采用双抗体夹心ＥＬＩＳＡ法检测了前列腺液中细胞因子水平，用ＳＡＳ统计分析软件中非平衡数据的方差分析方法和ＳＮＫ法作均数间的两两比较。／     

轮状病毒肠炎患儿血清TNFα,IL—6的变化及意义

目的：了解细胞因子在轮状病毒（ＲＶ）肠炎患儿血清中肿瘤坏死因子（ＴＮＦα）和白细胞介素６（ＩＬ－６）的变化，探讨其在免疫调节中的机理。方法：采用双抗体夹心ＥＬＩＳＡ法检测了２２例ＲＶ肠炎患儿血清中ＴＮＦα和ＩＬ－６的水平，同时与病情变化相比较。结果：ＲＶ肠炎患儿急性期血清ＴＮＦα和ＩＬ－６水平明显升高，与病情呈正相关。结论：血清ＴＮＦα和ＩＬ－６在ＲＶ感染的免疫防御保护和免疫损伤机理中可能起重要作     

N-乙酰半胱氨酸体外下调IL-8、IL-6及TNFα在PBMC中的表达

目的　研究N 乙酰半胱氨酸(NAC)体外对白细胞介素 8(IL 8)、白细胞介素 6(IL 6 )及肿瘤坏死因子α(TNFα)在外周血单核细胞 (PBMC)中表达的影响。方法　分离新鲜外周血PBMC,以PMA、A23187刺激PBMC,同时加入不同浓度的NAC,通过ELISA、RT PCR方法分别测定培养上清IL 8、IL 6及TNFα水平及细胞中相应mRNA水平。结果　通过PMA、A23187刺激的PBMC培养上清中的IL 8、IL 6及TNFα水平及细胞中的mRNA水平显著升高(P<0 01)。加入NAC(0、3、10、20mmol/L) 3h细胞中IL 8、IL 6及TNFα的mRNA水平显著降低(P<0 01)。24h后培养上清中IL 8、IL 6及TNFα水平明显低于PMA及A23187刺激的上清(P<0 01);且具有剂量依赖关系 (P<0 01 )。结论　NAC体外可以下调PMA、A23187刺激PBMC表达IL 8、IL 6及TNFα。