犬急性心肌缺血后左心室功能与抑凋亡蛋白Bcl-xl表达的研究

目的 观察犬急性心肌缺血后左心室壁动度、射血功能、细胞凋亡与心肌组织中Bcl-xl表达的变化.方法 犬30只随机分为实验组15只及对照组15只,实验组结扎左冠状动脉前降支近端,结扎时间分别为10,30,60min,每一时间点5只,对照组游离左冠状动脉前降支近端,不结扎.心肌组织行三苯四氮唑(TTC)染色,梗死区为黄白色,非梗死区为红色.超声心动图测定左室前壁增厚率及左心室射血分数,原位末端脱氧核苷酸转移酶介导的生物素脱氧尿嘧啶核苷酸缺口末端标记法(TUNEL)检测梗死区心肌组织凋亡细胞数,Western blotting检测梗死区心肌组织Bcl-xl的表达强度变化.结果 TTC染色示左室前壁及部分前间隔染色为黄白色,其余区域为红色.实验组冠脉结扎后10 min,左室前壁增厚率降低,与对照组比较差异有统计学意义(P＜0.05).左心室射血分数未发生明显改变,与对照组比较差异无统计学意义(P＞0.05).冠脉结扎后30～60 min,前壁增厚率降低与左心室射血分数进一步下降,与对照组比较差异有统计学意义(P＜0.01).实验组在冠脉结扎后10 min,梗死区心肌TUNEL阳性细胞数与对照组比较差异无统计学意义;冠脉结扎后30～60 min,梗死区心肌TUNEL阳性细胞数明显增加,与对照组比较差异有显著统计学意义(P＜0.01).实验组在冠脉结扎后30min,梗死区心肌Bcl-xl表达增高,与对照组比较差异有统计学意义(P＜0.05).冠脉结扎后60min,梗死区心肌Bcl-xl表达明显增高,与对照组比较差异有显著统计学意义(P＜0.01).结论 急性心肌缺血后,心肌细胞凋亡可能为其早期病理改变,并且与心肌室壁动度与左室收缩功能降低有一定关系,同时抑凋亡基因Bcl-xl表达迅速增加,以对抗促凋亡基因的作用.     

静脉应用血小板源性生长因子质粒减小梗死心肌面积的可行性

背景:过往研究已证实:心肌缺血前或缺血时心肌内注射血小板源性生长因子及其基因载体均可以明显减小缺血心肌的梗死面积,但心肌梗死后才经静脉使用血小板源性生长因子的基因载体是否具有相同的疗效,所知甚少.目的:进一步验证对心肌缺血后,经静脉注射血小板源性生长因子质粒phPDGF-B对缺血心肌梗死面积的作用.方法:20只SD大鼠随机分为4组,经结扎左冠状动脉前降支,建立心肌梗死模型.于结扎后30 min,雌、雄实验组静脉注射phPDGF-B质粒;雌、雄对照组静脉注射等体积PBS.2周后,进行常规的Masson,S Trichrome染色,对缺血心肌梗死区面积、纤维化及心室几何参数进行分析.结果与结论:大鼠静脉使用phPDGF-B质粒2周后,雌、雄实验组的心肌梗死的面积均明显小于雌、雄对照组(P<0.05);实验组梗死区存活的心肌细胞明显多于对照组;雌、雄实验组梗死区纤维化面积的比值均低于对照组,但差异没有显著性意义;实验组梗死区胶原沉积的密度明显小于对照组;实验组梗死边缘区的室壁厚度大于对照组(P<0.05).实验组梗死区室壁厚度大于对照组.结果证实,在心肌缺血30 min,经静脉使用phPDGF-B质粒对梗死区心肌细胞存活有保护作用,能有效减小缺血心肌的坏死面积,同时能有限度地改善存在心肌梗死的左心室重构,以及减小梗死区的纤维化程度,且上述作用没有性别差异.     

急性缺血再灌注左室局部功能与心肌细胞凋亡的相关性研究

目的探讨应变率成像评价急性缺血再灌注后左心室功能与肌细胞凋亡的相关性及其应用价值。 方法健康杂种犬30只，分对照组（10只），缺血组（10只），再灌注组（10只）。缺血组于第一对角支1cm以下套扎左冠状动脉前降支30min，再灌注组套扎30min后再灌注120min，对照组游离左冠状动脉前降支不结扎。超声心动图左室收缩期应变率测量左室局部收缩功能，Simpson’s法测左室射血分数，原位末端脱氧核苷酸转移酶标记技术（TUNEL）法检测缺血区心肌细胞凋亡数。 结果收缩期应变率与射血分数及心肌细胞凋亡数相关性良好。峰值收缩期应变率在三组之间均有显著性差异（P值均＜0.05），射血分数在三组之间无显著性差异（P＞0．05），心肌阳性凋亡细胞数仅在再灌注组与对照组之间有显著性差异（P＜0．05）。 结论应变率成像为临床提供了一个敏感、简便的评价早期心肌局部收缩功能的指标，局部心功能与心肌细胞凋亡相关。     

骨髓基质干细胞缺血心肌内移植早期:可减少心肌细胞凋亡但未改善心功能

背景：骨髓基质干细胞移植到梗死心肌组织能够起到抑制和减少心肌细胞凋亡的效应,而这一作用与心功能改善是否有相关性还不清楚。目的：观察缺血心肌内移植骨髓基质干细胞早期对心脏功能的影响。方法：采用结扎左前降支的方法建立大鼠急性心肌梗死模型,假手术组仅穿线不结扎。骨髓基质干细胞移植组于心肌梗死术后30 min分5个位置于梗死边缘向心肌组织内移植大鼠骨髓基质干细胞0.1 mL(2×106结果与结论：移植后第3天,与假手术组相比,模型组梗死区及缺血区心肌细胞凋亡明显;骨髓基质干细胞移植组梗死区和缺血区心肌细胞凋亡数目均较模型组显著减少。与假手术组相比,模型组和骨髓基质干细胞移植组大鼠平均动脉压、左心室收缩压明显下降,左心室舒张末压显著升高,左心室射血分数及缩短分数显著降低(P <0.05),骨髓基质干细胞移植组和模型组比较差异无显著性意义(P >0.05)。结果表明骨髓基质干细胞移植早期能减少心肌细胞凋亡但不改善急性心肌梗死后大鼠的心功能。假手术组、模型组术后分别向心肌内注射相同剂量的生理盐水。细胞移植后3 d监测血流动力学、超声心动图, TUNEL法检测心肌细胞凋亡的变化。     

急性缺血再灌注心肌细胞凋亡及凋亡基因与左室局部功能的实验研究

目的 应变率成像观察犬急性缺血再灌注后左心室局部功能，与细胞凋亡及心肌组织中caspase-3 mRNA和蛋白表达的变化。方法 健康杂种犬30只，分对照组（10只），缺血组（10只），再灌注组（10只）。缺血组于第一对角支1cm以下套扎左冠状动脉前降支30min，再灌注组套扎30min后再灌注120min，对照组游离左冠状动脉前降支不结扎。超声心动图左室收缩期应变率测量左室局部收缩功能，TUNEL法检测缺血区心肌细胞凋亡数，RT-PCR法检测caspase-3 mRNA的表达，免疫组化法测caspase-3蛋白的表达。结果 结扎30min后，左室前壁缺血节段收缩期应变率明显降低（P〈0.01）。并出现收缩后压缩（PSC），再灌注120min后缺血节段的应变率有所恢复，但仍低于对照组（P〈0.05）。缺血组缺血区心肌TUNEL阳性细胞数与对照组比较无显著性差异;再灌注组缺血区心肌TUNEL阳性数明显增加（P〈0.05）。缺血组缺血区caspase-3 mRNA与对照组比较表达增高（P〈0.05），再灌注组进一步增高（P〈0.01）。缺血组缺血区心肌细胞caspase-3表达升高，与对照组比差异有显著意义（P〈0.05），再灌注组caspase-3表达进一步增强（P〈0.01）。结论 急性心肌缺血再灌注促凋亡基因capase-3激活，缺血心肌细胞凋亡可能为其早期改变，应变率成像可以评价缺血早期心肌局部收缩功能。     

犬急性心肌梗死与再灌注的多层螺旋CT评价实验研究

目的探讨多层螺旋CT评价急性冠状动脉闭塞后心肌梗死及再灌注的能力.方法将12只杂种犬随机分成两组:①急性心肌梗死组(AMI),分别于结扎冠状动脉前、结扎后1 h和2 h进行CT平扫和增强扫描.②AMI再灌注组,分别于结扎前、结扎后1 h及再灌注30 min进行同样扫描.观察心肌梗死的病变部位及形态,测量每组正常心肌、心肌梗死部位在各个扫描时点的CT值,计算两者与左心室腔的CT值之比(M/L).结果12只犬结扎左前降支后1 h增强图像上左心室前壁或心尖区均有明显的低密度区形成.AMI组结扎后2 h图像缺血区的密度更为减低;AMI再灌注组再灌注30 min后病变的密度变化不明显.AMI组结扎后1 h与2 h的正常心肌与梗死心肌的CT值均值及两者与左心室腔的M/L均具有显著性差异(P＜0.001).AMI再灌注组结扎后1 h与再灌注后30 min正常心肌与梗死心肌的CT值均值及两者与左心室腔M/L也具有显著性差异(P＜0.001).结论急性冠脉闭塞后心肌梗死区MSCT表现为低密度,MSCT能够区分急性冠状动脉闭塞后梗死心肌与正常心肌.     

肝细胞生长因子对犬心肌梗死后二尖瓣反流的影响

目的 探讨肝细胞生长因子(HGF)对犬急性心肌梗死后二尖瓣反流的影响.方法 将13只杂种犬结扎左冠状动脉前降支复制急性心肌梗死模型,并将造模成功的12只犬随机分为对照组和治疗组各6只.治疗组于梗死心肌周围注射pc-DNA3-HGF 1 ml(约300 μg),对照组给予等量生理盐水.分别于术后1、4、8周进行超声心动图检查,监测心功能;术后8周测量左心房面积、二尖瓣反流面积以及二尖瓣反流面积与左心房面积的比值.处死犬,取心肌组织行HE染色、Ⅷ因子免疫组化染色及TUNEL染色,应用图像分析系统测定血管个数及凋亡细胞数.结果 术后4周时,治疗组左心室射血分数(LVEF)高于对照组(P<0.05);8周时,治疗组LVEF明显升高,左心室收缩末容积(LVESV)较对照组降低(P<0.05),且左心房面积、二尖瓣返流面积以及二尖瓣返流面积与左心房面积的比值均低于对照组(P>0.05).HE染色可观察到治疗组梗死心肌周围毛细血管较对照组增多,而对照组瘢痕形成明显.Ⅷ因子免疫组化染色显示治疗组梗死边缘区毛细血管明显多于对照组(P<0.01).TUNEL染色显示与对照组相比,治疗组梗死边缘区凋亡细胞减少(P>0.05).结论 HGF可能通过增加梗死心肌周围毛细血管数目,减少细胞凋亡,使心肌坏死及疤痕形成减少,从而缓解急性心肌梗死时的心功能恶化、左心房扩大及二尖瓣反流.     

三羟基异黄酮对兔缺血心肌的保护作用

目的 探讨三羟基异黄酮(GST)对缺血/再灌注(I/R)心肌的保护效果及可能机制.方法 结扎雄兔冠脉左前降支建立心肌I/R模型:心肌缺血40min,然后再灌注2 h.分4组:Sham组:冠脉不结扎;I/R组;GST+I/R组:心肌缺血前5 min静脉注入1.0 mg/kg GST;Vehicle+I/R组:心肌缺血前5 min静脉注入1 mL二甲基亚砜.检测血清乳酸脱氢酶及肌酸激酶活性,再灌注结束后通过Evans蓝-TTC染色判断心肌梗死范围,TUNEL法检测心肌细胞凋亡.结果 与I/R组及Vehide+I/R组相比,GST+I/R组心肌梗死范围、心肌酶活性及细胞凋亡指数均显著降低(P<0.01),而前两组之间无显著差异.结论 心肌缺血前给予GST能有效地减轻心肌I/R损伤,抗凋亡和减少心肌细胞坏死是其发挥效应的两条途径.     

组织追踪法定量评价急性心肌梗死左心室局部收缩功能的实验研究

目的　探讨组织追踪(tissue tracking ,TT)法定量评价犬急性心肌梗死(AMI)左心室局部收缩功能变化的可行性,为TT法应用于临床诊断急性心肌缺血提供实验依据。方法　选用9条健康杂种犬,于左侧第5肋间开胸,在第一对角支起点以下套扎冠状动脉左前降支(LAD)主干,建立AMI模型。分别于LAD结扎前和结扎后 15、30、60和 120 min,用 TT法在心尖四腔观、心尖二腔观和心尖左室长轴观测量左室收缩期 6 个壁 18个节段心肌的纵向最大位移,心肌缺血区通过心肌染色病理切片确定。结果　9条犬中8条犬成功建立 AMI模型。LAD结扎前,左室收缩期基底至心尖不同节段心肌位移曲线呈波形同步向上梯度样减低的正向波群,基底段与中段和中段与心尖段之间比较心肌位移差异有非常显著性意义(P<0.01)。LAD结扎即刻至 120 min,左室前壁和前间隔缺血节段失去结扎前心肌位移变化的规律性。结扎 LAD 15 min,左室前壁、前间隔最大位移明显减低,30 min后略有恢复趋势,但仍处于低水平。不同时间缺血区节段心肌位移测值与结扎前比较差异有非常显著性意义(P<0.01)。结论　TT能够直观定量评价左室收缩期所有心肌从心底至心尖方向的纵向位移,客观追踪观察AMI左室局部收缩功能的变化,方法简便可靠,可作为一种临床诊断急性心肌缺血的超声定量方法     

脂肪基质干细胞移植治疗大鼠急性心肌梗死

目的探讨大鼠脂肪基质干细胞(ASCs)移植于梗死心肌后的增殖分化情况及对心功能的影响。方法培养大鼠ASCs,流式细胞术鉴定其表型。将SD大鼠左前降支结扎制造急性心肌梗死模型后,在梗死心肌处植入DAPI标记ASCs(实验组)或DMEM培养液(对照组)。移植后1及4周,超声检查心功能。并取梗死区心肌组织进行移植细胞形态学检查及毛细血管密度测定。RTPCR、ELISA法测梗死区VEGF的mRNA及蛋白表达情况。结果培养获得ASCs,表型为CD44 、CD105 ,CD31-、CD45-。植入梗死区的ASCs可以分化为血管内皮细胞,实验组梗死心肌处血管密度较对照组明显增高(P<0.01),且VEGF基因及蛋白水平在移植后1周均较对照组明显增高(P<0.01)。移植后4周,实验组大鼠左室射血分数(LVEF)及左室短轴缩短率(FS)较对照组明显提高(P<0.01)。结论ASCs移植可以促进大鼠梗死后心肌血管新生,改善心功能。     

应变率成像评价急性缺血再灌注左心室功能与心肌细胞凋亡的相关性

目的 探讨应变率成像评价急性缺血再灌注后左心室功能与心肌细胞凋亡的相关性及其应用价值。方法 健康杂种犬30只，分为对照组（10只），缺血组（10只）和再灌注组（10只）。缺血组于第一对角支1cm以下套扎左冠状动脉前降支30min，再灌注组套扎30min后再灌注120min，对照组游离左冠状动脉前降支不结扎。应变率成像测定左室局部收缩功能，Simpson’s法测量左室射血分数（LVEF）、舒张末容积（EDV）及收缩末容积（ESV），TUNEL法检测缺血区心肌细胞凋亡指数。结果 收缩期应变率（SRs）与LVEF及TUNEL阳性细胞指数（AI）呈良好的相关性。SRs在三组间差异有统计学意义（P〈0．05），LVEF、EDV及ESV在三组间差异无统计学意义（P〉0．05），再灌注组AI与对照组间差异有统计学意义（P〈0．01）。结论 应变率成像为临床提供了一个敏感、简便的评价早期心肌局部收缩功能的指标，局部心功能与心肌细胞凋亡相关。     

应变率成像定量评价犬急性缺血再灌注局部心肌收缩功能的实验研究

目的探讨应变率成像(SRI)定量评价急性缺血再灌注左心室局部收缩功能变化的可行性,探求评价局部心肌功能的合理化指标。方法14只健康杂种犬,麻醉后开胸,于第一对角支起点以下套扎冠状动脉左前降支(LAD),结扎后30min,再灌注120min,建立缺血再灌注模型。分别于LAD结扎前,结扎后30min,再灌注后30min,60min,120min采集连续3个心动周期的组织速度图,用SRI软件分析左室各节段纵轴方向上收缩期应变率曲线的变化,Simpson's双平面法测量左室射血分数(LVEF),舒张末(EDV)及收缩末容积(ESV)。心肌缺血程度通过心肌特染病理切片确定。结果14只犬中12只成功建立缺血再灌注模型。结扎后30min,左室前壁缺血节段收缩期应变率明显降低(P<0.05),并出现收缩后压缩(PSC),再灌注30min后缺血节段收缩期应变率进一步降低,再灌注60min及120min后有所恢复,但仍未达到结扎前水平,LVEF,EDV,ESV于冠脉结扎前后差异无显著意义(P>0.05)。结论应变率能敏感定量评价局部心肌收缩功能的异常,可作为评价局部心肌缺血再灌注的定量指标。     

Coronary Artery Reperfusion: I. EARLY EFFECTS ON LOCAL MYOCARDIAL FUNCTION AND THE EXTENT OF MYOCARDIAL NECROSIS

The effects of coronary artery reperfusion 3 hr after coronary occlusion on contractile function and the development of myocardial damage at 24 hr was studied experimentally. In 14 control and 6 reperfused dogs, relationships between epicardial ST segment elevation 15 min after coronary occlusion and myocardial creatine phosphokinase activity (CPK) and histologic appearance 24 hr later were examined. The electrocardiograms were recorded from 10 to 15 sites on the left ventricular epicardium and transmural samples for CPK and histology were obtained from the same sites where epicardial electrocardiograms had been recorded. An inverse relation existed between ST segment elevation (mv) 15 min after occlusion and log CPK activity (IU/ mg of protein) 24 hr later, log CPK = − 0.06ST + 1.26. In dogs subjected to coronary artery reperfusion, there was significantly less CPK depression (log CPK = − 0.01ST + 1.31, [P < 0.01]) than that expected from the control group. In the control group 97% of specimens showing ST segment elevations over 2 mv at 15 min showed abnormal histology 24 hr later. In contrast, in the reperfused group 43% of sites exhibiting elevated ST segment at 15 min showed abnormal histology 24 hr later. In six additional dogs it was shown that the paradoxical movement of the left ventricular wall could be reversed within 1 hr of perfusion. Therefore, by enzymatic and histologic criteria, as well as by functional assessment, coronary artery reperfusion 3 hr after occlusion resulted in salvage of myocardial tissue.     

多普勒组织成像定量评价心室壁运动的价值

目的　探讨多普勒组织成像 (DTI)技术与传统二维超声判断心脏局部室壁运动异常的准确性与敏感性。方法　采用二维超声及DTI速度模式观察 8条犬冠脉结扎前后的局部室壁运动 ,所用仪器为AcusonSequoiaC 2 5 6彩色超声成像系统。 结果　缺血导致局部心室壁运动明显减弱 ,脉冲频谱DTI技术于冠脉闭塞后5s可检出这种异常 ,而传统超声指标在闭塞 1min后才出现显著性差异。血流再灌注 1min时 ,局部室壁运动明显增强。结论　DTI技术可定量评价急性缺血早期和再灌注局部室壁运动异常 ,方法较传统二维超声敏感准确。     

QTVI技术评价缺血后适应对缺血再灌注犬心功能的影响

目的探讨定量组织速度显像（QTVI）技术的应用价值及评价缺血后适应对缺血再灌注犬左室收缩功能影响。方法将21只杂种犬随机分3组：对照组（Con组,n=7）：结扎左前降支（LAD）60 min,再灌注3 h;缺血预适应组（Pre-C组,n=7）：结扎LAD 60 min前行缺血预适应（5 min结扎/5 min再灌注的4次循环）;缺血后适应组（Post-C组,n=7）：结扎LAD 60 min后,再灌注前行缺血后适应（30 s再灌/30 s再闭的3次循环）。应用QTVI观察犬缺血前,缺血60 min,再灌注60、120、180 min左室各壁收缩期峰值速度（Vs）、峰值位移（Ds）,计算6个室壁Vs、Ds平均值（作为左室整体收缩功能）。直线解剖M型超声心动图获得短轴缩短率（FS）,单平面Si mpson’s法测得左室射血分数（LVEF）。结果缺血60 min时各组Vs、Ds、LVEF、FS值均明显下降,组间没有显著差异;再灌注3 h后各组均有改善,Pre-C组、Post-C组明显高于Con组（P〈0.05）。Ds、Vs与EF、FS均呈直线正相关（r分别为0.844、0.793、0.800、0.760,均P〈0.05）。结论QTVI可较准确评价缺血再灌注犬心脏收缩功能变化;缺血后适应可减轻再灌注损伤对缺血心肌收缩功能影响。     

Glucagon-like peptide-1 limits myocardial stunning following brief coronary occlusion and reperfusion in conscious canines

We have recently demonstrated the benefits of glucagon-like peptide-1 (GLP-1) in enhancing regional and global myocardial function after reperfusion in the clinical setting of acute myocardial infarction. We hypothesized that GLP-1 facilitates recovery from myocardial stunning after an ischemic event. To investigate this, we administered GLP-1 (1.5 pmol/kg/min) to six dogs undergoing 10-min occlusion of the left circumflex coronary artery, followed by 24-h reperfusion. We compared the responses of coronary blood flow and regional thickening of the posterior wall with a group of eight vehicle-treated dogs undergoing the same occlusion-reperfusion protocol. Although recovery of coronary blood flow was identical, regional wall motion recovery occurred significantly ((*)p < 0.05) earlier (92 +/- 4 versus 57 +/- 5%(*) at 15 min) and was complete in the GLP-1-treated dogs, whereas residual contractile dysfunction persisted in the control group (99 +/- 4 versus 78 +/- 3%(*) at 24 h). This phenomenon was independent of changes in systemic hemodynamics or global systolic function. However, isovolumic left ventricular relaxation improved significantly in GLP-1-treated dogs. GLP-1 caused an insulinotropic effect, but no hypoglycemia. We conclude that GLP-1 enhances recovery from ischemic myocardial stunning after successful reperfusion.     

Improved left ventricular function and reduced necrosis after myocardial ischemia/reperfusion in rabbits treated with ranolazine, an inhibitor of the late sodium channel

Ranolazine is an inhibitor of the late sodium current and, via this mechanism, decreases sodium-dependent intracellular calcium overload during ischemia and reperfusion. Ranolazine reduces angina, but there is little information on its effects in acute myocardial infarction. The aim of this study was to test the effects of ranolazine on left ventricular (LV) function and myocardial infarct size after ischemia/reperfusion in rabbits. Ten minutes before coronary artery occlusion (CAO), anesthetized rabbits were assigned to vehicle (n=15) or ranolazine (2 mg/kg i.v. bolus plus 60 microg/kg/min i.v. infusion; n=15). Hearts received 60 min of CAO and 3 h of reperfusion. CAO caused LV dysfunction associated with necrosis. However, at the end of reperfusion, rabbits treated with ranolazine had better global LV ejection fraction (0.42+/-0.02 versus 0.33+/-0.02; p<0.007) and stroke volume (1.05+/-0.08 versus 0.78+/-0.07 ml; p<0.01) compared with vehicle. The fraction of the LV wall that was akinetic or dyskinetic was significantly less in the ranolazine group at 0.23+/-0.03 versus 0.34+/-0.03 in vehicle-treated group; p<0.02. The ischemic risk region was similar in both groups; however, infarct size was significantly smaller in the treated group (44+/-5 versus 57+/-4% vehicle; p<0.04). There were no significant differences among groups in heart rate, arterial pressure, LV end-diastolic pressure, or maximum-positive or -negative first time derivative of LV pressure (dP/dt). In conclusion, the results of this study show that ranolazine provides protection during acute myocardial infarction in this rabbit model of ischemia/reperfusion. Ranolazine treatment led to better ejection fraction, stroke volume and less wall motion abnormality after reperfusion, and less myocardial necrosis.