单克隆抗体与原位杂交检测早期培养细胞中巨细胞病毒的比较（文摘）

巨细胞病毒(CMV)感染人群(如AIDS病人，化疗患者和新生儿等)日益增多．追切需要一种快速敏感检测诊断CMV的方法。目前，检验诊断CMV的方法有：用免疫荧光法检测CMV早期抗原和分离培养病毒，观察CPE的出现等。本文详细地比较了4种检测早期培养细胞CMV诊断方法。这4种方法是(1)直接McAb荧光染色法(DFA)；(2)间接McAb荧光染色法(IFA)；(3)生物素标记DNA探针的原位杂交及(4)辣根过氧化物酶直接标记DNA(HRP—DNA)探针的原位杂交。     

原位DNA杂交和单克隆抗体染色法对离心培养的临床标本中巨细胞病毒的检测

一种巨细胞病毒(CMV)的原位DNA杂交检测盒用以检测离心培养物中的CMV,对其检测效果进行了评价。61份临床标本,以单克隆抗体染色法有17份CMV阳性(27.8％),而DNA杂交法对17份阳性标本中有15份显示阳性(24.5％)。早期检出的比较中,离心后DNA杂交法需要58h,而作为对照的单克隆抗体染色法只需16h。虽然DNA杂交法对CMV感染的研究和检测是一种好方法,但对离心培养物的检测,现在DNA杂交技术还不能完全取代单克隆抗体的应用。     

原位DNA杂交和单克隆抗体染色法对离心培养的临床标本中巨细胞病毒的检测

一种巨细胞病毒(CMV)的原位DNA杂交检测盒用以捡测离心培养物中的CMV，对其检测效果进行了评价。61份临床标本，以单克隆抗体染色法有17份CMV阳性(27．8％)．而DNA杂交法对17份阳性标本中有15份显示阳性(24．5％)。早期检出的比较中，离心后DNA杂交法需要58h，而作为对照的单克隆抗体染色法只需16h。虽然DNA杂交法对CMV感染的研究和捡测是一种好方法，但对离心培养物的检测，现在DNA杂交技术还不能完全取代单克隆抗体的应用。     

用对主要糖肽(GP-66)反应的单克隆抗体反向被动血凝试验来鉴定人类巨细胞病毒

用对巨细胞病毒(CMV)66,000道尔顿基质蛋白的不同抗原决定簇起友应的三种单克隆抗体(McAb)包被绵羊红细胞,进行反向被动血凝试验(RPHA),以检测和鉴定CMV感染细胞裂解物。由于五种实验室保存株(AD169,Davis,Espilat,C—87及Towne)和十种临床分离株均反应良好,而对未感染的MRC-5细胞裂解物、单纯疮疹病毒1型和2型、水痘-带状疱疹病毒及腺病毒裂解物均不起反应,说明该试验对CMV是特异性的。用三种McAb预处理的CMV裂解物,再加入抗体包被红细胞以鉴定CMV裂解物。该RPHA和鉴定性阻断试验同样仅需2小时就能完成。由于该试验使用96孔V型微板和25μl移液管,所以它是一种理想的鉴定CMV方法。特别是缺乏仪器来判定荧光抗体试验(FAT)或酶联免疫吸附试验(ELISA)时。     

肾综合征出血热(HFRS)病毒McAb在临床早期诊断中应用的研究

本研究用间接荧光抗体试验检测77例临床诊断为HFRS病人外周血白细胞中病毒抗原。阳性率为50.7％,在早期病例中(第2—5病日)阳性率为64.3％(27/42),并发现病日越早、病情越重,阳性率越高。在间接免疫荧光中应用了抗HFRS病毒MCAb 4B_9、4E_7、3H_4株。抗原阳性者与3种McAb表现为5种反应类型,不同McAb对抗原的检出率也不相同。将McAb组合可提高阳性检出率。在抗原阳性早期患者中,急性期血清特异性IgM抗体阳性率为96.3％。将HFRS抗原检测和急性期IgM测定联合应用,可提高HFRS早期诊断的阳性率和准确性。     

单克隆抗体快速诊断巨细胞病毒感染的研究

<正> 用血清学方法检测患者标本中的病毒抗原或抗体,是巨细胞病毒(CMV)感染常用的实验诊断方法,但常因所用免疫试剂的质量问题,而影响试验结果的敏感性与可靠性。为此本室用CMV-AD_(169)病毒株免疫BALB/c鼠,与SP_2/O小鼠骨髓瘤细胞融合,从所获得的杂交瘤细胞株中经多次克隆化培养,筛选出5株能稳定地分泌较高滴度的抗CMV单克隆抗体(McAb)的瘤株。我们用其中一株CM_1的McAb(为IgG2a),在ELISA与免疫酶斑点试     

PENA方法的建立及与ELISA IgM检测CMV的比较

目的　介绍一种敏感、稳定、快速、简便的实验室检测CMV的方法 ,同时探讨该种新方法与ELISA检测CMV方法的优、缺点。方法　对 5 5 2例病人应用间接荧光免疫法测定细胞核中的特异病毒早期抗体 (PENA)和ELISA法测定IgM抗体。结果　PENA方法 :强阳性 88例 ,阳性率 15 4 9% ,弱阳性 2 73例 ,阳性率 5 9 4 6 % ;ELISA -IgM方法 :阳性 34例 ,阳性率6 16 %。结论　PENA方法操作简便 ,与ELISA方法相比较 ,可对CMV感染进行早期测定及诊断 ,并可区分既往感染和即时感染 ,具有敏感性和稳定性 ,是测定小儿CMV感染的一种较好的方法     

抗鼻疽菌单克隆抗体的应用研究——Ⅰ.免疫荧光间接法对鼻疽菌的诊断

本文应用抗鼻疽菌单克隆抗体(McAb)代替免疫动多价血清(PolyAb)作荧光抗体间接染色法(IFA)检测鼻疽菌。对McAb的敏感性特异性进行了测定,对一些疽鼻病料进行了检测,征明McAb对鼻疽菌的诊断敏感性高,特异性强,具有实际应用价值,可取代PolyAb,作为对鼻疽菌检测的一种新试剂。     

应用抗人μ链McAb和APAAP法检测HFRS患者血清中IgM抗体

<正> 肾综合征出血热(HFRS)患者的早期特异性诊断多采用免疫荧光法检测血清中IgM抗体。最近有报道采用抗人μ链McAb荧光结合物检测患者血清IgM抗体。本文以HFRS病毒陈株感染Wish细胞作为抗原     

抗合胞病毒单克隆抗体用于IFAT供临床快速诊断的研究

本文以8株合胞病毒单克隆抗体(RSV-McAb)和北京地区近三年RSV地方株结合,选其中7株敏感性、特异性高的McAb进行混合,以RSV多价动物抗血清以下简写RSV-PolyAb)和双份血清学作为对照,用免疫间接萤光染色法(IFAT)检测69例患儿鼻咽部脱落细胞内的RSV-Ag。证实了McAb对RSV快速诊断敏感性高,特异性强,具有极大实际应用价值。它可以完全作为一种RSV快速诊断的新试剂来代替PolyAb。     

即刻早期和晚期基因的转录产物在巨细胞病毒感染中的诊断作用

近年来对于巨细胞病毒(CMV)的即刻早期(IE)基因和晚期(L)基因的结构和功能有了较为深入的研究.应用核酸杂交技术和聚合酶链反应等先进技术检测IE-mRNA和L-mRNA能在早期特异性地诊断CMV活动性感染,对于临床治疗和预后监测有重要的指导意义.     

应用荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)检测孕妇巨细胞病毒感染

目的探讨荧光定量聚合酶链反应对孕妇巨细胞病毒(CMV)感染的临床诊断价值。方法用FQ-PCR检测1016例孕妇尿的CMV-DNA,同时用ELISA检测血中CMV IgG和CMV IgM。对20例感染孕妇的胎儿进行了产前诊断。结果FQ-PCR检测出36例CMV-DNA阳性,阳性率为3.5%(36/1016);阳性样本CMV-DNA在3.9×105~6.8×108拷贝/ml之间,平均为4.23×105拷贝/ml;ELISA检测CMV-IgG阳性率72.83%(740/1016);CMV-IgM阳性率3.15%(32/1016),CMV-IgG阴性率24.02%(244/1016)。20例产前诊断者有4例发生了宫内传播。结论FQ-PCR对CMV感染的诊断有重要的作用。     

即刻早期和晚期基因的转录产物在巨细胞病毒感染中的诊断作用

近年来对于巨细胞病毒(CMV)的即刻早期(IE)基因和晚期(L)基因的结构和功能有了较为深入的研究。应用核酸杂交技术和聚合醇链反应等先进技术检测IE—mRNA和L—mRNA能在早期特异性地诊断CMV活动性感染，对于临床治疗和预后监测有重要的指导意义。     

流式细胞术在巨细胞病毒感染诊断中的应用

巨细胞病毒(cytomegalovirus, CMV)感染是器官移植受者、AIDS患者和其它严重免疫抑制患者的常见并发症之一，也是优生优育监测的重要指标〔1〕。CMV早期即刻抗原(immediate early antigen IEA)是GMV感染的最客观依据之一，其检测方法主要有离心培养法(centrifuged culture)〔2〕和免疫组织化学技术等。     

FQ-PCR检测尿巨细胞病毒在婴儿CMV感染中的应用价值

目的 探讨并分析荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)法检测尿巨细胞病毒(CMV)在婴儿CMV感染的诊断与治疗动态监测中的应用价值.方法 以120例确诊或疑似CMV感染观察组患儿(观察组)和120例健康对照组儿童为研究对象,采用荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)对尿CMV-DNA进行检测,对血细胞pp65抗原及血清CMV-IgM同时进行检测,并且对检测结果进行比较分析.另外,对30例确诊CMV感染患儿给予更昔洛韦治疗后尿CMV-DNA拷贝进行动监测.结果 FQ-PCR检测的灵敏性和特异性均高于pp65抗原检测,两种方法的灵敏性比较有统计学意义(x2=8.004,P＜0.05),特异性比较有统计学差异(x2=10.047,P＜0.05);FQ-PCR法的灵敏性、特异性均较CMV-IgM法高,两法的灵敏性比较有统计学意义(x2=14.468,P＜0.05),特异性比较有统计学意义(x2=37.604,P＜0.05).30例确诊患儿尿CMV-DNA病毒拷贝数治疗前后有统计学差异(x2=10.55,P＜0.05).结论 FQ-PCR法检测尿CMV在婴儿CMV感染的诊断与治疗动态监测中有良好的应用价值,值得临床推广.     

EB病毒抗原单克隆抗体的特异性研究

5种EB病毒细胞系通过三步放大间接免疫过氧化物酶方法,检测抗EB病毒抗原的单克隆抗体(McAb)—病毒壳抗原(VCA)、膜抗原(MA),早期抗原(EA)、早期弥漫性抗原(EA—D)、早期限制性抗原(EA—R)、核抗原(EBNA)、核抗原第2型(EBNA—2)及潜在性膜蛋白(LMP)。结果表明McAb、EBNA、EBNA—2和EA有较高特异性,VCA和EA—R有一定特异性,MA、LMP和EA—D未得到预期的特异性反应。     

AllGlo探针4重荧光定量PCR技术同时检测4种疱疹病毒

目的 探讨多重荧光定量PCR技术的优化条件,建立基于AllGlo探针技术荧光定量法检测4种疱疹病毒新方法.方法 分别采用单重和多重定性PCR扩增临床常见4种疱疹病毒[单纯疱疹病毒1型(HSV-1)、HSV-2、Epstein-Barr病毒(EBV)、巨细胞病毒(CMV)]并测序鉴定,然后分别采用AllGlo探针和TaqMan探针的单重和多重定量PCR技术对4种疱疹病毒进行单种和多种病毒同时定性定量检测.结果 TaqMan探针和AllGlo探针单种疱疹病毒检测阳性率和特异性均为100％,AllGlo探针单重定量PCR检测比4重探针单种定量PCR的检测Ct值高1～3,AllGlo探针4重定量PCR可以同时检测4种疱疹病毒,相同样品AllGlo探针4重定量PCR检测与单探针单重定量PCR分别检测的结果符合率100％.结论 AllGlo探针荧光定量PCR技术的通量、灵敏度和特异性均高于TaqMan探针,应用前景广阔.     

肾综合征出血热病毒单克隆抗体在临床早期诊断中应用的研究(简报)

本研究是用第四军医大学微生物教研究建立的4B_9、4E_7、3H_4三种肾综合征出血热病毒单克隆抗体(HFRSMcAb),以间接免疫荧光技术(IFAT)检测HFRS病人外周血白细胞中HFRS病毒抗原,并对该McAb在临床诊断中的应用进行了初步研究。 一、IFAT的阳性率和反应的特异性 共检测临床诊断HFRS病人73例。标本采集于第2—26病日。其中IFAT反应阳性35例,阳性率47.95％。在73例病人中,早期(第2—5病日)患者38例,阳性24例,阳性率     

巨细胞病毒感染对细胞肾素基因表达的影响及其生物学意义

目的 探讨巨细胞病毒(cytomegalovirus,CMV)感染肾球旁细胞肾素基因表达的变化及其意义.方法 用病毒感染复数(MOI)为10、0.1和0的鼠CMV分别与鼠肾球旁细胞模型As4.1细胞共育5 d作为实验组;用紫外线灭活病毒的假感染(mock感染)对照组.RT-PCR检测感染细胞中CMV即刻早期基因1(IE1)的表达;免疫荧光观察肾素阳性细胞和肾素阳性颗粒在细胞的分布;双色免疫荧光染色观察肾素阳性颗粒是否出现在CMV阳性细胞;RT-PCR和Western blot检测肾素基因在感染细胞内的表达.结果 CMV感染As4.1细胞后出现典型的病毒空斑;病毒感染细胞CMV IE1 RT-PCR产物阳性;肾素阳性细胞集中在病毒空斑周围CMV新感染细胞区,肾素阳性荧光颗粒主要以块状和环状存在于病毒感染细胞质中;双色免疫荧光染色显示肾素阳性颗粒和CMV阳性颗粒出现在同一细胞;CMV感染细胞肾素基因的表达随病毒感染量增加而增加.结论 CMV感染并导致其宿主细胞肾素基因表达,可能涉及CMV加速心血管疾病发生发展的新机制.     

巨细胞病毒感染对细胞肾素基因表达的影响及其生物学意义

目的 探讨巨细胞病毒(cytomegalovirus,CMV)感染肾球旁细胞肾素基因表达的变化及其意义.方法 用病毒感染复数(MOI)为10、0.1和0的鼠CMV分别与鼠肾球旁细胞模型As4.1细胞共育5 d作为实验组;用紫外线灭活病毒的假感染(mock感染)对照组.RT-PCR检测感染细胞中CMV即刻早期基因1(IE1)的表达;免疫荧光观察肾素阳性细胞和肾素阳性颗粒在细胞的分布;双色免疫荧光染色观察肾素阳性颗粒是否出现在CMV阳性细胞;RT-PCR和Western blot检测肾素基因在感染细胞内的表达.结果 CMV感染As4.1细胞后出现典型的病毒空斑;病毒感染细胞CMV IE1 RT-PCR产物阳性;肾素阳性细胞集中在病毒空斑周围CMV新感染细胞区,肾素阳性荧光颗粒主要以块状和环状存在于病毒感染细胞质中;双色免疫荧光染色显示肾素阳性颗粒和CMV阳性颗粒出现在同一细胞;CMV感染细胞肾素基因的表达随病毒感染量增加而增加.结论 CMV感染并导致其宿主细胞肾素基因表达,可能涉及CMV加速心血管疾病发生发展的新机制.