呼吸道合胞病毒感染中性粒细胞Toll样受体-4表达及其功能

目的:观察呼吸道合胞病毒(RSV)感染中性粒细胞Toll样受体- 4(TLR4)的表达及对炎症介质产生的影响, 探讨地塞米松(DEX)干预对RSV感染后中性粒细胞TLR4表达及炎症介质的作用.方法:RSV感染中性粒细胞, 流式细胞术(FCM)检测中性粒细胞TLR4表达及代表中性粒细胞呼吸爆发功能的过氧化氢(H2O2), ELISA检测中性粒细胞培养上清的IL-6和IL-8水平, 并观察阻断TLR4信号通路及DEX干预对RSV感染中性粒细胞功能的影响.结果:(1) RSV感染中性粒细胞TLR4表达增加;RSV感染中性粒细胞IL-6的产生增加, 阻断TLR4信号传导, RSV感染组IL-6产生减少 (阻断组IL-6:391.307±43.45 ng/L;RSV感染组IL-6:466.03±36.478 ng/L;对照组IL-6:21.205±15.059 ng/L);RSV感染中性粒细胞IL-8和H2O2的产生均明显增加, 阻断TLR4信号传导对IL-8和H2O2的产生没有影响.(2)DEX下调RSV感染后中性粒细胞TLR4表达, 减少RSV感染的中性粒细胞产生IL-6、 IL-8和H2O2的产生;阻断TLR4, 与DEX协同抑制RSV感染中性粒细胞IL-6的产生, 逆转DEX对RSV感染中性粒细胞H2O2产生的抑制作用.结论:TLR4信号通路在RSV感染后中性粒细胞炎症介质产生及呼吸爆发功能中起重要作用;阻断TLR4信号通路和DEX联合作用可能成为临床治疗的新靶点.     

Toll样受体4(TLR4)信号通路及其靶向药物的研究进展

先天免疫系统利用模式识别受体(PPR)或其他分子受体识别入侵的细菌等病原微生物,通过触发炎症反应来阻止感染的传播,在抗菌防御中起着至关重要的作用.Toll样受体4(TLR4)是哺乳动物先天免疫系统的核心,在细菌内毒素介导的炎症中起关键作用.TLR4可以识别Gram阴性菌细胞壁上的脂多糖(LPS),从而激活TLR4信号通...     

Toll样受体2(TLR2)与结核分枝杆菌感染的相关研究进展

Toll样受体2(TLR2)是白细胞表面表达的一种模式识别受体,已发现多种配体可以激动或抑制TLR2的活化,进而调控免疫细胞的炎症和凋亡状态。结核分枝杆菌(MTB)通常寄生在巨噬细胞中,但MTB感染机体后,包括巨噬细胞在内的多种免疫细胞表面的TLR2都可与其相互作用,释放细胞因子,影响MTB在体内的状态和增殖。在分子层面,TLR2的多态性有待更多探索,目前研究的大部分TLR2的多态性被认为与MTB的易感性无关。文中总结了TLR2与配体、感染后免疫调节活动、多态性与MTB易感性等方面的研究进展。     

IFN-γ/IL-4对呼吸道合胞病毒感染呼吸道上皮细胞TLR3和TSLP mR-NA表达的影响

目的:探讨呼吸道合胞病毒(RSV)感染呼吸道上皮细胞16HBE对Toll样受体3(TLR3)和胸腺基质淋巴细胞生成素(TSLP)mRNA表达的影响,并探索Th1/Th2细胞因子IFN-γ/IL-4对RSV感染16HBE细胞TLR3和TSLPmRNA表达的作用.方法:利用Hep-2细胞扩增病毒,并进行病毒毒力鉴定;不同浓度人工合成双链RNA(dsRNA)聚肌胞加入细胞培养基中,实时荧光定量RT-PCR检测16HBE细胞TLR3mRNA和TSLP mRNA表达水平变化;RSV感染16 HBE细胞试验分组:对照组、RSV感染组(MOI为2的RSV病毒感染16HBE6h)、RSV/IFN-γ组(RSV病毒感染,同时重组人IFN-γ 100μg/L加入培养基)、RSV/IL-4组(RSV病毒感染,同时重组人IL-4 100μg/L加入培养基),实时荧光定量RT-PCR检测TLR3mRNA和TSLPm RNA表达水平变化.结果:经Hep-2细胞培养扩增获得足量Long株RSV病毒;聚肌胞能有效刺激16HBE细胞TLR3mRNA和TSLPmRNA表达水平升高(P<0.01),并随聚肌胞浓度增加提高;RSV感染16HBE细胞6 h,TLR3和TSLPmRNA表达水平均升高(P<0.01);Th2细胞因子IL-4可以加强RSV感染引起的TSLPmRNA表达水平升高(P<0.01),而Th1细胞因子IFN-γ能抑制RSV感染引起的TSLP mRNA表达水平升高(P<0.01).结论:TLR3刺激物聚肌胞能有效刺激人呼吸道上皮细胞TLR3 mR-NA和TSLPmRNA表达水平升高;RSV感染16HBE细胞引起TLR3mRNA和TSLPmRNA表达水平升高;Th2细胞因子IL-4能协同病毒感染增加TSLPmRNA表达水平;Th1细胞因子IFN-γ能抑制RSV感染引起的TSLPmRNA表达水平升高.     

呼吸道合胞病毒靶细胞受体的研究进展

呼吸道合胞病毒（respiratory syncytial virus,RSV）感染主要发生在呼吸道纤毛支气管上皮细胞,RSV融合蛋白和附着糖蛋白在介导病毒入侵感染中起重要作用,也是体液免疫应答的主要靶点。本文就RSV与其靶细胞结合的相关受体的研究进展作一综述,探讨RSV治疗药物靶点的选择及病毒的组织嗜性。     

病毒相关Toll样受体研究进展

Toll样受体(Toll like receptors,TLR)是近来发现的固有性免疫系统中的细胞跨膜受体及病原模式识别受体之一,在对病毒的识别与免疫应答作用中起着重要的用。本文简要综述了病毒相关Toll样受体中TLR2、3、4、7、8、9的研究进展。     

Toll样受体2和Toll样受体4在HBV感染后的免疫作用

Toll样受体（TLR）是启动固有免疫和调节适应性免疫的重要分子,参与肝脏对病毒及细菌的免疫TLR2、TLR4过程。在HBV的慢性化进程中,TLR2、TLR4与Thl和Th2的免疫平衡及调节性T细胞（Treg）的免疫抑制相关,HBV感染后,HBcAg刺激巨噬细胞产生TNF—α的作用需要TLR2参与,HBeAg的表达与否与TLR2的表达状态有关,而TLR4通过诱导iNOS的表达和激发HBV特异性免疫在体内抗HBV过程中起重要作用：     

Toll样受体与乙型病毒性肝炎的研究进展

Toll样受体在抗病原微生物感染和调节固有免疫和获得性免疫中起着重要的作用,是连接固有免疫与获得性免疫的重要桥梁。TLRs在乙型病毒性肝炎中的作用复杂,以其特异的模式识别方式和相互调节的网络反应参与慢性乙型肝炎、慢性重型肝炎的发病。     

Toll样受体2和Toll样受体4在免疫应答衣原体感染中的作用

衣原体是重要的人类病原体,其能够导致多种疾病的发生.由衣原体引起的许多人类疾病被认为是免疫病理学介导的.已经证明Toll样受体(TLRs)是多种病原体感染的主要模式识别受体( PRRs),在起始固有免疫应答,建立适应性免疫应答中发挥着重要作用.在TLR家族中,TLR2和TLR4与衣原体感染的相关性研究备受关注,在识别衣原体感染、调节宿主的早期免疫应答、炎症反应和病理形成中执行着关键性的作用.研究TLR2和TLR4在免疫应答衣原体感染中的作用可以更好地理解TLRs介导的分子免疫机制,可能有助于研发免疫治疗的分子靶标,最终有效预防、控制衣原体感染引起的疾病.     

过敏性鼻炎及其合并哮喘患者血液单核细胞和B细胞上Toll样受体2(TLR2)的检测分析

目的 检测过敏原激发前后过敏性鼻炎(AR),过敏性鼻炎合并哮喘(ARA)患者外周血单核细胞、 B细胞上Toll样受体2(TLR2)的表达水平。方法 采集AR、ARA患者外周静脉血,用蒿草、尘螨和梧桐花粉过敏原粗提液激发,流式细胞术检测分析外周血单核细胞、 B细胞上TLR2的表达。结果 与健康对照组(HC)相比,AR、 ARA患者血液TLR2⁺单核细胞、 TLR2⁺B细胞百分比和单核细胞、 B细胞表达TLR2平均荧光强度(MFI)均降低;经上述三种过敏原激发后,HC组TLR2⁺单核细胞百分比降低;经尘螨过敏原激发后,AR组单核细胞TLR2表达的MFI降低;经蒿草、尘螨过敏原激发后,ARA组B细胞TLR2表达MFI显著降低。结论 AR、 ARA患者单核细胞、 B细胞上TLR2表达下调。     

TLR2和TLR4在人慢性根尖周病组织肥大细胞上的表达

 目的: 观察人不同类型慢性根尖周病组织中肥大细胞(mast cells,MCs)上Toll样受体2(Toll-like receptor 2,TLR2)和TLR4的表达情况,探讨TLR2-类胰蛋白酶(tryptase)和TLR4-tryptase双阳性MCs在慢性根尖周疾病发病机制中的作用。方法: 将60例自愿参与本研究的受试者按根尖周病分类标准分为3组:(1)正常对照组;(2)根尖周肉芽肿组;(3)根尖周囊肿组。将根尖周组织标本置于4%甲醛固定液中浸泡48 h以上,制作连续组织切片。HE染色,光学显微镜下观察各组根尖周标本的组织学变化;免疫荧光双染色后于荧光显微镜下观察TLR2-tryptase和TLR4-tryptase双阳性MCs在根尖周组织中的分布情况。结果: 根尖周病变组TLR2-tryptase和TLR4-tryptase双阳性MCs比正常牙周膜组明显增多(P<0.01);与根尖肉芽肿组相比,根尖囊肿组TLR2-tryptase及TLR4-tryptase双阳性MCs数目明显增高(P<0.01)。结论: TLR2及TLR4在慢性根尖周疾病组织中MCs上表达增加,提示TLR2-tryptase及TLR4-tryptase双阳性MCs可能参与慢性根尖周病发病过程的免疫调节。     

Toll样受体4在多发性骨髓瘤患者外周血白细胞的表达及临床意义初探

为了探讨Toll样受体4(Toll-like receptor 4,TLR4)在外周血白细胞上的表达及其在多发性骨髓瘤中的意义。采用流式细胞术检测50例多发性骨髓瘤患者及35名健康对照者外周血淋巴细胞、单核细胞和中性粒细胞上TLR4的表达。结果TLR4在患者外周血淋巴细胞和中性粒细胞中的表达率较低;单核细胞TLR4阳性表达率在多发性骨髓瘤患者组为(24.71%±7.83%),显著低于健康对照组阳性率(43.14%±15.20%),差异有统计学意义(P<0.01),而TLR4在各型多发性骨髓瘤患者组的阳性表达率差异无统计学意义(P>0.05)。TLR4主要表达于外周血单核细胞,在多发性骨髓瘤患者中其阳性率降低,而且TLR4的阳性率高低与多发性骨髓瘤分型无关。表明TLR4及其介导的天然免疫应答与多发性骨髓瘤的发病存在一定的相关性。     

TLR2及TLR4在侵袭性肺曲霉病小鼠中的表达

目的 研究Toll样受体(TLR)2和TLR4在侵袭性肺曲霉病小鼠中的表达,探讨TLR2和TLR4在侵袭性肺曲霉病中的作用. 方法 将小鼠分为3组:A组为正常对照组;B组为未免疫抑制但感染烟曲霉菌组;c组为侵袭性肺曲霉病(IPA)模型组,给予免疫抑制并感染烟曲霉菌.在感染后8、24、48和72 h时相点,处死小鼠,取肺组织,采用组织病理学方法观察肺组织的病理损伤,RT-PCR法检测肺组织各个时相点的TLR2、TLR4、TNF.ot和β-tublin的表达.TLR2、TLR4、TNF-α的PCR产物电泳条带的扫描密度值与同时扩增的β-tublin电泳条带的扫描密度值的比值用以表示TLR2、TLR4和TNF-α的相对表达水平. 结果 病理观察结果显示,对照组小鼠的肺组织结构正常;正常小鼠感染烟曲霉菌后,小鼠的肺组织有炎症细胞浸润、出血等炎症反应,但未见孢子萌芽生成菌丝;而IPA模型小鼠的肺组织病理损伤严重,可见炎症细胞浸润、肺泡塌陷伴随出血,孢子聚积并萌芽生成菌丝.8、24、48 h 3个时间点的TLR4和24、48 h两个时相点的TNF-α在IPA模型小鼠肺组织中的表达要低于烟曲霉菌感染的正常小鼠(P<0.05),而TLR2在烟曲霉菌感染的正常小鼠和IPA模型小鼠肺组织中呈现低表达,但24、72 h时相点的TLR2在IPA模型小鼠的表达要低于烟曲霉菌感染的正常小鼠(P<0.05). 结论 TLR4及其下游分子TNF-α在IPA模型小鼠肺组织中低表达,在组织病理镜检中可见肺曲霉病典型肺组织病理损伤和孢子生成菌丝.     

HBeAg对慢性乙型肝炎孕妇胎盘组织TLR4表达的作用研究

目的探讨HBeAg对慢性乙肝孕妇胎盘组织Toll样受体4（TLR4）表达的作用,及TLR4表达与胎盘持续感染HBV的关系。方法选取22例HBeAg阳性和24例HBeAg阴性慢性乙肝孕妇,及正常孕妇25例。以实时荧光定量RT-PCR（qRT-PCR）和免疫组化法检测胎盘组织中TLR4的表达,并采用实时荧光定量PCR和微粒子酶免疫分析法（MEIA）分别检测其血清HBV DNA和HBeAg水平。结果HBeAg阳性孕妇胎盘组织中TLR4mRNA的表达水平明显低于正常对照组和HBeAg阴性组（P〈0.01）,但与正常对照组相比,其血清HBeAg和HBV DNA水平则显著升高（P〈0.01）;胎盘组织中TLR4 mRNA表达与HBeAg水平呈负相关,而与血清HBV DNA水平无显著相关性。结论HBeAg对胎盘组织TLR4表达起负调节作用,胎盘组织中TLR4的表达与其持续感染HBV有一定关系。     

TLR4基因多态性在中国人群中的初步研究

目的检测中国人Toll样受体4(Toll—like receptor 4．TLR4)基因调控区和编码区的单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphisms，SNPs)．寻找TLR4基因的遗传标记。方法采用直接测序的方法检测基因的5′区、编码区、部分内含子区和3′区，以确定中国人群中TLR4基因SNP的位置和类型，并用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性对重庆汉族样本进行了抽样调查。结果在4．98kb的测序范围内，发现5个新的SNP，3个位于5′区．2个位于3′非翻译区。在重庆地区汉族样本中．两个高频分布SNP的等位基因频率分别是0．266和0．404。结论在TLR4基因新发现的两个高频多态性位点在我国人群中比较常见，可以作为关联分析的遗传标记。     

Comparison of class and subclass antibody response to live and UV-inactivated RSV administered intranasally in mice.

To determine the effect of viral dose and replication on the subclass antibody response to RSV, mice were immunized intranasally with different doses of live RSV (10(4)-10(6) pfu) and compared to mice given an immunizing regimen of UV-inactivated RSV. Mice given the 10(6) pfu dose of live RSV and mice given the 40 micrograms dose of UV-inactivated RSV had comparable class specific antibody responses to whole RSV in serum and respiratory secretions. Serum from these two groups of mice were then compared for IgG subclass response to whole RSV. A predominance of IgG2a subclass antibody was found for both immunizing regimens, and no significant differences in subclass proportions were noted between regimens. These two regimens were then compared for serum total IgG response to RSV surface glycoproteins F and G. The serum IgG response to these glycoproteins was lower after immunization with UV-inactivated RSV than after live-RSV immunization (F: P = 0.03; G: P less than 0.05), even though the serum IgG response of the two groups to whole RSV was comparable. The IgG subclass response to surface glycoproteins was evaluated for live RSV immunization. The proportions of subclass antibody responses to glycoprotein F were comparable to the subclass response proportions to whole RSV and were not characteristic of a T-dependent response pattern. The subclass profile for glycoprotein G was not comparable to that of whole RSV but was suggestive of a T-independent response pattern.     

TLR2和TLR4在原发性肝癌中的表达

目的：本研究通过检测原发性肝癌Toll样受体2（TLR2）和Toll样受体4（TLR4）的表达，分析其与临床病理生理因素的关系，探讨TLR2，TLR4在原发性肝癌疾病过程中的可能作用。方法：采用免疫组化法和实时荧光定量PCR分别在蛋白水平及mRNA水平检测原发性肝癌组织和配对癌旁组织TLR2、TLR4的表达。结果：原发性肝癌组织在蛋白水平和mRNA水平TLR2和TLR4的表达均明显低于癌旁组织（P<0.01）。但免疫组化结果显示不论是肝癌组织还是癌旁组织，TLR2和TLR4的表达均明显高于正常肝组织（P<0.01，P<0.05），有门静脉分支癌栓的患者癌组织TLR4的表达强度低于无门静脉分支癌栓的患者（P<0.05）。结论：肝癌组织TLR2和TLR4的表达与癌旁组织相比受到相对抑制，但高于正常肝组织，TLR2和TLR4信号途径可能参与了原发性肝癌的病理过程。     

Predominant type-2 response in infants with respiratory syncytial virus (RSV) infection demonstrated by cytokine flow cytometry

Acute RSV infection in infancy may produce some asthma-like symptoms and may be followed by a recurrent wheeze later in childhood. It has been proposed that RSV infection stimulates type-2 cytokine responses, resembling those found in atopy and asthma. Peripheral blood cells were obtained from RSV-infected infants (n = 30) and healthy controls (n = 10). After in vitro restimulation of the cells, intracellular IL-4 and interferon-gamma (IFN-gamma) were measured by flow cytometry. The cells from RSV-infected infants produced more IL-4 and less IFN-gamma than those from healthy controls. IL-4 production was more frequent in CD8 than in CD4 cells, and the bias toward IL-4 production was greatest in infants with mild infections, whereas IFN-gamma production increased with disease severity. Our conclusions are that RSV infection is associated with IL-4 production in peripheral T cells, and that peripheral blood in infants with severe disease may be depleted of cytokine-producing cells.     

TLR4在LPS诱导的结肠炎症恢复中的作用

目的:研究Toll样受体4(Toll-like receptor 4,TLR-4)在结肠炎症中的作用,探讨LPS在炎症性肠病中的治疗作用。方法:取正常肠上皮细胞进行体外脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)干预培养。采用慢病毒转染技术,构建TLR4低表达、正常表达及高表达的肠上皮细胞亚组。正常表达组(normal组)及高表达组(high组)培养基中加入LPS诱导细胞炎症,刺激时间分别为0、2、4 h。Western blot法检测TLR4的表达;收集细胞上清液,ELISA检测各亚组细胞炎症因子TNF-α、IL-6和IL-8的水平。收集细胞,qPCR检测细胞因子TNF-α、IL-6、IL-8、IL-10和IL-1βmRNA的表达水平。划痕试验观察对比2组细胞的迁移能力。结果:LPS干预培养细胞后,TLR4的表达量显著增加(P0.05)。ELISA和qPCR检测高表达组与正常表达组组间细胞因子TNF-α、IL-6、IL-8、IL-10和IL-1β的蛋白和mRNA水平的差异均有统计学意义(P0.05)。划痕试验提示TLR4高表达组的细胞迁移能力明显高于正常对照组。结论:LPS影响TLR4炎症通路的活化,促进前炎症因子及辅助刺激分子的释放,起到调节炎症反应的作用。     

小檗碱和育亨宾对内毒素血症小鼠脾脏TLR4信号通路中相关基因表达的影响

目的: 观察小檗碱和α₂肾上腺素能受体拮抗剂育亨宾对内毒素血症小鼠脾脏Toll样受体4(TLR4)信号通路84种基因表达的影响,并初步探讨其作用机制。方法: 雄性BALB/c小鼠随机分为对照组、脂多糖(LPS)组、小檗碱+LPS组、小檗碱+育亨宾+LPS组、育亨宾+LPS组、小檗碱组、小檗碱+育亨宾组和育亨宾组。分别用蒸馏水、小檗碱(50 mg/kg)、小檗碱+育亨宾(50 mg/kg+2 mg/kg) 和育亨宾(2 mg/kg)灌胃,每天1次,连续3 d,第3 d灌胃1 h后,腹腔注射LPS(20 mg/kg)或生理盐水。腹腔注射1 h后,用RT² Profiler^TM PCR Array分析技术检测小鼠脾脏TLR4信号通路84种基因mRNA的表达;用Western blotting分析小鼠脾脏TLR4信号通路的抑制分子细胞因子信号抑制物(SOCS)1、SOCS3和白细胞介素-1受体相关激酶(IRAK)-M蛋白的表达。结果: LPS可上调小鼠脾脏TLR4信号转导通路中相关炎症因子的mRNA表达,包括CXCL10、TNF-α、IL-1α、IL-1β、IL-6、IFN-γ和IFN-β。小檗碱能显著下调下调髓样分化因子(MyD88)依赖信号通路下游TNF-α、IL-1α、IL-1β和IL-6 mRNA的表达,也能MyD88非依赖信号通路下游基因IFN-β和CXCL10 mRNA的表达(P<0.05)。育亨宾能显著下调内毒素血症小鼠脾脏IL-1α、IL-1β 和IFN-β mRNA的表达(P<0.05),但对TNF-α、IL-6和CXCL10 mRNA表达的下调作用与LPS组相比没有显著差异(P>0.05)。小檗碱与育亨宾合剂能显著下调内毒素血症小鼠脾脏IFN-β和CXCL10 mRNA的表达,但不能显著下调内毒素血症小鼠脾脏IL-1α、IL-1β、TNF-α 和IL-6 mRNA的表达。LPS攻击后1 h,小檗碱和(或)育亨宾均不能增强内毒素血症小鼠脾脏SOCS1、SOCS3和IRAK-M蛋白的表达。结论: 小檗碱和育亨宾均能抑制LPS诱导的MyD88依赖和非依赖信号通路下游部分基因的表达,这种抑制作用的机制与SOCS1、SOCS3和IRAK-M蛋白无关。