脂肪酸结合蛋白放射免疫分析方法的建立及初步应用

用人工重组的人脂肪酸结合蛋白(FABP)多次免疫大耳白兔,获取高效价的FABP抗体.用氯胺T法制备125I-FABP,再经Sephdex G-25纯化;抗原抗体反应采用平衡一步法,4℃培养24h后,经PR试剂分离结合和游离的标记抗原.该法测定范围5-405ng/mL,最低检出量为9ng/mL,批内和批间CV分别小于6.4%和8.5%.用该法测得人血清FABP含量:健康人(45名)为15.68±2.9ng/mL;重症监护病人(46例)为72.08±32.64ng/mL;心脏病患者(73例)为78.95±24.83ng/mL,明显升高.结果表明,本法稳定,简便特异,其灵敏度适于检出人血清FABP水平的变化.     

IgG4酶联免疫分析的建立及初步应用

用兔抗人IgG4的多克隆抗体(IgG4Ab)包被成固相板,以识别结合待测标本中的IgG4。用生物素标记IgG4Ab得BioIgG4Ab;用亲和素标记辣根酶得HRPA。在已包被IgG4Ab的固相板中加入IgG4标准品(或待测样品),反应、洗涤后,加入BioIgG4Ab,反应、洗涤后,加入HRPA,反应、洗涤后,板上形成IgG4Ab—IgG4—BioIgG4Ab—HRPA复合物,加酶底物显色,用酶标仪在490nm波长测定OD值,作标准曲线,根据标准曲线,查出标本中IgG4含量。该法测定范围:2.5～200ng/mL,最低检出量2.1ng/mL,批内和批间CV分别8.4%和11.2%。测得血清IgG4含量:青年人(30名)为37.7±2.3ng/mL;30名献血员为42.7±9.9ng/mL,49例重症监护患者明显升高为71.2±9.2ng/mL;49例肺部感染患者明显降低为28.4±9.2ng/mL。结果表明该法稳定,灵敏度适于检出人血清IgG4水平。     

IgG3酶联免疫分析方法的建立及初步应用研究

目的:建立IgG3酶联免疫分析(ELISA)方法,探讨IgG3在炎症性疾病患者血清中的水平变化.方法:用兔抗人IgG3的多克隆抗体包被成固相酶标板,以识别结合待测标本中的IgG3,再用此多克隆抗体标记生物素(Bio-Ab),用亲和素标记辣根过氧化物酶(HRP-A),向固相酶标板中加入标准品或待测品,反应、洗涤后,加入Bio-Ab,反应、洗涤后,加入HRP-A,反应、洗涤后,酶标板上形成Ab-Ag-Ab-Bio-A-HRP复合物,加酶底物显色,用酶标仪在相应波长下测定光密度(OD值),根据标准曲线,计算出待测标本中的IgG3含量.结果:该法测定范围为(1.875～60)ng/ml,最低检出量1.5ng/ml,批内和批间误差分析＜8%和10%.用该法测得正常青年人血清IgG3含量为(12.91±4.25)ng/ml(n=64),风湿病患者为(11.23±4.64)ng/ml(n=64),肺部感染患者为(9.32±2.00)ng/ml(n=24),后两组血清IgG3水平均显著低于正常青年人(P＜0.05).结论:我们建立的IgG3 ELISA方法稳定、简便,特异性和灵敏度高,适于检测人血清IgG3水平的变化.     

乳铁蛋白酶免疫分析法的建立及乳品含量检测的初步应用

目的：建立乳铁蛋白（LF）酶免疫分析法,检测LF在血清及乳汁中的水平。方法：用人源的LF多次免疫兔,获得高效价的抗体。纯化后包被成固相酶标板,以识别并结合待测标本中的LF。用生物素标记抗原（Bio-Ag）,同辣根酶标记亲和素（HRP-A）可特异结合。向固相酶标板中同时加入Bio-Ag和不同浓度的标准品,37℃反应1.5h。洗涤后以HRP-A为探针,经酶底物显色后可获得良好的ELISA竞争抑制曲线。结果：该法测定范围：（0.36～9.00）μg/ml,最低检出量0.25μg/ml,批内和批间误差分别为〈6.3%和7.4%。用该法测正常献血员（40名）血清LF水平为（0.438±0.183）μg/ml;人初乳（5名）水平为（7.82±0.51）mg/ml。血清和初乳中的LF经65℃30min处理后活性不变,经100℃3min处理明显降解。结论：该法稳定、简便、特异适于检测人血清和乳汁中的LF水平。     

IGF-Ⅰ、IGFBP-3诊断矮小儿童生长激素缺乏的价值

目的:探讨胰岛素样生长因子-Ⅰ ( IGF-Ⅰ)和胰岛素样生长因子结合蛋白-3 ( IGFBP-3)诊断矮小儿童生长激素缺乏的价值.方法:①对64例身材矮小患儿用精氨酸激发试验和左旋多巴激发试验检测其血清生长激素(GH)水平,两项药物激发试验GH峰值均＜10ng/ml诊断为生长激素缺乏(GHD组,40例),其中有一项激发试验GH峰值＞10ng/ml,即可确实诊断为特发性矮小症( ISS组,23例).选取45例健康儿童作为对照组.②用化学发光法检测血清IGF-Ⅰ和IGFBP-3水平.结果:①血清IGF-Ⅰ水平,GHD组为(80.35±32.46)ng/ml,ISS组为(123.26±62.13)ng/ml,正常对照组为(362.20±78.21)ng/ml;血清IGFBP-3水平,GHD组为(2.67±1.32)ng/ml,ISS组为(3.62±1.524)ng/ml,正常对照组(6.39±1.06)ng/ml.②GHD组和ISS组患儿血清IGF-Ⅰ和IGFBP-3水平显著低于健康对照组(P<0.05) ;GHD组比ISS组患儿血清IGF-Ⅰ、IGFBP-3水平减低有显著性差异(P<0.05).③按正常对照组x-2s作为临界值诊断GHD,IGF-Ⅰ的阳性率为95%; IGFBP-3的阳性率为92.5%;IGF-Ⅰ、IGFBP-3水平同时评价时,阳性率为87.50%.结论:IGF-Ⅰ、IGFBP-3检测可用于诊断身材矮小儿童的生长激素缺乏.     

IGF-1、IGFBP-3在2型糖尿病周围神经病变诊断中意义的研究

目的探讨外周血IGF-1和IGFBP-3在2型糖尿病周围神经病诊断中的意义。方法研究对象分为2型糖尿病周围神经病组、2型糖尿病无周围神经病组和健康人群组3组,以化学发光法检测血清中IGF-1和IGFBP-3水平。结果 IGF-1和IGFBP-3水平在周围神经病组[IGF-1:(132.65±50.78)ng/ml;IGFBP-3:(3.43±1.05)μg/ml]明显低于无周围神经病组[IGF-1:(160.25±66.13)ng/ml;IGFBP-3:(4.37±1.35)μg/ml)]和健康对照组[IGF-1:(174.95±64.38)ng/ml;IGFBP-3:(4.75±3.39)μg/ml](P0.05),而后两组间无统计学差异(P0.05)。结论 IGF-1和IGFBP-3水平减少与2型糖尿病周围神经病的发生相关,对两者的监测有利于2型糖尿病周围神经病的诊断。     

Graves''病患者GH与IGF-1水平观察

目的:探讨Graves病(GD)患者对血清生长激素(GH)与胰岛素样生长因子-1(IGF-1)水平的影响.方法:采用放射免疫分析(RIA)检测42例GD患者、20例经治疗甲状腺功能恢复至正常水平GD患者与30例健康人血清GH与IGF-1水平.结果:GD组,血清IGF-1水平(170.8±44.4)ng/ml、GH水平(2.89±1.18)ng/ml明显升高,与对照组(IGF-1为90.5±30.5ng/ml、GH为1.58±1.20ng/m1)比较有显著性差异(p＜0.01、p＜0.05),且IGF-1与FT4正相关(r=0.58,p＜0.01).GD治疗缓解组,IGF-1水平(105.1±37.0)ng/ml、GH水平(1.71±1.36)ng/ml明显低于初诊未治疗组,差异有显著性(P＜0.01、P＜0.05).结论:GD患者血清IGF-1和GH水平明显升高,并且可能与甲状腺激素存在一定的关系.     

IGF—Ⅱ和TGF—α变化对肝癌与肝硬化的诊断价值

目的:研究IGF-Ⅱ和TGF-α变化对肝癌与肝硬化的诊断价值。方法:采用放射免疫分析法检测了42例肝癌病人、31例肝硬化病人和40例正常人血清中IGF-Ⅱ和TGF-α的水平,并与AFP进行了比较分析。结果:对照组IGF-Ⅱ和TGF-α分别为0.47±0.1lμg/L和12.89±3.68ng/L;肝硬化组分别为1.20±0.96μg/L和12.30±3.40ng/L,IGF-Ⅱ显著高于对照组p<0.01;肝癌组为1.98±1.35μg/L和18.85±9.61ng/L两项均显著高于对照组和肝硬化组p<0.01。结论:IGF-Ⅱ和TGF-α能配合甲胎蛋白(AFP)检测肝癌,三项指标联合检测可以提高肝癌和肝硬化的确诊率。     

原发性肝癌患者介入治疗前后血清IGF-Ⅱ、CA19-9和AFP联检的临床意义

目的:探讨了原发性肝癌患者介入治疗前后血清IGF-Ⅱ、CA19-9和AFP水平的变化及临床意义.方法:应用放射免疫分析对35例原发性肝癌患者进行了血清IGF-Ⅱ、CA19-9和AFP含量检测,并与30名正常健康人作比较.结果:介入治疗前血清IGF-Ⅱ、CA19-9和AFP含量非常显著地高于正常人组(P＜0.01),介入治疗后一个月皆已接近正常.介入治疗6个月再测,未复发者仍然属正常水平,而复发者又恢复至介入前水平.结论:测定原发性肝癌患者血清中IGF-Ⅱ、CA19-9和AFP水平的变化对患者的治疗和预后均具有重要的临床价值.     

不同甲状腺疾病对血清IGF-Ⅰ水平的影响

目的：研究不同甲状腺疾病对人体血清胰岛素样生长因子-Ⅰ（IGF-Ⅰ）水平的影响。方法：采用放射免疫分析（RIA）分别检测55例甲状腺功能亢进、36例原发性甲状腺功能减退、25例桥本氏甲状腺炎患者和30例健康人IGF-Ⅰ水平,并随访经过治疗后甲状腺功能恢复至正常水平患者（24例甲亢、16例甲减、10例甲炎）血清IGF-Ⅰ水平。结果：血清IGF-Ⅰ水平,甲亢组（398.9±92.6）ng/ml明显高于健康组,有极显著性差异（P〈0.01）;甲减组（123.7±43.4）ng/ml,甲炎组（178.9±50.5）ng/ml明显低于健康组（239.7±68.1）ng/ml,有显著性差异（P〈0.01,P〈0.05）。大多数甲状腺疾病治疗缓解患者血清IGF-Ⅰ水平得到恢复。结论：不同甲状腺疾病因甲状腺激素的变化影响了IGF-Ⅰ的正常调节,而且IGF-Ⅰ有可能参与调节甲状腺疾病的进程。     

IGF-Ⅰ RIA的建立及初步应用

目的:建立胰岛素样生长因子Ⅰ(insulin-like growth factor-Ⅰ,IGF-Ⅰ)放射免疫分析并初步应用.方法:用氯胺-T法制备高比活度125I-IGF-Ⅰ,建成IGF-Ⅰ放射免疫分析.结果:本法测定范围为(20～2400)ng/ml.正常对照组血清IGF-Ⅰ含量为(173.2±46.1)ng/ml,而心力衰竭组含量为(124.5±28.9)ng/ml,显著低于正常对照组(P＜0.01).结论:该IGF-Ⅰ放免法准确,结果可靠,可应用于临床及实验研究.     

特异性小鼠血清中瘦素放射免疫分析的建立和应用

目的　建立高特异性和高灵敏度的小鼠血清瘦素 (Leptin)放射免疫分析方法 ,用于测定小鼠血清中瘦素水平。方法　用人工重组的小鼠leptin多次免疫兔子获取高效价、高特异的小鼠leptin抗体。用氯氨T法制备1 2 5I标记的leptin ,经Sep hadexG 2 5纯化。抗原抗体反应采用平衡一步法 ,4℃培养 2 4h后经PR试剂分离结合和游离的标记抗原。该法测定范围为 1.1～ 30 0ng mL ,最低检出值为 0 .5ng mL ,批内和批间误差小于 4 .4 %和 6 .7%。结果　用该法测定正常小鼠 2 3例 ,血清leptin为 (39.6 5± 15 .72 )ng mL ,而人leptin放射免疫法为 (1.5 6± 0 .4 5 )ng mL ,具有显著的差异 ,2组数据有中等程度的相关性 (r=0 .6 2 18)。用该法测定正常人样本 30例 ,血清leptin为 (19.4 6± 7.0 9)ng mL ,而人leptin放射免疫法为 (10 .0 8± 5 .2 0 )ng mL ,具有显著差异 ,但不存在明显的相关性 (r =- 0 .0 95 9)。用该法发现烫伤大鼠血清leptin明显下降 (14 .33± 3.5 2 )ng mL与(6 .71± 3.14 )ng mL ,烫伤大鼠切痂后leptin于 96h内恢复正常水平 (12 .0 8± 4 .0 5 )ng mL。结论　该法稳定、简便、特异、灵敏 ,适于检出小鼠和大鼠血清中的leptin水平 ,而不适合于检测人血清内leptin水平     

人血清抵抗素ELISA方法的研究及其临床初步应用

用兔抗人抵抗素(resistin)片断(22～34氨基酸残基)的多克隆抗体(PcAb)包被固相板,用辣根过氧化物酶(HRP)标记PcAb得HRP-PcAb.在包被PcAb的孔中加入抵抗素标准品(或待测样品),加入HRP-PcAb,形成PcAb-resistin-HRP-PcAb复合物,加酶底物邻苯二胺(OPD)显色,用酶标仪在492nm波长处测定OD值,绘制标准曲线.从标准曲线读出样本中抵抗素含量.本方法特异性强,灵敏度高,精密度好.该法测定范围0.5～100ng/mL,最低检出量0.5ng/mL,批内和批间CV%分别为3.4%和7.2%.50例2型糖尿病患者血清抵抗素含量为23.2±3.9 ng/mL,明显高于正常值16.0±2.5ng/mL.结果表明该法稳定,灵敏度适于检测人血清抵抗素水平.     

急性颅脑损伤早期血清胰岛素样生长因子-Ⅱ的动态变化

目的 :探讨急性颅脑损伤早期血清胰岛素样生长因子 -Ⅱ (IGF -Ⅱ )的病理生理作用。方法 :用放免法测定 2 9例颅脑损伤患者在损伤 1天内、治疗后 3天、7天三种情况下血清胰岛素样生长因子 -Ⅱ (IGF-Ⅱ )含量。结果 :急性颅脑损伤 1天内、治疗后 3天、7天IGF -Ⅱ水平 (0 131± 0 0 4 7ng ml、0 117± 0 0 4 6ng ml、0 12 3± 0 0 5 0ng ml)均较正常对照组 (0 4 4± 0 14ng ml)明显降低 ,损伤 1天内、治疗后 3天、7天组间比较无统计学意义。结论 :观察IGF -Ⅱ含量的变化对探讨急性颅脑损伤早期病理生理机制有一定意义。     

塑料试管固相放射免疫法测定甲胎蛋白

本文将甲胎蛋白(AFP)特异的抗体IgG包被在塑料管内壁,建立了一种快速、简便、高灵敏、特异的固相竞争放射免疫分析(RIA)法测定AFP。标准曲线范围为10～800ng/ml,最小检出值和正常值均<10ng/ml。批内CV％为7.1％,批间CV％为10.3％。本文与液相RIA法平行测定61扮样品的AFP浓度(10.1～3030ng/ml)。经统计学处理,两者之间具有良好的直线相关,表明本文建立的方法可以替代液相RIA法测定AFP,并适用于大批样品和自动化检测。     

COPD患者血清IGF-Ⅱ测定及其临床意义

目的:探讨慢性阻塞性肺病(COPD)患者血清IGF-Ⅱ水平的变化及其临床意义。方法:采用放射免疫分析测定60例COPD患者和30例非COPD患者的血清IGF-Ⅱ水平,并进行对照统计分析。结果:COPD组血清IGF-Ⅱ水平显著高于对照组(0.65±0.22μg/L vs 0.51±0.18μg/L;t=3.015;P<0.01),Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ期COPD患者间IGF-Ⅱ水平无显著性差异(F=0.287,P>0.05),住院死亡组血清IGF-Ⅱ水平显著高于好转出院组(t=2.727,P<0.05)。结论:COPD患者血清IGF-Ⅱ显著升高,住院死亡组升高更明显。     

病毒性肝炎患者血清中游离胰岛素样生长因子1检测

目的检测慢性病毒性肝炎、肝硬化和慢性重型肝炎患者血清中的游离胰岛素样生长因子1(IGF-1)水平变化,分析IGF-1与患者的病情和预后关系.方法应用酶联免疫吸附法(ELISA)检测43例慢性肝炎、20例肝硬化和12例慢性重型肝炎患者血清游离IGF-1水平,并与肝功能指标进行对照.结果慢性重型肝炎、肝硬化和慢性肝炎患者血清游离IGF-1水平分别为(0.23±0.18)ng/ml、(0.37±0.24)ng/ml和(1.15±0.72)ng/ml,慢性重型肝炎、肝硬化患者明显较慢性肝炎低.5例血清游离IGF-1<0.2ng/ml的慢性重型肝炎患者均死亡,4例>0.3ng/ml者存活,3例在0.2～0.3ng/ml之间,其中2例死亡,1例好转.白蛋白在30g/L以下患者的血清游离IGF-1浓度显著低于白蛋白在31g/L以上的患者.结论血清游离IGF-1水平与病情程度、白蛋白合成有密切相关,并可作为判断慢性重型肝炎预后的一个重要指标.     

糖尿病、脑梗死和急性心肌梗死患者血浆抵抗素水平的变化及临床意义

目的 :研究糖尿病、脑梗死以及急性心肌梗死患者血浆抵抗素水平的变化 ,探讨抵抗素在上述疾病过程中的病理生理意义。方法 :清晨空腹抽血 ,分离血浆 ,采用竞争性酶联免疫法检测血浆抵抗素含量。结果 :健康人血浆Resistin含量为 (36 4 6± 14 32 )ng/ml,不同性别间无明显差异。 2型糖尿病患者血浆抵抗素含量明显低于健康对照组 (16 36± 7 4 7)ng/mlvs (36 4 6± 14 32 )ng/ml,P <0 0 1。脑梗死患者血浆抵抗素水平亦明显低于正常对照组 (2 0 0 1± 10 5 5vs 36 4 6± 14 32ng/ml,P <0 0 1) ,而陈旧性脑梗死患者明显高于新发病患者 (31 2 5± 15 4 6 )vs (2 0 0 1± 10 5 5 )ng/ml,P <0 0 5。急性心肌梗死患者血浆抵抗素水平为 (12 18±3 87)ng/ml,明显低于健康人 (P <0 0 1) ,发病后第 5d和第 2d相比 ,血浆抵抗素水平无明显变化 (11 6 4±3 5 7)vs (11 98± 3 95 )ng/ml,P >0 0 5。结论 :2型糖尿病、脑梗死以及急性心肌梗死患者血浆抵抗素水平明显下降 ,提示抵抗素可能在心、脑血管疾病和糖尿病这些具有代谢综合征表现的疾病发展过程中发挥重要的调控作用。     

新生儿肝内胆汁淤积时IGF-1的变化与意义

目的了解新生儿肝内胆汁淤积时胰岛素样生长因子-1(IGF-1)的变化及意义.方法选择通过临床及血生化结果诊断为新生儿肝内胆汁淤积的病例25例,抽外周静脉血1ml用ELIS法测定IGF-1.另设生理性黄疸新生儿20例作为对照组.结果新生儿肝内胆汁淤积组IGF-1浓度为23.05±6.45ng/ml,对照组33.01±11.83ng/ml(两组比较P＜0.01).结论新生儿肝内胆汁淤积时IGF-1合成下降,其作为一种旁分泌激素,对维持肝肠系统局部组织功能有一定的作用.     

肿瘤坏死因子-β对重型再生障碍性贫血患者效应T细胞损伤骨髓造血的影响

目的:研究肿瘤坏死因子-β(TNF-β)对重型再生障碍性贫血(SAA)患者效应T细胞(CD8+HLA-DR+T细胞)损伤骨髓造血的影响,探讨TNF-β在SAA免疫发病中的作用。方法:以免疫磁珠阳性分选15例SAA患者骨髓CD8+HLA-DR+T细胞作为效应细胞,以阴性分选去除15名正常人骨髓单个核细胞中CD3+T细胞后作为靶细胞,两者混合培养,于体系中分别加入不同浓度TNF-β(终浓度分别为0、15、25、50 ng/ml)为实验组,并设空白对照组,孵育72小时后,通过流式细胞术以Annexin V检测靶细胞凋亡状况,采用ELISA法测定培养上清液IL-10、IFN-γ水平。结果:空白对照组及3个实验组细胞凋亡比例分别为(49.85±20.33)%、(51.65±20.34)%、(55.94±20.19)%、(57.72±19.45)%,TNF-β终浓度为50 ng/ml组及25 ng/ml组均明显高于空白组和15 ng/ml组细胞凋亡比例(P<0.05),但空白组与15 ng/ml组,25 ng/ml组与50 ng/ml组细胞凋亡比例无显著差异(P>0.05)。空白对照组及各实验组培养上清IL-10浓度分别为(217.99±29.47)ng/ml、(216.47±29.00)ng/ml、(212.15±13.19)ng/ml、(218.01±28.61)ng/ml,各组差异无统计学意义(P>0.05)。TNF-β终浓度50 ng/ml组培养上清IFN-γ水平[(593.50±48.18)ng/ml]明显高于空白对照组[(544.85±69.77)ng/ml],15 ng/ml组[(567.38±74.51)ng/ml]、25 ng/ml组[(544.05±79.69)ng/ml](P<0.05)。结论:TNF-β能增强SAA患者效应T细胞诱导骨髓造血细胞凋亡,并呈浓度依赖性;高水平的TNF-β可能还促进SAA患者CD8+HLA-DR+T细胞分泌IFN-γ,两者具有协同细胞毒作用。