肝病患者肝组织及血清HBV—DNA比较

肝组织HBV-DNA检测能直接反映HBV病毒的存在。我们采用PCR-溴化乙锭法对乙型肝炎68例及肝癌5例肝组织和血清HBV-DNA进行检测,并对其中51例在不同的e系统模式时HBV-DNA存在情况进行分析,以期探讨肝病患者肝细胞内HBV-DNA复制、感染情况。1　对象和方法1.1　对象　共收集乙肝68例及肝癌5例的肝穿组织及血清标本。其中男41例,女32例;年龄18～51岁,均为本院1995年12月至1998年9月的住院患者。急性肝炎22例,慢性肝炎35例,重症肝炎11例。临床诊断以1995年5月修订的病毒性肝炎防治方案(试行)为参考[1],并辅以病理诊断。1.2　试剂来源…     

口腔磷癌组织中入乳头瘤病毒DNA的原位杂交研究

应用以高辛标记的HPV6/11和HPV16/18核酸探针分别在50例口腔鳞状细胞癌（OSCC）组织上进行原位杂交,以检测OSCC组织中HPV DNA的特征。结果表明,HPV16/18 DNA阳性16例（32%）,HPV16/18 DNA阳性信号散在分布于OSCC的癌细胞核中;而检测HPV6/11 DNA均为阴性。结果提示,原位杂交方法可用来检测OSCC组织 HPV DNA的存在并能准确组织定位;进一步支持高危型HPV16/18感染与OSCC的发生有关。     

输血传播病毒(TTV)感染的肝病患者36例分析

目的：观察ＴＴＶ（Ｔｒａｎｓｆｕｓｉｏｎ ｔｒａｎｓｍｉｔｔｅｄｖｉｒｕｓ,ＴＴＶ）阳性肝病患者的临床特征。方法：用巢式ＰＣＲ法检测血清ＴＴＶ ＤＮＡ,同时观察血清生化指标和肝组织学的变化。结果：ＴＴＶ感染者的血清学模式以ＨＢＶ、ＨＣＶ、ＨＡＶ、ＨＥＶ混合感染为主,占６１．１％（２２／３６）,临床表现以乏力、纳关为特征,ＴＢＬ、ＡＬＴ变化不明显;而ＴＴＶ单独感染者为３８．９％（１４／３６）,临床特     

HIV感染者/AIDS患者肝组织中HIV核酸的检测

目的 检测HIV核酸在肝脏组织中的分布情况,初步探讨HIV引起肝损害的机制.方法 选取12例HIV感染者和5例AIDS患者,取其肝脏标本(其中15例活检,2例尸检),使用4条3'末端生物素标记的HIV gag区保守序列的寡核苷酸探针混合后进行原位杂交实验,由2名病理科医生和2名传染病科医生共同读取结果,衬染后蓝色为阳性信号.结果 所有17份标本的单个核细胞和窦壁细胞胞质中均有阳性信号,此外有4份标本(标本6、11、15、17)的肝细胞胞质中有阳性信号,其中2例免疫组化结果显示肝细胞内也有HIV p24抗原,而血清抗HIV阴性患者肝组织和未加探针的阴性对照均未见阳性信号.AIDS患者肝组织中阳性杂交信号较HIV感染者明显.结论 HIV可能直接感染了肝脏组织的多种细胞,包括Kupffer细胞、淋巴细胞、血管内皮细胞以及肝细胞等.HIV感染肝组织的情况可能与免疫抑制的程度相关.     

肝病患者血浆D—二聚体水平检测与分析

血浆Ｄ—二聚体 (Ｄ -Ｄ)水平测定 ,以前多用于血栓性疾病的诊断 ,是一项鉴别原发纤溶与继发纤溶及观察溶栓疗效的指标。近年来的研究表明 ,在各种肝脏疾病中存在不同程度的凝血 ,纤溶异常 ,Ｄ -Ｄ量纤维蛋白的特异性降解产物 ,也是体内高凝状态及纤溶亢进的重要分子标志物之一[1] 。ＣａｒｒＪＭ也认为 :在血小板计数 ,纤维蛋白原定量ＦＤＰ和Ｄ -Ｄ测定的试验中 ,唯有Ｄ -Ｄ才能真正反映体内凝血及纤溶状态。[2 ] 为了探讨Ｄ -Ｄ测定对肝病分型 ,治疗及估计预后等方面的意义 ,本文测定了 5 9例肝病患者的Ｄ-Ｄ水平 ,简要报道如下 :1　材料…     

不同肝病患者血清中肝再生增强因子水平的检测及意义

目的 建立血清肝再生增强因子（ALR）的酶联免疫检测方法，了解不同肝病患者血清中ALR水平及其意义。方法 利用ALR的酶联免疫方法检测不同肝病患者外周血清中ALR水平。结果 所建立的ALR酶联免疫方法其最低检测到的ALR浓度为0.1μg/L，在10ng/ml范围内抗体与ALR的反应呈良好的线性关系，与TGF－α，EGF等其它促肝细胞增殖因子无任何交叉反应。重型肝炎患者血清中ALR水平最高，急性肝炎次之，两者均非常显著高于正常人，慢性肝炎，肝炎后肝硬变，原发性肝癌和肝外疾病患者（P＜0.05和P＜0.01)；慢性肝炎和肝炎后肝硬变患者血清中ALR水平亦明显高于正常人（P＜0.05)；原发性肝癌和肝外疾病患者血清ALR水平与正常人无明显差异（P＞0.05)。结论 ALR酶联免疫检测方法对于不同肝病患者血清中ALR的检测具有良好的特异性和敏感性；肝病患者血清ALR的增多可能与肝损害及肝脏的再生有密切关系。     

原位杂交检测增生和癌变前列腺组织中前列腺分泌蛋白94mR …

根据前列腺分泌蛋白９４（ＰＳＰ９４）和ＰＳＰ５７的基因结构特点,设计并合成了以地高辛标记的两条探针,利用组织原位杂交的方法。对增生和癌变前列腺组织中ＰＳＰ９４ｍＲＮＡ的表达量进行了比较。结果显示,２０例增生前列腺组织,有１０例ＰＳＰ９４和ＳＰ５７共同探针的杂交信号比ＰＳＰ９４特异探针信号强,１０例相反。它们的共同点是均以腺体增生为主。而７例前列腺癌组织中除１例外,其余６例ＰＳＰ９４特异探针的杂交信     

TTV在恒河猴实验感染的初步研究

通过TTV在恒河猴的实验感染，了解TTV的肝性及其在各组织中的分布。从5只实验感染病毒的恒河猴各组织中抽提DNA，经PCR检测各种中TTV的感染；分别用病毒双链探针或单链负义探针，与吸附在纤维膜上的组织DNA进行斑点杂交。PCR结果与双链探针的杂交结果一致，肝、骨髓、脾、胃、小肠和大肠组织及血清均阳性，都有TTV的感染。单链负义探针与各组织DNA杂交，仅在肝、骨髓和小肠为阳性，表示肝、骨髓和小肠可能有作为病毒复制中间的正义DNA。提示TTV能侵染恒河猴的许多功能，但双在肝、骨髓和小肠可能是病毒的复制场所，故TTV可能具嗜肝性。     

原位杂交检测增生和癌变前列腺组织中前列腺分泌蛋白94 mRNA的表达

根据前列腺分泌蛋白 94(PSP94)和PSP5 7的基因结构特点 ,设计并合成了以地高辛标记的两条探针 ,利用组织原位杂交的方法 ,对增生和癌变前列腺组织中PSP94mRNA的表达量进行了比较。结果显示 ,2 0例增生前列腺组织 ,有 1 0例PSP94和PSP5 7共同探针的杂交信号比PSP94特异探针杂交信号强 ,1 0例相反。它们的共同点是均以腺体增生为主。而 7例前列腺癌组织中除 1例外 ,其余 6例PSP94特异探针的杂交信号均比PSP94和PSP5 7共同探针的杂交信号强。增生和癌变前列腺组织杂交结果比较 ,癌变前列腺组织PSP94特异探针杂交信号均比增生前列腺组织强。     

原位聚合酶链反应技术及其在消化道肿瘤相关病毒基因检测中的应用

为克服核酸原位杂交技术(ISH)和聚合酶链反应(PCR)的不足,我们应用分子病理学原理建立了原位PCR(PCRIS)、反转录原位PCR(RT—PCRIS)技术,对27例原发性肝癌(HCC)组织中丙型肝炎病毒核酸(HCV RNA)、54例胃癌(GC)组织中EPstein—Barr病毒脱氧核糖核酸(EBV DNA)及20例食道癌(EC)组织中人乳头状瘤病毒DNA(HPV DNA)进行原位分析。结果显示HCV RNA、EBVDNA及HPV DNA阳性率分别为78％、29％及25％,明显高于ISH检测结果(P<0.05)。提示本研究建立的PCRIS、RT—PCRIS技术特异、灵敏、定性、定位;HCV、EBV、HPV感染分别与HCC、GC及EC发生、发展密切相关。     

拉米夫定预防肝移植术后乙型肝炎病毒再感染的研究

为探讨拉米夫定对预防原位肝移植术后乙型肝炎病毒再感染的作用。对7例乙型肝炎病毒感染相关终末期肝病患者行同种肝移植,5例于肝移植前后予拉米夫定预防乙型肝炎病毒再感染,2例予普通抗病毒药物阿昔洛韦治疗。结果显示：应用拉米夫定组术后均无乙型肝炎病毒再感染,其中3例随访超过6个月,亦未发现有YMDD变异发生;2例未予拉米夫定治疗术后均发生乙型肝炎病毒再感染,提示拉米夫定能有效地预防肝移植术后乙型肝炎病毒再感染。     

用原位聚合酶链反应检测肝癌石蜡包埋组织中的HBV—DNA

为研究乙型肝炎病毒(HBV)感染和肝细胞癌(HCC)之间的关系,我们建立了原位聚合酶链反应(ISPCR)并检测26例HCC石蜡包埋组织中的HBV—DNA。结果显示,HBV DNA在肝癌组织和癌旁肝组织的阳性率分别为84.6％(22/26)、91.3％(21/23)。ISPCR技术既显示了PCR技术的高敏性和特异性,又能在细胞内定位,是研究HBV与HCC关系的一项有价值的技术。     

菌落原位酶联免疫检测

本文介绍了一种用于筛选外源基因重组子的方法。将生长在培养皿上的菌落用氯仿原位裂解,释放出抗原。采用双抗体夹心法用抗体包被聚乙烯薄膜,覆盖在培养皿上,通过抗原抗体反应使抗原结合到聚乙烯薄膜上,再与酶标抗体结合,覆盖在含有底物(四甲基联苯胺)的明胶板上显色,在阳性菌落的部位出现蓝斑。采用此法由235个含有乙型肝炎核心抗原基因的重组子中,筛选到6株能产生此抗原的菌株,方法简单,不用同位素。     

丙型肝炎病毒非结构蛋白NS5A反式激活基因的克隆化研究

应用抑制性消减杂交技术构建丙型肝炎病毒非结构蛋白5A（HCV NS5A）反式激活基因差异表达的cDNA消减文库，克隆HCV NS5A蛋白反式激活相关基因。以HCV NS5A表达质粒pcDNA3.1(－）-NS5A转染HepG2细胞，以空载体pcDNA3.1(－）为对照，制备转染后的细胞裂解液，提取mRNA并逆转录为cDNA，经RsaI酶切后，将实验组cDNA分成两组，分别与两种不同的接头衔接，再与对照组cDNA进行消减杂交及两次抑制性PCR，将产物与T／A载体连接，构建cDNA消减文库，并转染大肠杆菌进行文库扩增，随机挑选克隆PCR扩增后进行测序及同源性分析。文库扩增后得到121个阳性克隆，经菌落PCR分析，得到115个200－1000bp的插入片段，对其中的90个片段测序，并进行同源性分析，显示31种在基因编码蛋白和15种未知功能基因序列，包括一些与细胞周期、细胞凋亡、信号传导及肿瘤发生等细胞生长调节密切相关的蛋白编码基因，可能是NS5A反式激活靶基因。结果提示，成功构建了HCV NS5A反式激活基因差异表达的cDNA消减文库，该文库的建立为进一步阐明HCV NS5A反式调节的靶基因及致肝细胞癌发生的分子生物学机制提供了理论依据。     

原位杂交检测胰腺癌血小板衍化生长因子及其受体的基因表达

用原位杂交（ＩＳＨ）法，采用ｃＤＮＡ探针（ＰＤＧＦＡ、Ｂ，ＰＤＧＦＲα、β）对１５例胰腺癌手术切除标本和８例正常互腺组织标本进行检测。旨在观察胰腺组织和胰腺癌标本中血小板衍化生长因子（ＰＤＧＦ）及其受体（ＰＤＧＦＲ）的基因表达，探讨其在肿瘤侵袭和转移过程中的作用。结果表明，正常胰腺组织中ＰＤＧＦＡ较多，ＰＤＧＦＢ未检出，与胰腺癌组织相比较无显著差异。胰腺癌组织中ＰＤＧＦ和ＰＤＧＦＲ均有表达，而ＰＤ