沉默p53凋亡刺激蛋白抑制因子抑制结直肠癌细胞的增殖

目的探索p53凋亡刺激蛋白抑制因子(iASPP)在结直肠癌组织/细胞中的表达及iASPP沉默后对结直肠癌细胞增殖的影响。方法该研究首先检测临床样本结直肠癌组织和癌旁正常组织中iASPP mRNA的表达差异、结直肠癌细胞系和正常结肠上皮细胞系(HCoEpiC)mRNA和蛋白质iASPP表达差异;然后在人结肠癌细胞SW480中转染iASPPsiRNA,用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测iASPP mRNA表达效率,用免疫印迹试验(Western blot)检测iASPP的蛋白表达水平;最后用MTT法和Brd U法检测沉默iASPP对SW480细胞增殖的影响。结果结直肠癌组织中,iASPP mRNA表达相比癌旁正常组织上调;结直肠癌细胞LoVo、SW620和SW480中iASPP mRNA和蛋白质表达相比正常结肠上皮细胞系(HCoEpiC)均上调;在SW480细胞中转染iASPP-siRNA可下调iASPP的表达;沉默iASPP可抑制结直肠癌细胞的增殖。结论沉默iASPP基因抑制结直肠癌细胞的增殖。     

实时荧光定量RT-PCR检测肝细胞肝癌中B-myb的表达及其临床意义

目的 建立B-myb mRNA表达量检测的实时荧光定量聚合酶链反应(RT-PCR)系统,检测肝细胞肝癌(HCC)中B-myb的表达并分析其临床意义.方法 用实时荧光定量聚合酶链反应技术检测70例HCC患者癌组织、癌旁肝组织及18例正常肝组织中B-myb mRNA的表达情况.结果 B-myb mRNA在肝癌组织(0.0375±0.0168)及癌旁肝组织(0.0353±0.0128)中的表达水平明显高于在正常肝组织(0.0265±0.0099)中的表达水平(P＜0.05),而在肝癌组织及癌旁肝组织中的表达水平差异无统计学意义(P＞0.05).B-myb在人肝癌组织中的表达与临床分期、肝外转移及术后复发明显有关,而与门静脉癌栓、肿瘤个数、肿瘤直径、血清AFP水平及分化程度无明显关系.结论 该方法克服了传统PCR只能定性检测而不能定量检测的缺点,为研究B-myb在HCC中的表达提供了定量方法.B-myb可能与肝癌的发生、发展有关.     

原发性肝癌组织中SOX7mRNA的表达

目的:探讨原发性肝癌(HCC)组织中SOX7 mRNA的表达及意义.方法:应用实时荧光定量PCR检测SOX7 mRNA在7种肝癌细胞系(HepG2、SNU449、SNU182、SMMC-7721、HUH-7、PLC-PRF-5及Hep3B)和40例HCC及其配对癌旁正常肝组织中的表达.结果:肝癌细胞系中SOX7 mRN...     

肝细胞肝癌中OY-TES-1基因mRNA表达水平的研究

目的 检测OY-TES-1基因mRNA在肝细胞肝癌(HCC)与癌旁组织中的表达水平.方法 建立实时定量PCR方法,检测37例HCC及配对癌旁组织中目的 基因OY-TES-1及管家基因HPRT的表达,OY-TES-1mRNA的表达量以OY-TES-1/HPRT表示,应用SPSS13.0统计分析软件进行数据分析.结果 ①经实时定量PCR检测,HCC中OY-TES-1mRNA阳性率为72.97%(27/37),癌旁阳性率为64.86%(24/37),有17对HCC及癌旁组织均表达阳性,OY-TES-1mRNA在HCC及癌旁组织两者的定性表达无差异(P＞0.05);②在37例HCC及配对癌旁组织中,HCC中OY-TES-1mRNA水平明显高于对应的癌旁组织(P＜0.05),但与HCC患者的年龄、性别等临床资料无相关.结论 OY-TES-1 mRNA在HCC中有较高的表达频率,其表达水平高于对应的癌旁组织,它有望作为用于HCC辅助诊断及免疫治疗的肿瘤抗原,OY-TES-1蛋白在肝癌及癌旁组织中的表达及相关意义尚值得做进一步的研究.     

高迁移率族蛋白A1(HMGA1)在肝细胞癌中的表达及临床意义

目的:研究肝细胞癌(hepatocelluar carcinoma,HCC)中高迁移率族蛋白A1(high mobility group protein A1,HMGA1)的表达情况,探讨HMGA1基因在HCC中的表达与肝内转移以及临床病理参数之间的关系。方法:采用实时定量荧光聚合酶链反应(real-time fluorescent quantitative polymerase chain reaction,QRT-PCR)检测52例肝细胞癌组织和配对的癌旁组织、10例正常肝脏组织中HMGA1mRNA的表达,用免疫组化法(immunohistochemistry,IHC)检测HMGA1蛋白在肝细胞癌中的表达,评价HMGA1的表达与HCC临床病理学因素的相关性。结果:肝癌组织中HMGA1mRNA的表达较正常肝脏中升高6.82倍,其中有、无肝内转移组较正常肝组织分别升高13.36倍和4.63倍(P<0.05)。HMGA1mRNA的表达与TNM分期、Edmonson分级、肝内转移有关(P<0.05)。肝细胞癌中有肝内转移组较无肝内转移组HMGA1蛋白表达明显增强。结论:HMGA1基因在肝细胞癌中的表达较正常肝脏组...     

原发性肝癌组织中陷井受体3基因表达与扩增的临床意义

目的　观察原发性肝癌组织中陷井受体 3(DcR3)基因的表达和扩增 ,探讨该基因在肝癌组织中过度表达的原因 ,分析临床病理学因素在肝癌DcR3基因表达和扩增中的作用。方法　对4 8例病理学证实的原发性肝癌患者的组织 ,利用RT -PCR检测癌组织及癌旁组织DcR3基因mRNA表达 ,荧光定量PCR检测该基因的扩增倍数 ,统计分析肝癌组织中DcR3基因表达与扩增的相关性 ,比较不同临床病理学类型肝癌中该基因表达及扩增的差异。结果　 4 8例肝癌组织中DcR3基因mRNA阳性表达 2 9例 ,阳性率为 6 0 4 % ;癌旁组织无阳性表达。mRNA表达与肿瘤大小、临床分期及肿瘤的浸润和转移有关 (P <0 0 5 )。mRNA阳性表达组的基因扩增倍数为 1 5 3± 0 82 ,阴性组为 0 75± 0 33,其差异有显著意义 (P <0 0 1)。 4 8例患者的DcR3基因扩增倍数为 0 18～ 3 86 ,平均值为 1 2 2± 0 77,扩增倍数超过 2的患者共 7例 ,占 14 6 %。不同扩增倍数肝癌患者该基因mRNA的表达差异有显著意义 (P <0 0 1) ;不同临床病理学特征肝癌间DcR3基因的扩增倍数差异无显著意义 (P >0 0 5 )。序列分析发现其mRNA序列与源序列有 3个碱基改变。结论　 (1)原发性肝癌组织中存在DcR3基因的高表达 ,对应的癌旁组织中未见表达 ;(2 )原发性肝癌组织中存在DcR3基     

Claudin-1mRNA在肝细胞癌中的表达及临床意义

目的 探讨肝细胞癌(HCC)中Claudin-1 mRNA的表达与临床病理因素的关系.方法 采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)方法检测35例HCC组织及相应癌旁组织和10例正常肝组织中Claudin-1 mRNA的表达水平,并结合相关指标进行分析.结果 Claudin-1 mRNA在HCC组织中的表达明显低于癌旁...     

KLF6基因在原发性肝癌中的表达

目的 通过研究潜在抑癌基因KLF6在肝细胞癌的表达,探讨KLF6基因作为肝癌抑制基因的可能性.方法 分别用荧光定量PCR、半定量RT-PCR和Western blot方法检测肝细胞癌及癌旁组织中KLF6基因在mRNA及蛋白水平的表达变化.结果 实时荧光定量PCR显示经过看家基因GAPDH标化的KLF6 cDNA 起始浓度,在配对癌旁组织约为肝癌组织的3倍.26例肝癌组织的KLF6 mRNA表达水平与配对癌旁组织相比,差异具有显著性意义(P<0.01).在肝癌细胞株HepG2及Hep3B,KLF6 mRNA的表达亦显著低于正常对照细胞L02(P<0.01).实验还发现,在肝细胞癌中KLF6蛋白表达变化与mRNA表达变化一致,即KLF6蛋白在癌组织及肝癌细胞的表达明显低于癌旁组织及L02(P<0.01).结论 KLF6表达下调可能是肝细胞癌的遗传学改变之一, KLF6基因可能为新的肝癌相关抑癌基因.     

iASPP在肝细胞癌组织中的表达及与临床特征的关系

目的 检测肝细胞癌组织（HCC）中iASPP及p53蛋白的表达,并探讨iASPP与p53表达状态及肝细胞癌的关系.方法 所用组织标本为潍坊市人民医院及安丘市人民医院2008～2010年手术切除标本,HCC 55例,选取距离癌肿块边缘〉5cm且病理证实无肿瘤细胞侵犯的32例正常肝脏组织作为阴性对照.所有病例均经病理证实为HCC,患者术前未进行过放疗或化疗.采用免疫组织化学方法检测iASPP及p53蛋白在55例HCC术后病理标本和32例正常肝脏组织中的表达,并分析iASPP及p53蛋白与HCC的关系.结果 p53阴性时,HCC组织和癌旁组织中iASPP蛋白表达阳性率分别为74%,20%,差异具有统计学意义（P〈0.05）,p53阳性时,癌组织、癌旁组织中的iASPP蛋白表达差异无统计学意义（P〉0.05）;p53阴性时癌组织中iASPP蛋白的阳性率显著高于p53阳性组织中的阳性率（P〈0.05）,不同性别、年龄、分化程度、临床分期的iASPP蛋白表达阳性率差异无统计学意义.结论 人HCC组织中iASPP的表达与p53表达状态有关,p53阴性时iASPP高表达,与HCC的临床病理特征无明显相关性.     

iASPP基因在卵巢癌中的表达及其临床意义

目的 检测iASPP在卵巢癌中的表达,探索其在卵巢癌中的致病机制.方法 收集2013年5月至2014年12月于常州市妇幼保健院行卵巢肿瘤切除术的患者的癌组织及对应癌旁组织标本共32份,用实时荧光定量聚合酶链反应法检测iASPPmRNA相对表达水平并分析它与卵巢癌临床病理特征的关系.结果 卵巢癌组织中iASPP mRNA水平明显高于癌旁组织(P=0.001),并且与卵巢癌病理分期相关(P＜0.05),iASPP表达水平与患者年龄、是否绝经、组织学类型、术前有无化疗、有无淋巴结转移、糖类蛋白125及糖类蛋白153表达情况无相关性,其差异无统计学意义(P＞0.05).结论 iASPP mRNA在卵巢癌组织中高表达显示其在肿瘤发生过程中发挥重要作用.     

凝血因子Ⅱ mRNA在人肝细胞癌中表达与临床指标的关系

目的 探讨凝血因子ⅡmRNA在人肝细胞癌(HCC)组织中的表达及其与HCC临床指标的关系.方法 用荧光定量PCR技术检测55例HCC患者凝血因子Ⅱ mRNA的表达,分析目的基因表达量与临床病理指标之间的关系.结果 55例HCC中凝血因子Ⅱ mRNA的相对表达量为(1.184±0.535),凝血因子Ⅱ mRNA在癌组织与...     

肝癌组织GPC3 mRNA与AFP mRNA的表达

目的: 探讨肝细胞肝癌(HCC)中GPC3 mRNA与AFP mRNA的表达以及二者单独和联合检测的诊断价值.方法: 半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)分别检测HCC 41例,其他肝肿瘤15例,健康人11例肝组织标本中两个基因的表达.结果: GPC3 mRNA在HCC、癌旁、其他肿瘤、远离HCC与正常肝组织的相对表达量分别为78.9±35.5,30.6±21.6,36.6±25.2,23.8±15.5;而AFP mRNA的相对表达量依次为61.2±32.6,31.5±23.6,29.0±24.7,21.2±15.9;各基因在HCC与其他组织间表达差异显著(P<0.01).以各自远离癌灶与正常组织相对表达量的上限(x 1.96s)为界值,HCC中GPC3 mRNA,AFP mRNA的高表达比率分别为80.5 %与63.4 %,而两者联合检测的比率达92.7 %.AFP mRNA与血清AFP水平和HCC分级有关,GPC3 mRNA的表达与HCC的分级及侵袭性有关.HCC中两个指标相对表达量无显著相关性(r=-0.145,P=0.365).结论: GPC3 mRNA可能是一个潜在的特异性HCC标记,与AFP mRNA联检可提高HCC筛查与诊断的比率.     

肝癌结节中Hepcidin、BMP6表达及铁含量与肝癌临床特征的相关性分析

目的检测肝癌(HCC)结节中铁调素(Hepcidin)、骨形成蛋白6(BMP6)表达,功能性磁共振成像(fMRI)测定铁含量,并分析Hepcidin、BMP6与肝癌临床特征的相关性。方法选取2015年2月-2019年2月在川北医学院附属医院肝胆科进行手术治疗的85例HCC患者,术中留取HCC结节中央组织及相应癌旁组织(5 cm)。使用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测组织中Hepcidin、BMP6 mRNA表达,观察铁染色分级并测定铁含量。结果 HCC结节组织Hepcidin蛋白表达阳性率、Hepcidin mRNA表达水平均较癌旁组织高,BMP6蛋白表达阳性率、BMP6mRNA表达水平均较癌旁组织低,差异均有统计学意义(P0.05)。HCC结节组织铁含量较癌旁组织少,差异均有统计学意义(P0.05)。Hepcidin、BMP6蛋白表达与HCC患者肿瘤结节数、Edmondson-Steiner分级及有无肝硬化、肿瘤包膜、血管侵犯有关,差异有统计学意义(P0.05)。铁含量与Hepcidin mRNA表达水平呈负相关,与BMP6mRNA表达水平呈正相关,差异有统计学意义(P0.05)。结论 Hepcidin高表达、BMP6低表达与HCC患者肿瘤结节数、Edmondson-Steiner分级等有关,肝癌结节组织铁含量明显少于癌旁组织铁含量,提示检测Hepcidin、BMP6表达水平及肝癌组织铁含量对早期诊断HCC具有重要意义,以期能进行早期干预。     

Survivin基因在肝细胞肝癌中的表达及意义

目的研究Survivin基因在肝细胞肝癌(HCC)组织中的表达情况,以探讨Survivin基因与HCC发病机制和临床指标间的关系。方法收集30例确诊HCC患者癌组织和癌旁组织,采用免疫组织化学方法、实时荧光定量RT-PCR法检测其中Survivin基因、Survivin蛋白的表达。结果在本组30例HCC癌组织中,Survivin基因m RNA的表达均高于癌旁组织(P0.05)。在不同的病理分期之间Survivin蛋白的表达比较差异具有统计学意义(P0.05)。结论由此可以认为Survivin基因的表达程度在HCC的发生和发展中扮演着重要角色,参与了肿瘤的发展与转归。     

靶向沉默PPP1R16A基因可抑制肝癌细胞的增殖

目的 观察和比较在人肝癌与癌旁组织中蛋白磷酸酶1调节亚基16A(protein phosphatase 1 regulatory subunit 16A,PPP1R16A)基因在基因组和转录水平的差异,探讨靶向沉默PPP1R16A基因对肝癌细胞HCC LM3增殖能力的影响.方法 收集106例肝癌患者的肿瘤组织及癌旁组织,采用实时荧光定量PCR技术检测PPP1R16A基因的基因组和转录水平.体外合成PPP1R16A序列特异性小干扰RNA(siRNA),使用脂质体法转染肝癌细胞株HCC LM3.实验分si-16A组(针对PPP1R16A的特异性siRNA转染的HCC LM3细胞)、NC组(非特异性siRNA转染的HCC LM3细胞)、空白组(未转染siRNA的HCC LM3细胞),用实时荧光定量PCR检测PPP1R16A基因拷贝数和转录水平,用蛋白质印迹法检测PPP1R16A蛋白表达,用CCK-8实验、克隆形成实验检测细胞增殖和克隆形成能力,用流式细胞术检测细胞周期.结果 人肝癌组织中PPP1R16A基因的拷贝数和转录表达水平均高于癌旁组织(P＜0.01),且两者具有相关性(P=0.015).CCK-8实验和克隆形成实验显示,转染siRNA后,si-16A组细胞增殖低于NC组和空白组(P＜0.001).流式细胞术结果显示,si-16A组较NC组和空白组细胞周期被抑制.结论 肝癌组织中PPP1R16A的拷贝数发生扩增,基因转录上调.靶向沉默PPP1R16A能抑制肝癌细胞HCC LM3的增殖能力.提示PPP1R16A基因在肝癌中发挥癌基因的作用.     

CYR61/CCN1在肝细胞肝癌中的原位表达及其临床意义

目的：观察Cyr61在肝细胞肝癌中表达的意义．方法：采用免疫组化法和RT—PCR共检测65例肝细胞肝癌中Cyr61蛋白和mRNA表达水平,分析其表达与肝癌的临床病理学特征的关系．结果：高分化HCC组织的Cyr61蛋白表达水平高于低分化HCC组织（P〈0．01）;镜下存在静脉浸润、多结节的HCC组织中Cyr61蛋白表达高于无静脉浸润、单结节的HCC组织（P〈0．05）．30例肝癌组织Cyr61mRNA表达均为阳性,86．67％（26／30）癌组织Cyr61mRNA表达低于相应癌旁组织（P〈0．05）．结论：Cyr61可能在肝癌的发生早期发挥重要作用,并与肝癌进程中的间质重建和侵袭转移有关．     

肝癌及其癌旁组织中细胞凋亡抑制蛋白survivin的表达

目的：分析细胞凋亡抑制蛋白survivin在原发性肝癌（HCC）及其癌旁组织中的表达,探讨其在肿瘤血管形成和抵抗肿瘤血管内皮细胞凋亡中的作用。方法：采集HCC癌组织、癌旁组织和正常肝组织标本,通过免疫组织化学方法分析survivin蛋白表达阳性率与HCC病理参数的关系,采用流式细胞术分析survivin蛋白在不同组织中的表达水平,用荧光定量PCR方法分析不同组织中survivin基因的表达水平。结果：survivin蛋白在肝癌组织中表达水平与门静脉癌栓的形成有关联（P<0.05）,与肿瘤大小、包膜、甲胎蛋白（AFP）水平及HCC病理分期均无关联（P＞0.05）;流式细胞术结果,肝癌组织中survivin蛋白表达水平高于癌旁组织和正常肝组织（P<0.05）,癌旁组织中survivin蛋白表达水平高于正常肝组织,但差异无统计学意义（P＞0.05）;荧光定量PCR检测,survivin基因只在肝癌组织中表达,在癌旁组织和正常肝组织中无表达,其表达水平组间比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论：细胞凋亡抑制蛋白survivin在肝癌组织中表达水平较高,但在癌旁组织中检测不到其基因的表达,survivin蛋白可能是通过旁分泌作用从肝癌病变处进入癌旁组织细胞中发挥抑制细胞凋亡的功能。     

原发性肝细胞癌中WAF1/CIP1基因的表达及其临床病理意义

目的 :探讨原发性肝细胞癌 (HCC)中 WAF1/ CIP1基因 m RNA的表达与临床病理学指标的关系和意义。方法 :采用半定量 RT- PCR方法 ,检测 WAF1/ CIP1基因在 30例 HCC及其癌旁肝组织中的表达。结果 :肝癌组织 WAF1/ CIP1m RNA表达相对值低于其相应癌旁肝组织 [(1.10± 0 .43) U对 (1.31± 0 .41) U,P<0 .0 5 ],有卫星灶形成的肝癌低于无卫星灶形成的肝癌[(0 .86± 0 .2 9) U对 (1.32± 0 .44 ) U,P<0 .0 1],但其在 HCC的其他病理学指标中差异无显著性 (P>0 .0 5 )。结论 :WAF1/CIP1基因的表达异常可能参与 HCC的发生、发…     

外周血GPC3与PEG10 mRNA检测对肝细胞癌转移的诊断价值

目的 研究外周血磷脂酰肌醇蛋白聚糖3(GPC-3)与遗传印迹基因(PEG10)mRNA检测对肝细胞癌(HCC)转移的诊断价值.方法 30例HCC患者分为HCC转移组(n=18)和HCC未转移组(n=12),另选取11例肝硬化患者作为对照.以SYBRGreen I作为荧光信号,采用实时荧光定量聚合酶链反应(FQ RT-PCR)检测三组患者外周血GPC-3 mRNA和PEG10 mRNA表达,应用ROC曲线和诊断性能专用指标评价两者预测诊断及排除诊断的价值.结果 HCC转移组GPC-3 mRNA和PEG10 mRNA表达显著高于HCC未转移组和肝硬化组(P<0.05);HCC未转移组与肝硬化组GPC-3 mRNA和PEG10 mRNA的表达比较差异无统计学意义.单项检测GPC-3 mRNA和PEG10 mRNA的诊断灵敏度分别为66.7%和72.2%,特异度均为91.7%,ROC曲线下面积(AUC)为0.748和0.812;两基因检测平行试验的灵敏度为90.7%,特异度为84.0%,阴性似然比为0.11,诊断准确率为83.3%;系列试验的灵敏度为60.5%,特异度为98.7%,阳性似然比为45.5,诊断准确率为73.3%.结论 检测外周血GPC-3mRNA和PEG10 mRNA对估计肝癌有无血行播散和肝外转移有一定的价值,且PEG10 mRNA优于GPC-3 mRNA.两者联合系列试验有助于HCC外周血转移的预测诊断.     

实时荧光定量RT-PCR检测肝癌组织中miR-122a及miR-224的表达

目的 运用实时荧光定量RT-PCR方法分析miR-122与miR-224两种miRNAs在原发性肝细胞癌(HCC)中的表达,探讨以miRNAs为靶点在早期肝癌中的临床诊断意义.方法 采用基于2(-△△ACT)的实时荧光定量RT-PCR法对35例肝癌组织及癌旁组织的miR-122a及miR-224进行了定量分析,结果经由Noahernblot验证.结果 与正常组织相比,在所有的被检肝癌组织中,均发现了miR-122a有不同程度的表达下调(P<0.01),而上述肝癌组织中的miR-224的定量结果显示该miRNA表达显著增加(P<0.001).结论 HCC组织中存在上述两种miRNAs表达水平的改变.实时荧光定量RT-PCR法为早期、准确的在临床上检测肝组织癌变提供了新的思路.