细胞凋亡与肝脏疾病

细胞凋亡(apoptosis,APO)是指在一定的生理和病理情况下,机体为维护内环境的稳定,通过基因调控而使细胞自动消亡的过程.英国Kerr教授1972年首先提出凋亡的概念,他主要根据形态学上的不同将细胞凋亡与坏死相区分,并指出前者是一种主动的、程序性的、细胞固有的过程许多文献又称凋亡为程序性细胞死亡(programmed cell death,PCD),而最新观念认为APO是形态学上的概念,PCD是发生机制上的概念,不是所有PCD都表现为APO,因而可以认为APO是PCD的一种形态学表现[1].1980年以来,细胞凋亡现象受到了广泛重视,有关的研究工作取得了重要进展,并成为医学生物学各学科所共同关注的极为活跃的研究领域[2-19].     

两种原位DNA断链标记技术检测组织切片和培养细胞中的凋亡细胞

目的:介绍两种原位 DNA 断链标记技术(TUNEL 和 ISNT)在检测常规石蜡组织切片和体外培养细胞凋亡中的应用。方法:用 TUNEL 和 ISNT 检测了甲基强的松龙处理的 SD 在鼠胸腺组织,正常鼠肠粘膜组织,肿瘤组织等标本的石蜡组织切片和体外培养的肿瘤细胞药物处理后发生凋亡的细胞爬片及再障病人骨髓涂片。结果:大鼠胸腺组织经甲基强的松龙处理后可见大量凋亡的 T 淋巴细胞,鼠肠粘膜组织粘膜上皮细胞以凋亡的方式更新脱落,肿瘤组织中可见散在凋亡细胞。药物处理的肿瘤细胞和再障病人骨髓细胞中有较多的凋亡细胞。被染成棕色或棕褐色的细胞在形态学上符合凋亡细胞的形态学改变。结论:两种方法具有应用范围广、特异性和敏感性都较高、可以检测早期的细胞凋亡、并可通过计算标记指数进行定量或半定量等的特点。特别适用于常规石蜡组织切片中细胞凋亡的检测,是不失于研究体内组织细胞凋亡的首选方法之一。     

两种原位DNA断链标记技术检测组织切片和培养细胞中的凋亡细胞

目的：介绍两种原位DNA断链标记技术(TUNEL和ISNT)在检测常规石蜡组织切片和体外培养细胞凋亡中的应用。方法：用TUNEL和ISNT检测了甲基强的松龙处理的SD在鼠胸腺组织．正常鼠肠粘膜组织．肿瘤组织等标本的石蜡组织切片和体处培养的肿瘤细胞药物处理后发生凋亡的细胞爬片及再障病人骨髓涂片。结果：大鼠胸腺组织经甲基强的橙龙处理后可见大量凋亡的T淋巴细胞，鼠肠粘膜组织粘膜上皮细胞以凋亡的方式更新脱落，肿瘤组织中可见散在凋亡细胞。药物处理的肿瘤细胞和再障病人骨髓细胞中有较多的凋亡细胞。被染成棕色或棕褐色的细胞在形态学上符合稠亡细胞的形态学改变。结论；两种方法具有应用范围广、特异性和敏感性都较高、可以检测早期的细胞凋亡、并可通过计算标记指数进行定量或半定量等的特点。特别适用于常规石蜡组织切片中细胞凋亡的检测，是不失于研究体内组织细胞凋亡的首选方法之一。     

细胞凋亡的形态特征与分子机制研究进展

细胞凋亡是细胞的主动死亡过程,此过程涉及一系列基因的激活表达和调控.凋亡是为了适应生存环境的主动死亡过程,并不是病理条件下的损伤.核酸内切酶反应是凋亡分子(APO)的重要步骤.目前,人们对细胞凋亡的发生机制及其与疾病的关系有了比较全面清晰的认识,这对重新认识疾病的发生机制具有划时代的意义.     

2,3-吲哚醌抑制人神经母瘤细胞增殖

运用台盼蓝拒染法测定人神经母瘤细胞(SH-SY5Y细胞)生长曲线,Hoechst33258核染色形态学检测细胞凋亡,流式细胞仪检测2,3-吲哚醌对SH-SY5Y细胞凋亡率的影响.结果2,3-吲哚醌作用48 h后开始抑制SH-SY5Y细胞生长,并且细胞核出现核裂解、浓缩等典型凋亡形态学改变,凋亡率升高,诱导细胞凋亡呈现时间和剂量依赖关系.提示2,3-吲哚醌可用于肿瘤的治疗.     

转化生长因子-3在胃癌及癌旁组织中的表达及其与细胞凋亡关系的实验研究

转化生长因子(TGF)β属结构相关蛋白的异二聚体多肽.有五种同分异构体,哺乳动物体内只有TGF-βⅠ、TGF-βⅡ、TGF-βⅢ存在.具有调节细胞增殖、分化、黏附、迁移、刺激细胞外基质形成、诱导细胞凋亡及抑制免疫反应等作用.为探讨其在胃癌发生与发展中的作用,我们采用免疫组化和DNA原位末端标记技术(TUNEL)对正常胃黏膜、胃癌及其癌旁组织中TGFβⅠ、TGF βⅡ的表达及与细胞凋亡有关指标进行了形态学观察.     

重型肝炎与细胞凋亡

细胞凋亡(Apoptosis)由英国学者Kerr于1972年首先提出，用以描述在形态学上有别于细胞坏死的一种细胞死亡方式，其本质是基因调控的程序性细胞死亡过程．又称细胞程序性死亡。凋亡是个主动、耗能的基因DNA断化而最终导致细胞死亡的过程．其作为一种生理现象在胚胎发育、免疫与造血系统成熟、维持正常组织和器官细胞数的恒定生长平衡等方面均发挥重要作用，但细胞凋亡异常，也参与多种疾病发生。     

程序化细胞死亡分子-5蛋白对地塞米松诱导的多发性骨髓瘤细胞凋亡的影响

目的 观测程序化细胞死亡分子-5(PDCD-5)蛋白表达对地塞米松(DXM)诱导人多发性骨髓瘤(MM)细胞株(KM3)凋亡的影响.方法 将不同浓度的rhPDCD-5蛋白单独或与DXM同时加入处于对数生长期的KM3细胞株中培养16 h后,通过普通倒置显微镜和DAPI染色后荧光显微镜观察KM3细胞的形态变化,应用膜联蛋白V(Annexin V)和碘化丙啶(PI)标记后进行流式细胞仪(FCM)检测KM3细胞凋亡率.结果 PDCD-5蛋白与DXM联用组可观察到多数细胞皱缩、胞膜发泡及不规则凹陷,核固缩、核分裂等凋亡相关的形态学改变;单用组PDCD-5蛋白或DXM组可观察到部分细胞凋亡形态学改变,但不如联用组明显;PBS对照组细胞形态则无明显变化.联用组其KM3细胞凋亡率较单用组明显增加,且浓度较高PDCD-5蛋白组其凋亡率更高.结论 rhPDCD-5蛋白可直接作用于KM3使其凋亡,并对DXM诱导的KM3细胞凋亡有明显的促进作用.     

氯化甲基汞抗裸鼠皮下U251胶质瘤细胞的体内实验研究

目的 在建立裸鼠皮下U251胶质瘤模型基础上,通过体内实验及相关形态学研究,分析氯化甲基汞(MMC)的抗脑胶质瘤作用.方法 制备裸鼠皮下U251胶质瘤模型,随机分为对照组和实验组,实验组裸鼠注射U251脑胶质瘤细胞1 w后,每天灌胃给予10 mg/kg体重MMC,连续5 d,对照组给予相同体积的生理盐水.全部裸鼠于肿瘤接种后14 d处死.结果 大体病理显示实验组肿瘤体积明显小于对照组,病理组织学观察发现实验组U251胶质瘤细胞生长密度较对照组低,并可见细胞体积变小、核固缩等凋亡的形态学改变.透射电镜显示实验组肿瘤细胞发生核固缩、染色质周边化、核断裂、胞浆空泡变性等改变,实验组瘤体汞含量明显高于对照组.结论 MMC对裸鼠U251胶质瘤细胞增殖具有明显的抑制作用,其机制可能是通过诱导胶质瘤细胞凋亡实现的,相关分子机制有待进一步深入研究.     

Caspase与胰岛β细胞凋亡的关系

半胱天冬蛋白酶(caspase)可通过Fas、肿瘤坏死因子、颗粒酶B、Bcl-2家族等通路激活,参与β细胞凋亡。不同的caspase在β细胞凋亡中所起的作用不尽相同。Caspase-8与caspase-3作为启动酶与效应酶分别在凋亡信号转导途径的上游与下游起重要作用,经过一系列酶联反应,最终引起β细胞发生凋亡的特征性形态学改变。     

中药对肝脏细胞凋亡影口向的研究

目前已经开展中药对3种肝脏细胞凋亡影响研究,即肝癌细胞、肝星状细胞(HSC)和肝细胞.笔者就其研究现状、意义和前景探讨如下.1中药诱导肝癌细胞凋亡肝癌的发生,一方面与控制细胞增殖的癌基因过度表达有关,另一方面与抑制细胞凋亡的基因高度表达及诱导细胞凋亡的抗癌基因等变异失活有关.现在认为,在肝癌发生的始动、促动、进展等各个阶段均有细胞发生凋亡,尽可能地清除异常细胞是机体为了保护自己而采取自我防御措施[1].关键在于,肝癌细胞的增殖与凋亡在体内孰占主导地位?治疗能否通过抑制增殖和促进凋亡而改变肝癌细胞的消长状态?有人认为,通过诱导肝癌细胞大量凋亡,可以达到阻断肿瘤形成和改善患者预后的目的.     

TUNEL染色结合细胞形态学特点鉴别急性胰腺炎时腺泡细胞的死亡方式

目的:通过脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记(TdT-mediated dUTP nick labeling,TUNEL)染色检测大鼠急性胰腺炎(acute pancreatitis,AP)中腺泡细胞的死亡情况,探讨TUNEL染色阳性细胞的形态与细胞死亡方式之间的关系.方法:大鼠随机分为ANP组和假手术组(sham operation,SO),每组6只,利用4%的牛磺胆酸钠胰胆管逆行注射建立大鼠急性坏死性胰腺炎(acute necrotizing pancreatitis,ANP)模型,对两组大鼠胰腺组织进行病理学观察并采用TUNEL技术对胰腺组织切片进行染色,光镜下观察TUNEL染色阳性细胞的形态学表现.结果:对比假手术组,ANP组大鼠胰腺组织出现典型的AP样病理改变,同时可见大量的TUNEL染色阳性腺泡细胞.阳性细胞之间的形态学特点各异,其中既有细胞呈凋亡表现,如核固缩和核破裂伴凋亡小体形成;也有细胞呈坏死表现,如核膨胀、核溶解以及胞质空泡化.两种细胞死亡方式的形态学表现之间存在显著差异.结论:AP时,TUNEL染色并不能很好地区分腺泡细胞的坏死与凋亡,但其联合阳性染色细胞的形态学特征可初步鉴别两种细胞死亡方式.     

药物诱导细胞凋亡与胃癌治疗

1细胞凋亡与胃肿瘤治疗 细胞凋亡(apoptosis)是细胞发育代谢,维持正常功能过程中的一种生理现象,是细胞衰老、死亡的主要形式之一.它与病理情况下的细胞坏死不同,典型的细胞凋亡形态学改变是:细胞核固缩,染色质凝集,呈新月型紧贴于核膜周边,核碎裂,染色质片段化,凋亡小体形成.胃细胞学检查证明,正常的胃粘膜存在细胞凋亡,从腺体的底部到表面,都能看到少量的凋亡小体.细胞分裂的周期中决定细胞生长速度和凋亡的关键是G1期[1].近年来,发现胃癌中不仅存在细胞过度增生,同时存在细胞的凋亡异常[2],细胞凋亡异常在肿瘤发生发展过程中具有重要的病理生理意义[2,3].     

激素与细胞凋亡

激素与细胞凋亡刘军喜，刘士廉凋亡是生物体内普遍存在的一种不同于坏死的生理性细胞死亡，首先因其特殊幼形态学特点而被人们所认识￣［１］。细胞凋亡普遍存在于多种组织和器官，增殖与凋亡相互平衡，维持组织器官正常的生理功能及细胞数量的稳定￣［２］。胚胎发生、发...     

Caspase与胰岛β细胞凋亡的关系

半胱天冬蛋白酶（caspase）可通过Fas、肿瘤坏死因子、颗粒酶B、Bcl-2家族等通路激活,参与β细胞凋亡.不同的caspase在β细胞凋亡中所起的作用不尽相同.Caspase-8与caspase-3作为启动酶与效应酶分别在凋亡信号转导途径的上游与下游起重要作用,经过一系列酶联反应,最终引起β细胞发生凋亡的特征性形态学改变.     

培养细胞凋亡的超微结构标本制备

1972年英国学者Kerr首次详细描述了细胞正常时的超微结构改变[1],并将这种正常细胞的“生理性”死亡即“凋亡”命名为Apoptosis。细胞凋亡是细胞主动死亡的过程,其形态学特征与细胞坏死有着显著的差别。目前已知检测凋亡的方法多种多样,但形态学方法尤其是超微结构检查,是证明细胞凋亡的直接证据。我们采用地塞米松诱导Jurkat细胞凋亡的模型,通过透射电镜技术对细胞的凋亡进行形态学观察,该方法稳定、简便、便于常规制作。1　材料和方法1.1　材料　Jurkat细胞(由中科院上海细胞生物研究所提供);RPMI-1640(GIBCO)培养液,其中含10%灭活…     

癌基因与抑癌基因和细胞程序化死亡及肿瘤治疗的策略

近年来的研究表明,在肿瘤形成和演化的多步骤过程中,癌基因、抑癌基因与细胞凋亡(APO)或程序化细胞死亡(PCD)过程有相当重要的联系。本综述将阐明主要癌基因、抑癌基因参与肿瘤PCD的研究进展及当今肿瘤治疗的新思路。 1 程序化死亡和肿瘤生物学行为 早在1980年,Wyllie等就发现肿瘤细胞发生凋亡     

Cyt-C与caspase在细胞凋亡中的作用及相互关系

细胞凋亡,又称细胞程序性死亡,是指细胞在一定的生理或病理性条件下,遵循自身的程序,自己结束其生命的过程,是一种主动的、程序性的、细胞固有的生物学过程,其特征是一系列细胞形态学的改变,包括染色体浓缩、核碎裂、细胞皱缩、凋亡小体形成等[1,2].近年研究发现,脑缺血再灌注致神经细胞死亡主要由凋亡所致[3,4],细胞色素C(Cyt-C)和天冬氨酸特异性的半胱氨酸蛋白水解酶(caspase)家族在细胞凋亡的发生和发展中起着关键作用[5].近年来对两种酶与各种疾病以及两种酶与凋亡的研究逐渐增加,本文将就此作出综述,同时探讨二者在细胞凋亡中的关系.     

应用RNA干扰技术研究游离脂肪酸对人脐静脉内皮细胞凋亡的影响

目的 应用RNA干扰(RNAi)技术探讨游离脂肪酸(FFA)对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)凋亡的影响.方法 利用体外同源重组技术构建糖原合成酶激酶-3β(GSK-3β)特异的siRNA腺病毒表达载体,在人胚胎肾293A细胞中包装并扩增病毒,应用空斑实验法测定病毒滴度.选用GsK-3β特异的RNAi腺病毒感染HUVEC,采用Western blot方法检测其对GSK-3β和β-catenin 蛋白水平的影响.FFA贮存液按油酸盐:棕榈酸盐2:1配制,RNAi腺病毒和FFA共同干预HUVEC,采用流式细胞术、Hoechst 33258染色检测细胞凋亡.实验分为0.75 mmol/L FFA组、GSK-3β特异性RNAi腺病毒(Ad-640)+FFA组、未重组RNAi腺病毒(Ad-DEST)+FFA组、正常细胞组.采用方差分析进行数据比较.结果 构建的RNAi腺病毒感染HUVEC可以显著抑制GSK-3β蛋白的表达,上调细胞内β-catenin蛋白水平.0.75 mmol/L FFA具有促进细胞凋亡率的作用,荧光染色可见细胞出现典型的凋亡形态学改变;Ad-640+0.75 mmol/L FFA组与0.75 mmol/L FFA组(F=26.42,P<0.01)及Ad-DEST+0.75 mmol/L FFA组(F=23.34,P<0.01)相比细胞凋亡率显著减少,凋亡形态学改变亦明显减少,而Ad-DEST+FFA组与FFA组细胞凋亡率无显著差异(F=5.56,P>0.05),凋亡形态学改变相似.结论 构建的CSK-3β特异性RNAi腺病毒对FFA作用下的HUVEC具有部分保护作用.     

5-氟脲嘧啶诱导人胆囊癌细胞凋亡的研究

为研究 5 -氟脲嘧啶 (5 - FU)对胆囊癌细胞凋亡的影响 ,在体外培养的胆囊癌细胞中加入不同浓度的 5 -FU ,应用光镜、电镜、DNA凝胶电泳及流式细胞仪检测癌细胞凋亡的形态学特征、生化学特征、细胞凋亡百分率及细胞周期变化。在 5 - FU作用下 ,凋亡的胆囊癌细胞出现膜小泡、凋亡小体等特征性改变 ;DNA电泳呈现典型的“梯状”条带 ;流式细胞仪测定出现典型的凋亡峰 ;其凋亡百分率随着药物浓度的提高而明显升高 (与对照组比较 ,P<0 .0 5 )。认为 5 - FU可诱导胆囊癌细胞发生凋亡 ,其凋亡率随药物浓度的提高而升高