纳米磷酸三钙复合人工骨的Ames致突变试验

目的 从基因角度探讨纳米磷酸三钙／胶原复合人工骨的遗传毒理学特性。以了解此复合人工骨的生物相容性，为其在骨缺损修复领域的临床应用提供依据。方法 将纳米级磷酸三钙（β－TCP）同胶原复合，制成纳米β－TCP／胶原复合人工骨，并制备浸提液，采用Ames致突变试验，以生理盐水为阴性对照，测试其对鼠伤寒沙门菌的致突变比值（MR＝实验组回变菌落数Rt／阴性对照组回变菌落数Rc）。结果 阳性对照组各菌株回变菌落平均数均超过其相应阴性对照组回变菌落平均数的二倍以上（MRp＞2)，此复合人工骨的浸提液各剂量组对鼠伤寒沙门菌的致突变比值MR均小于2。结论 纳米磷酸三钙／胶原复合人工骨不会引起鼠伤寒沙门菌的回复突变数增加，提示此人工骨不会引起基因突变。     

纳米磷酸三钙复合人工骨的Ames致突变试验

目的:从基因角度探讨纳米磷酸三钙/胶原复合人工骨(Co/N-TCP)的遗传毒理学特性。借以了解其生物相容性,并为其在骨缺损修复领域的临床应用提供依据。方法:将纳米级磷酸三钙(β-TCP)同胶原复合,制成纳米β-TCP/胶原复合人工骨,并制备浸提液,采用Ames致突变试验,以生理盐水为阴性对照,测试其对鼠伤寒沙门菌的致突变比值(MR=实验组回变菌落数Rt/阴性对照组回变菌落数Rc)。结果:阳性对对照组各菌株回变菌落平均数均超过相应阴阴性对照组回变菌落平均数的2倍以上(MRp>2),此复合工人骨的浸提液各剂量组对鼠伤寒沙门菌的致突弯比值MR均小2。结论:(Co/N-TCP)不会引起鼠伤寒沙门菌的回复突变数增加,提示此人工骨不会引起基金突变。     

一种新型纳米羟基磷灰石材料应用于牙周组织工程的可行性研究

目的:对一种新型纳米羟基磷灰石材料 -纳米羟晶 -胶原仿生骨材料 (nHAC)进行细胞相容性和细胞毒性的研究,以初步探讨其应用于牙周组织工程的可行性。方法:将体外培养的人牙周膜细胞(PDLCs)接种于nHAC三维支架上复合培养,采用细胞计数和扫描电镜观察PDLCs在nHAC支架上的附着、生长情况,并通过MTT测试法和碱性磷酸酶(ALP)活性检测法研究nHAC浸提液对PDLCs增殖和功能表达的影响。结果:人PDLCs在nHAC支架上形成良好贴附并增殖,扫描电镜可见nHAC具有良好的多孔网状结构,细胞在nHAC上生长旺盛,伸展充分,而PDLCs在不同浓度的材料浸提液中的生长、增殖及ALP活性与空白对照组相比无显著性差异。结论:nHAC具有良好的三维空间结构和细胞相容性,且无细胞毒性,有望成为牙周组织工程的支架材料。     

纳米羟基磷灰石复合材料的研究--纳米羟基磷灰石的细胞毒性

目的 :研究纳米羟基磷灰石的细胞毒性。方法 :采用能快速、准确、敏感地评价细胞增殖率和细胞毒性的MTT比色法 ,以普通HA为对照组 ,纳米HA为实验组 ,选用不同浓度的材料浸提液 ,分别检测小鼠成纤维细胞L 92 9和原代培养的人牙周膜成纤维样细胞的相对增殖率 ,评价其细胞毒性。结果 :与普通HA相比 ,纳米HA表现出较高的细胞增殖率 ,随着浸提液浓度的降低和培养时间的增长 ,细胞毒性趋于 0级 ;纳米HA的微颗粒与细胞的直接接触并未见细胞毒性作用 ;与L 92 9相比 ,原代培养的牙周膜成纤维样细胞的细胞增殖率较低 ,其敏感性较高。结论 :纳米HA无细胞毒性。     

新型纳米羟基磷灰石根充糊剂的细胞毒性研究

目的　体外研究新型纳米羟基磷灰石(n-HA)根充糊剂的细胞毒性。方法　体外培养成骨细胞,采用碱性 磷酸酶(ALP)和Ⅰ型胶原免疫组化染色鉴定成骨细胞;采用MTT比色法,以F12培养基为对照,选用3种不同浓度 的新型n-HA根充糊剂浸提液,分别检测浸提液与成骨细胞接触1、3、5、7 d的细胞相对增殖率(RGR),以评价其细 胞毒性。结果　与对照组相比,新型n-HA根充糊剂表现出较高的细胞相对增殖率,随着浸提液浓度的降低和培养 时间的延长,细胞毒性趋于0级;相同时间点不同浓度的新型n-HA根充糊剂浸提液的吸光度值无显著性差异(P> 0·05)。结论　新型纳米羟基磷灰石根充材料无细胞毒性。     

纳米羟基磷灰石/胶原对富血小板血浆促进骨髓基质干细胞成骨向分化的影响

目的：探讨纳米羟基磷灰石/胶原（nHAC）作为支架材料对兔自体富血小板血浆（PRP）体外诱导兔骨髓基质干细胞（rBMSCs）向成骨细胞分化能力的影响。方法：兔自体PRP分别作用于与nHAC联合培养的rBMSCs及常规培养的rBMSCs,利用扫描电镜观察rBMSCs在nHAC上的生长情况;通过碱性磷酸酶（ALP）活性测定,骨钙素（OCN）含量测定,骨桥蛋白（opn）mRNA相对表达量的分析,比较两种培养条件下兔自体PRP诱导rBMSCs向成骨细胞分化能力上的差异。结果：联合培养的rBMSCs在nHAC上生长良好,其ALP活性、OCN含量均较常规培养明显增加,且opn mRNA相对表达量是常规培养组的4.78倍。结论：nHAC作为支架材料可明显提高兔自体PRP诱导rBMSCs向成骨细胞分化的能力。     

犬骨髓基质细胞复合nHAC/CSH裸鼠皮下成骨的实验研究

目的：评价纳米晶羟基磷灰石/胶原/硫酸钙(nHAC/CSH)—犬骨髓基质细胞(bone marrow stromal cells,BMSCs)复合物体内异位成骨能力。方法：犬骨髓基质细胞(dBMSCs)通过密度梯度离心法分离得到,与nHAC/CSH复合,构建可注射骨,扫描电镜观察细胞生长情况,并将构建的可注射组织工程骨植入裸鼠体内,4周后行HE染色观察异位骨形成情况。结果：扫描电镜观察细胞生长良好,体内研究表明,可注射组织工程骨植入裸鼠皮下4周后有类骨样结构形成。结论：nHAC/CSH复合BMSCs具有良好的成骨活性。     

骨形成蛋白与胶原基纳米骨修复牙周骨缺损的实验研究

目的 探讨重组人骨形成蛋白-2(rhBMP-2)和胶原基纳米骨复合材料(nHAC)修复牙周骨缺损的效果.方法 制备小型猪牙周骨缺损模型,设立rhBMP-2-nHAC复合材料植入组、空白对照组和单纯植入胶原基纳米骨组,术后8周观察各组间修复效果及组织病理学变化,通过骨组织形态计量学测定分析评价牙周骨组织的再生情况.结果 术后8周可见复合材料植入组大量新生牙周组织生长,四环素单标记表面、四环素双标记表面、骨矿化沉积率、骨体积、类骨质表面、成骨细胞表面等骨组织形态计量学结果 与空白对照组和单纯胶原基纳米骨组比较,差别均有统计学意义(P ＜ 0.05).结论 rhBMP-2和nHAC可明显促进牙周骨缺损修复.     

成骨细胞和牙周膜成纤维细胞交互作用的初探

目的　了解牙周组织再生中两种重要的细胞(成骨细胞和牙周膜成纤维细胞)之间的相互调控作用,以探讨牙周膜形成和维持的相关因素及其对牙种植体周围结构的影响机制。方法　采用原代培养法获取同一SD大鼠的成骨细胞和牙周膜成纤维细胞,将两种细胞分别接种于培养板上,再置于细胞培养池中以建立体外共同培养模型,分别测试两种细胞的碱性磷酸酶(ALP)及Ⅰ型胶原表达。结果　两种细胞在共同培养后,其ALP活性都发生显著变化,牙周膜成纤维细胞ALP表达明显提高,而成骨细胞ALP则降低;Ⅰ型胶原未发生显著变化。结论　当两种细胞在体外共同培养时,牙周膜成纤维细胞能抑制成骨细胞的成骨作用,而成骨细胞则能诱导牙周膜成纤维细胞向成骨样细胞分化。     

纳米羟基磷灰石材料复合碱性成纤维细胞因子促进牙周组织再生的实验研究

目的:探讨新型纳米羟基磷灰石材料—纳米羟晶/胶原仿生骨材料(nHAC)作为生长因子载体和牙周组织工程支架材料应用的可行性,观察评价其对牙周组织再生修复的影响和意义。方法:将人牙周膜细胞(HPDLCs)接种于nHAC三维支架上复合培养,体外扫描电镜观察HPDLCs在nHAC支架上的附着、生长情况,并将碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)与nHAC复合植入动物人工牙周组织缺损,表面覆盖聚四氟乙烯(e-PTFE)膜,以空白对照组和单纯置膜组作为对照。术后8周进行组织学观察和测量,分析评价其牙周组织的再生情况。结果:扫描电镜可见nHAC具有良好的多孔网状结构,PDLCs在nHAC支架上贴附紧密,生长旺盛,伸展充分,动物实验结果显示nHAC/bFGF/膜复合植入组较空白对照组和单纯置膜组有更多新生的牙槽骨、牙周膜和牙骨质生成,结果具有显著性差异。结论:nHAC具有良好的三维空间结构和细胞相容性,与bFGF复合植入牙周缺损后可显著促进牙周组织再生,提示nHAC有望成为理想的生长因子载体和牙周组织工程支架材料。     

Compression-dependent up-regulation of ephrin-A2 in PDL fibroblasts attenuates osteogenesis

Members of the ephrin/Eph family have recently been shown to be involved in the regulation of bone homeostasis in a murine model. The activation of the EphB4 receptor on osteoblasts by its ligand ephrin-B2 led to stimulation of osteoblastogenesis and therefore to bone formation. The activation of ephrin-A2-EphA2 signaling on osteoblasts inhibited the activation of osteoblast-specific gene expression, leading to bone resorption. Fibroblasts within the periodontal ligament periodontal ligament may be one of the first responders to orthodontic forces. Periodontal ligament fibroblasts (PDLF) are mechanoresponsive. Members of the ephrin/Eph family might link mechanical forces received by PDLF with the regulation of osteoblastogenesis on osteoblasts of the alveolar bone. To study whether ephrin-A2 is modulated upon compression, we subjected human primary PDLF to static compressive forces (30.3 g/cm(2)). Static compressive forces significantly induced the expression of ephrin-A2, while the expression of ephrin-B2 was significantly down-regulated. Moreover, osteoblasts of the alveolar bone stimulated with ephrin-A2 in vitro significantly suppressed their osteoblastogenic gene expression (RUNX2, ALPL) and decreased signs of osteoblastic differentiation, as demonstrated by a significantly reduced ALP activity. Together, these findings establish a role for this ligand/receptor system linking mechanical forces with the regulation of osteogenesis during orthodontic tooth movement.     

CFDA SE标记观察人成骨细胞与骨支架材料附着情况的实验研究

目的通过荧光活性染料CFDA SE标记观察人成骨细胞与nano-hydroxyapatite/collagen/Poly L-lactic acid(nHAC/PLA)骨支架材料黏附生长情况。方法用CFDASE标记人成骨细胞,接种于nHAC/PLA骨支架材料上,测定细胞的黏附率。于接种后第1、3、7天检测荧光光度,并用激光共聚焦显微镜观察细胞在支架材料上的生长状况。结果CFDASE标记的人成骨细胞的黏附率为(97.99±1.43)%,未标记的人成骨细胞黏附率为(98.57±1.17)%,两者无统计学差异(P>0.05);随时间增长,nHAC/PLA骨支架材料内的细胞数量增多,沿孔壁生长良好,但总荧光光度值未发生明显变化。结论荧光活性染料CFDASE标记不影响人成骨细胞在nHAC/PLA骨支架材料上的黏附,可作为观察人成骨细胞在nHAC/PLA骨支架材料生长情况的实验手段。     

成骨细胞与血管内皮细胞联合培养对成骨细胞功能的影响

目的　探讨不同比例兔成骨细胞(ROB)与血管内皮细胞(RVEC)直接联合共培养后,对成骨细胞功能的影 响。方法　取兔成骨细胞与血管内皮细胞,将两者分为4组分别以1∶0、1∶1、2∶1、4∶1直接联合共培养于培养皿中, 通过对细胞内碱性磷酸酶活性(ALP)测定和培养液中骨钙素(OC)定量测定,观察血管内皮细胞对成骨细胞功能的 影响。结果　成骨细胞与血管内皮细胞直接联合共培养相容性良好,2∶1的细胞比例组ALP活性及OC含量较其 他各组明显增高。结论　在体外直接联合共培养的体系中,血管内皮细胞有明显促进成骨细胞活性的作用。     

纳米羟基磷灰石复合胶原/聚乳酸材料复合兔骨髓基质细胞异位成骨的实验研究

目的：观察nHAC/PLA复合兔BMSCs的异位成骨能力.方法：通过负压吸附使BMSCs与nHAC/PLA材料复合,将nHAC/PLA＋自体BMSCs、自体BMSCs、nHAC/PLA材料分别植入新西兰兔背部肌袋内,术后4、8周通过大体、组织学观察来研究其异位成骨能力.结果：自体BMSCs组与nHAC/PLA材料组在新西兰兔背部肌袋内均无骨质形成,nHAC/PLA＋自体BMSCs组8周时有大量较成熟的骨质形成,同时材料本身部分吸收.结论：通过负压吸附的方法制备出的nHAC/PLA＋自体BMSCs具有良好的异位成骨能力.     

纳米羟基磷灰石复合胶原/聚乳酸材料与骨髓基质细胞体外复合的实验研究

目的了解兔BMSCs与nHAC/PLA材料在体外共培养时细胞与材料复合的情况,进一步验证nHAC/PLA材料作为骨组织工程支架材料的可行性。方法将兔BMSCs与nHAC/PLA材料在体外复合共培养,通过倒置显微镜、扫描电镜观察细胞与材料的复合情况,用MTT法及碱性磷酸酶活性检测法检测材料对细胞增殖、分化的影响。结果BMSCs可以在nHAC/PLA材料表面及孔洞中良好地粘附、迁移、增殖和分化,复合培养5天后nHAC/PLA材料对BMSCs的增殖及分化表现出一定的促进作用。结论nHAC/PLA材料可以作为BMSCs良好的载体。     

载药纳米羟基磷灰石复合胶原材料预防感染及修复骨缺损的实验研究

目的:探讨载药纳米羟基磷灰石复合胶原材料(nHAC)预防感染及修复骨缺损的可行性。方法:将nHAC与克林霉素复合,制成载药nHAC人工骨,将其置于接种有金葡菌的培养基中检测其体外缓释特性及抗菌活性;将其植入金葡菌污染的兔颅骨缺损区,通过细菌培养和组织病理检查评价其骨缺损修复能力及抗感染能力。结果:载药nHAC人工骨在体外持续释放高浓度抗生素;植入金葡菌污染的骨缺损后可有效预防骨感染,骨感染的发生率明显低于单纯nHAC人工骨植入组。结论:载药nHAC人工骨是伴有污染或感染骨缺损较理想的修复材料。