STCH减弱Aβ_(25-35)对SH-SY5Y培养细胞神经毒性作用的初步研究

目的:研究应激和分子伴侣蛋白(stress and chaperon,STCH)拮抗β淀粉样蛋白(beta-amyloid25-35,Aβ25-35)在体外对人神经母细胞瘤细胞系SH-SY5Y毒性的机制。方法:用Aβ25-35(20μmol/L)在不同时间点分别处理SH-SY5Y培养细胞,然后采用逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)和蛋白印记(Western Blot)法检测内质网应激相关分子的表达和c-Jun amino-terminal kinase(JNK)的磷酸化,并采用负载钙荧光探针(acetoxymethyl ester ofFura-2,Fura-2AM)钙成像技术检测过表达STCH对100nmol/L星孢霉素(staurosporin)引起的钙超载的情况。结果:Aβ25-35处理SH-SY5Y细胞后引起STCHmRNA表达上调,在3h开始升高,12h达到高峰,然后下降;而葡萄糖调节蛋白94(glucose-regulated protein94,Grp94)则于处理后6h表达上调,9h达到高峰,然后快速下降。Aβ25-35处理SH-SY5Y细胞能够激活JNK通路,致其磷酸化增加,过表达STCH,能够抑制JNK的磷酸化。过表达的STCH能够显著拮抗stauroposrine引起的游离钙增加。结论:STCH可能通过拮抗游离钙增加,抑制JNK通路而发挥保护神经元的作用,这将为我们寻找神经保护的策略提供有益的线索。     

龟板抗Parkinson病大鼠多巴胺能神经元凋亡的作用

为探讨补肾中药龟板抗Parkinson病大鼠模型黑质神经元凋亡的作用,本研究用6-羟基多巴胺(6-OHDA,0.2%)于大鼠左侧黑质致密带注射2μl造成Parkinson病(PD)模型,同时设立龟板组(灌胃补肾中药龟板2g/次,2次/d,连续12周)、模型组和正常对照组,观察其行为改变,再用HE、TH染色或DIG-dUTP染色观察黑质神经元的变化,免疫组化染色检测Bcl-2和Bax蛋白的表达。结果显示:龟板组PD大鼠的旋转行为改善明显,黑质致密部的TH染色阳性神经元增多,DIG-dUTP染色阳性率降低,Bcl-2蛋白表达增加和Bax蛋白表达减少。本文结果提示,长期龟板治疗对PD模型大鼠多巴胺能神经元凋亡具有明显的保护作用,且该作用可能与龟板升高Bcl-2和降低Bax的表达有关。     

胞二磷胆碱对原代培养的中脑多巴胺能神经元的保护作用及其机制

为了研究胞二磷胆碱(citicoline,CC)对6-羟多巴胺(6-OHDA)诱导的Parkinson病体外细胞模型中的多巴胺能神经元的保护作用及其机制,本研究采用MTT法检测细胞活力;应用Fluo3/AM荧光染料,并通过流式细胞仪检测细胞内钙离子[Ca2+]i浓度;罗丹明123检测线粒体膜电位(ΔΨm);罗丹明123和PI荧光双染,在荧光显微镜下观察细胞膜通透性和细胞凋亡;乳酸脱氢酶(LDH)试剂盒检测培养上清中LDH的漏出;TH免疫组化染色鉴定多巴胺能神经元。实验分成三组:(1)对照组:即原代培养细胞;(2)6-OHDA损伤组:即原代培养细胞加6-OHDA;(3)CC保护组:原代培养细胞中分别加2、1、0.1、0.01和0.001mmol/LCC后,再加6-OHDA。结果显示:与6-OHDA组相比,1、0.1、0.01和0.001mmol/LCC组细胞活力增加(P<0.01);[Ca2+]i浓度下降和ΔΨm升高(P<0.01);除了0.001mmol/LCC组外,各CC组LDH漏出率明显低于6-OHDA组(P<0.01)。以上结果提示:在体外Parkinson病细胞模型中,CC可能通过保护神经元细胞膜,提高线粒体膜电位,增加细胞活力,降低[Ca2+]i浓度,减少LDH漏出等途径削弱6-OHDA的神经毒性作用,发挥其对神经元的保护作用。     

雌激素对去卵巢Parkinson病模型大鼠黑质-纹状体系统多巴胺能神经元的影响

本研究的目的是观察雌激素对多巴胺(DA)能神经元是否具有保护作用。去卵巢(OVX)大鼠分别给予生理盐水(NS)和苯甲酸雌二醇(EB)处理,1周后6OHDA造模,造模2周后灌注取材;利用免疫组化法观察黑质内DA阳性神经元的数量、纹状体中DA能末梢的变化;用TUNEL法观察黑质凋亡细胞的数目并对纹状体中胆碱能神经元进行乙酰胆碱酯酶(AChE)染色,观察其退变情况。结果显示和NS组相比,EB组黑质内DA能神经元数量多、凋亡细胞数少(P<0.05);NS组纹状体内DA能神经元末梢减少60%左右,胆碱能神经元退变明显。结果提示雌激素对DA能神经元具有保护作用,在很大程度上可能与抑制神经元凋亡有关。     

Genistein对体外培养的大鼠多巴胺能神经元的保护作用

为了探讨genistein(GST)对离体培养的Parkinson模型多巴胺能神经元的保护作用,本实验取孕14～16 d的SD大鼠胚胎中脑腹侧,常规体外培养。将培养细胞分为四组:正常对照组、E2+MPP+组、GST+MPP+组、MPP+组。用免疫细胞化学染色法观察培养物中TH阳性神经元的生长状况、观察神经元中微管相关蛋白-2(MAP-2)的染色情况。通过突触素(SYN)免疫荧光染色,观察各实验组突触数量的变化。结果显示:与正常对照组、E2+MPP+组以及GST+MPP+组相比,MPP+组TH阳性神经元数量少,SYN免疫阳性产物表达亦减少(P<0.05);MAP-2阳性染色的平均灰度减少约40%左右。而E2+MPP+组、GST+MPP+组中上述指标与正常对照组相比,差异无统计学意义(P>0.05)。本研究结果表明genistein对体外培养的多巴胺能神经元具有类似雌激素样的神经保护作用。     

尼古丁对Parkinson小鼠黑质多巴胺能神经元及小胶质细胞的影响

为探讨尼古丁对多巴胺能神经元的保护作用,本研究采用尼古丁(0.25mg/kg)预处理C57BL/6J小鼠,再给予1-甲基-2-乙基-1,2,3,6-四氢吡啶(MPTP;20mg/kg)诱导Parkinson病(PD)小鼠模型。通过行为学检测和中脑黑质致密部(SNc)的酪氨酸羟化酶(TH)以及OX-42的免疫组织化学染色,观察了尼古丁对PD小鼠的行为以及黑质多巴胺能神经元和小胶质细胞的影响。结果显示:经尼古丁预处理可以明显减轻PD小鼠的行为障碍,增加TH免疫阳性的多巴胺能神经元的数量,并且可以抑制SNc内小胶质细胞的增生。本研究结果提示,尼古丁可保护多巴胺能神经元,而抑制小胶质细胞的增生可能是其作用机制。     

Nurrl基因对多巴胺神经元的调控及其与多巴胺系统疾病的关系

Nurrl基因位于2q22-q23，全长9.822kb，由8个外显子和7个内含子组成，为一种机体早期应激反应基因。该基因编码产物为598个氨基酸组成的核蛋白受体，是类固醇激素和甲状腺激素核受体大家族中的一种寡核受体。近年来研究表明该基因对诱导中枢神经系统多巴胺神经元的发生、发育、分化及其成熟后功能维持起重要作用，而Parkinson病及精神分裂症与中枢多巴胺神经系统功能失调密切相关。故揭示该基因与中枢多巴胺神经元调控关系，对揭示Parkinson病及精神分裂症等多巴胺失调疾病的发病机制和治疗具有重要作用。     

GDNF激活星形胶质细胞保护PD模型大鼠黑质多巴胺能神经元

探索在胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)保护受损多巴胺(DA)能神经元过程中,星形胶质细胞的可能作用。成年大鼠右侧纹状体内注射6-羟多巴胺(6-OHDA)制备Parkinson病(PD)模型。动物模型右侧黑质内注射GDNF,于注射后第7、14和21d进行动物行为学分析,行黑质节段连续冠状石蜡切片,以抗酪氨酸羟化酶(TH)、胶质原纤维酸性蛋白(GFAP)抗体免疫组化染色,分别显示DA能神经元和激活的星形胶质细胞,光镜观察并进行细胞计数。用免疫印迹法分析注射后第21d黑质内TH、GFAP蛋白表达量,蛋白条带用图像处理仪扫描,LabWorks软件分析处理。结果显示:动物在注射GDNF后第21d,行为学功能出现显著性恢复;TH阳性神经元数量显著增加;在检测的各时间点均可观察到大量的GFAP阳性细胞;TH、GFAP的蛋白表达量显著高于对照组。以上结果提示,黑质内注射GDNF可能通过激活了的星形胶质细胞保护PD模型大鼠黑质DA能神经元。     

Nurr1基因对多巴胺神经元的调控及其与多巴胺系统疾病的关系

Nurrl基因位于2q22-q23，全长9.822kb,由8个外显子和7个内含子组成，为一种机体早期应激反应基因。该基因编码产物为598个氨基酸组成的核蛋白受体，是类固醇激素和甲状腺激素核受体大家族中的一种寡核受体。近年来研究表明该基因对诱导中枢神经系统多巴胺神经元的发生，发育，分化及其成熟后功能维持起重要作用，而Parkinson病及精神分裂症与中枢多巴胺神经系统功能失调密切相关。故揭示该基因与呆区多巴胺神经元调控关系，对揭示Parkinson病及精神分裂症等多巴胺失调疾病的发病机制和治疗具有重要作用。     

美满霉素对帕金森病大鼠黑质多巴胺能神经元损伤的保护作用

目的观察美满霉素(MC)对脂多糖(LPS)所致帕金森病(PD)大鼠黑质多巴胺能(DA)神经元损伤的保护作用。方法黑质内注射LPS制作PD大鼠模型。应用MC对实验动物进行处理。采用行为学、酪氨酸羟化酶(TH)、核因子-κB(NF-κB)等免疫组化及免疫印迹技术观察MC的神经保护作用。结果对照组大鼠无行为变化,PD组大鼠平均旋转圈数为196.90±9.52,MC组为120.03±10.50,差异非常显著(p<0.01)。免疫组化表明对照组TH阳性神经元数量较多,PD组神经元数量明显减少或消失(p<0.01),MC组TH阳性神经元数与PD组相比明显增加(p<0.01);对照组黑质仅见少数NF-κB阳性细胞,无明显核转位现象,PD组黑质NF-κB阳性细胞较多,部分细胞有明显核转位现象,与PD组相比,MC组NF-κB阳性细胞数明显减少(p<0.01);对照组黑质OX-42小胶质细胞呈分枝状,胞体较小突触细长,PD组黑质小胶质细胞大部分呈圆形,突起少而短甚至消失,与PD组相比,MC组呈激活状态的小胶质细胞数量明显减少。Western blotting分析结果相同。结论 MC可防护LPS所致黑质DA能神经元损伤,具有神经保护作用。     

鱼藤酮对多巴胺能神经元的损伤作用及机制

鱼藤酮等环境毒物的长期接触可能与帕金森病发病有关。鱼藤酮(Rotenone)是线粒体复合酶Ⅰ抑制剂，可以抑制多巴胺能神经元线粒体复合酶Ⅰ的活性、降低线粒体膜电位、诱导细胞内活性氧的产生，从而导致多巴胺能神经元α-突触核蛋白(α-synuclein)表达增加、路易小体(Lewy bodies)形成，DJ-1和Parkin的突变以及细胞微管破坏。     

中脑黑质多巴胺神经元对适当剂量鱼藤酮毒性损伤的特殊敏感性

目的:探索中脑黑质多巴胺神经元对适当剂量鱼藤酮毒性损伤是否具有特殊敏感性。方法:采用颈背部皮下注射鱼藤酮的方法建立大鼠中脑黑质多巴胺神经元损伤模型,进行中脑黑质和纹状体酪氨酸羟化酶(TH)免疫组织化学染色加尼氏染色;同时通过HE染色及尼氏染色方法分别观察心、肝、脾、肾等重要胸腹腔脏器及海马、顶叶皮质的形态学变化。结果:中脑黑质TH免疫染色和尼氏染色结果显示组间中脑黑质致密区以外部位尼氏小体数目无差异;大脑顶叶皮质和海马尼氏染色及胸腹腔重要脏器HE染色结果表明各组大鼠均未出现相应部位损伤。结论:低剂量颈部皮下注射鱼藤酮能选择性诱导中脑黑质多巴胺神经元损伤,说明中脑黑质多巴胺神经元对鱼藤酮具有高度敏感性。     

An ultrastructural study of neurons and non-neuronal cells in the myenteric plexus of the rabbit colon

The myenteric plexus of the rabbit colon showed a degree of structural organization that was unusually high for the peripheral nervous system, providing a basis for the complex integrative activity which is known to occur. It resembled central nervous tissue in several respects: a wide range of neuron types was present; the proportion of glial cells to neurons was about 2:1; and there was a densely packed, avascular neuropil, not penetrated by connective tissue. Most neurons had at least one surface exposed to the extraganglionic space. Clear evidence was obtained for spontaneous neuronal degeneration. Three types of non-neuronal (glial) cells were observed: Type 1, which was most common, contained many 10 nm ‘gliofilaments’ and resembled enteric glial cells or astrocytes in the central nervous system; Type 2, composing about 5% of the glial cells, had few filaments; Type 3 was seen only rarely, had a small dark nucleus, little cytoplasm, may have been of extraganglionic origin and resembled microglia of the central nervous system. Fibroblast-like cells were also present in extraganglionic sites. Schwann cells could not be identified within the myenteric ganglia.     

内质网分子伴侣GRP78在大鼠脊髓缺血再灌注损伤中的表达变化

目的观察在大鼠脊髓缺血再灌注损伤(SCII)过程中内质网分子伴侣GRP78的表达变化,并探讨其意义。方法健康成年Wistar大鼠55只,随机分为两组:(1)脊髓压迫缺血再灌注组50只,每个时间点10只,采用自制压迫装置制备脊髓压迫缺血再灌注模型;(2)假手术对照组5只,只做全椎板切除不做脊髓压迫。用免疫组化、West-ernblot和TUNEL等方法,分别于缺血再灌注后30min、3、7、11和23h,检测压迫段脊髓组织中GRP78的表达变化及细胞凋亡情况。结果再灌注30min后,GRP78在压迫段脊髓开始表达上调,7h达峰值,11h表达回落,23h显著减少。TUNEL染色显示,神经细胞的凋亡指数随着再灌注时间的延长而升高。结论GRP78在脊髓缺血再灌注损伤中呈现时序性的表达变化,这可能是脊髓内源性保护机制之一。     

帕金森病模型大鼠中脑腹侧被盖区多巴胺能神经元改变的实验研究

目的：探讨帕金森病（Parkinson’s disease，PD）大鼠模型中脑腹侧被盖区（ventral tegmentalarea，VTA）多巴胺能神经元的改变。方法：应用6-羟基多巴胺（6-hydroxydopamine，6-OHDA）注射右侧黑质致密区（substantia nigra compacta，SNc）制作PD大鼠模型，进行阿朴吗啡（apomorphine，APO）诱发行为学观察、电镜、尼氏染色观察中脑VTA神经元的改变、酪氨酸羟化酶（tyrosine hydroxylase，TH）免疫组织化学ABC观察其DA能神经元的改变并进行图像分析。结果：APO诱发PD大鼠模型异常旋转行为，尼氏染色见PD大鼠中脑VTA有神经细胞肿胀、坏死等变化，VTA TH阳性神经元数量减少，形态学改变。结论：中脑VTA DA能神经参与PD模型大鼠的改变；APO能诱导6-OHDAPD模型大鼠的旋转行为，其强弱可能与TH^＋神经元数量直接相关。     

在小鼠帕金森病模型中观察丙戊酸钠对多巴胺神经元及GDNF表达的影响

目的:通过建立小鼠帕金森病模型,观察丙戊酸钠(valproate,VPA)对中脑黑质多巴胺神经元及胶质源性神经营养因子(glial-derived neurotrophic factor,GDNF)表达的影响,以期探索丙戊酸钠的神经保护作用机制.方法:采用免疫组织化学方法检测小鼠中脑黑质多巴胺神经元;原位杂交方法检测纹...     

Effects of IL-6 secreted from astrocytes on the survival of dopaminergic neurons in lipopolysaccharide-induced inflammation

The role of astrocytes in microglia-induced neuronal death remains controversial. In this study, astrocytes and astrocyte-derived conditioned media (ACM) supported the survival of dopaminergic neurons, and the former was more effective than the latter. In the presence of astrocytes, low concentrations of LPS enhanced the survival of dopaminergic neurons, while high concentrations attenuated survival. LPS dramatically induced astrocytes to secrete IL-6 in a dose-dependent manner with no effect on secretion of GDNF. Neuron–astrocyte cultures had highest secretion of GDNF, followed by ACM-treated neuron-enriched cultures. After neuron–astrocyte cultures treated with IL-6-neutralizing antibody, both effects of the enhanced and attenuated survival of dopaminergic neurons were abolished. Our results indicate that astrocytes play a protective role in the LPS-induced damage of dopaminergic neurons in certain circumstances, and the interaction between astrocytes and dopaminergic neurons may enhance the protective effect of astrocytes. Suitable activation of astrocytes increases the protective effect while excessive activation attenuates it, and IL-6 might medicate this dual action. The underlying mechanisms related to the secretion of GDNF and proinflammatory factors warrant further investigation.     

Enhanced apoptotic and reduced protective response in chondrocytes following endoplasmic reticulum stress in osteoarthritic cartilage

Endoplasmic reticulum (ER) stress has been shown to participate in many disease pathologies. Although recent reports have demonstrated that ER stress in chondrocytes is present in human osteoarthritis (OA), its role in the pathology of cartilage degeneration, such as chondrocyte apoptosis, remains unclear. In the present study, we investigated the expression of phosphorylated PERK (pPERK), ubiquitin (Ub), GRP78, CHOP, phosphorylated JNK (pJNK) and cleaved caspase-3 (C-CASP3) and the mRNA splicing of XBP1 (XBP1 splicing) in human OA cartilage by immunohistochemistry and RT-PCR. Additionally, human chondrocytes were treated with several concentrations of tunicamycin, an ER stress inducer, to assess the impact of ER stress on the mRNA expression of CHOP, XBP1 splicing and apoptosis, as determined by real-time PCR, RT-PCR and ELISA analyses respectively. In human OA cartilage, the number of chondrocytes expressing pPERK, Ub, CHOP and pJNK positively correlated with cartilage degeneration and the number of C-CASP3-positive chondrocytes. XBP1 splicing and GRP78 expression in severe OA containing the greatest number of C-CASP3-positive chondrocytes were similar to the levels in mild OA, however, XBP1 splicing was higher in moderate OA than in mild and severe OA. Tunicamycin dose dependently increased CHOP expression and apoptosis of cultured chondrocytes. Although tunicamycin upregulated XBP1 splicing in cultured chondrocytes, its impact on XBP1 splicing was weakened at higher concentrations. In conclusion, the present results indicate that ER stress may contribute to chondrocyte apoptosis along with OA progression, which was closely associated with an enhanced apoptotic response and a reduced protective response by the cells.     

尼莫地平对帕金森病模型小鼠黑质多巴胺神经元的保护作用

目的:研究尼莫地平在1-甲基-4-苯基-1,2,3,6四氢吡啶(MPTP)所致帕金森病(PD)模型小鼠中对黑质多巴胺能神经元的保护作用。方法:雄性健康C57BL/6N小鼠随机分为对照组,腹腔注射生理盐水;模型组,腹腔注射MPTP(25 mg/kg);尼莫地平治疗组,每次注射MPTP前3 h灌胃给予尼莫地平(15 mg/kg)。观察各组小鼠行为学变化,免疫组织化学和免疫蛋白印迹法观察中脑黑质酪氨酸羟化酶(TH)、前列腺素E2(PGE2)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)的表达变化。结果:与对照组小鼠比较,MPTP模型组小鼠出现典型的PD症状,中脑黑质TH阳性神经元大量丢失,PGE2和TNF-α阳性细胞显著增多,蛋白水平明显升高;经尼莫地平治疗后,上述症状得到明显改善。结论:在MPTP所致PD小鼠模型中,尼莫地平通过抑制炎症因子PGE2和TNF-α的表达从而对多巴胺能神经元具有一定的保护作用。     

牛膝多肽对体外培养的MPP~+诱导的大鼠多巴胺能神经元凋亡的保护作用

目的:观察牛膝多肽(achyranthes bidentatapolypeptides,ABPP)对MPP~+(1-甲基-4-苯基-吡啶离子)损伤多巴胺能神经元的保护作用。方法:原代培养大鼠胚胎中脑多巴胺能神经元,与浓度50 ng/ml的ABPP或50ng/ml神经生长因子(NGF)共同孵育6 h,加入20μmol/L MPP~+损伤多巴胺能神经元12 h。使用四甲基偶氮唑盐(methyl thiaaolyl terazolium salt color imetry,MTT)比色法测定细胞活力;采用末端标记技术(Td T-mediated d UTP Nick-End Labeling,TUNEL)检测细胞凋亡;流式细胞仪检测细胞凋亡;Western Blot检测细胞凋亡相关蛋白Bcl-2和Bax的表达水平。结果:ABPP或NGF预处理6 h可增强多巴胺能神经元的细胞活力,抑制MPP~+损伤后多巴胺能神经元的凋亡,上调Bcl-2/Bax蛋白的表达水平。ABPP对大鼠多巴胺能神经元的保护作用优于NGF。结论:与NGF相比,ABPP发挥了更好的拮抗MPP~+对多巴胺能神经元损伤的作用,其机制可能与上调Bcl-2/Bax蛋白的表达水平相关。