大肠埃希菌O157出血性肠炎

肠出血大肠埃希菌 (Ｅ .Ｃｏｌｉ)主要包括Ｏ157:Ｈ7和Ｏ2 6 :Ｈ11,其中Ｏ157:Ｈ7是出血性肠炎的主要致病菌 ,由Ｒｉｌｅｙ等人于 1982年在美国一次出血性肠炎爆发流行时最先分离出。现对大肠埃希菌Ｏ157出血性肠炎作简要综述。　　大肠埃希菌Ｏ157出血性肠炎的病原学Ｅ .ＣｏｌｉＯ157革兰染色阴性 ,直杆状 ,约 1.0 μｍ×2 .0 μｍ大小。典型的Ｅ .ＣｏｌｉＯ157不发酵山梨醇 ,缺乏 β 葡萄糖醛酸酶 (ＧＵＤ)的活性。在 ｐＨ 2 .5～ 3.0、温度 37℃时能耐受 5ｈ而不失去活性 ,在低温下存活时间较长 ,不耐热 ,在 75℃时 1ｍｉｎ即失去活性[…     

O157大肠埃希菌食品分离株的特征研究

目的掌握福建省E.coliO157∶H7和O157∶H?食品分离株的毒力基因携带状况、PFGE分型特征、抗生素的药敏谱以及产志贺毒素的E.coliO157∶H7菌株的细胞毒性状况。方法分离菌株经VITEK全自动生化系统鉴定;O157和H7单克隆诊断血清凝集;PCR法检测O157、H7抗原基因及毒力因子基因;菌株的分型用PFGE方法进行;采用CLSI推荐的K-B法对菌株进行15种抗生素的药敏试验;对产志贺毒素的分离株用Vero细胞和Cyto Tox 96R○试剂盒进行细胞毒性检测。结果2株E.coliO157∶H7,其O157、H7及Stx2、Hly、eaeA毒力基因均阳性,Stx1基因均阴性;另3株E.coliO157∶H?,其O157基因阳性,H7和Stx1、Stx2、Hly、eaeA毒力基因均阴性;5株菌的PFGE带型各不相同,2株E.coliO157∶H7的同源性较高,达81%;菌株对15种常用抗生素较为敏感,链霉素、甲氧苄啶敏感率稍低为40%,其余敏感率达60%～100%。2株产志贺毒素的菌株对Vero细胞有毒性作用,细菌细胞比位50:1时细胞毒性百分比分别为61.25%和67.80%。结论本省在外环境动物性食品中存在产志贺毒素的E.coliO157∶H7菌株,提示应加强E.coliO157∶H7的监测,预防该菌在本省人间的感染和流行。     

非O157产志贺毒素大肠埃希菌研究进展

产志贺毒素大肠埃希菌(Shiga toxin-producing Escherichia coli,STEC)是一类能产生一种或一种以上志贺毒素的大肠埃希菌的总称,包括400余种血清型,其中以O157∶H7血清型为主。近年来,非O157STEC在世界范围内引起散发感染和暴发的报道明显增加,但由于非O157STEC血清型多样,菌株间表型差异较大,目前尚无一种有效的能用于所有非O157STEC菌株分离的方法,因此非O157STEC的流行情况可能被低估。本文就非O157STEC的病原学、致病机制、流行病学特征、实验室诊断、治疗和预防等方面的研究进展做一简要综述。     

大肠埃希菌O157：H7

1982年，在Michigan和Oregon因进食污染的汉堡包发生的47名血性腹泻患者粪便中第一次分离出E．coliO157:H7，回顾性研究发现它与1975年一名自限性的急性血性腹泻患者粪便培养的大肠埃希菌为一类，并且1973～1982年间发生的3千多份出血性肠炎E．coli培养中均见O157：H7血清型[1]．它可产生一种与志贺氏毒素（Shigatokin，ST）极相似的毒素，故称之为类志贺氏毒素。又因它对培养的Vero细胞具毒性作用，故又称之为"Vero毒素"。该菌因引起出血性腹泻而得名肠出血性大肠埃希氏苗（enterohemorrhagicE．coli，EHEC）。近年来，更多的研究…     

基因芯片检测肠出血性大肠埃希菌O157∶H7

目的设计和制备快速、特异、灵敏的检测大肠埃希菌O157∶H7基因芯片。方法选择O157∶H7特异的rfbE、fliC、SLT1和SLT2基因,设计引物和探针,并制备检测芯片,通过两次聚合酶链反应(PCR)扩增,制备荧光标记的靶序列,并与芯片进行杂交,检测O157∶H7菌株和非O157病原体。结果O157∶H7菌株在采用单一和多重PCR两种方法制备的荧光标记靶序列与芯片杂交,均在芯片相应探针处出现阳性信号,非O157杂交结果均为阴性;芯片检测灵敏度比PCR检测高。结论基因芯片可以快速、灵敏、特异地检测O157∶H7,为建立快速灵敏的检测细菌病原体和鉴别诊断的自动分析系统提供了新方法。     

应用多重PCR方法检测大肠埃希菌O157：H8的初步研究

目的 研究一种快速、特异的检测大肠埃希菌（以下称大肠杆菌）O157：H7的复合PCR方法。方法 选用针对大肠杆菌O157：H7志贺样毒素Ⅰ、Ⅱ（SLT-Ⅰ、SLT-Ⅱ）和溶血素（Hly)基因的三对引物,在同一扩增体系中进行PCR,检测12株不同来源的O157：H7大肠杆菌及其它致病性大肠杆菌及沙门菌、志贺菌15株。结果 除质粒缺失株（933）外,其余11株O157：H7大肠杆菌均在361bp处有溶血素基因产物出现;而12株O157：H8大肠杆菌扩增后的两条志贺样毒素基因产物存在差异,其中6株在210bp、484bp处出现两条相应产物,3株仅有210bp一条SLT－Ⅰ基因产物,另3株仅有484bp的SLT－Ⅱ基因产物。其它致病性大肠杆菌及沙门菌、志贺菌的扩增结果均为阴性。结论 本复合PCR方法具有较高的特异性,可迅速、有效地将O157：H7大肠杆菌与其它常见致病性大肠杆菌及沙门菌、志贺菌相鉴别,通过进一步研究有望应用于临床大肠杆菌O157：H7感染的辅助诊断。     

肠出血性大肠埃希菌(O157:H7)的基因同源性的分析

目的 对江苏省徐州地区O157：H7的病原学进行分析。方法 采用聚合酶链反应对O157：H7菌株毒力基因谱进行检测，同时用脉冲凝胶电泳(PFGE)和随机扩增多态性DNA(RAPD)方法对O157：H7菌株的同源性分析比较。结果 流行地区分离的O157：H7菌株，100％携带Hly、eaeA基因，95．35％携带SLT2基因，11．63％携带SLT1基因。脉冲凝胶电泳图谱表明流行地区分离的O157：H7菌株与日本分离的O157：H7菌株有明显差异，为不相关菌株；与国内标准菌株882364为近似型(相似，但不相同)。流行地区患者分离菌株与外环境家畜家禽粪便及昆虫肠道分离菌株的脉冲凝胶电泳图谱完全相同。结论 携带O157：H7菌株的家畜家禽可能是导致疫情发生的传染源。脉冲凝胶电泳方法用于O157：H7病原学分析，对流行病学研究有重要意义。随机扩增多态性DNA方法用于O157：H7病原学分析，技术简便、省时。     

广西肠出血性大肠埃希菌O157监测研究

目的了解广西人和动物中EHECO157的流行强度与规律,为卫生决策提供依据。方法采集腹泻病人和家禽家畜粪便、苍蝇及生熟肉类食品标本,经mEC肉汤增菌、O157快诊金卡筛选和免疫磁珠富集后,接种CHROMagarO157显色培养基,最后进行生化和血清学鉴定。结果2007-2008年,广西共采集各类标本3964份,从牛粪、猪粪、鸡粪和苍蝇标本中检出O157菌株22株,检出率分别为4.35%、1.27%、0.70%和1.84%,其它标本均未检出。22株O157菌株中有18株O157∶H7、4株O157:H-,分布于4-11月。结论广西家禽家畜和苍蝇均有较高的EHECO157带菌率,存在人感染甚至发生人间暴发流行的危险,应继续加强监测并采取适当措施以降低家禽家畜带菌率。     

O157∶H7大肠埃希菌的分子分型方法

近年来 ,分子生物学技术应用到流行病学之中 ,形成了一门新的分支学科———分子流行病学。分子流行病学中重要的一点是利用合适的分型方法对分离到的病原进行分析。所以分型方法便显得十分重要。一种方法是否能应用于分子分型以及其分型效果如何大致可以从以下几个方面考虑 :1、分型力 :是指分析的每一分离株得到明确的阳性结果的能力 ;不可分型的分离株指对分型得到一种阴性或不能解释的结果的菌株。2、重复性 :是指当重复测试相同菌株时得到相同结果的能力 ,这个标准可能受到特定方法的结果对时间的变化或者被测菌特征的稳定性的变化的影…     

Fimbriation and curliation in Escherichia coli O157

Shiga toxin-producing Escherichia coli (STEC) serotypes, particularly E. coli O157:H7, possess a variety of fimbrial and afimbrial adhesins which have emerged as important contributors to intestinal colonization. E. coli O157:H7 possesses two chromosomal operons encoding long polar fimbriae (Lpf), which have been found to influence adherence in vitro and colonization in vivo. In a recent Infection and Immunity paper, we further explored the role of Lpf in E. coli O157:H7 intestinal colonization by using the infant rabbit model of STEC infection. We found that an E. coli O157:H7 Lpf-deficient mutant was outcompeted in the rabbit intestine by its parental strain, which may suggest that Lpf contributes to colonization. In contrast, the Lpf-deficient mutant showed an increased adherence to cultured intestinal epithelial cells, and we discovered that this strain overexpressed curli fibers. In this addendum article, we provide a continued perspective on the predicted roles of Lpf and curli, both in vivo and in vitro.     

浙江省O157大肠杆菌监测及其分子生物学特性

目的了解肠出血性大肠杆菌O157∶H7和其他O157大肠杆菌在浙江省动物、人群中的分布、流行以及PFGE分型、毒力基因携带状况。方法按全国O157∶H7监测方案在5-10月份肠道传染病高发季节,采集全省各地(市)肠道门诊腹泻病人粪便,进行O157大肠杆菌分离培养,并用免疫磁珠分离法对浙江省5个监测点的宿主动物进行O157∶H7分离培养、鉴定,可疑菌株以PCR法检测O157∶H7抗原、志贺样毒素(stx1和stx2)、粘附抹平因子(eaeA)及溶血素(hly)4种毒力基因。用脉冲场凝胶电泳(pulse field gel electrophoresis,PFGE)方法进行同源性分析,同时选择14种抗生素进行药敏试验,并将分析结果与本省首株患者粪便中分离的产志贺样毒素的O157∶H7菌株进行比较。结果全省5个监测点2006年共监测动物粪便标本2377份,分离到4株O157∶H7菌株,阳性率为0.17%;同时在绍兴、舟山肠道门诊腹泻病人粪便中分离到2株O157:H?菌株。4株O157∶H7菌株,stx2、Hly、eaeA均阳性,stx1均阴性;2株O157∶H?菌株仅1株携带eaeA毒力基因。脉冲场凝胶电泳分型显示,4株O157∶H7菌株分3个型,除金华地区2006年分离所得2株完全相似外,其它相同地区不同年代分离的O157∶H7菌株及相同年代不同地区分离的O157∶H7菌株则完全不相似。2株O157∶H?菌株1株PF-GE电泳条带降解,另1株与其它O157∶H7菌株电泳条带差异明显。结论浙江省大肠杆菌0157菌株在动物中以携带stx2毒力基因的O157∶H7菌株为主,但在腹泻患者中则以不带志贺样毒素的O157∶H?菌株为主。不同地区分离的O157∶H7菌株PFGE分型差异明显。羊、奶牛是携带stx2毒力基因的O157∶H7大肠杆菌的主要宿主。各级疾控应加强对宿主动物和腹泻病人大肠杆菌O157的分离监测和流行病学调查。     

江苏省肠出血性大肠埃希菌O157的基因PCR-RFLP分型研究

目的对历年从江苏省不同地区分离的肠出血性大肠埃希菌O157（以下简称：O157）进行分型分析。方法采用多聚酶链反应-限制性片段长度多态性分析（PCR-RFLP）方法对108株O157分子分型,比较不同地区、不同年份菌型差异。结果根据EcoRV限制性酶切图谱可将菌株分成JS01-JS10十个不同的型别。主要菌型JS01占64.9%,JS02型与JS01型菌株酶切图谱相似度很高,JS03和JS04型菌株数目较少（12株）,但近一半属于人源菌株。从时间方面看,1999年分离的菌型最多;从地区方面看,铜山县分离到的菌株型别最为多样化。结论不同菌型之间的致病性存在差异,菌株与地理来源的关系密切。PCR-RFLP方法操作简便、重复性好,为O157的流行病学研究提供了一条全新途径。     

Fimbriation and curliation in Escherichia coli O157:H7: a paradigm of intestinal and environmental colonization

Shiga toxin-producing Escherichia coli (STEC) serotypes, particularly E. coli O157:H7, possess a variety of fimbrial and afimbrial adhesins which have emerged as important contributors to intestinal colonization. E. coli O157:H7 possesses two chromosomal operons encoding long polar fimbriae (Lpf), which have been found to influence adherence in vitro and colonization in vivo. In a recent Infection and Immunity paper, we further explored the role of Lpf in E. coli O157:H7 intestinal colonization by using the infant rabbit model of STEC infection. We found that an E. coli O157:H7 Lpf-deficient mutant was outcompeted in the rabbit intestine by its parental strain, which may suggest that Lpf contributes to colonization. In contrast, the Lpf-deficient mutant showed an increased adherence to cultured intestinal epithelial cells, and we discovered that this strain overexpressed curli fibers. In this addendum article, we provide a continued perspective on the predicted roles of Lpf and curli, both in vivo and in vitro.     

大肠杆菌O157∶H7 CVa9株O抗原变异的研究

目的　研究本实验室保藏的大肠杆菌O15 7:H7(E coliO15 7:H7)日本分离株CVa9O抗原的变异。方法　血清凝集试验检测CVa9菌株O和H抗原 ,区分O抗原变异株与非变异株。聚合酶链反应 (PCR)法分别检测O15 7和H7特异性基因。生化试验检测生化特性。观察菌株在麦康凯、山梨醇麦康凯、棉子糖麦康凯及ChromagarO15 7显色培养基上菌落形态 ,菌落计数法计算变异率。结果　抗 -O15 7抗血清与CVa9菌株进行玻片凝集试验出现强凝集 (CVa9- 8)和不凝集 (CVa9- 1、CVa9- 15 )两种菌落 ,试管凝集试验结果相同 ,证实不凝集菌落O抗原发生变异。抗 -HT 抗血清分别与变异株和非变异株H抗原进行试管凝集试验 ,均为强凝集。两种菌株O15 7和H7特异性基因均为阳性。变异株与非变异株生化特性基本相同 ,但变异株不发酵棉子糖。两种菌株在麦康凯及山梨醇麦康凯培养基上菌落形态特征没有区别。在ChromagarO15 7显色培养基上培养 4 8h ,变异株为浅紫红色 ,菌落周边呈毛边状 ,非变异株为紫红色 ,菌落边缘整齐。变异株在用棉子糖代替乳糖制备的棉子糖麦康凯培养基上菌落呈粉红色 ,非变异株呈红色。菌落计数显示变异率为 99 80 %。结论　CVa9菌株在保存过程中O抗原发生变异 ,菌落形态及部分生化特征亦有所改变。变异株和非变异株均携带O15     

Characterization and Food Application of the Novel Lytic Phage BECP10: Specifically Recognizes the O-polysaccharide of Escherichia coli O157:H7

Escherichia coli O157:H7 is a global concern that causes serious diseases, such as hemolytic uremic syndrome and bloody diarrhea. To control E. coli O157:H7 in food, a novel siphophage, BECP10, that targets the O157 serotype was isolated and characterized. Unlike other E. coli phages, BECP10 can only infect E. coli O157 strains, and thus, did not infect other strains. The 48 kbp genome of BECP10 contained 76 open reading frames (ORFs), including 33 putative functional ORFs. The phage did not contain lysogeny-related modules or toxin-associated genes, suggesting that the phage might be strictly lytic. The tail spike protein (TSP) sequence had very low homology with the reported T1-like phages, indicating that TSP might be related to this unique host spectrum. The specific O-antigen residue of E. coli O157:H7 may be a key factor for phage infection by adsorption and receptor identification. The phage exhibited strong antibacterial activity against E. coli O157:H7 over a broad pH range and showed little development of phage-insensitive mutants. The phage sustained viability on the burger patties and reduced E. coli O157:H7 to a non-detectable level without the emergence of resistant cells at low temperatures for five days. Therefore, phage BECP10 might be a good biocontrol agent for E. coli O157:H7-contaminated food matrices.     

出血性大肠杆菌O157菌壳的制备研究

目的利用温度控制噬菌体PhiX174裂解基因E的表达,制备出血性大肠杆菌O157∶H7菌壳,鉴定其裂解效率并观察其形态。方法利用PCR技术扩增得到噬菌体PhiX174裂解基因E并克隆到质粒pBV220中,将重组质粒导入出血性大肠杆菌O157∶H7。重组菌株O157∶H7(pBV220::E)培养温度从28℃突升至42℃,每20min检测菌液OD600值,绘制重组菌株生长曲线。体外菌落计数计算裂解效率,并通过电镜观察菌壳结构。结果获得了PhiX174裂解基因E全长基因及重组质粒,构建了大肠杆菌的重组菌株。重组菌菌液OD600值在温度突升至42℃后40min后开始显著下降,80min后OD600值趋于平稳。细菌的裂解效率为98.4%。电子显微镜观察显示,经诱导后,O157∶H7细菌内容物可以通过细菌表面的孔道流出,从而形成菌壳。结论本研究成功制备了大肠杆菌O157∶H7菌壳,为将来进一步研究O157菌壳的特性奠定了基础。     

Preparation of immunomagnetic iron-dextran nanopartides and application in rapid isolation of E.coli O157:H7 from foods

AIM: To prepare a kind of magnetic iron-dextran nanopartides that was coated with anti-E.coli O157:H7 IgG, analyze its application conditions, and try to use it to isolate E.coli O157:H7 from foods. METHODS: Magnetic iron-dextran nanopartides were prepared by the reaction of a mixture of ferric and ferrous ions with dextran polymers under alkaline conditions. The particles were coated with antiserum against E.coli O157: H7 by the periodate oxidation-borohydride reduction procedure. The oxidation time, amount of antibody coating the particles, amount of nanoparticles, incubation time and isolation time were varied to determine their effects on recovery of the organisms. Finally, the optimum conditions for isolating E.coli O157:H7 from food samples were established. RESULTS: E.coli O157:H7 can be isolated from samples within 15 min with the sensitivity of 101 CFU/mL or even less. In the presence of 108 CFU/mL of other organisms, the sensitivity is 101-102 CFU/mL. Nonspecific binding of other bacteria to the particles was not observed. Two and a half hours of enrichment is enough for the particles to detect the target from the food samples inoculated with 1 CFU/g. CONCLUSION: Isolation of target bacteria by immuno magnetic nanoparticles is an efficient method with high sensitivity and specificity. The technique is so simple that it can be operated in lab and field even by untrained personnel.