AHTG与柔红霉素的偶联物体外对正常人粒单祖细胞的影响及其抗Molt-4细胞作用

本文采用克隆测定法观察抗人胸腺细胞球蛋白与柔红霉素偶联物（AHTG-Dcx-DNR）体外对正常人粒单祖细胞的影响及其抗T淋巴细胞白血病细胞系Molt-4作用。不同浓度偶联物与骨髓细胞共同孵育2h后进行CFU-GM培养，结果表明，含柔红霉素（DNR）0.01mg／L和0．1mg/L的偶联物对正常人骨髓CFU-GM的抑制率较相同浓度的游离DNR小（P＜0.01和P＜0.05），而较高浓度的偶联物（含DNRlmg／L)对CFU-GM则呈一定抑制作用。偶联物处理Molt-4细胞后能有效地抑制白血病集落的形成，呈量效关系，提示该偶联物体外有抗白血病作用。     

猪抗人淋巴细胞球蛋白与兔抗人胸腺细胞球蛋白治疗重型再生障碍性贫血的疗效比较

目的比较猪抗人淋巴细胞球蛋白（ALG）与兔抗人胸腺细胞球蛋白（ATG）治疗重型再生障碍性贫血（再障）的疗效。方
法回顾分析2004~2013年接受免疫抑制治疗的重型再障患者（猪ALG组43例,兔ATG组32例）6个月有效率,χ2检验比较组间
差异。Kaplan-Meier 法绘制生存曲线,log-rank 检验比较组间差异。结果猪ALG组6 个月有效率为79.07%,高于兔ATG组
（56.25%）且差异显著（P=0.034）;5年总生存率为86.047%,高于兔ATG组（72.878%）,但差异不显著（P=0.190）。结论猪ALG
血液学应答优于兔ATG,预后和安全性相似。
     

抗胸腺细胞球蛋白在肾移植中的应用

目的 观察抗胸腺细胞球蛋白（ATG）预防及治疗肾移植排斥反应的效果。方法 应用抗胸腺细胞球蛋白（ATG）预防和治疗各种排斥反应87例。结果 43例预防性应用ATG者有5例发生急性排斥反应；14例难治性急性排斥经ATG治疗后13例逆转；17例肾小管坏死者有16例安全渡过急性肾小管坏死期；其中8例系超急性排斥反应后再次移植，经ATG治疗后仍有4例再次发生超急性排斥。结论 抗胸腺细胞球蛋白能够有效预防，控制急性排斥，并可逆转绝大多数难治性急性排斥反应，但不能预防超急性排斥反应及慢性排斥反应。     

低剂量抗胸腺细胞球蛋白在肾移植免疫诱导治疗中的应用

目的 探讨低剂量抗胸腺细胞球蛋白(ATG)在同种异体肾移植早期排斥反应防治中应用的有效性和安全性.方法 239例同种异体肾移植患者临床资料纳入本项研究,根据应用ATG剂量的不同分为两组:A组(n=116),常规剂量ATG进行免疫诱导治疗,剂量为2 mg·kg-1·d-1,术后连续应用7～14 d;B组(n=123),肾移植患者接受低剂量ATG进行免疫诱导治疗,剂量为0.75 mg·kg-1·d-1,术后连续应用5～10 d.所有病例均接受常规三联免疫抑制治疗方案.对两组患者人肾存活状态、早期排斥反应发生情况、并发症发生率进行比对分析.结果 术后两组急性排斥反应发生率相比差异无统计学意义(P>0.05).术后6个月,A、B两组移植受者人肾存活率比较差异无统计学意义(P>0.05).术后两组间1、3、6个月血肌酐水平相比差异亦无统计学意义.B组术后感染并发症发生率明显低于A组,组间比较差异有统计学意义(P<0.01).白细胞减少症和血小板减少症的发生率在两组间相比,差异有统计学意义(P<0.05).结论 应用ATG进行免疫诱导治疗可以有效防治同种异体肾移植术后早期排斥反应,低剂量ATG在有效发挥免疫诱导作用的同时可以降低感染、白细胞及血小板减少等并发症的发生率.     

抗胸腺细胞球蛋白致血清病4例

本文总结再生障碍性贫血患者应用抗胸腺细胞球蛋白 (ATG)致血清病 4例的临床资料 ,报告如下。1　临床资料例 1,女 ,2 9岁。 2 0 0 1年 8月 2 4日因面色苍白 ,皮下出血 5年住院。外院诊断再生障碍性贫血。体查 :面色苍白 ,无出血点 ,淋巴结不大 ,肝脾未触及 ,白细胞2 1× 10 9/L ,血红蛋白 74g/L ,血小板 35×10 9/L,肝肾功能正常 ,酸溶血试验 (- ) ,CD5 9正常 ,骨髓涂片一次增生活跃 ,巨核细胞 2个 ,一次增生减低 ,未见巨核细胞。骨髓活检 :脂肪占 95 % ,治疗 :康力龙、环孢霉素A ,9月 7～ 11日用抗胸腺细胞球蛋白 (ATG) (马抗 ) 5 0 …     

抗胸腺细胞球蛋白治疗重型再障一例

我院1999年7月首次应用抗胸腺细胞球蛋白(ATG)治疗重型再障(Ⅰ型)获得成功．报告如下。 患者，男，47岁。因面色苍白，高热，皮肤瘀斑1周入院。查体：T39.5℃，重度贫血貌，全身皮肤散在出血点及瘀斑。右肺可闻及湿哕音，心率120次／min，律齐，肝脾未触及。实验室检查：Hb 40g／L，Ret 0.0012，WBC1.8×109／L，L0.86，N 0.10，BPC 15×109／L，骨髓涂片：有核细胞增生极度低下，粒系0.11，红系0.098，淋巴0.764，浆细胞、单核细胞、组织细胞多见，全片未见到巨核细胞。做T细胞亚群测定T4／T8比值减低明显。根据血液病诊断及疗效标准门长之南主编诊断为重型再障Ⅰ型。人院后给予康力龙6mg／d，升细……     

柔红霉素对人B细胞淋巴瘤OCI-LY7细胞凋亡的诱导作用及其机制

目的：探讨柔红霉素对人B细胞淋巴瘤OCI-LY7细胞凋亡的影响及其机制,阐明柔红霉素在弥漫大B细胞淋巴瘤中的耐药机制。方法：将体外培养的OCI-LY7细胞分为0、0.1、1.0和10.0 mg·L^-1柔红霉素组。采用MTT法检测各组OCI-LY7细胞存活率,流式细胞术检测各组OCI-LY7细胞凋亡率,Western blotting法检测各组OCI-LY7细胞中凋亡相关蛋白Bax、cleaved caspase-3和survivin表达水平。后续实验分为对照组、柔红霉素组、柔红霉素+空载体组和柔红霉素+survivin组,按照上述方法检测survivin过表达后各组OCI-LY7细胞存活率、凋亡率和细胞中凋亡相关蛋白表达水平。结果：与0 mg·L^-1组比较,处理48 h后0.1、1.0和10.0 mg·L^-1柔红霉素组OCI-LY7细胞存活率和细胞中survivin蛋白表达水平逐渐降低（P<0.05）,而细胞凋亡率和细胞中cleaved caspase-3及Bax蛋白表达水平逐渐升高（P<0.05）。与对照组比较,柔红霉素组OCI-LY7细胞存活率和细胞中survivin蛋白表达水平明显降低（P<0.05）,而细胞凋亡率和细胞中cleaved caspase-3及Bax蛋白表达水平明显升高（P<0.05）;与柔红霉素组比较,柔红霉素+survivin组OCI-LY7细胞存活率和细胞中survivin蛋白表达水平明显升高（P<0.05）,而细胞凋亡率和细胞中cleaved caspase-3及Bax蛋白表达水平明显降低（P<0.05）。结论：柔红霉素可诱导OCI-LY7细胞凋亡,其作用机制可能与下调survivin蛋白表达有关。     

抗胸腺细胞球蛋白治疗再生障碍性贫血25例临床研究

用抗胸腺细胞球蛋白（ＡＴＧ）治疗再生障碍性贫血２５例，总有效率为７２％（８／２５），缓解率为４４％（１１／２５），病死率１６％（４／２５），死亡４例均系重型再障。８０％以上的再障病例治疗前Ｔ４／Ｔ８倒置，治疗后５８％的病例正常或较前提高。治疗后Ｔ４／Ｔ８持续倒置者的骨髓造血功能恢复也不完全。血清病反应轻者疗效明显优于反应重者（Ｐ＜０．０１）。     

柔红霉素体外对HL-60细胞的凋亡作用

目的：了解柔红霉素（ＤＮＲ）体外作用于ＨＬ－６０　细胞时产生凋亡的规律及一些相关蛋白表达的变化。方法：应用光镜、ＤＮＡ电泳及ＦＣＭ检测ＨＬ－６０细胞发生的凋亡模式；用ＩＣ、ＦＣＭ观察相关蛋白的变化。结果：当ＤＮＲ浓度为０．２μＭ～２μＭ时，ＨＬ－６０细胞发生的凋亡率随浓度的增加与作用时间的延长而升高，可见典型的凋亡细胞及明显的ＤＮＡ梯度条带。１μＭ　ＤＮＲ作用２ｈ时，ｂｃｌ－２与ｃ－ｍｙｃ的荧光强度指数（ＦＩ）降低，ｂａｘ、ｃａｓｐａｓｅ－３　的　ＦＩ　升高；而作用５ｈ时，ｂａｘ、ｃａｓｐａｓｅ－３的ＦＩ值反而降低。结论：一定浓度的ＤＮＲ在体外可诱导ＨＬ－６０细胞凋亡，它可抑制ｂｃｌ－２与ｃ－ｍｙｃ蛋白的表达，而激活ｂａｘ、ｃａｓｐａｓｅ－３蛋白的表达。     

Preparation of AHTG-DNR conjugates and their antitumor effect in vitro

Summary 100%, 75%, 50%, 25% and 12.5% oxidized dextran T10 (Dex T1o) were used as intermediate carriers for conjugating drug daunorubicin (DNR) and antibody anti-human thymocitic globulin (AHTG), to form different immunoconjugates, AHTG:Dex:DNR. It was demonstrated that the conjugate with 25% oxidized Dex T10 as intermediate carrier linked more DNR molecules than the others. The degree of its substitution was 10–11 moles of DNR per mole of AHTG. Moreover, because the amount to reducing agent sodium borohydride (NaBH₄), required for the reduction reaction, was relatively small, its damaging effect on AHTG and DNR was lessened accordingly. The antitumor effect of AHTG: Dex: DNR in vitro was tested by using 24-h cytotoxicity assay, with CEM as target cell. Cytotoxic effect of the conjugate was proven and the LD₅₆ was 10.68 μg/ml. However, it showed only slight cytotoxic effect on non-target cell K562. When 10 min cytotoxicity assay was performed to show the specific tumor-killing effect of the conjugate, it revealed an obvious cytotoxic activity toward CEM, with the LD₅₀ being 14.79 μg/ml, but hardly toward K562. These results suggest that AHTG:Dex:DNR possesses specific cytotoxic effect.     

单克隆抗体与链黑菌素偶联物的抗肝癌BEL-7402细胞活性

采用活化酯法制备链黑菌素与抗人肝癌单克隆抗体(McAb)3A5的免疫偶联物,该偶联物兼有二者的生物活性和紫外吸收特征。抗体与链黑菌素偶联分子比为1:2～6,蛋白回收率为76％,链黑菌素保留原活性的12.5％,抗体活性基本上完全保持。但随着药物分子偶联数目的增加,抗体活性减小。偶联物在体外细胞克隆生成试验中,对肝癌BEL-7402细胞的抑制作用为游离链黑菌素的63倍,而对与抗原性无关的人咽上皮癌KB细胞的作用则较游离的链黑菌素弱11倍。以上结果表明,该免疫偶联物对靶细胞显示选择性杀伤作用。     

洋地黄毒甙体外抗人癌细胞株的作用

目的：探讨洋地黄毒甙体外抗肿瘤作用。方法：以台盼蓝排染法、中性红活染法和克隆形成实验测定洋地黄毒甙（ＤＴ）对多种人癌细胞株的细胞毒作用。结果：０．０１～１．２５μｇ／ｍｌＤＴ在体外能显著杀伤ＨＬ－６０．Ｋ５６２．ＳＭＭＣ－７７２１，ＳＧＣ－７９０１细胞，并呈剂量依赖性，药物作用２４ｈ．ＩＣ５０分别是０．１３２．０．１８２．０．２６５．０．４８９μｇ／ｍｌ。对正常成纤维细胞株ＨＬＦ的ＩＣ（５０）为４．２８８μｇ／ｍｌ．明显高于癌细胞，对癌细胞具有选择毒性作用。克隆形成实验中，０．０１～１．２５μｇ／ｍｌＤＴ处理１２ｈ，对ＨＬ－６０和ＳＧＣ－７９０１细胞集落形成有明显的抑制作用，ＩＣ５０分别是０．０５６．０．ｌ１９μｇ／ｍｌ。结论：应用洋地黄毒甙及其他Ｎａ＋－Ｋ＋－ＡＴＰ酶抑制剂防治肿瘤是一个值得探讨新方向。     

柔红霉素诱导Jurkat细胞凋亡的实验研究

目的探讨柔红霉素在体外诱导Jurkat细胞发生凋亡的规律.方法应用DNR体外作用于Jurkat细胞,研究DNR诱导Jurkat 细胞凋亡的规律,Annexin V/PI双标法流式细胞仪检测Jurkat细胞凋亡率,PI染色流式细胞仪检测细胞周期分布.结果 0.1～2.0μmol/L浓度范围DNR作用一定时间后,Jurkat细胞的凋亡率随药物浓度的增加与作用时间的延长而升高.DNR作用后Jurkat细胞G2/M期比例明显增加.结论一定浓度的DNR在体外可诱导Jurkat细胞凋亡,在一定的剂量范围内,呈现剂量-效应、时间-效应关系,其机制可能与DNR抑制细胞有丝分裂有关.     

力达霉素构建的小型化单克隆抗体免疫偶联物的抗肿瘤作用

目的研制一种具有高效、小型化特点的抗肿瘤单克隆抗体(单抗)免疫偶联物.方法以化学偶联法制备抗肿瘤抗生素力达霉素(LDM)与单抗Fab＇片段的偶联物Fab＇LDM.以非还原型SDS-PAGE法确定偶联物的相对分子质量;ELISA法、四氮唑蓝(MTT)法、克隆形成法及小鼠移植性结肠癌26(C26)模型观察Fab＇-LDM偶联物的抗肿瘤作用.结果 Fab＇-LDM偶联物的相对分子质量(Mr)约为65 000,Fab＇与LDM的偶联分子比为11;偶联物与BEL-7402及C26细胞均呈免疫学阳性反应,但与KB细胞无反应;Fab＇-LDM对靶细胞BEL-7402的杀伤作用比游离LDM强13倍,对C26细胞的杀伤作用比LDM强5.5倍,但对非靶细胞KB的作用与LDM相当.动物试验结果表明,0.05 mg/kg、0.1 mg/kg和0.2 mg/kg剂量Fab＇-LDM偶联物对小鼠移植性结肠癌26的抑瘤率分别达80%、92%和94%,而0.1 mg/kg剂量游离LDM的抑瘤率为77%;同时偶联物治疗组动物生存时间较对照组延长.偶联物的抑瘤作用强于等剂量游离LDM(P＜0.01).结论以高效抗肿瘤抗生素LDM为"弹头"药物,可与单抗活性片段构建成具有良好抗肿瘤作用的小型化单抗导向药物.     

嗜酸粒细胞促淋巴细胞活性及抗肿瘤的作用机制

目的：探讨嗜酸粒细胞（EOS）体外抗肿瘤及对淋巴细胞活性的影响,研究EOS在肿瘤免疫中的作用.方法：建立豚鼠I型超敏反应模型,应用Percoll液不连续密度梯度法分离豚鼠血液、腹腔液中EOS.放射免疫法检测豚鼠血清及EOS与淋巴细胞共同培养的上清液（SELC）中TNF-α,IL-4含量;MTT法分别测定EOS,SELC,EOS裂解液（LLE）对白血病K562细胞,乳腺癌MCF-7细胞增殖活性的影响.结果：豚鼠血液、腹腔液EOS（1×10^6,1×107,1×10^8/L）能够促进脾淋巴细胞增殖,刺激指数最高分别可达1.92,2.58.血清,SELC中IL-4,TNF-α含量明显增高（P〈0.05）;腹腔液SELC48hIL-4,TNF-α含量最高分别为（3.94±0.16）,（8.93±0.15）g/L;腹腔液EOS,SELC,LLE与K562,MCF-7细胞共同培养,能够抑制K562,MCF-7细胞的增殖,尤其SELC对K562增殖的抑制率最高可达59.28%.结论：EOS可以促进淋巴细胞的增殖活性,提高SELC中IL-4,TNF-α的含量.腹腔液EOS,SELC,LLE能够抑制肿瘤细胞的增殖.     

熊果酸体外抗胃癌细胞SGC7901机制的研究

目的探讨熊果酸(urso lic ac id,UA)体外抑制胃癌细胞SGC 7901生长的作用机制。方法体外培养人胃癌细胞株SGC 7901,M TT法观察不同浓度UA作用不同时间对细胞生长的影响;不同浓度UA(0~40μm o l/L)处理SGC 7901细胞24 h后,倒置显微镜观察细胞形态变化;荧光染料Hoechst 33258染色和流式细胞仪检测细胞凋亡情况;W estern B lotting法检测凋亡相关蛋白B cl-2和B ax的表达。结果20~40μm o l/L UA可抑制SGC 7901的生长,并呈浓度和时间依赖性,其作用12、24、36、48 h的IC50分别为(57.50±1.18)、(34.28±2.05)、(27.54±1.11)、(24.83±1.02)μm o l/L。20~40μm o l/L UA作用24 h后,SGC 7901细胞变圆,出现不同程度的漂浮;同时细胞被阻滞于G0/G1期并发生凋亡,随药物浓度升高,凋亡率增加,凋亡相关蛋白B cl-2表达减少,B ax无明显变化。结论熊果酸对SGC 7901细胞具有较强的抗肿瘤活性,其机制可能与细胞毒作用、增殖抑制作用以及下调凋亡相关蛋白B cl-2表达而促进凋亡有关。     

siRNA沉默HLX基因对AML细胞生长的影响

目的 筛选高表达H2.0样同源盒基因（H2.0-like homeobox gene,HLX）的白血病细胞株,沉默HLX后观察急性髓系白血病（acute myelogenous leukemia,AML）细胞株的生长及分化影响,为HLX在AML中的深入研究提供理论基础。方法 实时荧光定量PCR（quantitative real-time polymerase chain reaction,qRT-PCR）筛选高表达HLX基因的白血病细胞株,并检测p21活化激酶1（p21-activated kinase 1,PAK1）的基因表达;设计siRNA-HLX沉默HLX基因表达最高的AML细胞株中的该基因,运用相差显微镜观察细胞生长情况,MTS/PMS比色分析法检测增殖抑制率。结果 AML细胞株中HLX基因的表达水平显著较高（P< 0.01）,干扰HLX基因后,可见AML细胞株生长速度减慢,增殖被抑制,并且PAK1mRNA表达下调（P< 0.01）。结论 HLX基因可抑制AML细胞株的生长、增殖及分化。     

内皮抑素对人肝癌细胞HepG2 VEGF表达的影响及对血管生成的抑制作用

目的探讨内皮抑素(Endostatin)对体外条件下肝癌细胞HepG2血管内皮生长因子(vascular endothelialgrowth factor,VEGF)表达的影响以及体内条件抑制血管生成的作用。方法采用不同浓度的重组人血管内皮抑制素恩度(Endostar,YH-16)体外作用于肝癌细胞株HepG2,采用RT-PCR和Western blot法检测其VEGF的表达水平。并将肿瘤细胞接种于裸鼠背部皮下,形成裸鼠移植瘤模型,采用瘤周皮下注射的办法将不同浓度的恩度作用于瘤体,通过免疫组化以及超声探测仪检测,观察其对移植瘤生长以及微血管密度的影响。结果 RT-PCR和Western blot结果显示,恩度能在体外抑制肝癌细胞VEGF的表达,且其表达随恩度浓度的增加而呈"V"字型变化,当恩度浓度为25μg/mL时,对肝癌细胞VEGF表达的抑制作用最为明显(P<0.05)。不同浓度的恩度作用于裸鼠移植瘤14d后,瘤体的生长速度均较阴性对照组减慢,且部分瘤体发生退缩(P<0.05),25mg/kg组瘤体的抑制最为明显,瘤体体积为注射前的81.98%;免疫组织化学检测结果提示恩度在体内条件下能抑制移植瘤内肿瘤细胞VEGF的表达,其中25mg/kg组阳性细胞数<30%为阴性(-),并且恩度能抑制瘤体内微血管的生成。结论恩度可以在体外抑制肝癌细胞株HepG2的VEGF表达,且可有效抑制裸鼠移植瘤内新生血管的生长。