SARS冠状病毒S基因重组DNA诱导的体液免疫反应

目的 以严重急性呼吸综合征冠状病毒（SARS-CoV）密码子优化的S、S1和S2基因分别构建其真核表达质粒，免疫BALB／c小鼠，以初步评价其诱导特异性体液免疫的效果。方法将人工合成密码子优化的S、S1和S2基因克隆入pcDNA4／HisMax-TOPO表达载体，重组质粒转染293T细胞，Western blot和免疫组化检测其真核表达，重组质粒免疫BALB／c小鼠，酶联免疫（ELISA）检测抗S蛋白抗体，伪病毒中和试验、细胞融合抑制试验检测中和抗体。结果3种重组质粒均可在真核细胞中获得表达，免疫小鼠后可诱导针对S蛋白的特异性抗体，抗体在12周观察期内呈持续上升趋势；其中，仅S和S1蛋白重组质粒能够诱导中和抗体的产生，以S蛋白的效价为高。结论密码子优化S和S1蛋白重组质粒可以有效诱导BALB／c小鼠产生中和抗体，其抗体可能具有阻断SARS-CoV侵袭易感细胞的能力。该结果为进一步研究SARS-CoV DNA疫苗提供了参考依据。     

SARS冠状病毒编码蛋白质及其基因分析的研究进展

20 0 3年初 ,一种严重的急性呼吸综合征 (severeacuterespiratorysyndrome,SARS)从我国广东省迅速向周边地区蔓延。直到 6月 4日 ,世界卫生组织 (WHO)共接到来自全球 2 9个国家和地区累计 84 0 2起病例报告 ,其中国内就有 5 32 9人感染。在WHO的协调下 ,全球 10个国家的 11个实     

SARS病毒抗体的检测及其应用

为了解SARS患者血清抗体产生的规律 ,我们用间接免疫荧光法 (IFA)和酶联免疫吸附试验 (ELISA)对广州市第八人民医院的 4 3例住院治疗的SARS患者和 10例正常人的双份血清进行SARS抗体检测 ,同时比较了IFA和ELISA法的特点。10例正常人双份血清的SARS病毒IgM和IgG抗体均阴性。 4 3例SARS患者 ,其中 34例检出IgM占 79.1%。 37例检出IgG占 86 .10 %。SARS病毒IgG抗体的阳性率高于IgM。结果显示 ,发病的同时机体便可检测到SARS抗体IgM最迟离起病时间最长 (33d)的血清也能检测到 ,但也有患者发病第 9、2 3及 30天的第二份…     

53例SARS早期患者的临床分析

目的研究SARS早期的临床特点.方法对53例SARS早期病例的流行病学、临床、实验室及影像学资料进行回顾性分析.结果53例患者中男性24例,女性29例,平均年龄(38±16.7)岁(10～85岁),发病年龄以20～50岁患者居多(67.9%),平均潜伏期(7.3±7.0)d(3～14 d),职业分布居多者为职员(11例,占20.8%),其次是医护人员(9例,17.0%).临床症状以发热(100%),咳嗽(49.1%),肌肉酸痛(24.5%),乏力(17.0%),胸闷憋气(20.8%),腹泻(5.7%)等为主要表现.在病程的第1～5天患者白细胞＜4.0×109/L 33例(62.3%),(4.0～10.0)×109/L 18例(34.0%),67.9%患者淋巴细胞计数减少,13.2%患者血小板计数减少.X线胸片主要病变呈肺部斑片状渗出性阴影,其中双侧受累占15.1%,单侧受累75.4%.血气分析示PO2＜90mm Hg(1kPa=7.5 mm Hg)26例(占49.1%),出现酸碱平衡紊乱者9例(17.0%),其中代谢性酸中毒4例(10.8%)及代谢性碱中毒合并呼吸性酸中毒4例(10.8%).SARS常合并多脏器损伤,其中肝功能(ALT、AST)异常占37.7%,肾功能(BUN、SCR)损伤占11.3%,心肌酶(LDH、CK、HBDH)异常占43.4%.结论本病临床表现复杂,密切监测血常规、胸片及血气分析对于早期诊断意义重大.     

SARS病毒抗体第一代参考品的研制及初步应用

目的 建立严重急性呼吸综合征(SARS)病毒抗体参考品，用于对SARS病毒抗体诊断试剂的实验室评价。方法 收集临床确诊为SARS病人血清和非SARS人群血清，用不同的SARS病毒抗体诊断试剂进行检测筛查，选择不同样品组成参考品。并用该参考品对不同试剂进行初步评价。结果 SARS病毒ISM抗体的参考品由38份组成，其中包括11份阳性参考品、20份阴性参考品、灵敏度样品6份，精密性样品1份；SARS病毒总抗体(包括IgG)由46份组成，其中包括18份阳性参考品、20份阴性参考品、灵敏度样品7份，精密性样品1份。结论 初步应用结果显示该参考品确实能够反应不同试剂的质量差异。     

SARS冠状病毒S1基因片段真核表达载体的构建及其活性测定

严重急性呼吸综合征（severe acute respiratory syndrome,SARS）病原体是SARS冠状病毒（SARSCoV）,研究开发安全有效的SARS-CoV疫苗以控制SARS成为热点.经过对12株SARS冠状病毒基因序列比较,发现S蛋白的氨基酸突变率仅为0.23%,其较高的保守性为疫苗研究奠定了良好的基础,由此,S蛋白成为候选疫苗的重要靶位.pcDNA3.1（＋）是一种高效率的质粒型真核表达载体.本研究将SARS-CoV的S1基因片段连至真核表达载体pcDNA3.1（＋）,构建重组pcDNA3.1（＋）/S1并初步研究其免疫效果.     

北京株和广州株SARS病毒与非典型肺炎患者血清中和抗体反应观察

目的 研究北京和广州地区分离的SARS病毒的抗原性关系，为非典型肺炎疫苗候选株的筛选提供依据。方法 采用Reed-Muench法测定BJ01和GZ01株病毒的滴度，分别选取北京和广州地区SARS病人血清各6份，采用固定病毒．稀释血清法进行微量细胞交叉中和试验，测定两地病人血清对BJ01和GZ01株病毒的中和抗体水平及交叉中和能力，分析这两株SARS病毒抗原性的差异。结果 北京和广州两地的非典型肺炎病人血清能够中和本地分离的SARS病毒。两地血清可互相交叉中和BJ01和GZ01株SARS病毒。中和抗体水平相同。结论 北京和广州两地分离的SARS病毒BJ01和GZ01株抗原性相似、差异较小。     

SARS冠状病毒的病原生物学分析及其启示

Severe acute respiratory syndrome (SARS) is the first new epidemic of the twenty - first century. A novel coronavirus (SARS - CoV) has been identified as the causative agent of SAP, S. The genome of SARS - CoV has 29,727 nucleatides in length. The genome organization, with 11 open reading flames, is similar to that of conronaviruses.Phylogenetic analyses and sequence comparisons showed that SARS- CoV is not closely related to any of the known coronaviruses, indicating neither a mutant nor recombinant of well -characterized coronaviruses. It is a complete new coronavirus from nonhuman hostPathological studies show that severe immune response, associated to cytokine dysregulation, may be related to the lung damage of fatal SRAS. Recombination of genomes of wild - type strains with vaccine coronavirus is a potential risk associated with the application of living attenuated coronavirus vaccines. The proteinases, controlling the activities of the SARS- CoV replication, and spike protein, involved in viral entry and pathogenesis, represent attractive targets of anti- SARS drug development. Comparative full-length genome sequence analysis of 14 SARS coronavirus isolates suggests a remarkable genetic conservation of the virus. Anti - SARS vaccine and drug development will benefit from this genetic conservation. SARS-CoV is not likely to change rapidly and thus may not readily mutate to a benign infection. The progress in anti - SARS research has been impressive. However, one of the most effective tools in the control of the SARS is quickly tracing and isolating the contacts of stricken patients before they spread the virus further.     

发现一种与严重急性呼吸综合征相关的新型冠状病毒

目前“传染性非典型性肺炎”在世界范围内爆发流行，世界卫生组织称其为严重急性呼吸综合征(Severe Acute Respiratory Syndrom，SARS)。美国CDC采集了SARS患者的各种标本，并使用病毒分离、电子显微镜、组织学研究、分子与血清学分析等技术对这些标本进行广谱的病原学研究。研究结果显示这次的爆发流行与一种新的冠状病毒有关，而且有证据显示这种病毒是引起SARS的病原体。     

广东地区严重急性呼吸综合征(SARS)患者血清的IFA检测

目的：证实新分离出的冠状病毒与SARS患者的关糸。方法：应用IFA诊断试剂做免疫荧光染色，检测2003-02-04-04-13期间，广东地区3所医院临床诊断为SARS的72例患者血清特异性抗体，以及直接参加救治SARS患者但末发生感染的109名医护人员的血清标本，并以疾病流行期间70例健康体检者作为正常对照组。结果：72例SARS患者中，62例血清特异性：IgG呈阳性；而109例密切接触但末发生感染的医护人员及70例SARS流行期间健康体检者，血清特异性IgG和IgM均呈阴性。结论：SARS冠状病毒是引发广东地区SARS的病原体。     

SARS肺部病变胶原纤维的检测及其意义

目的 研究SARS肺部病变形态特征和探讨胶原纤维在SARS肺部病变中的变化规律。方法 4例SARS肺标本组织，经HE、苦味酸天狼猩红和免疫组化染色、光镜或偏振光观察胶原纤维的分布及表达。结果 SARS肺部病变发展过程分3期：急性渗出期、纤维增殖期、胶原化期。急性渗出期：胶原纤维较正常稍增多，可见Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ型，Ⅰ型较多；纤维增殖期：Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ型胶原纤维增多；胶原化期：基膜及肺间质Ⅳ型胶原显著增多，而Ⅰ型胶原明显减少。结论 胶原纤维过度增生及代谢异常是导致肺纤维化重要因素之一，苦味酸天狼猩红和免疫组化联合应用对认识胶原纤维的变化规律起到互补作用。     

传播链和非传播链SARS患者中SARS冠状病毒抗体的分布及变化规律

目的　探讨人体对SARS CoV血清抗体反应及分布规律。方法　对 30 1例临床诊断病例的血清标本 (其中传播链上的病例 15 8例 ,非传播链病例 14 3例 ) ;采用北京华大GBI生物技术有限公司生产的间接ELISA试剂 ,进行SARS CoVIgG抗体的检测 ,部分病例还进行了SARS CoVIgM的检测。结果　传播链涉及 15条 ,最多涉及 4代 ,各条链的SARSIgG抗体阳性率为 85 70 %～ 10 0 .0 0 % ,总阳性率为 94 30 % (14 9 15 8)。SARS病例数随代数增加而减少。但各代间IgG阳性率的差异无显著意义 ;χ2 =5 11,P >0 0 5。非传播链病例的血清抗体阳性率为 12 5 9% (18 14 3)。与传播链的阳性率比较 ,两者间的差异有显著意义 ;χ2 =199 6 4 ,P <0 0 0 1。在发病后的 0～ 7d、8～ 14d、15～ 2 1d、2 2～ 30d内 ,SARS CoVIgG的累计阳性率分别为 16 6 7%、4 0 0 0 %、70 0 0 %、93 10 % ;然后进入平台期 ,并可以维持 6个月以上。在发病 7d内 ,SARS CoVIgM的累计阳性率为 16 6 7% ,8～ 14d时 ,已有 5 5 17%的标本IgM抗体阳转 ,在 2 1～ 30d时 ,抗体阳性率达高峰 (86 96 % ) ,以后迅速下降。结论　SARS感染后 ,94 %的感染者可产生IgG抗体。检测该抗体可以作为临床核实诊断的依据。SARS CoVIgG抗体在 7d时可能检出 ,一般在 4周达     

由一例自杀未遂——浅谈SARS流行及过后公众的心理应激问题

非典型肺炎是一种烈性传染病．在流行期间公众一度恐慌与不安．出现许多应激问题，过后并不能很快平静。     

5株SARS-CoV部分基因序列比较分析

目的　分析SARS CoV部分结构区的基因序列 ,了解其变异程度。方法　采用套式PCR法扩增各结构区基因 ,对阳性PCR产物进行克隆和测序 ,并对序列进行分析。结果　完成了LC1株病毒的M、N、E和S基因的扩增和克隆 ,对LC2、LC3、LC4和LC5株病毒的M区基因进行了扩增和克隆。序列分析显示各结构基因的核苷酸序列与已报道的 18株序列的同源性在 99%以上。结论SARS CoV的基因序列较保守 ,有利于PCR诊断试剂和预防用疫苗的研制。     

SARS肺损伤与抗白细胞粘附防治的设想

去年末至今,传染性非典型肺炎(严重急性呼吸道综合征,SABS)在我国局部地区和世界其他国家流行,并有快速扩散的迹像。我国在党中央领导下,已经展开了全面防治SARS的工作,已得到基本控制。由于本病属新出现的病种,既往研究较少,对其认识不深,目前国内外专家、临床学家正在全力研究本病,以期尽早找到有效的防治措施。 本期发表周同等专家关于SARS肺损伤方面的专题报告,供同道参考。希望更多的专家写出有关SARS方面的专题文章,为尽早战胜SARS贡献力量。有关SARS方面的论文,本刊将优先发表。 让我们万众一心,众志成城,战胜SARS！     

严重急性呼吸综合征患者相关病毒的随访监测及意义

目的 随访监测确诊SARS患者,研究SARS-CoV、新型呼肠病毒和脊髓灰质炎病毒在患者体内的存在状况及与SARS的可能相关性.方法 采集8例SARS患者痊愈2年后的咽拭子、唾液（或痰液）、尿液、血清及连续3天的粪便标本,用RT-PCR的方法分别扩增SARS-CoV、呼肠病毒和脊髓灰质炎病毒;采用ELISA的方法检测患者血清中的SARS-CoV抗体和脊髓灰质炎病毒IgG抗体.结果 8例患者中有4例的粪便中脊髓灰质炎病毒RNA阳性,均为Sabin 1毒株,在5′端非编码区的第480nt及VP1蛋白编码区的第2795nt两个重要的减毒位点上均发生了回复突变;SARS-CoV和新型呼肠病毒均阴性.对照组标本中均未检测到上述三种病毒.3例随访患者血清中SARS-CoV抗体阳性;4例患者血清中脊髓灰质炎IgG抗体阳性.25例健康体检者的血清中SARS-CoV抗体均阴性,其中23例的血清中脊髓灰质炎病毒抗体阳性.结论SARS患者痊愈2年后的血清中特异性脊髓灰质炎病毒抗体与健康人有显著差异,其粪便标本中仍有较高的脊髓灰质炎病毒阳性率,而且病毒核酸在两个重要的减毒位点上均发生了回复突变.     

7例SARS患者治疗的临床研究

目的　进行严重急性呼吸综合征 (SARS)的临床研究。方法　对 2 0 0 4年 4月 2 2日在地坛医院收治的 7例确诊SARS患者进行回顾性分析。结果　 7例确诊SARS患者 ,男性 2例、女性 5例 ,年龄 2 0～ 4 9岁 ,平均年龄为 (35 3± 11 3)岁。临床症状主要表现为发热、咳嗽、不同程度的呼吸困难、全身不适、恶心、呕吐等 ,肺部可闻及湿音 ,可伴有肺外损伤。临床治疗中采用综合治疗原则 ,包括氧疗 ;小剂量、短期应用甲泼尼龙 ,剂量为每天 1～ 2mg kg;及时应用呼吸机 ;必要的心理干预及支持治疗等 ,患者均好转。结论　合理应用糖皮质激素 ,及时使用呼吸机是SARS治疗的关键。     

高血糖对SARS患者T细胞亚群的影响

传染性非典型肺炎(WHO命名为严重急性呼吸综合征，SARS)是一种由新型冠状病毒所致的急性呼吸道传染病。众多研究发现该病有显著的外周血淋巴细胞记数改变，主要表现为T淋巴细胞亚群计数下降，提示免疫功能受到抑制。治疗SARS时应用糖皮质激素可加重这一抑制，并使血糖升高，而高血糖可进一步导致机体免疫力下降，从而影响预后。为此，本文分析了高血糖对SARS患者T细胞亚群的影响，以期为合并高血糖SARS患者的治疗提供某些提示。     

严重急性呼吸综合征(SARS)对医院感染的新挑战

2003年2月开始波及我国及东南亚和欧美各国的非典型肺炎，WHO建议称严重急性呼吸综合征(severe acute respiratory syndrome,SARS)是近20年来影响最大最广的新的传染病。该病具有起病急，潜伏期短，传染性强，医院感染率高等特点，由于SARS的医院感染占的比例大，这对医院感染控制提出一个新的极其严峻的挑战。而医院感染控制又是保障医疗护理工作正常运行的关键，     

SARS病毒S蛋白片段与细胞结合作用分析

目的研究SARS冠状病毒(SARSCoV)S蛋白片段与SARSCoV敏感细胞Vero的相互作用,明确S蛋白的受体结合位点。方法在E.coli中表达S蛋白第260～600位氨基酸(S260600)和397～796位氨基酸(S397796)片段,通过Westernblot对蛋白表达进行确认,用NiSepharose螯合层析对重组蛋白进行纯化。将纯化的S260600和S397796蛋白与Vero细胞4℃共同孵育1h后,先后与SARS患者血清及FITC标记的抗人IgG作用,通过流式细胞仪检测蛋白与细胞表面受体的结合情况。结果成功构建了原核表达质粒pET30a/S260600和pET30a/S397796,并表达、纯化出S260600和S397796重组蛋白。分别用SARS患者血清和抗6×His单克隆抗体进行Westernblot检测,证实重组蛋白得到正确表达。流式细胞仪分析显示S260600和S397796重组蛋白均可与Vero细胞发生结合,但S397796的结合力要弱于S260600。同时发现S260600重组蛋白与SARSCoV非敏感细胞NIH3T3细胞不能结合,进一步证明S260600重组蛋白与Vero细胞表面受体的结合是特异性的。结论重组蛋白S397796和S260600具有受体结合能力,尤其S260600包含了重要的受体结合位点,对进一步研究介导SARSCoV感染的细胞表面受体、开展疫苗和抗病毒药物的筛选均具有重要意义。