siRNA靶向沉默MALAT-1基因对人食管癌EC9706细胞体外侵袭迁移的影响

目的:研究长链非编码RNA MALAT-1对食管癌EC9706细胞系迁移、侵袭能力的影响。方法:化学合成针对MALAT-1的siRNA,脂质体法转染EC9706细胞,转染48h后RT-PCR和Western blot检测各细胞MALAT-1在mRNA和蛋白质水平的表达。Transwell实验检测迁移、侵袭能力改变。结果:小干扰RNA下调MALAT-1表达后,RT-PCR和Western blot证实食管癌EC9706细胞中MALAT-1的表达在mRNA水平和蛋白质水平均明显下调,Transwell实验证实食管癌EC9706细胞迁移、侵袭能力下降。结论:抑制MALAT-1表达能够使食管鳞癌细胞的侵袭转移能力明显降低。     

EIF4E基因下调对胃癌细胞的侵袭转移能力的影响及机制研究

目的:探讨特异性下调真核起始因子EIF4E对胃癌细胞侵袭转移能力的影响及可能的作用机制。方法:采用siRNA技术下调EIF4E的表达,Western blot检测转染前后EIF4E和MMP9蛋白质表达,通过Traswell小室实验检测转染前后侵袭迁移能力的差异。结果:Western blot证实,与阴性对照相比,转染EIF4E siRNA组细胞EIF4E表达明显下调,同时与阴性对照相比,转染EIF4E siRNA组细胞MMP9蛋白表达同样明显下调,Traswell小室实验证实,下调EIF4E后,MKN28细胞的体外侵袭迁移能力显著降低。结论:在胃癌MKN28细胞中存在EIF4E基因对MMP9的调控作用,EIF4E基因可能通过调控MMP9的表达参与胃癌的侵袭迁移行为,EIF4E有望成为肿瘤基因治疗的新靶点。     

miR-21-3p通过下调CCT4抑制食管鳞癌细胞的迁移及侵袭

目的:探讨miR-21-3p对食管鳞癌细胞迁移和侵袭的影响及其作用机制。方法:通过数据库检索miR-21-3p的下游靶基因,GEPIA2数据库预测CCT4在食管鳞癌中的表达和对食管鳞癌患者预后的影响,培养食管鳞癌细胞TE-1、KYSE150,将miR-21-3p inhibitor、SiCCT4、Plenti-CMV-CCT4-GFP/Puro转染至TE-1和KYSE150细胞中,分为miR-21-3p inhibitor组和inhibitor NC组、SiCCT4组和SiNC组、Plenti-CMV-CCT4组和inhibitor+Plenti-CMV-CCT4组,采用qRT-PCR检测各组细胞中miR-21-3p和CCT4 mRNA的表达水平,Transwell迁移侵袭实验检测各组细胞的迁移及侵袭能力,Western blot检测转染后各组细胞CCT4蛋白的表达水平。结果:数据库预测结果显示CCT4在食管鳞癌中过表达,与食管鳞癌患者总体生存期相关,与miR-21-3p呈正相关。qRT-PCR显示miR-21-3p和CCT4在食管癌细胞相较于正常上皮细胞表达显著升高,且在抑制miR-...     

下调ERp57抑制食管癌细胞增殖、迁移和侵袭

目的:分析内质网驻留蛋白57(ERp57)在食管鳞癌组织中的表达情况以及下调ERp57对食管癌细胞TE-1生物学功能的影响。方法:GEPIA数据库分析食管癌中ERp57的表达;通过荧光定量PCR和Western blot检测临床食管癌标本及细胞株中ERp57的表达;利用shRNA沉默TE-1细胞内ERp57后,通过CCK8检测细胞增殖、TUNEL检测细胞凋亡、划痕检测细胞迁移、Transwell检测细胞侵袭。结果:食管癌组织中ERp57的mRNA和蛋白的表达水平均高于癌旁组织(P<0.05),食管癌细胞中ERp57的mRNA及蛋白的表达高于食管上皮细胞(P<0.05)。沉默ERp57使TE-1细胞的增殖能力减弱、凋亡比例增加,并减弱了TE-1细胞的迁移及侵袭能力。结论:沉默ERp57表达能够抑制食管癌细胞TE-1的增殖、迁移、侵袭,可为食管癌研究提供理论依据。     

Cdc42 小干扰RNA对结肠癌细胞恶性表型的影响

 目的 研究细胞周期分裂蛋白Cell division cycle 42(Cdc42)小干扰RNA(siRNA)对人结肠癌细胞恶性表型的影响. 方法 Western blot 检测五种结肠癌细胞系中Cdc42的表达。设计并合成靶向Cdc42编码区的三对siRNA及阴性对照RNA,应用Lipofectamine^TM2000分别转染结肠癌细胞系中高表达Cdc42的Lovo和SW620细胞,RT-PCR和Western blot分别检测48h后Cdc42 mRNA及蛋白的表达。Cell Counting Kit-8检测细胞的增殖能力,损伤刮擦实验和Transwell小室法分别检测细胞迁移与侵袭能力的变化。 结果 RT-PCR和 Western blot检测显示,Cdc42-siRNA能显著下调Cdc42 mRNA和蛋白水平,尤其Cdc42-siRNA1;siRNA处理后的肿瘤细胞增殖受到抑制,细胞迁移、侵袭能力也显著降低。 结论 Cdc42-siRNA可有效抑制结肠癌细胞的增殖、迁移和侵袭。提示Cdc42可能成为抑制结肠癌细胞增殖和转移新的分子靶点。     

miR -22抑制食管鳞状细胞癌细胞侵袭和转移

目的:探讨微小RNA-22(miR-22)对食管鳞状细胞癌细胞侵袭和转移的影响。方法:采用实时定量RT-PCR检测miR-22在食管鳞状细胞癌细胞系中的表达。过表达miR-22后应用Transwell小室、MTT增殖及划痕试验分析对食管鳞状细胞癌细胞侵袭和转移能力的影响。结果:在食管鳞状细胞癌细胞系中miR-22的表达比正常对照明显降低。此外,过表达miR-22可明显抑制食管鳞状细胞癌细胞系Eca109和TE-1细胞增殖、侵袭和转移能力。结论:miR-22作为肿瘤抑制小片段RNA可以抑制食管癌细胞的侵袭和转移。本研究有助于了解miR-22在食管鳞状细胞癌中的功能,为食管鳞状细胞癌治疗提供新靶点。     

siRNA干扰VRK1表达对食管癌细胞BANF1蛋白表达及增殖迁移能力的抑制作用

 目的 探讨小干扰RNA干扰VRK1表达对食管癌细胞株BANF1蛋白的表达及其增殖迁移能力的影响。方法 将VRK1 siRNA转染EC109和EC1细胞系干扰VRK1的表达， Western blot法检测VRK1siRNA干扰效率及siRNA干扰后食管癌细胞BANF1的表达。CCK-8实验和流式细胞术检测干扰VRK1表达后对细胞增殖能力的影响，Transwell细胞体外侵袭实验观察干扰前后细胞迁移能力的改变。结果 两株食管癌细胞VRK1 siRNA转染后，转染实验组VRK1蛋白表达分别下调62.40%和52.14%，同时BANF1蛋白表达分别下调24.51%和52.87%。转染12 h后，细胞增殖开始受到抑制，36 h抑制率最高，分别达19.41%、20.10%。VRK1和BANF1表达下调后，G1、G2期细胞比例下降，S期细胞比例上升。实验组细胞迁移个数下降，细胞迁移数和对照组相比差异有统计学意义（P<0.05）。结论 siRNA干扰VRK1表达后可降低食管鳞癌细胞BANF1蛋白的表达，使食管鳞癌细胞增殖周期阻滞在DNA合成期，分裂期细胞比例下降，抑制其增殖及迁移能力。     

小干扰RNA抑制CXCR4基因表达对人肺癌细胞体外侵袭力的影响

目的：研究趋化性细胞因子受体CXCR4小干扰RNA（small interference RNA，siRNA）对人肺癌细胞体外侵袭力的影响。方法：利用T7 RNA聚合酶体外合成CXCR4特异性siRNA，用脂质体转染A549细胞。于转染后72h采用RT-PCR方法检测CXCR4 mRNA水平，用Western印迹方法检测CXCR4蛋白质水平，用Boyden小室模型检测细胞体外侵袭能力的变化，通过MTT法测定细胞增殖能力，用FCM法检测细胞周期的分布情况。结果：转染CXCR4 siRNA 72h后，CXCR4 mRNA及蛋白质水平明显下调，细胞的体外侵袭力减弱，增殖活性降低，细胞周期分布无明显改变。结论：特异的siRNA能够有效下调CXCR4基因，降低人肺癌细胞体外侵袭能力。     

趋化性细胞因子受体CXCR4基因沉默对乳腺癌细胞体外侵袭和定向肺转移的影响

目的 利用RNA干扰技术下调趋化性细胞因子受体CXCR4基因的表达,探讨其沉默对乳腺癌细胞体外侵袭及肺转移潜能的影响.方法 设计合成CXCR4的特异性短发卡状RNA(shRNA),将其插入至pSilencer载体中,并将重组后的pSilencer质粒载体经脂质体包裹转染乳腺癌MDA-MB-231细胞株,抗性筛选稳定抑制CXCR4表达的永久细胞克隆.应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot法,检测shRNA对细胞内CXCR4基因表达的影响.利用Boyden小室模型检测细胞体外侵袭能力.二苯基溴化四氮唑蓝(MTT)法检测细胞的增殖状况.通过裸鼠尾静脉瘤细胞注射方法,构建肺转移模型,检测CXCR4基因沉默对乳腺癌细胞肺转移能力的影响.结果 成功构建和筛选出CXCR4特异性的shRNA质粒载体,稳定转染CXCR4-shRNA的乳腺癌细胞的CXCR4 mRNA和蛋白的表达较空白对照组明显下调(29.5%±3.8%比69.7%±2.6%,15.4%±1.1%比39.0%±2.4%;均P<0.01),体外侵袭能力减弱,增殖速度减慢,肺转移能力下降.结论 以CXCR4为靶向的shRNA能够有效下调CXCR4基因的表达,降低人乳腺癌细胞体外侵袭、增殖以及肺转移的能力.CXCR4是乳腺癌侵袭和转移过程中的重要调控因子.     

Cdc42小干扰RNA对结肠癌细胞恶性表型的影响

目的 研究细胞周期分裂蛋白 Cell division cycle 42(Cdc42)小干扰RNA(siRNA)对人结肠癌细胞恶性表型的影响.方法 Western blot检测五种结肠癌细胞系中Cdc42的表达.设计并合成靶向CAc42编码区的三对siRNA及阴性对照RNA,应用Lipofectamine~(TM)2000分别转染结肠癌细胞系中高表达Cdc42的Lovo和SW620细胞,RT-PCR和Western-blot分别检测48 h后Cdc42 mRNA及蛋白的表达.Cell Counting Kit-8检测细胞的增殖能力,损伤刮擦实验和Transwell小室法分别检测细胞迁移与侵袭能力的变化.结果 RT-PCR和 Western blot检测显示,CAc42-siRNA能显著下调CAc42 mR-NA和蛋白水平,尤其Cdc42-siRNAl;siRNA处理后的肿瘤细胞增殖受到抑制,细胞迁移、侵袭能力也显著降低.结论 Cdc42-siRNA可有效抑制结肠癌细胞的增殖、迁移和侵袭.提示Cdc42可能成为抑制结肠癌细胞增殖和转移新的分子靶点.     

食管平滑肌瘤10例临床治疗体会

我院１９７５年６月～１９９０年７月共收治食管平滑肌瘤１０例，占同期食管肿瘤总数的０．１９２％（１０／１０９２）。位于食管上段２例，中段５例，下段３例。Ｘ线食管钡餐造影是诊断本病的主要方法。行食管粘膜外肿瘤摘除９例，食管部分切除１例，效果良好。本文就其诊断与手术治疗进行了讨论。     

仙人掌原液毒性的初步研究

背景与目的： 研究仙人掌原液的毒性。 材料与方法： 小鼠急性毒性试验、Ames试验、小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验、小鼠精子畸形试验、大鼠30 d喂养试验。 结果： 仙人掌原液雌、雄小鼠LD50均大于20.0 g/kg,属无毒物质;Ames试验、微核试验和精子畸形试验结果均为阴性;大鼠30 d喂养试验结果显示该样品30 d喂养对大鼠各项观察指标未见毒性作用。结论： 在本次实验条件下,仙人掌原液为无毒物质,未显示有遗传毒性和亚急性毒性作用。     

Assessment of the degree of carcinogenicity of small doses of nitrites

Chronic experiments on CBA and C57B1 mice and acute experiments on CBA mice established: (a) carcinogenic effect of sodium nitrite given continuously with drinking water (0.1; 1.0 and 10.0 maximum allowable concentration) in combination with morpholine fed with bread, and (b) endogenous synthesis of nitrosomorpholine as a result of simultaneous intragastric administration of same doses of sodium nitrite and morpholine. Also, nitrosomorpholine and N-nitrosodimethylamine synthesis was observed in vitro following addition of low-dose sodium nitrite, morpholine and amidopyrine to human gastric juice. Carcinogenic hazard associated with low-dose nitrite consumption in humans is discussed.     

仙人掌原毒性的初步研究

背景与目的:研究仙人掌原液的毒性。材料与方法:小鼠急性毒性试验、Ames试验、小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验、小鼠精子畸形试验、大鼠30 d喂养试验。结果:仙人掌原液雌、雄小鼠LD50均大于20.0 g／kg,属无毒物质;Ames试验、微核试验和精子畸形试验结果均为阴性;大鼠30 d喂养试验结果显示该样品30 d喂养对大鼠各项观察指标未见毒性作用。结论:在本次实验条件下,仙人掌原液为无毒物质,未显示有遗传毒性和亚急性毒性作用。     

中晚期贲门癌148例的外科治疗

目的　总结贲门癌手术治疗影响生存率的因素 ,提供今后工作参考。方法　对 14 8例经手术治疗的贲门癌患者进行术后并发症、绝对生存率的X2 检验。结果　本组切除率为 94.5 9% ,近半胃切除占 72 .14 % ,1、3、5年生存率分别为 67.9%、45 %和 2 4.3 %。病期、外侵程度和淋巴结转移等因素对 5年生存率有显著影响 (P <0 .0 1)。术后并发症以吻合口瘘及肺癌并发症为多见 ,其发生率为 3 .6% ,手术死亡率 1.4%。结论　提高生存率的关键在于早期诊断 ,根治手术和术后积极综合治疗。     

胆囊癌29例分析

目的探索胆囊癌的防治方法。方法分析29例胆囊癌病人临床资料、治疗方法及结果。结果术前诊断明确者21例，剖腹探查发现已属晚期，9例为Ⅳ期行根治术，12例为Ⅴ期未行根治术，均于术后1年内死亡。术前怀疑胆囊癌者5例，剖腹探查冰冻切片证实为Ⅴ期及Ⅳ期者各1例，Ⅴ期未行根治术，Ⅳ期行根治术，均于术后1年内死亡；Ⅲ期者3例，行胆囊癌根治术分别于术后10月、13月、17月死亡。2例术中冰冻切片发现的Ⅱ期胆囊癌，行胆囊癌根治术，分别于术后23月、26月死亡。1例意外胆囊癌属Ⅰ期胆囊癌，术后5年半死亡。结论要减少胆囊癌危害，重在及时治疗胆囊结石。