肌成束蛋白-1表达对肝癌细胞增殖及细胞骨架的影响

目的研究肌成束蛋白-1(Fascin-1)表达对肝癌细胞HepG2增殖能力和骨架结构的影响。方法采用RNA干扰技术抑制HepG2中Fascin-1表达;噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖;免疫荧光法检测Fascin-1表达下调后肌动蛋白微丝的改变。结果 RNA干扰可有效抑制HepG2中Fascin-1表达。Fascin-1蛋白表达下调可抑制细胞增殖,同时引起细胞微丝排列紊乱、断裂、网状结构消失呈絮状,部分细胞收缩。结论 Fascin-1下调引起的肌动蛋白微丝的破坏,一方面可能导致了癌细胞增殖抑制,另一方面可能通过影响细胞运动能力而降低细胞的迁移侵袭能力。     

芦荟大黄素对高转移乳腺癌细胞MDA-MB-231体外转移潜能的影响

目的研究芦荟大黄素(Aloe emodin,AE)对人高转移乳腺癌细胞MDA-MB-231体外转移潜能的影响及其作用机制。方法 MTT法检测AE对MDA-MB-231细胞增殖的抑制作用;Transwell chamber法检测AE对MDA-MB-231细胞侵袭重组基底膜能力和趋化性运动能力的影响;RT-PCR、Western blot法检测AE对MDA-MB-231细胞黏着斑激酶(FAK)mRNA和蛋白表达的影响。明胶酶谱法检测MDA-MB-231细胞分泌的基质金属蛋白酶-9(MMP-9)活性。结果 80μmol·L-1 AE抑制MDA-MB-231细胞体外侵袭重组基底膜能力、趋化性运动能力,其抑制率分别为(52.98±5.46)%,(45.88±8.51)%。作用于MDA-MB-231细胞24 h后,AE下调FAK mRNA和蛋白表达,下调MDA-MB-231细胞分泌MMP-9。结论 AE抑制MDA-MB-231细胞体外侵袭能力、趋化性运动能力,其作用机制与其下调FAK表达和MMP-9的分泌有关。     

慢病毒介导的性别决定区 Y框蛋白 9表达下调对抑制 Wnt信号通路调控乳腺癌细胞侵袭能力的影响

目的研究慢病毒介导的性别决定区 Y框蛋白 9(SOX9)表达下调对抑制 Wnt信号通路调控乳腺癌细胞侵袭能力的影响。方法以 Wnt信号通路抑制剂 XAV939处理乳腺癌细胞 MDA?MB?436,噻唑蓝( MTT)法测定细胞增殖活性,蛋白质免疫印迹(Western blot)检测细胞中 SOX9蛋白及 Wnt信号通路蛋白 β?连环蛋白( β?catenin)、下游靶基因 c?myc表达水平。 SOX9 siRNA慢病毒感染 MDA?MB?436细胞, Realtime PCR和蛋白质印迹法检测干扰效果。细胞划痕实验测定细胞迁移能力, Transwell小室检测细胞侵袭能力,蛋白质印迹法检测细胞中基质金属蛋白酶 ?2(MMP?2)和上皮间质转化( EMT)相关蛋白上皮性钙黏附素(E?cadherin)、神经性钙黏附素( N?cadherin)表达水平。结果 XAV939能够下调 MDA?MB?436细胞增殖活性,抑制乳腺癌细胞中 SOX9蛋白表达,降低 Wnt信号通路蛋白 β?catenin、c?myc表达水平。 SOX9 siRNA慢病毒感染后的 MDA?MB?436细胞中 SOX9 mRNA和蛋白水平降低。下调 SOX9的 MDA?MB?436细胞侵袭数目从( 85.56±4.35)降低至( 64.15±3.25)迁移率从(74.16±6.25)%降低至( 54.12±3.96)%,细胞中 MMP?2蛋白水平降低, E?cadherin蛋白水平升高, N?cadherin蛋白水,平降低。 XAV939也能够下调 MDA?MB?436细胞侵袭数目从( 85.56±4.35)降低至( 51.23±2.87)迁移率从( 74.16±6.25)%降低至( 45.28± 3.59)%,抑制细胞中 MMP?2蛋白表达,促进 E?cadherin蛋白表达,下调 N?cadherin蛋白表,达水平。 XAV939处理下调 SOX9的 MDA?MB?436细胞,细胞侵袭数目降低至( 34.18±2.59)迁移率降低至( 24.78±1.68)%,细胞中 MMP?2蛋白表达水平下降更多, E?cadherin蛋白水平升高更多, N?cadherin蛋白水平下多。结论抑制 Wnt信号通路下调乳腺癌细胞中 SOX9的表达水平,降更,敲低其表达能够协同 Wnt信号通路抑制剂降低乳腺癌细胞侵袭迁移能力。     

半边旗提取物5F对高转移卵巢癌细胞HO-8910PM侵袭转移的影响

目的研究半边旗提取物5F(以下简称5F)对人高转移卵巢癌细胞HO8910PM转移相关能力的影响及其作用的机制。方法以MTT法检测5F对高转移卵巢癌细胞HO8910PM细胞增殖的影响;以细胞粘附人工重组基底膜实验检测5F对HO8910PM细胞粘附能力的影响;用Transwell小室法检测5F对HO8910PM细胞的侵袭能力和趋化运动能力的影响;Westernblot法检测5F对HO8910PM细胞NFκB(P65)和VEGF蛋白表达的影响。结果50μmol·L-1的5F作用细胞6h后能抑制HO8910PM细胞体外侵袭人工基底膜、趋化运动和粘附能力,抑制率分别为(37.57±0.62)%,(28.42±0.67)%,(46.07±4.49)%;5F能明显下调HO8910PM细胞中NFκB(P65)和VEGF蛋白的表达。结论5F能抑制高转移卵巢癌细胞HO8910PM的侵袭、运动和粘附能力。5F抗肿瘤侵袭转移的作用机制与NFκB(P65)和VEGF蛋白的表达下调有关。     

TMPRSS4基因沉默对甲状腺滤泡状癌细胞侵袭能力的影响

目的 观察TMPRSS4基因沉默在甲状腺癌WRO细胞体外侵袭能力的影响.方法 构建慢病毒载体转染甲状腺癌WRO细胞,分为三组:空白对照组(正常WRO细胞),NC-ShRNA阴性对照组,TMPRSS4-ShRNA组.使用Western Blot方法检测转染后细胞的TMPRSS4表达,确定转染效果.采用Transwell法观察细胞体外侵袭力的改变.结果 Western Blot结果显示转染组TMPRSS4蛋白表达显著低于阴性转染组及空白对照组.侵袭实验结果提示TMPRSS4基因沉默组相比于空白对照组和阴性对照组侵袭穿膜细胞数显著减少(P＜ 0.05).结论 下调TMPRSS4表达可有效减少甲状腺癌WRO细胞的侵袭能力.     

Rho GTP酶在姜黄素抑制人肺癌细胞增殖和转移中的作用

目的 探讨姜黄素对人肺癌细胞株(A549)增殖和转移的影响,并通过检测姜黄素对细胞内Rho GTP酶蛋白表达及细胞骨架重组的影响,揭示Rho GTP酶在姜黄素抑制肺癌转移中的作用。方法 应用MTT法观察姜黄素对A549增殖能力的影响,体外侵袭实验和迁移实验观察姜黄素对肺癌细胞转移的影响。Western blot和半定量RT-PCR法分别检测姜黄素对与细胞骨架重组相关的RhoA,Rac1,Cdc42蛋白和mRNA表达的影响。免疫荧光细胞化学法标记微丝,激光共聚焦扫描显微镜观察姜黄素对细胞骨架重组的影响。结果 姜黄素能抑制A549细胞增殖,增殖抑制率均随处理浓度增大和作用时间延长而增加。与对照组比较,2.5,5 μmol·L^-1的姜黄素处理24 h后的A549细胞增殖抑制率较低,但体外侵袭和迁移能力均显著下降(P<0.01)。姜黄素能显著下调RhoA,Rac1,Cdc42蛋白和mRNA表达(P<0.01),并能明显影响细胞内微丝骨架的结构和分布。结论 姜黄素可通过下调 Rho GTP 酶基因表达,调控肺癌细胞微丝骨架结构,进而抑制体外增殖和转移能力。     

二烯丙基二硫抑制人胃癌SGC7901细胞侵袭及相关机制

目的探讨二烯丙基二硫(diallyl disulfide,DADS)对人胃癌SGC7901细胞迁移和侵袭的影响及其分子机制。方法划痕愈合和侵袭实验检测DADS对SGC7901细胞迁移与侵袭能力的影响;RT-PCR、Western blot检测DADS作用SGC7901细胞后MMP-9和TIMP-3表达。结果划痕实验结果显示,15 mg.L-1DADS处理SGC7901细胞12 h、24 h后,较未处理组划痕距离明显增加(P<0.05),表明DADS可抑制SGC7901细胞迁移。Transwell实验结果显示,15 mg.L-1DADS处理SGC7901细胞12 h与24 h后,穿膜细胞数分别为(31.9±0.46)、(23.5±0.52)个,较未处理组的(51.6±0.68)、(41.3±0.72)个明显减少(P<0.05),表明DADS可抑制SGC7901细胞侵袭能力。RT-PCR结果显示,15 mg.L-1DADS处理SGC7901细胞12 h与24 h后,MMP-9 mRNA表达明显下调(P<0.05),而TIMP-3 mRNA表达明显上调(P<0.05)。Western blot结果显示,15 mg.L-1DADS处理SGC7901细胞12 h、24 h、48 h后,MMP-9蛋白表达明显降低(P<0.05),而TIMP-3蛋白表达明显增加(P<0.05)。结论 DADS可抑制人胃癌SGC7901细胞迁移与侵袭能力,其机制可能与下调MMP-9和上调TIMP-3有关。     

核糖核酸干扰下调ACE蛋白表达对胰腺癌细胞运动侵袭能力的影响

目的观察血管紧张素转换酶(ACE)下调对胰腺癌细胞株SW1990运动侵袭能力的影响。方法设计并体外合成靶向ACE的小干扰RNA,将其转染到SW1990细胞中,蛋白质印迹法检测转染前后细胞中ACE蛋白的表达,采用Transwell小室检测转染前后细胞运动侵袭能力的改变。结果 ACE siRNA能有效降低SW1990细胞中ACE的表达。抑制SW1990细胞中ACE的表达后,SW1990细胞的运动能力明显下降,穿过人工基底膜的细胞数显著低于对照组(P<0.05)。结论核糖核酸干扰下调ACE表达能明显抑制胰腺癌细胞SW1990在体外的运动侵袭能力。     

多硫代二酮哌嗪类化合物1004体外对MDA-MB-231细胞转移能力的影响及机制研究

摘要：目的 检测多硫代二酮哌嗪类化合物1004体外对三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞转移能力的影响,并初步研究其作用机制。方法 利用磺酰罗丹明染色法（SRB）检测1004作用于MDA-MB-231细胞24和72 h的细胞毒活性;细胞粘附实验检测1004对MDA-MB-231细胞外基质粘附的影响;划痕实验和Transwell侵袭实验,分别检测1004对MDA-MB-231细胞迁移和侵袭的影响;明胶酶谱法检测1004对MDA-MB-231细胞基质金属蛋白酶MMP9活性的影响;Western Blot检测1004对MDA-MB-231细胞N-cadherin、Snail、c-Myc和FGFR1的蛋白表达的影响,检测AKT和ERK表达和活化水平。结果 1004作用于MDA-MB-231细胞72 h的IC50为（6.28±1.25）μmol?L-1,而1004作用于MDA-MB-231细胞24 h的IC50超过100 μmol?L-1。1004作用于MDA-MB-231细胞可增加细胞粘附,并抑制细胞的迁移和侵袭。1004可以显著降低N-cadherin、c-Myc 及Snail 的表达水平,并抑制MMP9 的活性。1004 作用于MDA-MB-231细胞可以浓度依赖性地引起FGFR1的表达下调,并抑制下游ERK和AKT 的活化。结论 1004体外对MDA-MB-231细胞具有转移抑制活性,其机制可能与下调FGFR1的蛋白水平并抑制FGFR信号通路有关。     

B7-H4在肝癌组织中的表达及其对肝癌细胞侵袭、迁移的影响

目的 探讨新型共刺激分子B7-H4在肝癌组织中的表达情况及其对肝癌细胞侵袭和迁移的影响。方法 (1)收集2013年8月至2019年1月昆明医科大学第二附属医院肝癌组织32例;(2)筛选肝癌细胞系Hep3B,SMMC-7721,Huh-7,PLC/PRF/5等细胞的B7-H4表达情况;(3)筛选并培养高表达的该基因的肝癌细胞株,并使用预先制备好的慢病毒载体抑制该基因表达,将处于对数生长期的高表达的B7-H4肝癌细胞分为对照组、shRNA-1抑制组、shRNA-2抑制组,采用Western Blot(WB)法及实时荧光定量PCR法检测各组B7-H4的相对表达量;采用Tranwell细胞侵袭实验观察各组细胞侵袭能力;采用细胞划痕实验观察各组细胞迁移能力。结果 在临床样本中,B7-H4在肝癌组织中的表达明显高于癌旁组织,且肝癌中B7-H4表达越高,病人越容易复发。HCCLM3的Western Blot相对表达量,对照组(5.32±1.03)、shRNA-1组(1.42±0.29)、shRNA-2组(2.06±0.68),shRNA-1组、shRNA-2组均被抑制,shRNA-1组抑制明显(P＜0.05)。HCCLM3对照组的细胞数为(365±21)、shRNA-1组(128±8);PLC/PRF/5组的细胞数为(267±44)、shRNA-1组(79±12)。与对照组相比较,shRNA-1组可明显抑制HCCLM3和PLC/PRF/5的细胞侵袭能力(P＜0.01)。HCCLM3对照组的细胞迁移率为(82%±13%)、shRNA-1组(44%±6%);PLC/PRF/5对照组细胞迁移率为(77%±9%)、shRNA-1组(41%±6%)。与对照组比较,shRNA-1组明显抑制HCCLM3和PLC/PRF/5的细胞迁移能力(P＜0.05)。转染抑制该基因后其相对表达量、细胞侵袭能力、迁移能力均下降。结论 B7-H4有望成为新的肝癌预后标志物,下调肝癌细胞B7-H4的表达可以减弱肝癌细胞侵袭和迁移能力。     

CCR10 activation stimulates the invasion and migration of breast cancer cells through the ERK1/2/MMP-7 signaling pathway

CCR10, a member of the chemokine receptor subfamily, is overexpressed in several tumors and play a crucial role in cancer development and progression. However, the functions of CCR10 in breast cancer are unknown. Here, we detected the protein levels of CCR10 in breast cancer cells by western blotting, and examined CCR10 expression in breast cancer tissues via immunohistochemical assay. The results showed that CCR10 expression was elevated in breast cancer MCF7, BT-474 and MDA-MB-231 cells. Further, 63 of 89 cases (70.8%) had positive CCR10 staining, and the CCR10 level was closely related to capsular invasion, lymph node metastasis and tumor stage. Moreover, CCL27, the ligand of CCR10, dose-dependently stimulated the invasion and migration of breast cancer cells, and promoted MMP-7 expression and ERK1/2 activation. CCR10 knockdown in breast cancer cells through siRNA transfection attenuated CCL27-induced cell invasiveness, and suppressed MMP-7 expression and ERK1/2 activation. Additionally, blocking the ERK1/2 pathway inhibited the CCL27/CCR10-promoted cell invasion of breast cancer cells. Together, these data suggest that CCL27/CCR10 interaction induces the ERK1/2 pathway, which then increases MMP-7 expresion and subsequently promotes breast cancer cell invasion and migration. Thus, CCR10 may be a key regulator in breast cancer cell invasion and migration.     

miR-96在人乳腺癌中表达及其对乳腺癌细胞侵袭和迁移活性的影响

目的研究miR-96在人乳腺上皮细胞株和乳腺病变组织中表达状况及其对人乳腺癌细胞增殖、侵袭和迁移的影响。方法抽提4株人乳腺上皮细胞系和28例人乳腺病变新鲜组织总miRNA,实时定量PCR方法检测它们miR-96的表达状况;脂质体介导的转染方法将miR-96抑制物转染人乳腺癌MCF-7细胞株;通过MTS试剂盒检测细胞增殖能力,Transwell侵袭和迁移实验检测细胞侵袭及迁移能力。结果miR-96在高侵袭乳腺癌细胞株中表达较低侵袭乳腺细胞明显下调(P<0.01);人乳腺癌组织中miR-96表达较乳腺良性病变组织明显下调(P<0.01);miR-96抑制物转染乳腺癌MCF-7后,乳腺癌细胞侵袭和迁移活力较阴性对照组细胞明显增强(P<0.05),而细胞增殖活力改变无统计学意义(P>0.05)。结论 miR-96在人乳腺癌细胞株和乳腺癌组织中存在表达下调,并对人乳腺癌细胞的侵袭及迁移能力可能存在一定负性调控作用。     

circ_0000264促进乳腺癌细胞增殖、迁移和侵袭

目的 探讨环状RNA circ_0000264在乳腺癌细胞增殖、迁移和侵袭中的功能及作用机制。方法 采用qRT-PCR检测乳腺癌组织和细胞系中circ_0000264的表达;利用si-circ_0000264构建敲低circ_000026的细胞模型;分别采用CCK-8、BrdU和Transwell实验检测细胞的增殖、迁移和侵袭;采用双荧光素酶报告基因实验验证circ_0000264与miR-622的靶向调控关系。结果 circ_0000264在乳腺癌组织和细胞中均呈高表达（P<0.05）。与对照组相比,敲低circ_0000264可抑制乳腺癌细胞的增殖、迁移和侵袭（P<0.05）。circ_0000264对miR-622具有吸附作用。下调miR-622可部分逆转敲低circ_0000264对乳腺癌细胞增殖和转移的抑制作用。结论 circ_0000264在乳腺癌进展过程中发挥促进作用;circ_0000264通过负向调控miR-622促进乳腺癌细胞的增殖、迁移和侵袭。     

肿瘤相关钙信号传导蛋白-2基因对乳腺癌细胞转移能力的影响

目的探讨TROP-2基因小干扰RNA（siRNA）对乳腺癌细胞黏附和侵袭力的影响。方法培养人乳腺癌Bcap-37、LCC1、MCF-7、MDA-MB-231、MDA-MB-435、MDA—MB-468及ZR75-1细胞株,以荧光实时定量PCR方法检测TROP-2基因mRNA表达;筛选出TROP-2表达最高者。采用TROP-2基因小干扰RNA转染乳腺癌细胞,分别以荧光实时定量RT-PCR和免疫荧光方法观察TROP-2基因mRNA和蛋白水平,然后以四唑蓝（MTT）比色法检测细胞黏附性,以Transwell方法检测癌细胞侵袭能力。结果7株乳腺癌细胞中,TROP-2均有不同程度的表达,以MCF-7细胞最高;以TROP-2siRNA转染乳腺癌MCF-7细胞后,癌细胞TROP-2基因mRNA和蛋白水平明显下降,且呈浓度依赖性;黏附试验结果显示,5、10、20nMsiRNA组黏附率分别为（52．9±2．5）％、（25．6±2．3）％、（12．8±2．2）％（P〈0．01）;Transwell试验结果显示,5、10和20nMsiRNA组穿过滤膜的细胞分别为（78±17）、（39±15）、（19±16）,而对照组分别为（136±25）、（139±21）（P〈0．01）。结论TROP-2基因在乳腺癌细胞黏附和侵袭中发挥着重要作用;以siRNA转染乳腺癌细胞,可抑制乳腺癌细胞黏附和侵袭能力。     

人参皂苷Rh2与P13K/AKT信号通路抑制剂LY294002对乳腺癌细胞转移和侵袭的影响

目的：研究人参皂苷Rh2（GensenosideRh。）与磷脂酰肌醇-3-激酶／丝苏氨酸蛋白激酶（P13K／AKT）信号通路抑制剂LY294002对乳腺癌细胞转移和侵袭的影响。方法：试验分为对照（空白培养液）组、人参皂苷Rh2（80μmol／L）组、LY294002（50gmol／L）组与人参皂苷Rh2（80gmol／L）＋LY294002（50gmol／L）组。人参皂苷Rh：与LY294002体外作用于人乳腺癌细胞MCF7／Adr,Westernblot法检测细胞基质金属蛋白酶（MMP）2、P-糖蛋白（P-gP）、丝苏氨酸蛋白激酶（AKT）、磷酸化丝苏氨酸蛋白激酶（p-AKT）蛋白表达;黏附试验观察细胞与基底膜的黏附力,Transwell法观察细胞侵袭能力和迁移能力。结果：与对照纽比较,人参皂苷Rh2组、LY294002组与人参皂苷Rh2＋LY294002组p—AKT、P—gP、MMP．2蛋白表达显著减弱,细胞与基底膜的黏附力、细胞迁移能力与侵袭能力显著减弱（P〈0．05）;人参皂苷Rh2＋LY294002组与人参皂苷Rh2组、LY294002组比较以上指标差异具有统计学意义（P〈0．05）。结论：抑制P13K／AKT信号通路可有效降低MCF7／Adr侵袭迁移能力,P13K／AKT通路是调控乳腺癌侵袭迁移的重要信号通路之一。     

姜黄素通过调控miR-7641/PTPN14分子轴抑制乳腺癌发展进程的分子机制研究

目的 探讨姜黄素通过调控miR-7641/PTPN14分子轴抑制乳腺癌发展进程的分子机制。方法 采用实时荧光定量PCR（qRT-PCR）检测乳腺癌患者癌组织及细胞系中miR-7641表达情况;使用Kaplan-Meier方法作乳腺癌患者生存曲线;采用不同浓度的姜黄素处理细胞,或转染miR-7641 mimic、Anti-miR-7641及pcDNA-PTPN14载体,采用qRT-PCR检测miR-7641表达情况,MTT实验及克隆形成实验检测细胞增殖能力,Transwell小室法检测细胞迁移及侵袭,western blotting检测Ki67、pcDNA、CyclinD1、Bax、Bcl-2、caspase-3、caspase-8蛋白表达水平,采用双荧光素酶报告基因系统检测miR-7641与PTPN14靶向调控关系。结果 与癌旁组织或乳腺正常上皮细胞比较,miR-7641在乳腺癌患者癌组织及乳腺癌细胞系中高表达（P<0.01、0.001）,且miR-7641能够明显促进乳腺癌细胞的增殖、迁移及侵袭（P<0.05、0.01、0.001）,并促进Ki67、pcDNA、CyclinD1、Bcl-2蛋白表达,抑制Bax、caspase-3、caspase-8蛋白表达;miR-7641与PTPN14 3''-UTR靶向结合,姜黄素通过miR-7641/PTPN14分子轴抑制乳腺癌细胞的增殖、迁移及侵袭（P<0.01、0.001）,并抑制Ki67、pcDNA、CyclinD1、Bax蛋白表达,促进Bcl-2、caspase-3、caspase-8蛋白表达。结论 姜黄素可通过下调miR-7641促进PTPN14表达,进而抑制乳腺癌细胞的增殖、迁移及侵袭。     

肝素结合细胞因子影响乳腺癌细胞的增殖、侵袭和上皮细胞间质化的功能研究

目的 探讨肝素结合细胞因子(Midkine)的表达对乳腺癌细胞的增殖和侵袭的作用.方法 采用慢病毒介导的shRNA干扰技术在乳腺癌细胞中沉默Midkine的表达,及利用慢病毒高表达Midkine基因在正常乳腺表皮细胞中.利用蛋白质印迹(Western blot)法检测shRNA干扰或高表达后的正常乳腺表皮细胞和乳腺癌细胞中Mid-kine蛋白的表达情况.利用流式细胞仪技术、Transwell小室实验、及细胞划痕实验,分析Midkine基因高低表达对正常乳腺表皮细胞和乳腺癌细胞生长、增殖、侵袭及转移的影响.结果 首先观察了不同乳腺癌细胞中Midkine的表达情况.其中Midkine只有在BT549、MDA-MB157和MDA-MB436间充质乳腺癌细胞(Mesenchymal cell)中表达,而正常细胞和上皮细胞乳腺癌细胞(Epithelial cell)中不表达.BT549细胞中两种不同shRNA降低Mdikine蛋白表达的效率分别达到100%和90%.HMLE正常乳腺上皮细胞中Midkine高表达效率非常高.结晶紫染色法检测细胞增殖实验结果显示,Midkine-shRNAs转染组BT549细胞的生长速度较阴性对照组降低(P<0.01).流式细胞仪检测结果显示,Midkine-shRNAs转染组BT549细胞的增殖指数为(36.06±2.12)%和(32.06±3.46)%,明显低于对照组53.06±3.68%.同时观察到EMT标识物B连环蛋白(β-catenin)、N钙粘蛋白(N-cadherin)在Midkine-shRNAs转染组BT549细胞中表达上调.Transwell小室实验显示两个Midkine-shRNA转染组BT549细胞迁移(Migration)细胞数为零和(7±4.4)个高/倍视野,它们的侵袭(Invasion)细胞数为(38±7)和(46±8)个/高倍视野,明显低于对照组的迁移(Migra-tion)细胞数(178±14)个/高倍视野,侵袭(Invasion)细胞数(232±35)个/高倍视野.同时也观察到高表达Midkine正常乳腺上皮细胞表现出间质化(EMT)的表型,EMT标识物E钙粘蛋白(E-cadherin)、连环蛋白(β-catenin)在Midkine高表达HMLE细胞中表达下调的现象.细胞划痕实验显示Midkine高表达HMLE细胞组的迁移距离明显高于对照组.结论 在BT549细胞中降低Midkine的表达,可抑制BT549细胞的迁移和侵袭,同时可明显上调对上皮细胞间质化标志蛋白β-catenin和N-cadherin表达,提示在Midkine高表达的肿瘤患者中,通过抑制其蛋白表达可能抑制肿瘤的转移和侵袭.     

去甲斑蝥素对CXCR4表达及MCF-7细胞迁移的影响

目的探讨去甲斑蝥素(NCTD)抑制乳腺癌细胞MCF-7侵袭转移的机制。方法体外培养人乳腺癌MCF-7细胞株,采用MTT法检测NCTD对MCF-7细胞增殖抑制浓度;建立体外细胞趋化转移模型分析200,400,600μmol/LNCTD抑制MCF-7细胞迁移的能力;realtime PCR、Western blot分析不同浓度药物处理后的MCF-7细胞中CXCR4及CXCL12表达。结果NCTD可抑制MCF-7细胞增殖,具有明显的量效关系,24h的IC50为582μmol/L;在体外条件下,NCTD可以抑制CXCL12所趋化的细胞迁移;同时可以抑制MCF-7细胞中的CXCR4表达。结论NCTD通过下调CXCR4的表达抑制乳腺癌细胞MCF-7的迁移。