防御素2在肝内胆管结石病中的抗菌作用

目的探讨人防御素2(HBD2)在肝胆管结石病中的抗菌作用。方法应用免疫组织化学方法和RT-PCR检测肝内胆管结石患者手术切除肝组织标本HBD2的表达情况。比较胆汁培养为革兰阴性及阳性菌组的HBD2表达的强弱,左右肝组织HBD2表达的强弱,分析HBD2表达与急性生理功能和慢性健康状况评分系统(ARACHEⅡ)评分的关系。结果 HBD2在部分肝内胆管结石的胆管间质细胞胞浆中表达,革兰阴性菌组的肝组织HBD2表达强于革兰阳性菌组,左肝部位HBD2的表达强于右肝部位,ARACHEⅡ高分组的HBD2表达强于低分组。结论 HBD2在肝胆管结石病肝组织中起到抗菌作用,其表达强度与革兰阴性菌和ARACHEⅡ评分正相关。     

人β-防御素4基因在HEK293细胞中的转染表达

目的人β-防御素4(humanβ-defensin 4,HBD 4)对多种病原菌有杀伤作用。HBD4的自然表达水平极低,体外获得难度较大且价格昂贵。利用基因工程技术生产重组的HBD4成为研究的焦点。文中旨在构建HBD4真核表达载体,探讨真核细胞表达HBD4的可行性。方法用PCR法从已构建的重组克隆载体pMD18-T/HBD4中扩增出HBD4全长编码基因,克隆入真核表达载体pEGFP-N2,构建pEGFP-N2/HBD4重组真核表达载体;通过脂质体转染法将pEGFP-N2/HBD4导入HEK293细胞,采用RT-PCR、荧光显微镜、Western blot检测HBD4的mRNA和蛋白表达情况,并对表达的HBD4进行抗菌活性的初步研究。结果构建的重组真核表达载体pEGFP-N2/HBD4,经酶切鉴定、测序,证实插入的序列与Genebank中的HBD4基因序列完全相同。将pEGFP-N2/HBD4转染HEK293细胞,在转染细胞检测到HBD4mRNA表达。荧光显微镜下可在细胞膜及细胞质中观察到绿色荧光。Western blot分析显示:在pEGFP-N2/HBD4转染的HEK293细胞及细胞培养液中检测到了HBD4蛋白的表达。Kirby—Bauer纸片扩散法证实表达的HBD4蛋白对铜绿假单胞菌具有较强的杀伤作用。结论成功构建了HBD4基因的真核表达载体,并在HEK293细胞中表达出具有抗菌活性的HBD4多肽。     

肺泡Ⅱ型上皮细胞功能的研究进展

 肺泡Ⅱ-型上皮细胞(alveolar epithelial type Ⅱ cell,AT2)是构成哺乳类动物肺泡上皮的主要细胞之一,是合成和分泌肺泡表面活性物质的主要细胞。近年来研究发现其合成和分泌功能受多种体液及环境因素的影响和调控,并涉及多种相关基因、蛋白及信号通路。AT2具有增殖、分化及修复功能,其异常转分化可能与肺纤维化及肿瘤发生有关。AT2在维持肺泡内液体平衡中发挥重要作用,并受多种体液与炎症因子调控,可能参与肺损伤和肺水肿的病理过程。AT2参与固有免疫及免疫调节机制,可向T细胞呈递抗原并调节T细胞的分化。对肺泡Ⅱ 型上皮细胞功能的研究有助于理解肺泡生理功能和多种肺部疾病的发病和病理过程,对其功能调节机制的研究在多种肺部疾病的防治中有临床应用前景。     

抗Her-2抗体与人β防御素Ⅱ融合蛋白的表达、纯化及活性鉴定

利用小分子泛素样修饰蛋白（small ubiquitin-like modifier,SUMO）融合表达系统,在大肠杆菌Origami B（DE3）中表达人β防御素Ⅱ（human β defensin 2,HBD2）与抗人表皮生长因子受体2（Her-2）单链抗体（4D5 scFv）的融合蛋白。经20 ℃,l mmol/L IPTG诱导24 h后,获得相对分子质量约为41 kD的SUMO-HBD2-4D5融合蛋白,为可溶性表达,表达量占菌体上清总蛋白的42.2%。利用组氨酸亲和凝胶色谱（Ni-NTA sepharose）、特异性SUMO蛋白酶（SUMO protease）酶切和分子筛（Sephadex G-25）联用的方法可获得纯度大于95%的目的蛋白HBD2-4D5,其最终得率达到15 mg/L。HBD2-4D5 200μg对金黄色葡萄球菌（ATCC25923）和大肠杆菌K12D31具有较明显的杀伤作用。免疫荧光分析结果显示,HBD2-4D5蛋白能结合于Her-2高表达的人乳腺癌细胞SK-BR-3表面。本实验表达的HBD2-4D5双功能蛋白具有较好的抗菌活性和特异性结合SK-BR-3表面Her-2的能力,为日后用于靶向治疗Her-2高表达的肿瘤疾病提供研究基础。     

重组人β防御素2在真皮多能干细胞中的表达及抗菌活性的测定

目的检测重组人Β防御素2(HUMANΒ-DEFENSIN2,HBD2)腺病毒表达载体在大鼠真皮多能干细胞(DERMALMULTIPOTENT STEM CELLS,DMSCS)中的表达,并观察重组HBD2的体外抗菌活性。方法将含有HBD2重组腺病毒转染DMSCS,RT-PCR、荧光免疫化学、WESTERN BLOTTING检测HBD2的表达情况,ELISA测定培养上清中HBD2的浓度,K-B纸片扩散法检测上清对大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌和铜绿假单胞菌等标准菌株的杀灭效果。结果RT-PCR、荧光免疫化学和WESTERNBLOTTING的结果显示转染后HBD2可在DMSCS中有效地表达,上清中HBD2的浓度为743.6NG/ML,K-B纸片法显示HBD2对上述标准菌株有明显的杀灭效应。结论HBD2重组腺病毒表达载体在DMSCS可高效表达,并对大肠埃希菌等标准菌株有杀灭效应。     

环状RNA在肺部疾病中的研究进展

肺部疾病是临床常见病,其发病率逐年升高且治疗难度日益增大,严重威胁人类的生命健康。高通量测序和基因芯片技术的长足发展使得被学术界忽略已久的环状RNA（circRNA）再度成为研究热点。CircRNA在生物体内均有广泛表达,对生物功能发挥着重要的调控作用,并具有高度的特异性、稳定性和保守性,在疾病的诊疗方面潜力巨大。本文总结了circRNA在肺部疾病中的研究进展,为肺部疾病的诊治提供一定的理论依据。     

人β-防御素基因在女性生殖道及妊娠相关组织中的表达

目的 检测人β－防御素（HBDs)基因在女性生殖道各段组织及妊娠相关组织中的表达。方法 采用逆转录聚合酶链反应（RT－PCR）检测正常女性生殖道各段组织及怀孕妇女妊娠相关组织中HBD－1，HBD－2的表达情况，用内参照β－actin的特异引物作RT－PCR。结果 细胞株ME－180表达HBD－1 mRNA，而不表达HBD－2mRNA；正常女性阴道，子宫颈，子宫内膜，输卵管和卵巢5种组织中均发现有HBD－1 mRNA的表达，除阴道，卵巢外的其余组织中也有HBD－2 mRNA的表达；绒毛膜，绒毛，羊膜，胎盘和脐带5种妊娠相关组织中，HBD－1 mRNA在除羊膜外的各组织中均有表达，而HBD－2mRNA则在绒毛膜，绒毛及胎盘组织中表达。结论 HBDs在正常妇女生殖道及妊娠相关组织中广泛表达，提示其在维系正常妇女及孕妇生殖道内环境稳定，宿主天然抗感染中起着重要的作用。     

单核细胞趋化蛋白1与肺部疾病

大部分肺部疾病的发生机制十分复杂,目前认为其病变的发生与发展是趋化因子、细胞因子和活性代谢产物等综合作用的结果。单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)是一种分泌型单链蛋白质,为趋化因子家族成员之一。目前的研究已经表明,MCP-1在肺损伤、肺血栓、肺纤维化、慢性阻塞性肺疾病、肺部肿瘤、肺结核等肺部疾病中发挥重大作用。现就其特点、功能及与这些肺部疾病的关系予以综述。     

新生儿低血糖脑损伤时的脑电图改变与临床预后关系分析

<正>新生儿低血糖脑损伤(HBD)属于危重疾病,小于胎龄儿、早产儿群体中发生率较高,且患儿出生后数小时至1周内出现非特异性的相关症状、体征~([1])。本研究探讨脑电图对HBD的监测以及预后作用,现报告如下。1资料与方法1.1临床资料:2014年6月至2016年6月,选择本院接收     

迷走神经与肺部疾病

 迷走神经支配人体的内脏器官,其传出纤维激活后可释放乙酰胆碱调节器官功能,而传入纤维能感知器官中机械和化学信号,并将其传入中枢,这种双向交流使得神经中枢能够反馈性调节器官功能。在呼吸系统中,迷走神经调节气道张力、血流供应、黏液分泌及呼吸型式。近来发现,迷走神经与免疫系统产生交互作用,在肺部疾病的发病机制中发挥重要作用,如哮喘、慢性阻塞性肺疾病(chronic obstructive pulmonary disease,COPD)、急性呼吸窘迫综合征(acute respirtory distress sydrome,ARDS)、肺纤维化和肺癌。在疾病状态下,多种细胞释放的细胞因子、化学因子和其他介质激活迷走神经,将免疫信息传到中枢,从而改变病程。激活迷走神经还可以释放神经肽调节免疫细胞的活动,并通过胆碱能抗炎通路控制肺部炎症,因此了解迷走神经在神经免疫反应中的作用对于肺部疾病的临床治疗有着重要意义。     

信号肽重组HBD2在人肺癌细胞中表达的初步研究

目的构建高表达人源化β-防御素2(HBD2)表达体系.方法构建人pLNCX2-CEA信号肽-HBD2(成熟肽)逆转录表达载体,DOTAP转染逆转录包装细胞,获得含融合基因的侵袭性逆转录病毒,再转染人肺癌A549细胞,用免疫印迹法鉴定转化细胞中HBD2蛋白的表达.结果成功构建了表达HBD2成熟肽的重组信号肽HBD2的人肺癌表达体系,经Western Blot检测,证实有目的基因表达.结论构建的人肺癌表达体系具有高表达HBD2的功能.     

人β防御素4基因的合成及其真核表达载体的构建

人类β防御素（human13defensin，HBD）是一类具有广谱抗微生物活性的小分子抗菌肽，具有杀伤细菌、真菌、病毒、原虫、肿瘤细胞以及免疫调节等多重活性，而且其作用机制独特，至今尚未发现病菌株对其产生耐药性，因此成为国内外众多学者研究的热点。目前发现的HBD有4种，即HBD1～4。已证实HBD4对多种病原菌有杀灭作用，尤其对现在耐药严重的肉葡萄球菌和绿脓杆菌有强大的杀菌作用，在上皮及黏膜尤其是呼吸道黏膜的防御、抵抗病原微生物感染方面起着重要作用。本研究拟通过人工合成HBD4基因并构建其真核表达载体，为HBD4基因的转染和表达以及抗菌治疗的研究奠定基础。     

程序性坏死在肺部疾病中作用的研究进展

程序性坏死是由死亡受体介导的不依赖于含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶的细胞死亡方式,与细胞凋亡不同,其具有坏死细胞的形态学特征。程序性坏死受自噬、细胞器和蛋白质转换调节,在心肌梗死、动脉粥样硬化、缺血再灌注损伤、炎性肠病和老年痴呆等多种临床疾病的病理生理中起重要作用。在肺部疾病(慢性阻塞性肺疾病、肺癌、肺部炎症和哮喘等)的发病过程中程序性坏死也起重要作用,其参与调控肺部疾病的发生发展。但程序性坏死与其他程序性细胞死亡的关系尚未阐明,未来需进一步研究。     

人β防御素3和γ干扰素在MAPK信号通路中的相互诱导及联合抗甲型流感病毒的机制

目的 探讨人β防御素3(HBD3)和γ干扰素(IFN-γ)在丝裂源活化蛋白激酶(MAPK)信号通路中相互诱导作用及体外联合抗甲型流感病毒(IAV)H1N1的作用。方法 不同剂量IFN-γ(12.5、25.0、50.0、100.0μg/L)或HBD3(0.25、0.50、1.00、2.00 mg/L)分别作用人支气管上皮细胞BEAS-2B 4、12、24、48 h,另设立p38 MAPK、ERK和JNK通路抑制剂预处理后、用IFN-γ(25.0μg/L)或HBD3(1.00 mg/L)处理BEAS-2B细胞4 h, qRT-PCR和ELISA检测HBD3及IFN-γ基因和蛋白表达,Western blot检测p-p38 MAPK、p-ERK、p-JNK蛋白表达;25.0μg/L IFN-γ、1.00 mg/L HBD3、HBD3 siRNA转染及IFN-γ中和抗体(0.50 mg/L)单独或联合作用BEAS-2B细胞、用5×TCID₅₀ H1N1感染,qRT-PCR和Western blot检测IAV核蛋白(NP)基因和蛋白的表达情况。结果 在BEAS-2B细胞中,...     

人β-防御素4基因在COS-7细胞中的转染表达

目的探讨人β-防御素4（HBD4）基因在真核细胞COS-7中表达的可能性。方法用脂质体转染法将实验室已构建的重组真核表达载体pcDNA3.1＋/HBD4导入COS-7细胞,采用RT-PCR、Western-blot法检测HBD4的mRNA和蛋白表达水平,并对表达的HBD4进行抗菌活性的初步研究。结果 pcDNA3.1＋/HBD4转染的COS-7细胞中检测到HBD4mRNA表达。Western blot分析显示,在pcDNA3.1＋/HBD4转染的COS-7细胞及细胞培养液中检测到了HBD4蛋白的表达。Kirby-Bauer纸片扩散法证实表达的HBD4蛋白对大肠杆菌ATCC25922具有较强的杀伤作用。结论在COS-7细胞中成功表达具有抗菌活性的HBD4多肽。     

过氧化物酶6肺部抗氧化应激研究进展

氧化应激诱导的肺泡上皮细胞凋亡和损伤在肺部疾病中的作用受到广泛的关注和重视。过氧化物酶6(peroxiredoxin 6, Prdx6)兼有谷胱甘肽(glutathione, GSH)过氧化物酶和磷脂酶A₂(phospholipase A₂, PLA₂)活性,能有效对抗氧化应激,减轻氧化应激诱导的肺部损伤,在肺部疾病中扮演重要角色。本文通过对Prdx6的结构、功能、分布、表达调控等方面进行回顾,并进一步结合相关实验研究,对Prdx6在肺部抗氧化过程中发挥的作用和调控机制等作一综述。     

血清HBD2和HBD3在肺炎支原体肺炎感染患儿中的表达水平及与免疫功能的关系

目的 分析肺炎支原体肺炎(MMP)感染患儿血清人类β-防御素2(HBD2)、HBD3的表达水平,并探讨其临床意义。方法 选择陵水县人民医院2020年1月-2022年6月接诊的100例MMP患儿作为观察组,其中重症28例,轻症72例;并纳入同期健康体检儿童100人作为对照组。比较观察组、对照组和观察组不同病情程度患儿血清HBD2、HBD3、IgA、IgG、T淋巴细胞亚群CD3⁺、CD4⁺、CD4⁺/CD8⁺的表达,并分析血清HBD2、HBD3和免疫功能的相关性。结果 观察组血清HBD2、HBD3分别为(114.59±14.06)pg/mL、(62.60±10.71)pg/mL,均高于对照组(78.69±11.83)pg/mL、(31.16±4.47)pg/mL,IgA、IgG和CD3⁺、CD4⁺、CD4⁺/CD8⁺分别为(1.16±0.18)g/L、(10.24±1.53)g/L、(53.28±5.86)%、(32...     

间充质干细胞治疗肺部疾病的研究进展

间充质干细胞(MSCs)是一种具有多项分化潜能的干细胞,可分化为多种组织细胞,并通过分化和旁分泌效应发挥组织修复、免疫调节、抗菌和抗凋亡等作用。目前,许多肺部疾病发病机制复杂且缺乏有效的治疗方法,而MSCs可对诸多肺部疾病产生治疗作用。因此,研究MSCs对肺部疾病的影响,从细胞和分子层面揭示其作用机制,将为肺部疾病的预防和治疗奠定临床前基础。     

HBD的N端融合蛋白的跨膜转导作用

研究人源性穿膜肽HBD的N端融合蛋白的跨膜转导作用。通过DNA重组技术将HBD融合在EGFP蛋白的氨基端（N端）,构建重组质粒pET28b HBD EGFP Histag,经IPTG诱导表达和Ni2+ NTA纯化,获得重组蛋白HBD EGFP。通过激光共聚焦显微镜定性观察及流式细胞仪定量检测发现,融合在EGFP氨基端的HBD跨膜转导效率比融合在EGFP羧基端（C端）的HBD转导效率提高了约10倍。实验结果表明,N端融合的HBD EGFP对于外源蛋白具有跨膜运输效果,且比C端融合的HBD具有更高的跨膜转导效率。该结果可为HBD在抗癌药物递送方面的有效应用提供理论依据。     

大蒜素对肺癌A549细胞株β防御素表达的影响

目的β防御素(hum an beta defensins,HBD)是人体产生的天然抗菌物质,本研究通过大蒜素对β防御素表达的影响,探讨大蒜素的免疫调节机制。方法采用含大蒜素的细胞培养液处理人肺癌A549细胞,观察其对A549细胞不同种类β防御素mRNA表达水平的影响。结果含5μg/mL的大蒜素细胞培养液可使HBD3 mRNA的表达上调,而对HBD2和HBD1的表达无显著影响。结论大蒜素可以使A549细胞HBD3的表达升高,这可能是大蒜素参与人体免疫调节,提高机体免疫力的机制之一。大蒜素处理后HBD3升高而HBD2水平,不变进一步证实了HBD3与HBD2的诱导表达途径不同。