HPLC法同时测定不同产地半夏中7种核苷类成分的含量

目的 建立高效液相色谱(HPLC)法同时测定不同产地半夏中鸟苷、胸腺嘧啶核苷、肌苷、尿苷、腺嘌呤、腺苷、尿嘧啶7种核苷类成分含量的方法。方法 采用C₁₈色谱柱(赛默飞,5μm, 4.6 mm×250 mm);流动相为乙腈(A)-0.05%磷酸溶液(B),梯度洗脱;流速1.0 ml/min;检测波长250 nm;柱温30℃;进样量10μl。结果 半夏中7种核苷类成分的分离度较好,鸟苷、胸腺嘧啶核苷、肌苷、尿苷、腺嘌呤、腺苷、尿嘧啶的线性方程分别为Y_鸟苷=11.851X+3.562 1、Y_{胸腺嘧啶核苷}=9.422X+0.191 5、Y_肌苷=11.619X+2.816 0、Y_尿苷=11.818X-1.405 1、Y_腺嘌呤=14.849X+0.510 9、Y_腺苷=16.471X+1.906 3、Y_尿嘧啶=14.758X+5.562 5;平均加样回收率分别为99.41%、98.70%、98.84%、98.37%、97.83...     

在线二维液相色谱法测定发酵虫草菌粉(Cs-4)中6种活性物质

目的:建立发酵虫草菌粉(Cs-4)中尿嘧啶、尿苷、腺苷、腺嘌呤、鸟苷、麦角甾醇6种活性物质的二维液相色谱测定方法。方法:采用二维液相色谱测定法,第一维色谱系统采用亲水相互作用色谱柱,第二维系统采用C₁₈色谱柱。样品经乙腈溶液提取,过滤后进样,5种核苷和碱基在第一维液相系统分离测定,麦角甾醇在第二维液相系统测定。结果:方法中各物质线性范围：尿嘧啶,0.3～30μg·mL^-1;尿苷,0.4～40μg·mL^-1;腺苷,0.8～80μg·mL^-1;腺嘌呤,1.0～100μg·mL^-1;鸟苷,2.5～250μg·mL^-1;麦角甾醇1.5～150μg·mL^-1。方法中各物质加样回收率范围与精密度：尿嘧啶,96.7%～103.4%,1.8%～3.1%;尿苷,98.9%～101.4%,1.7%～2.6%;腺苷,95.9%～104.7%,1.5%～3.5%;腺嘌呤,97.0%～104.0%,1.4%～4.0%;鸟苷,98.2%～101.4%,1.9%～...     

RP-HPLC同时测定暗紫贝母中10个核苷及碱基类成分的含量

目的:建立RP-HPLC-DAD同时测定暗紫贝母药材中5个核苷类活性成分(尿苷、鸟苷、胸苷、腺苷、肌苷)及5个游离的碱基(腺嘌呤、胸腺嘧啶、鸟嘌呤、尿嘧啶、胞嘧啶)含量的方法。方法:采用Agilent Zorbax Bonus-RP C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm);流动相为甲醇和水,梯度洗脱,流速1 mL·min-1;检测波长260 nm;柱温30℃。结果:胞嘧啶、尿苷、鸟苷、胸苷、腺苷、腺嘌呤、肌苷、胸腺嘧啶、鸟嘌呤、尿嘧啶的质量浓度分别在1.78～56.80 mg·L-1、1.84～59.00 mg·L-1、1.58～50.60 mg·L-1、1.73～55.30 mg·L-1、1.78～57.10 mg·L-1、1.63～52.10 mg·L-1、1.79～57.20 mg·L-1、1.80～57.70 mg·L-1、1.63～52.30 mg·L-1、1.63～52.30 mg·L-1范围内与峰面积呈良好线性关系,平均回收率为97.7%～103.2%,RSD≤2.2%。结论:建立了RP-HPLC-DAD同时测定暗紫贝母药材中10个核苷及碱基类成分含量的方法,该方法简单,重复性好,准确可靠;暗紫贝母药材中鸟苷、尿苷、胸苷、腺苷含量较高;青海久治、大通产暗紫贝母药材中核苷含量均高于四川松潘;青海2个产地比较,大通产暗紫贝母药材中核苷含量又明显高于久治。     

皖产古尼虫草中核苷和碱基成分的HPLC分析

目的:建立高效液相色谱法测定皖产古尼虫草中核苷和碱基成分(尿嘧啶、虫草素、腺苷、腺嘌呤、尿苷、次黄嘌呤、肌苷和鸟苷)的含量,并比较其与天然冬虫夏草核苷和碱基成分的异同。方法:采用Zorbax SB-Aq(250 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱,以水-乙腈为流动相,梯度洗脱,流速为0.8 mL.min-1,检测波长260 nm,柱温20℃。结果:尿嘧啶、虫草素、腺苷、腺嘌呤、尿苷、次黄嘌呤、肌苷和鸟苷进样浓度分别在0.38～191.08,0.37～188.48,0.37～189.72,0.37～190.92,0.37～188.55,0.50～168.55,0.37～190.36,0.24～125.00μg.mL-1范围内线性关系良好,R2为0.9998～0.9999;加样回收率分别为102.1%,102.1%,95.3%,96.2%,96.9%,94.1%,108.7%,101.8%,RSD未超过2.8%。皖产古尼虫草和冬虫夏草均含有核苷和碱基成分,其中:皖产古尼虫草含有较高的尿嘧啶、尿苷、腺苷,而冬虫夏草中肌苷含量较高;二者的次黄嘌呤、鸟苷、腺嘌呤的含量相近;在该检测限下,两者均未测得虫草素。结论:初步认...     

HPLC法检查腺苷注射液的有关物质

目的:建立腺苷注射液中有关物质的检查方法。方法:采用高效液相色谱法。色谱柱为Agilent TC C18,流动相为乙腈-0.01 mol/L磷酸二氢钾溶液(pH 5.8)(12∶88),流速为1.0 ml/min,检测波长为260 nm。已知杂质按外标法以峰面积计算含量;总杂质及其他单个杂质以自身对照法计算。结果:在该色谱条件下,腺苷与各杂质分离良好,腺苷检测质量浓度线性范围为0.3³0μg/ml,特定杂质尿苷、鸟苷、肌苷及腺嘌呤检测质量浓度线性范围均为0.0330μg/ml,特定杂质尿苷、鸟苷、肌苷及腺嘌呤检测质量浓度线性范围均为0.03³.0μg/ml(r=0.999 83.0μg/ml(r=0.999 8¹.000),检测限为0.03、0.21、1.20、0.21、0.03 ng。结论:该方法操作简单、灵敏度高,为更好地控制产品的质量提供了有效的检查方法。     

UPLC法测定西洋参不同部位中8个核苷类成分

目的:建立超高效液相色谱-二极管阵列检测器(UPLC-PDA)法同时测定西洋参中鸟嘌呤、尿苷、腺嘌呤、肌苷、鸟苷、2’-脱氧鸟苷、β-胸苷、腺苷8个核苷类成分，并对山东省威海市7个地区11批西洋参不同部位的核苷含量进行测定，以期为西洋参质量控制与评价提供科学依据。方法:采用Acquity UPLC HSS T₃(100 mm×2.1 mm, 1.8μm)色谱柱，流动相为水-乙腈，梯度洗脱，流速0.3 mL·min^-1,柱温30℃,检测波长为260 nm,进样量2μL。结果:8个核苷的质量浓度在1.00～200.00μg·mL^-1范围内线性良好，相关系数均>0.999 6,平均加标回收率为98.1%～99.9%,RSD范围为1.2%～2.6%,灵敏度、准确度及精密度均符合要求。山东省威海地区西洋参芦头、须根和主侧根部位样品核苷含量分别为2 556.18、1 829.93和1 100.67 mg·kg^-1,结果具有显著性差异(P<0.05)。结论:该方法可用于西洋参中核苷含量测定及不同部位的...     

超高效液相-质谱联用测定不同产地半夏中10种成分含量及质控指标筛选

目的:建立同时测定半夏中6个核苷类(尿嘧啶、胞苷、尿苷、腺嘌呤、鸟苷、腺苷)和4个有机酸类(酒石酸、柠檬酸、苹果酸、琥珀酸)的超高效液相-质谱联用(UPLC-MS/MS)分析方法,并对不同产地的半夏进行品质评价.方法:色谱条件为Shim-pack XR-ODS Ⅲ(200 mm× 2 mm,2.2 μm),流动相A 为...     

HPLC法测定不同产地地龙中尿嘧啶、次黄嘌呤、尿苷、肌苷的含量

目的:测定不同产地、品种的地龙药材中尿嘧啶、次黄嘌呤、尿苷、肌苷的含量,建立地龙质量控制的客观指标。方法:用0.9%生理盐水超声提取地龙药材,采用反相高效液相色谱法,Waters Symmetry C₁₈色谱柱（150mm×4.6mm,5μm）,以0.01mol·L^-1磷酸二氢钾溶液和50%甲醇为流动相,流速为0.8ml·min^-1,梯度洗脱,检测波长254nm,柱温27℃,同时测定尿嘧啶、次黄嘌呤、尿苷、肌苷等4种成分的含量。结果:尿嘧啶的线性范围为0.75～24.00μg·ml^-1（r=0.9993）,平均回收率99.82%,RSD=2.34%（n=6）;次黄嘌呤的线性范围2.50～80.00μg·ml^-1（r=0.9992）,平均回收率101.93%,RSD=1.45%（n=6）;尿苷的线性范围1.25～40.00μg·ml^-1（r=0.9992）,平均回收率97.53%,RSD=1.73%（n=6）;肌苷的线性范围5.00～160.00μg·ml^-1（r=0.9991）,平均回收率102.06%,RSD=2.44%（n=6）。结论:该方法重复性,回收率好,可用于地龙药材中尿嘧啶等4种成分的含量测定。     

RP—HPLC法同时测定半夏中5种核苷含量的研究

目的:采用反相高效液相色谱法检测半夏药材中的核苷类成分,同时对检测确定的5种核苷进行含量测定。方法:核苷检测采用3种色谱条件,通过与对照品的对照,确定在半夏中5种核苷分别为尿嘧啶、黄嘌呤、尿苷、肌苷、鸟苷。含量测定采用 Ace C_(18)柱(150mm×4.6mm,5μm),以水为流动相,流速:0.8mL·min~(-1),测定波长254nm。结果:尿嘧啶、黄嘌呤为首次在半夏中检测到。尿嘧啶、黄嘌呤、尿苷、肌苷、鸟苷的线性范围依次为0.82～8.16,1.52～15.24,3.30～33.04,0.50～5.02,2.98～29.84μg·mL(-1)。r=0.9995～0.9999;回收率:96.4%～102.3%。结论:以 RP-HPLC 法同时测定半夏药材中的5种核苷快速、简便,结果可靠,为测定半夏中核苷类成分提供了有效的方法。     

藏药麻花秦艽花和线叶龙胆花中10种核苷类成分的含量分析

目的 建立藏药麻花秦艽花和线叶龙胆花中同时测定胞嘧啶、胞苷、尿嘧啶、腺嘌呤、鸟嘌呤、尿苷、胸腺嘧啶、鸟苷、胸苷和腺苷等10种核苷类成分含量的HPLC-DAD方法,并对产自青海的6批次麻花秦艽花和6批次线叶龙胆花的该10种核苷成分进行含量测定和比较分析。方法 Bonus RP色谱柱(250 mm×4.6 mm,5 μm),甲醇-0.04%乙酸水溶液梯度洗脱,流速1.0 mL/min,柱温35 ℃,检测波长260 nm,进样量20 μL。结果 10种核苷类成分线性关系、精密度、稳定性、重复性均符合含量测定方法学的要求,加样回收率为93.1%～97.3%。不同产地线叶龙胆花中10种核苷类成分总含量849.38-1014.37 μg.g-1,麻花秦艽花为256.27-822.52 μg.g-1。腺苷、鸟苷、尿苷和胞苷含量在麻花秦艽花和线叶龙胆花中均较高,是其主要核苷成分,而尿嘧啶、鸟嘌呤和胸苷在两种样品中含量均较低。结论 所建立的方法简便实用、重复性好,适用于藏药麻花秦艽花和线叶龙胆花中10种核苷类成分的测定。青海不同产地两种藏药中10种核苷类成分的分析数据可为其质量控制和品质评价提供参考。     

Qualitative and quantitative analyses of nucleosides and nucleobases in Ganoderma spp. by HPLC-DAD-MS

A high-performance liquid chromatography-diode array detector-mass spectrometry (HPLC-DAD-MS) analytical method was developed for detection of the nucleosides and nucleobases in two species of Lingzhi, the dried sporophore of Ganoderma lucidum and G. sinense. The method, combining advantages of both DAD and MS, was successfully used to qualitatively identify for six nucleosides namely, adenosine, cytidine, guanosine, inosine, thymidine, uridine and five nucleobases namely, adenine, guanine, hypoxanthine, thymine and uracil in Lingzhi samples. Quantitative analyses showed that uridine was the most abundant nucleoside in these Lingzhi samples and the contents of nine target analytes were found to be different in pileus and stipes of the fruiting bodies and among the different species of G. spp. The established method might apply as an alternative approach for the quality assessment of Lingzhi.     

Simultaneous determination of 10 nucleosides and nucleobases from different cultivation years of Fritillaria unibracteata var. wabuensis by HPLC-DAD

Determination of nucleosides and nucleobases is important for the quality control of Fritillaria unibracteata Hsiao et K.C. Hsia var. wabuensis (FUW) due to their physiological and pharmacologicalactions. In the present study, we developed a sensitive and reliable HPLC-diode-array detection method to simultaneously determine ten nucleosides and nucleobases, including cytosine, uracil, cytidine, uridine, thymine, adenine, inosine, guanosine, thymidine and adenosine. Complete separation of all the analytes was achieved on a Zorbax 300 Å 300 Extend C₁₈ column with a gradient of methanol-ultrapure water at a flow rate of 1 mL/min in less than 30 min. The diode-array detector wavelength was set at 260 nm for the UV detection of nucleosides and nucleobases. The optimized method provided good linearity (R²≥0.9993 for all the analytes), satisfactory precision (RSD≤3.715%), good repeatability (RSD≤3.748%) and good recovery (RSD from 97.688% to 102.923%). In addition, the developed method was successfully applied to simultaneous determination of ten nucleosides and nucleobases from FUW, and their content changes of various cultivation time (1-7 years) were further analyzed for the first time. Our findings were useful for ensuring the cultivation time choice of artificial cultivation, quality control, pharmaceutical studies and clinical efficacy of FUW.     

超高效液相色谱法同时测定瑞香狼毒中伞形花内酯和狼毒色原酮的含量

目的：建立超高效液相色谱（UPLC）法测定瑞香狼毒药材中伞形花内酯和狼毒色原酮的含量。方法：超高效液相色谱法,Waters BEH C₁₈（2.1 mm×100 mm,1.7 μm）色谱柱;流动相为乙腈（A）-0.1%磷酸水溶液（B）,进行梯度洗脱;检测波长伞形花内酯为327 nm,狼毒色原酮为297 nm;流速0.3 mL·min^-1;进样量2 μL,柱温25℃。结果：伞形花内酯、狼毒色原酮的线性范围分别为0.74~19.64 μg·mL^-1（r=0.999 9）、14.70~352.8 μg·mL^-1（r=0.999 8）,平均回收率分别为99.20%,99.63%,RSD分别为1.81%,1.65%。13批瑞香狼毒药材中伞形花内酯的含量范围为0~0.602 mg·g^-1,狼毒色原酮的含量范围6.08~33.37 mg·g^-1。结论：该方法操作简便、快速、重复性好、结果准确可靠,可用于中药瑞香狼毒的质量控制。     

基于时空变化的桑寄生中广寄生苷、槲皮苷、槲皮素含量分析

目的：研究基于时空变化的桑寄生中广寄生苷、槲皮苷、槲皮素含有量的影响。方法：采用双波长切换法测定来源于不同产地、不同采收期的桑寄生样品中广寄生苷、槲皮苷、槲皮素含量,样品采用甲醇超声提取方法制备。色谱条件：Ultimate^®XB-C₁₈色谱柱（250 mm×4.6 mm,5 μm）,流动相为乙腈（A）-甲醇（B）-0.1%磷酸溶液（C）,梯度洗脱（0~25 min,3% A,39% B;25~45 min,3% A~23% A,39% B~19% B）,流速：1.0 mL·min^-1,柱温：25℃,双波长切换检测（0~25 min,254 nm;25~45 min,365 nm）。结果：广寄生苷、槲皮苷、槲皮素的线性范围分别为0.099 2~1.984 0 μg（r=0.999 9）,0.225 4~4.458 0 μg（r=0.999 9）和0.125 8~2.516 0 μg（r=0.999 7）,平均加样回收率（n=5）分别为98.39%,97.08%和98.15%。不同产地桑寄生药材茎枝中广寄生苷、槲皮苷、槲皮素含量分别为0.000 0~0.021 5,0.214 3~0.892 0和0.000 0~0.023 1 mg·g^-1,叶中为0.000 0~0.096 3,2.265 3~5.998 7和0.000 0~0.156 9 mg·g^-1;不同采收期桑寄生药材茎枝中广寄生苷、槲皮苷、槲皮素含量分别为0.000 0~0.022 5,0.159 6~0.825 3和0.000 0~0.040 9 mg·g^-1,叶中为0.021 8~0.095 5,2.261 0~5.998 7和0.026 3~0.210 3 mg·g^-1。结论：该方法准确度高、简便快捷、重复性好,可作为桑寄生药材的质量控制标准。     

吗替麦考酚酯胶囊和麦考酚钠肠溶片在早期肾移植患者中的药动学

目的：探讨肾移植术后早期患者口服吗替麦考酚酯胶囊（MMF）和麦考酚钠肠溶片（EC-MPS）的药动学特点,为临床合理用药提供依据。方法：选取26例肾移植患者,按随机数字表法分为MMF组（n=13）和EC-MPS组（n=13）,两组患者分别于术后第1天给予MMF（750 mg q12 h）或EC-MPS（720 mg q12 h）、他克莫司、甲泼尼龙预防排斥反应。于术后第7天的早上服药前及服药后0.5,1,1.5,2,3,4,6,8,10,12 h采集静脉血样3 mL,采用UPLC-UV分析方法测定霉酚酸（MPA）血浆浓度。以 DAS 2.0药动学软件进行药动学分析,所有与剂量相关的两组药动学参数分别进行了剂量校正（C_max/D,C₀/D,AUC_{0-12 h}/D及AUMC_{0-12 h}/D）。用SPSS 17.0软件进行统计学分析。结果：术后第7天MMF和EC-MPS的主要药动学参数t_max分别为（1.54±0.9）h和（2.19±1.56）h（P> 0.05）;C_max/D分别为（5.12±2.83）mg·L^-1·g^-1和（9.51±7.38）mg·L^-1·g^-1（P> 0.05）;AUC_{0-12 h}/D分别为（19.13±7.78）mg·h·L^-1·g^-1和（25.96±11.78）mg·h·L^-1·g^-1（P> 0.05）。两组患者的药-时曲线个体间差异均较大,大部分患者观察到有双峰现象,极个别患者观察到有多峰。MMF组和EC-MPS组患者的MPA-AUC_{0-12 h}低暴露组比例分别为84.6%和46.15%,目标暴露组比例分别为15.4%和46.15%,仅有1例EC-MPS组患者为高暴露组。结论：MMF和EC-MPS在早期肾移植患者体内的药动学个体差异较大,需要常规监测MPA-AUC_{0-12 h},同时可结合C₀作为参考,以指导临床调整用药剂量。MMF和EC-MPS常规剂量下的MPA-AUC_{0-12 h}在早期肾移植患者中偏低,建议增加给药剂量。     

高效液相色谱法同时测定三七中5种核苷和碱基的含量（英文）

目的测定三七不同部位中5种核苷类成分胞苷、尿苷、鸟苷、腺苷和尿嘧啶含量。方法采用Zorbax SB-Aq色谱柱;以8mmol·L-1醋酸铵水溶液（A）和甲醇（B）为流动相梯度洗脱,在25℃条件下流速为1mL·min-1;检测波长为260nm。结果胞苷、尿苷、鸟苷、腺苷和尿嘧啶线性范围分别为1.79-57.40μgm·L^-1（r^2=1.0000）,3.30-105.60μgm·L^-1（r^2=1.0000）,3.09-98.80μgm·L^-1（r^2=0.9999）,2.77-88.60μgm·L^-1（r^2=1.0000）和0.38-12.30μgm·L^-1（r^2=1.0000）;加样回收率分别为93.9%,96.5%,92.7%,93.2%和98.8%。三七不同部位中5种核苷类成分的含量差异显著。结论本文首次报道了三七中核苷类成分的含量,其对完善三七药材的质量控制具有一定的指导意义。     

Response of the guinea-pig urinary bladder to purine and pyrimidine nucleotides

The ability of purines and pyrimidines to cause and inhibit contractile responses was examined in strips of guinea-pig urinary bladder. Adenosine 5′-triphosphate (ATP), β, γ-methylene ATP (APPCP), adenosine 5′-diphosphate (ADP), guanosine 5′-triphosphate (GTP) and cytidine 5′-triphosphate (CTP) caused concentration-dependent contractions of the bladder. The order of potency was APPCP > ATP > GTP=CTP > ADP. Adenosine 5′-monophosphatedenosine, guanosine 5′-diphosphate, guanosine, 5′-monophosphate, guanosine, cytidine 5′-disphosphate, cytidine 5′-monophosphate and cytidine had no apparent contractile activity up to 10⁻ M. Cumulative administrations of 5 × 10⁻⁴ M APPCP, ATP, ADP, GTP or CTP resulted in complete desensitization of the tissue to the contractile activity of the nucleotide. Tissues desensitized to GTP or CTP were non-responsive to ATP suggesting cross-tachyphylaxis. Nucleotides lacking contractile activity or nucleosides did not alter the response of the bladder to ATP; except AMP and adenosine which significantly reduced the contraction. These results suggest that the polyphosphate structure, and not the base, is the determining portion of the nucleotide for promoting contractile activity and the development of tachyphylaxis.     

高效液相色谱法同时测定六君子丸中7种成分的含量

目的：采用高效液相色谱法同时测定六君子丸中橙皮苷、白术内酯Ⅰ、白术内酯Ⅲ、甘草苷、甘草酸铵、党参炔苷、茯苓酸共7种成分的含量。方法：色谱柱为Venusil MP-C₁₈柱（250 mm×4.6 mm,5.0 μm）;流动相为甲醇-乙腈（45∶55,A）和0.2%磷酸水溶液（B）,梯度洗脱,流速：1.0 mL·min^-1;柱温：40 ℃。结果：7种有效成分橙皮苷、白术内酯Ⅰ、白术内酯Ⅲ、甘草苷、甘草酸铵、党参炔苷、茯苓酸分别在3.010~301.0 μg·mL^-1（r=0.999 6）、0.154~15.4 μg·mL^-1（r=0.999 4）、0.202~20.2 μg·mL^-1（r=0.999 2）、1.025~102.5 μg·mL^-1（r=0.999 5）、1.240~124.0 μg·mL^-1（r=0.9993）、5.030~503.0 μg·mL^-1（r=0.999 5）、0.412~41.2 μg·mL^-1（r=0.999 3）范围内含量与峰面积呈良好的线性关系;加样回收率在96.59%~98.34%之间。6批次供试品中橙皮苷、白术内酯Ⅰ、白术内酯Ⅲ、甘草苷、甘草酸铵、党参炔苷、茯苓酸的含量分别为：5.126~5.773,0.058~0.078,0.105~0.132,1.257~1.514,2.012~2.241,8.256~8.425,0.235~0.334 mg·g^-1。结论：所建立的方法简便、快速、准确,可用于六君子丸的质量控制。