玉米须多糖诱导人肝癌SMMC-7721细胞凋亡的研究

目的:观察不同浓度的玉米须多糖(stigma maydis polysaccharide SMPS)对肝癌SMMC-7721细胞作用的影响.方法:将玉米须多糖以不同浓度和时间作用于肝癌SMMC-7721细胞,采用 MTT比色法观察细胞毒性;应用HE染色法观察凋亡细胞的形态;原位末端标记法(TUNEL法)检测细胞凋亡率.结果:玉米须多糖以剂量依赖和时间依赖的方式抑制SMMC-7721细胞的生长.HE染色观察到凋亡细胞的形态学改变.结论:玉米须多糖抑制SMMC-7721细胞的增殖,诱导细胞凋亡.为临床治疗肝癌提供理论依据.     

灵芝多糖诱导人肝癌细胞HepG2凋亡的研究

目的：研究灵芝多糖（GLPS）与化疗药氟尿嘧啶联合使用诱导人肝癌细胞HepG2凋亡作用。方法：MTT法测定细胞毒作用,流式细胞术检测细胞凋亡率,比色法测定Caspase-3、Caspase-8酶活性,Western—Blotting法检测细胞色素C、Caspase-3、Caspase-8蛋白表达情况。结果：灵芝多糖与氟尿嘧啶联合使用具有显著的细胞毒作用;流式细胞术检测,随着GLPS浓度增加,细胞凋亡率升高,Caspase-3、Caspase-8酶活性亦增强;Western-Blotting检测发现GLPS作用后细胞色素C、Caspase-3、Caspase-8蛋白表达不同程度增加。结论：灵芝多糖与氟尿嘧啶联合使用可通过引起细胞色素C的释放,活化Caspase诱导肝癌细胞凋亡。     

大黄素诱导HK-2细胞凋亡的机制探讨

 目的：探讨大黄中游离蒽醌大黄素诱导人近曲小管上皮细胞（HK-2）的细胞凋亡作用机制。方法：体外 培养HK-2细胞,利用MTT法评价大黄素对HK-2细胞的增殖抑制作用,利用TUNEL染色检测大黄素对HK-2细胞凋亡的影响, 流式细胞技术检测大黄素对HK-2细胞线粒体膜电位的影响,凋亡相关蛋白检测采用Western Blot分析;结果：大黄素作 用HK-2细胞48 h后,明显抑制细胞的增殖,IC50值为130.65 μmol•L-1。大黄素浓度为80 μmol•L-1时促使细胞凋亡, 线粒体膜电位降低,Western Blot分析凋亡相关蛋白显示,大黄素作用HK-2细胞后,抑制细胞外信号调节激酶1/2 （extracelluar signal regulated kinase 1/2,ERK1/2）的磷酸化,并且呈现明显的剂量和时间效应关系,细胞内 Bcl-2表达降低,Bax没有明显的变化,致使促凋亡基因蛋白占优势,细胞向促调亡的方向发展,细胞色素c释放增加, 从而使Caspase-8活化,激活下游Caspase-3,引起细胞的凋亡;大黄素对HK-2细胞的损伤效应可能是通过MAPK/ERK信号 转导通路抑制ERK磷酸化,而导致了细胞凋亡。结论：大黄素能够引起HK-2细胞的凋亡,其机制可能涉及MAPK/ERK信号 转导通路抑制途径。     

香菇多糖抑制Akt通路和微管蛋白聚合诱导肿瘤细胞凋亡的分子机制

目的：研究香菇多糖（SLNT1）诱导H22和MCF-7细胞凋亡的分子机制。方法：体外MTT法检测SLNT1对H22和MCF-7细胞的生长抑制作用;AO/EB染色考察SLNT1对H22凋亡细胞形态学变化;微管红色荧光探针试剂盒观察SLNT1对MCF-7细胞微管蛋白聚合作用的影响;体内建立H22荷瘤小鼠模型,给予不同剂量香菇多糖（50,100,200 mg·kg^-1）溶液治疗,空白组（不接种不给药）,阳性对照组（腹腔注射环磷酰胺,25 mg·kg^-1）,给药10 d,末次给药后剥离肿瘤组织,保存于-80℃冰箱中。Western blot法检测H22肿瘤组织中p-Akt、p53、Bcl-2、Bax、cleaved caspase-3蛋白表达情况。结果：SLNT1能显著抑制H22和MCF-7细胞的体外生长增殖。AO/EB染色表明给药SLNT1后,出现典型的H22凋亡细胞,大部分细胞被染成橙红色,细胞核固缩、破裂并出现凋亡小体,且SLNT1能抑制微管蛋白聚合诱导MCF-7细胞发生凋亡。Western blot结果显示SLNT1显著降低H22肿瘤组织中p-Akt和Bcl-2的表达,上调肿瘤抑制蛋白p53和Bax,cleaved caspase-3的表达,并增加Bax/Bcl-2的值。结论：香菇多糖的诱导肿瘤细胞凋亡作用可能是通过抑制Akt通路进而促进线粒体凋亡途径和抑制微管蛋白聚合来实现的。     

新型微管抑制剂BZML诱导H1299细胞G2/M期阻滞及细胞凋亡

目的研究新型微管抑制剂5-(3,4,5-三甲氧基苯甲酰基)-4-甲基-2-(对甲苯基)咪唑[5-(3,4,5-trimethoxybenzoyl)-4-methyl-2-(p-tolyl)imidazole,BZML]抑制人非小细胞肺癌H1299细胞增殖的机制。方法采用MTT法评价BZML体外抑制H1299细胞的活性。免疫荧光染色观察BZML对微管的抑制作用。采用流式细胞技术考察BZML对H1299细胞周期的影响,并检测H1299细胞活性氧(ROS)的产生及细胞凋亡的情况。结果 BZML时间及剂量依赖性地抑制H1299细胞增殖,半数抑制浓度(IC50)为14.6 nmol·L-1。BZML通过抑制微管聚合,引起H1299细胞发生G2/M期阻滞,并通过诱导活性氧的产生,最终导致细胞凋亡。结论 BZML是一种新型的微管抑制剂,能诱导H1299细胞发生G2/M期阻滞,并通过诱导ROS的产生引起细胞凋亡的发生。     

香菇多糖对人子宫内膜癌细胞HEC-1B增殖的影响

目的观察香菇多糖对HEC-1B细胞增殖的影响,并对其机制进行初步探讨。方法HEC-1B细胞分为对照组和香菇多糖（高、中、低剂量）组,加香菇多糖高、中、低剂量于培养液中,使其终浓度分别为0.25g/L、0.5g/L、1.0g/L。采用MTT法观测香菇多糖对HEC-1B细胞增值的影响;分别采用realtime PCR、免疫组织化学方法检测肿瘤组织中Bax、Bcl-2、PCNA mRNA蛋白含量。结果香菇多糖能抑制HEC-1B细胞的增殖,其低、中、高剂量对HEC-1B细胞的增殖抑制率分别为20.46%、35.69%和40.18%。香菇多糖能明显升高HEC-1B细胞中Bax mRNA蛋白含量（P〈0.05或P〈0.01）,明显降低HEC-1B细胞中Bcl-2、PCNA mRNA蛋白含量（P〈0.05）。结论香菇多糖能抑制HEC-1B细胞的增值,其机制可能与升高Bax表达,降低Bcl-2、PCNA表达有关。     

姜黄素诱导食管癌Eca-109细胞凋亡机制的研究

目的观察姜黄素诱导食管癌Eca-109细胞凋亡,并初步探讨其作用机制。方法通过CCK-8法检测不同浓度、不同时间点作用于Eca-109细胞的增殖抑制率。应用Caspase 3活性检测试剂盒检测胱天蛋白酶3活性。流式细胞技术检测细胞早期凋亡。免疫细胞化学法检测凋亡相关基因Bax和Bcl-2的表达情况。结果随浓度增加时间延长各组生长抑制率有明显增高,且呈剂量浓度依赖性,组间差异有显著性(P<0.01)。胱天蛋白酶3活性检测发现:姜黄素20μmol·L-1,40μmol·L-1作用24 h后OD值与对照组比较,差异具有统计学意义(P<0.05)。流式细胞术检测到姜黄素作用后,细胞凋亡率明显升高。免疫细胞化学染色显示,随着姜黄素浓度的增高和作用时间的增长,Bcl-2蛋白表达减弱,Bax蛋白表达增强。结论姜黄素可能是通过诱导胱天蛋白酶3表达活性增高,上调促凋亡基因Bax及下调抗凋亡基因Bcl-2的表达,诱导Eca-109发生凋亡。     

NS-398诱导肝癌细胞凋亡的实验研究

目的 :研究选择性环氧化酶 2 (COX 2 )抑制剂NS 398对人肝癌细胞HepG2 凋亡的影响 ,及其相关蛋白Bcl 2在细胞凋亡中的作用。方法 :通过体外细胞培养 ,应用荧光显微镜、透射电镜、流式细胞仪观察NS 398对HepG2 的凋亡诱导作用 ,应用免疫细胞化学法观察Bcl 2在人肝癌细胞HepG2 凋亡中的表达。结果 :NS 398处理HepG2 细胞后 ,电镜下可见到细胞核固缩、染色质凝集成新月型紧靠核膜周边 ,核碎裂、染色质片断化等典型的细胞凋亡形态变化。荧光显微镜及流式细胞检测则未见凋亡征象。免疫细胞化学分析显示 ,NS 398处理后的HepG2 细胞 ,其Bcl 2表达较对照组明显下降。结论 :COX 2选择性抑制剂NS 398对人肝癌HepG2 细胞有显著的凋亡诱导作用 ;抗凋亡基因Bcl 2在NS 398诱导的HepG2 细胞凋亡中有重要的调控作用。     

细胞凋亡基因调控机制研究进展

近年来，某些基因在细胞凋亡发生发展过程中的作用得到普遍重视。它们既具有单一的调节作用，又具有复杂的协同效应。研究这些基因在细胞凋亡中的调控机制，对利用基因治疗技术治疗恶性肿瘤和退变性疾病具有重要意义。本论述了调控细胞凋亡的基因及其在细胞凋亡中的作用机制。     

紫杉醇对肝癌SMMC7721细胞凋亡的诱导作用及对相关基因表达的影响

目的：探讨紫杉醇对肝癌SMMC7721细胞凋亡的诱导作用及对bcl-2和bax基因的影响。方法：用浓度为5ug·ml-1的紫杉醇处理肝癌SMMC7721细胞后,利用DNA琼脂糖凝胶电泳,TUNEL法检测其细胞凋亡;通过原位杂交法、免疫组化法,测定紫杉醇诱导肝癌SMMC7721细胞产生凋亡时,凋亡抑制基因bcl-2和凋亡促进基因bax的mRNA和蛋白表达。结果：紫杉醇作用一定时间后,SMMC7721细胞产生凋亡、bcl-2显著下降、bax表达显著增高。结论：紫杉醇通过调节细胞凋亡抑制基因bcl-2和细胞凋亡促进基因bax的作用,从而诱导肝癌SMMC7721细胞产生凋亡。     

葛根素对人小细胞肺癌H446细胞增殖与凋亡的影响及其作用机制研究

目的观察葛根素对人小细胞肺癌H446细胞增殖与凋亡的影响,并初步探讨其作用机制。方法采用MTr比色法和流式细胞术检测葛根素对H446细胞增殖抑制和诱导凋亡的作用;免疫组化法检测葛根素对PCNA、Bax和Bcl-2蛋白表达的影响。结果40、80μg/ml浓度的葛根素体外作用24、48h,对H446细胞有促增殖作用,在160—640μg／ml浓度范围内,葛根素能够抑制H446细胞的生长,并呈现良好的剂量依赖和时间依赖关系。435μg/ml的葛根素可以诱导H446细胞凋亡。检测葛根素对PCNA、Bax和Bcl-2蛋白表达的影响显示葛根素能够下调PCNA和Bcl-2蛋白的表达,上调Bax蛋白的表达。结论在一定浓度范围内,葛根素可能通过下调PCNA和Bcl-2蛋白的表达,上调Bax蛋白的表达而诱导H446细胞凋亡。     

镍染毒大鼠睾丸生精细胞凋亡及其对Bcl-2和Bax表达的影响

目的探讨硫酸镍诱导大鼠睾丸生精细胞凋亡的类型及其对生精细胞Bcl-2、Bax蛋白表达和雌二醇水平的影响。方法健康性成熟Wistar雄性大鼠32只,随机分为4组,正常对照组,硫酸镍1.25、2.5、5.0 mg/kg 3个剂量组。腹腔注射染毒,1次/d,连续30 d。采用原位缺口末端标记法(TUNEL)检测睾丸生精细胞凋亡;免疫组化SABC法检测生精细胞Bcl-2和Bax蛋白表达;放射免疫法检测血清雌二醇(E2)水平。结果与对照组比较,各剂量组大鼠睾丸生精细胞凋亡增多(P<0.05),且凋亡细胞主要是生精早期和晚期阶段的精原细胞和精母细胞。各剂量组大鼠生精细胞Bcl-2阳性表达减少而Bax阳性表达增多,且血清E2水平降低(P<0.05)。结论硫酸镍可诱导大鼠睾丸精原细胞和精母细胞凋亡,其机制可能与生精细胞内Bcl-2蛋白表达下调,Bax蛋白表达上调以及雌二醇水平降低有关。     

黄芩苷抗肿瘤作用及机制的研究

黄芩(Scutellaria baicalensis Georgi)是常用中药.已有研究证实黄芩体内外具有抗肿瘤作用[1～3],但对其有效成分抗肿瘤作用未见报道.本实验对黄芩苷抑瘤作用及可能的作用机制进行了研究.     

迷迭香酸抗过氧化氢诱导血管平滑肌细胞凋亡作用的研究

目的探讨迷迭香酸对过氧化氢(H2O2)诱导血管平滑肌细胞凋亡的保护作用及其机制。方法流式细胞术检测细胞凋亡率;吖啶橙(acridine orange,AO)染色观察细胞形态学变化;MTT法检测细胞活性;Western blot检测细胞中Bcl-2、Bax、Fas和FasL蛋白的表达。结果经500μmol·L-1H2O2处理24h后,细胞凋亡率为34.9%±2.55%,出现核固缩、核碎裂等典型的凋亡形态学改变,所以随后实验选择500μmol·L-1H2O2为诱导血管平滑肌细胞凋亡的最佳浓度。①500μmol·L-1的H2O2处理血管平滑肌细胞24h能引起细胞活性明显降低;细胞凋亡率明显增加,达35.7%±1.33%;细胞中Bcl-2蛋白表达降低,Bax蛋白表达升高,Bcl-2/Bax蛋白比值减少,Fas和FasL蛋白表达升高。②用迷迭香酸(10、20、40μmol·L-1)预处理细胞30min,可以增加细胞活性;降低细胞凋亡率,呈浓度依赖性;细胞中Bcl-2/Bax蛋白比值升高,Fas和FasL蛋白表达降低。结论迷迭香酸能拮抗H2O2诱导血管平滑肌细胞凋亡;其作用机制可能与升高细胞中Bcl-2/Bax蛋白比值,减少Fas、FasL蛋白表达有关。     

SOD类似物阻断百草枯诱导的N27细胞凋亡的作用

目的探讨在离体培养的细胞中,SOD类似物[manganese(Ⅲ)meso-tetrakis(N,N′-diethylimidazolium-2-yl)porphyrin,MnTDM]阻断百草枯诱导的N27细胞凋亡的作用。方法以N27细胞为多巴胺能神经元的细胞模型,检测不同浓度的MnTDM对百草枯诱导的N27细胞凋亡的保护作用,四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测细胞活性及代谢状态;电镜观察凋亡形态;免疫细胞化学染色法观察凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2蛋白的表达。结果经百草枯作用后N27细胞活性下降,且其下降程度与百草枯浓度的升高呈线性关系,MnTDM明显阻断百草枯诱导的细胞活性下降(P<0.05),且该阻断作用与MnTDM的浓度成正相关;MnTDM预处理后,电镜观察到细胞凋亡形态好转,凋亡相关蛋白Bcl-2表达升高,Bax表达降低,Bcl-2/Bax值升高。结论MnTDM对百草枯介导的凋亡有一定的保护作用,提示其可能对帕金森病患者的临床防治有一定作用。     

醋酸铜诱导Hela细胞的凋亡

目的研究醋酸铜对人宫颈癌细胞(Hela细胞)存活,生长,周期和凋亡的影响及Bcl-2,Fas基因表达的变化,探讨铜离子引起细胞凋亡的分子机制。方法体外培养Hela细胞,不同剂量醋酸铜(0~40μg/ml)作用72h,苔盼蓝拒染法测细胞存活率,噻唑蓝法(MTT)测醋酸铜对细胞生长的抑制作用。不同剂量的醋酸铜(0~60μg/ml)作用36h,碘丙啶(PI)单染测铜离子对细胞周期的影响;作用24、36和48h,Annexin V/PI双染法测细胞凋亡;作用24h,RT-PCR法检测与凋亡有关基因Bcl-2,Fas表达的变化。结果苔盼蓝拒染法显示,随着浓度醋酸铜的增加,细胞存活率降低;MTT法显示,醋酸铜对细胞生长有强烈的抑制作用。PI单染证明铜离子对细胞周期无影响。Annexin V/PI双染法的结果显示,随着醋酸铜浓度及作用时间的增加,细胞凋亡率显著升高。基因表达分析显示Bcl-2表达量随铜离子增加而降低,而Fas与Bcl-2相反。结论醋酸铜降低Hela细胞的存活率,抑制Hela细胞的生长,这主要是由细胞凋亡引起的。凋亡的发生可能与Bcl-2 mRNA水平的下降及Fas mRNA水平的升高有关。     

硫化氢对脂多糖诱导的大鼠肺组织细胞凋亡的影响

目的探讨硫化氢(H2S)对脂多糖(LPS)诱导的内毒素性急性肺损伤(ALI)大鼠肺组织细胞凋亡的影响。方法♂SD大鼠48只,随机分为6组,每组8只:空白对照组、LPS组、LPS+NaHS低剂量组、LPS+NaHS中剂量组、LPS+NaHS高低剂量组和LPS+PPG组。LPS组、LPS+NaHS低、中、高剂量组和LPS+PPG组舌下静脉注射LPS(5 mg.kg-1),空白对照组注射等容量的生理盐水。LPS+NaHS低、中、高剂量组和LPS+PPG组在注射LPS 3 h时腹腔分别注射低、中、高剂量的氢硫化钠(NaHS)或炔丙基甘氨酸(PPG),空白对照组和LPS组腹腔注射等容量生理盐水。各组大鼠均在舌下静脉注射LPS或生理盐水6 h后处死,取肺组织。应用流式细胞学技术检测各组大鼠肺组织细胞凋亡情况,免疫组化法检测肺组织Bcl-2和Bax的表达,Westernblot检测肺组织天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶3和9(Caspase-3、9)的蛋白表达。结果 LPS组与空白对照组比较肺组织细胞凋亡率明显升高,Bcl-2蛋白表达明显减弱,Bax蛋白表达明显增强,Bcl-2/Bax比值明显降低,Caspase-3和Caspase-9蛋白表达明显增强(P<0.05或P<0.01)。与LPS组比较,LPS+NaHS中、高剂量组肺组织细胞凋亡率明显降低,LPS+NaHS高剂量组Bcl-2阳性细胞表达明显增强,LPS+NaHS中、高剂量组Bax阳性细胞表达明显减弱,LPS+NaHS低、中、高剂量组Bcl-2/Bax比值明显增加,LPS+NaHS高剂量组Caspase-3和Caspase-9蛋白表达明显减弱(P<0.05或P<0.01)。与LPS组比较,LPS+PPG组肺组织细胞凋亡率明显升高,Bcl-2阳性细胞表达明显减弱,Bax阳性细胞表达明显增强,Bcl-2/Bax比值明显降低,Caspase-3和Caspase-9蛋白表达明显增强(P<0.05或P<0.01)。结论 LPS诱导的ALI早期肺组织细胞凋亡增加,给予外源性H2S可减少肺组织细胞凋亡,可能与通过下调Bax、Caspase-3、9蛋白表达和上调Bcl-2蛋白表达有关。     

二氨基肉豆蔻酸活化胱天蛋白酶依赖的线粒体途径诱导HL-60细胞凋亡

目的探讨二氨基肉豆蔻酸(D-82)诱导HL-60细胞凋亡的作用及与线粒体途径活化的关系。方法 D-821.5,3和6mg·L-1处理HL-60细胞6h,或D-826mg·L-1处理细胞6,12及24h后,锥虫蓝染色法检测细胞存活率;AO-EB染色分析凋亡率;琼脂糖凝胶电泳检测DNA损伤;罗丹明123染色流式细胞术检测线粒体膜电位变化;比色法测定胱天蛋白酶3和胱天蛋白酶9活性;Western印迹法检测胞浆和线粒体细胞色素c(Cytc)及细胞中Bcl-2和Bax蛋白表达。结果 D-82的浓度和作用时间与HL-60细胞存活率密切相关,相关系数分别为0.938(P<0.01)和0.809(P<0.05)。D-821.5,3和6mg·L-1处理HL-60细胞6h,细胞存活率分别为(81±11)%,(70±9)%和(56±11)%;D-826mg·L-1作用HL-60细胞12和24h,存活率降至(36±7)%和(24±9)%。D-821.5,3和6mg·L-1诱导HL-60细胞出现凋亡形态学改变及DNA阶梯状条带,凋亡率从正常对照组的(2±2)%上升至(18±4)%,(40±11)%和(75±11)%(n=3,P<0.05)。D-823和6mg·L-1组,罗丹明平均荧光强度由正常对照组的24±5降至20±5及12±4(n=3,P<0.05),说明线粒体膜电位降低;D-823和6mg·L-1组胱天蛋白酶3活性分别增加39%和125%,胱天蛋白酶9活性分别增加61%和145%(P<0.05,P<0.01)。与正常对照组比,D-823和6mg·L-1组线粒体Cytc表达分别降低22%和38%(P<0.05,P<0.01),胞浆中Cytc表达分别升高22%和65%(P<0.05);Bax表达分别增加45%和116%(P<0.05,P<0.01),Bcl-2表达分别减少27%和40%(P<0.01)。结论 D-82通过活化胱天蛋白酶依赖的线粒体途径诱导HL-60细胞凋亡。     

绿原酸对过氧化氢诱导内皮细胞凋亡的保护作用

目的探讨绿原酸对体外过氧化氢诱导人脐静脉内皮细胞凋亡的影响及机制。方法体外培养的人脐静脉内皮细胞株传代后进行实验,分为(A)正常对照组、(B)绿原酸组(30μmol.L-1)、(C)H2O2损伤组、(D)绿原酸+H2O2组。检测细胞线粒体膜电位;Hoechst33258荧光染色检测细胞凋亡;RT-PCR检测不同组内皮细胞Caspase-3和Bcl-2基因的表达。结果与正常对照组比较,过氧化氢(400μmol.L-1)能明显的造成内皮细胞的凋亡(P<0.05),绿原酸(30μmol.L-1)可降低过氧化氢引起的内皮细胞凋亡,表现为细胞凋亡率减少(P<0.05),线粒体膜电位增加,Bcl-2的表达增强,Caspase-3的表达减弱。结论绿原酸可抑制过氧化氢引起的内皮细胞凋亡,其作用机制可能与保护线粒体膜电位,促进凋亡抑制基因Bcl-2的表达及抑制Caspase-3的表达有关。