烙铁头蛇毒诱导家兔血小板释放血栓恶烷A_2的生物测定及其探讨

烙铁头蛇毒(Trimeresurus mucrosquamatus Snake venom,TMV)系蝰科蝮亚科烙铁头属烙铁头蛇(Trimeresurus mucrosquamatus(cantor))的毒腺分泌液的干燥制剂。据报道,台湾产烙铁头蛇毒可引起血     

抗血小板糖蛋白Ⅱb/Ⅲa Fab抗体的原核表达及其生物活性

目的：研制抗血小板膜糖蛋白Ⅱb／Ⅲa Fab抗体。方法：通过问接免疫荧光试验和血小板聚集抑制试验，选取鼠源抗血小板糖蛋白Ⅱb／Ⅲa单克隆抗体(mAb P140)。从分泌该mAb的杂交瘤细胞株(P140)中，克隆到抗体轻链基因和重链Fd段基因，构建原核表达重组质粒p3MH／P140x-Fd，并在XLI-Blu菌株中进行表达。采用钴亲和层析法对P140 Fab抗体进行纯化，用SDS-PAGE、ELISA和Western blot等方法，对P140 Fab抗体进行检测，并通过血小板聚集抑制试验，观察P140 Fab抗体的抗栓活性。结果：SDS-PAGE和Western blot表明，纯化的P140Fab抗体的相对分子质量(Mr)约为47000。ELISA的结果显示，P140 Fab抗体可与人血小板特异性结合。在体外ADP诱导的血小板聚集试验中，P140 Fab抗体对血小板聚集的抑制作用成剂量依赖性，IC50的平均值为16．85mg/L。结论：成功地研制出具有抗栓活性的抗血小板膜糖蛋白Ⅱb／Ⅲa的Fab抗体。     

羟基红花黄色素A对肝纤维化大鼠血清学指标及脂质过氧化的影响

目的观察羟基红花黄色素A(HYSA)对四氯化碳(CCl4)诱导的肝纤维化(HF)大鼠血清学指标及脂质过氧化的影响。方法清洁级雄性SD大鼠60只,体重(180±30)g,随机分为A、B、C、D、E组,A组(正常对照组)、B组(HF模型组)、C组(红花组)、D组(HYSA组)、E(秋水仙碱组),除A组外,其余各组采用CCl4灌胃,诱导大鼠肝纤维化模型;造模第2周起,腹腔注射给予相应药物,8w后处死大鼠取血清及肝组织标本,光景下观察肝组织结构变化及肝纤维化程度,放射免疫技术检测测定血清中ALT、AST、ALB含量,分光光度计检测肝组织匀浆中SOD和MDA的含量。结果与B组比较,C、D、E组大鼠血清中ALT、AST活性显著降低,ALB含量显著升高,肝细胞变性、坏死明显减少,肝组织纤维化程度明显减轻,肝组织MDA含量显著降低,SOD活性显著升高;与C组比较,D组的肝纤维化程度显著减轻,两者比较有统计学意义(P<0.05)。结论 HYSA作为红花抗肝纤维化的主要有效作用成分,能够保护肝组织,减轻肝细胞水肿程度,减轻其纤维化程度,并能促进损伤肝组织的修复,且其抗肝纤维化作用机制可能与其抗脂质过氧化作用有关。     

磷脂酶A_2抑制剂对卵巢癌细胞转移潜能的影响

目的:卵巢癌细胞可分泌大量溶血性磷脂酸(LPA),LPA促进卵巢癌的发展,磷脂酶A2是LPA合成的主要酶。拟研究磷脂酶A2的抑制剂能否抑制卵巢癌的转移。方法:Transwell检测细胞迁移能力变化;Western blot检测磷脂酶A2的表达/活化状态;ECIS检测细胞浸润能力;质谱分析LPA浓度;裸鼠卵巢癌模型检测肿瘤的转移。结果:在体外LPA以剂量依赖方式促进SKOV3细胞的迁移和黏附;SK-OV3细胞内具有高表达和活化的iPLA2和cPLA2酶;应用AACOCF3和HELSS后,SKOV3分泌的LPA显著减少;AA-COCF3和HELSS显著抑制裸鼠内SKOV3的远地转移。结论:LPA显著促进SKOV3的迁移、黏附、对单层腹膜的浸润。AACOCF3和HELSS显著抑制SKOV3分泌LPA、并显著抑制SKOV3的迁移和浸润,还抑制裸鼠内SKOV3的远地转移,AACOCF3和HELSS有可能成为卵巢癌转移的潜在抑制剂。     

低体温对肺循环和血浆去甲肾上腺素、5-羟色胺、血栓素A_2、前列环素的影响

本实验通过冰袋浴使动物中心体温下降至33℃左右,发现肺动脉压和肺血管阻力显著增加。此时。血浆中去甲肾上腺素(NE)含量较降温前增加近10倍;与此相反,血浆中5-羟色胺(5-HT)含量显著减少,其代谢产物5-羟吲哚乙酸(5-HIAA)没有相应增加;低体温不影响动脉血中TxB_2(TxA_2稳定代谢产物)和6-keto-PGFlα(PGI_2稳定代谢产物)的水平。结果提示:交感神经在低体温诱导的肺动脉高压中有重要作用;低体温时5-HT减少,可能是机体的保护措施;前列腺素与低体温时肺循环变化无明显相关作用。     

羟基红花黄色素A对缺血/再灌注大鼠肺线粒体通透性转换功能的影响

目的: 研究羟基红花黄色素A(HSYA)对缺血/再灌注(I/R)损伤肺组织细胞的保护作用,并探讨其对肺I/R损伤时线粒体通透性转换(MPT)功能的影响。方法: 开胸阻断左肺门45 min,松开阻断带形成再灌注,复制在体肺I/R模型。健康SD大鼠50只,随机分为5组,每组10只:假手术对照组(对照组) 、缺血/再灌注1 h组(I/R 1 h组)、缺血/再灌注3 h组(I/R 3 h组)、HSYA干预+I/R 1 h组(SI 1 h组)和HSYA干预+I/R 3 h组(SI 3 h组)。SI 1 h组和SI 3 h组分别在缺血前20 min和再灌注即刻静注HSYA (2.0 mg/kg),其余步骤分别同I/R 1 h组和I/R 3 h组,对照组、I/R 1 h组和I/R 3 h组分别注射同等体积生理盐水。观察各组肺湿干重比(W/D)、肺泡损伤数定量评价指标(IQA)、肺组织细胞凋亡情况、胞浆内和线粒体基质内细胞色素C (CytC)、凋亡诱导因子(AIF)的水平以及MPT功能。结果: 与对照组相比,其余各组肺组织细胞凋亡指数(AI)、W/D和IQA均增高,CytC和AIF胞浆含量增加而线粒体内含量减少;SI各组与相应的I/R组比,AI、W/D和IQA均显著降低,但仍高于对照组;SI组CytC和AIF较相应的I/R组胞浆含量减少而线粒体内含量增加;线粒体在540 nm处的吸光度值SI 1 h较IR 1 h、SI 3 h较IR 3 h增高,但仍低于对照组。结论: 羟基红花黄色素A在一定程度上抑制I/R肺组织细胞凋亡,发挥细胞保护作用,该作用可能与其维持MPT功能、减少CytC和AIF由线粒体向胞浆内释放有关。     

血小板膜糖蛋白Ⅱb/Ⅲa受体拮抗剂ETBT对血小板功能的影响

目的:观察血小板膜糖蛋白Ⅱb/Ⅲa(GPⅡb/Ⅲa)拮抗剂——依替巴肽(Eptifibatide,ETBT)对血小板聚集、释放、收缩血块和促凝活性等的影响。方法:在正常人全血或富血小板血浆(PRP)中加入不同浓度ETBT,分别检测二磷酸腺苷(ADP)诱导的血小板最大聚集率(rPAmax)、血小板CD62p表达百分率、血块收缩率和血小板3因子(PF3)有效性,通过与对照组比较获得ETBT对血小板功能的抑制率。结果:各种浓度(0.5～5.0μM)ETBT均对rPAmax有显著抑制作用(P0.01),且随ETBT浓度增加而增加;较高浓度(5.0～10μM)ETBT对血块收缩有显著抑制作用(P0.01);ETBT(0～80μM)ETBT对血小板CD62p表达(P=0.425)和PF3有效性没有明显抑制作用。结论:ETBT显著抗血小板聚集作用,但对血小板CD62p表达和促凝作用的影响较小;ETBT抗血小板聚集及抑制血块收缩的作用与其浓度呈正相关。     

Pam3CSK4对血小板活化及其TLR2表达的影响

Objective To investgate role of TLR2 in the activation, the innate immune and inflammation of human platelets. Methods Human washed platelets were separated from healthy people(n=5) and were stimulated with different concentrations(1μg/ml, 5μg/ml, 10μg/ml) of TLR2 agonistPam3CSK4(a synthetic bacterial lipoproteins). Then the platelet aggregation rate, the expression of CD62p and TLR2 on the platelet surface were measured. Results The platelet aggregation rate were (28.32±5.67)%, (52.56±8.54)% and (76.24±11.23)%, respectively, at concentration of 1μg/ml, 5μg/mland 10μg/ml of Pam3CSK4, more than (12.83±2.43)% at 0μg/ml of it. In addition, the expression of CD62p were (18.45±2.66)%, (22.45±2.04)%, (29.53±4.08)%, respectively at above concentration of Pam3 CSK4, more than (11.20±1.67)% of CD62p at control group(P<0.01). The expression of TLR2 was not significantly increased at a lower concentration of Pam3CSK4(1μg/ml) with (16.85±6.10)% compared with(10.81±3.99)% at the control group. However, it were (21.15±9.90)% and (22.52±9.26)%, respectively, at a higher concentration(5μg/ml, 10μg/ml)more than(10.81±3.99)% at the control group(P<0.05). Conclusion Pam3CSK4 induce aggregation, activation and the up-regulation of TLR2 of platelet by stimulating TLR2 receptor of it. Thereafter, TLR2 play an important role in the innate immune of platelet.     

Pam3CSK4对血小板活化及其TLR2表达的影响

目的 探讨Toll样受体2(TLR2)在血小板激活及免疫方面的作用.方法 取健康人(n=5)全血6 ml,以密度梯度离心法制备洗涤血小板.用1、5、10μg/ml的TLR2激动剂Pam3CSK4(一种合成的细菌脂蛋白)刺激人洗涤血小板,然后测定血小板聚集率,血小板表面蛋白CD62p和TLR2表达的变化.结果 Pam3CSK4以浓度0、1、5和10μg/ml激活血小板:聚集率增加分别为(12.83±2.43)%、(28.32±5.67)%、(52.56±8.54)%、(76.24±11.23)%,P<0.01;血小板表面CD62p表达量增加分别为(11.20±1.67)%、(18.45±2.66)%、(22.45±2.04)%、(29.53±4.08)%,P<0.01.Pam3CSK4在1μg/ml时TLR2表达为(16.85±6.10)%,与对照组(10.81±3.99)%相比差异无统计学意义(P>0.05),在5 μg/ml、10μg/ml时TLR2表达量分别为(21.15±9.90)%和(22.52±9.26)%,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05).结论 细菌脂蛋白Pam3CSK4通过激活TLR2引起血小板聚集、活化,是血小板参与抑制革兰阳性细菌感染的免疫应答机制之一.     

引入血红素生物合成基因对褐黄孢链霉菌产纳他霉素的影响

目的考察引入血红素合成关键基因对褐黄孢链霉菌生产纳他霉素的影响。方法运用PCR方法扩增相关血红素合成基因hem A1、hem B、hem E,使用属间接合转移的方法转化入褐黄孢链霉菌HCCB13086,获得引入血红素基因的工程菌株;通过摇瓶发酵考察突变菌株对载氧能力及纳他霉素产量的影响。结果成功构建3个引入血红素合成关键基因的菌株,3株菌在相对高氧条件下生长及产抗能力均与对照组相当,而在相对低氧条件下纳他霉素产量均较对照菌株提高,其中引入hem A1血红素基因的菌株提高最为显著,较对照组的纳他霉素产量提高64%,达到8.52 g/L。结论引入血红素合成基因可提高菌体对氧的利用,促进菌体生长和代谢产物的增加。     

Pam3CSK4对血小板活化及其TLR2表达的影响

Objective To investgate role of TLR2 in the activation, the innate immune and inflammation of human platelets. Methods Human washed platelets were separated from healthy people(n=5) and were stimulated with different concentrations(1μg/ml, 5μg/ml, 10μg/ml) of TLR2 agonistPam3CSK4(a synthetic bacterial lipoproteins). Then the platelet aggregation rate, the expression of CD62p and TLR2 on the platelet surface were measured. Results The platelet aggregation rate were (28.32±5.67)%, (52.56±8.54)% and (76.24±11.23)%, respectively, at concentration of 1μg/ml, 5μg/mland 10μg/ml of Pam3CSK4, more than (12.83±2.43)% at 0μg/ml of it. In addition, the expression of CD62p were (18.45±2.66)%, (22.45±2.04)%, (29.53±4.08)%, respectively at above concentration of Pam3 CSK4, more than (11.20±1.67)% of CD62p at control group(P<0.01). The expression of TLR2 was not significantly increased at a lower concentration of Pam3CSK4(1μg/ml) with (16.85±6.10)% compared with(10.81±3.99)% at the control group. However, it were (21.15±9.90)% and (22.52±9.26)%, respectively, at a higher concentration(5μg/ml, 10μg/ml)more than(10.81±3.99)% at the control group(P<0.05). Conclusion Pam3CSK4 induce aggregation, activation and the up-regulation of TLR2 of platelet by stimulating TLR2 receptor of it. Thereafter, TLR2 play an important role in the innate immune of platelet.     

大黄 虫丸对难治性肾病综合征抗凝血酶Ⅲ、纤溶酶原、血小板聚集率的影响

目的 探讨大黄 虫丸对难治性肾病综合征(RNS)高凝状态(HCS)的治疗作用。方法将68例RNS随机分为实验组和实验对照组,实验组服用大黄 虫丸,实验对照组服用潘生丁。观察患者血中抗凝血酶Ⅲ(AT-Ⅲ)、纤溶酶原(PLG)、血小板聚集率(PAgT)的变化。结果 实验组治疗后患者血中AT-Ⅲ、PLG极显著回升(P=0.000;P=0.000),PAgT极显著降低(P=0.000)。实验组显著优于对照组。结论 大黄 虫丸是治疗RNS-HCS的有效药物。     

磷脂酶A_2活性对大鼠多形核白细胞化学发光的影响

利用腹腔注射酪蛋白，激活腹腔内磷脂酶Ａ２（ＰＬＡ２），收集腹腔内增多的多形核白细胞（ＰＭＮ），测定细胞化学发光（ＣＬ）。结果发现，１％酪蛋白３０ｍｌ注射大鼠腹腔１５ｈ后，腹腔ＰＭＮ显著增多，ＰＬＡ２浓度和活性明显增加，由ＰＭＡ诱发的ＰＭＮ－ＣＬ明显减低；而加热灭活后同量的酪蛋白不能导致上述变化。进一步还发现，ＰＬＡ２激动剂Ａ２３１８７和抑制剂溴己酮、氯喹在体外可促进和抑制外周血ＰＭＮ－ＣＬ。上述结果提示，ＰＬＡ２活性对ＰＭＮ－ＣＬ有显著的调节作用。     

人源性抗血小板膜糖蛋白Ⅱb/Ⅲa Fab抗体的研制及其对血小板聚集功能的影响

目的:构建人源性抗血小板膜糖蛋白Ⅱb/Ⅲa(GPIⅡb/Ⅲa)Fab噬菌体抗体库,筛选抗GPⅡb/Ⅲa特异性的噬菌体抗体,并对其功能进行研究.方法:取血小板膜糖蛋白抗体(抗GPⅡIb/Ⅲa)阳性的特发性血小板减少性紫癜(ITP)患者脾细胞,采用噬菌体抗体库技术构建人源性抗GPⅡb/Ⅲa Fab噬菌体抗体库,以表达GPⅡb/Ⅲa的CHO123细胞筛选抗体库,并以ELISA法检测噬菌体抗体;用Western blot对抗体进行鉴定,并测定其与血小板抗原的结合;观察筛选到Fab抗体对血小板聚集的影响.结果:筛选出2株能够与血小板膜GPⅡb/Ⅲa特异性结合的Fab抗体,其序列与人免疫球蛋白轻、重链可变区序列具有高度同源性,表达纯化的Fab抗体能抑制血小板聚集.结论:成功地从人源性抗血小板膜糖蛋白Ⅱb/Ⅲa Fab抗体库筛选出特异性识别GPⅡb/Ⅲa,具有抑制血小板聚集作用的人源性抗体.     

大黄Zhe虫丸对难治性肾病综合征抗凝血酶Ⅲ、纤溶酶原、血小板聚集率的影响

目的 探讨大黄Zhe虫丸对难治性肾病综合征（RNS）高凝状态（HCS）的治疗作用。方法 将68例RNS随机分为实验组和对照组,实验组服用大黄Zhe虫丸,实验对照组用潘生丁。观察患者血中抗凝血酶Ⅲ（AT-Ⅲ）、纤溶酶原（PLG）、血小板聚集率（PAgT)的变化。结果 实验组治疗后患者血中AT－Ⅲ、PLC极显著回升（P＝0．000;P＝0．000）,PAgT极显著降低（P＝0．000）。实验组显著优于对照组。结论 大黄Zhe虫丸是治疗RNS－HCS的有效药物。     

大黄虫丸对难治性肾病综合征抗凝血酶Ⅲ、纤溶酶原、血小板聚集率的影响

目的探讨大黄虫丸对难治性肾病综合征 (RNS)高凝状态 (HCS)的治疗作用。方法将68例RNS随机分为实验组和实验对照组 ,实验组服用大黄虫丸 ,实验对照组服用潘生丁。观察患者血中抗凝血酶Ⅲ(AT-Ⅲ )、纤溶酶原 (PLG)、血小板聚集率 (PAgT)的变化。结果实验组治疗后患者血中AT -Ⅲ、PLG极显著回升 (P=0 .000 ;P=0 .000) ,PAgT极显著降低 (P=0 .000)。实验组显著优于对照组。结论大黄虫丸是治疗RNS -HCS的有效药物。     

血小板活化及其产物对类风湿关节炎的影响

类风湿关节炎是一种自身免疫性疾病,主要是以血管翳的形成和滑膜炎为病理改变。研究发现血小板活化及其活化产物作为类风湿关节炎一个重要的病理变化和发病因素,贯穿在病程始终,对类风湿关节炎的发生发展极其重要。本文通过对血小板活化机制的分析以及对血小板活化产物与类风湿关节炎之间关系的分析,探讨血小板活化及其活化产物对类风湿关节炎的影响。     

磷酯酶A_2抑制剂DTNB对大鼠心肌缺血再灌注心律失常的影响

目的 :研究非钙依赖性的磷脂酶A2 (PLA2 )和ATP敏感性钾通道 (KATP)在大鼠心肌缺血再灌注(I/R)心律失常中的作用。方法 :结扎大鼠左冠状动脉前降支造成缺血 10min ,然后放开再灌注 10min。在心肌缺血前 5min分别给予PLA2 抑制剂 5 ,5 -dithio -bis(2 -nitrobenzoicacid) (DTNB) (16mg/kg) ,KATP开放剂pinacidil(0 2mg/kg) ,KATP阻断剂glibenclamide(0 3mg/kg)。结果 :与对照组相比 ,DTNB可降低心律失常评分、磷酸肌酸激酶 (CPK)和乳酸脱氢酶 (LDH)值 (P <0 0 5 ) ;而glibenclamide对I/R心律失常无影响 ,但升高CPK ,LDH值 (P<0 0 5 ) ;与glibenclamide组比 ,在glibenclamide阻断KATP后 ,DTNB可引起致死性心律失常 ,并可升高LDH值 (P<0 0 5 ) ;pinacidil可完全抑制I/R引起的室颤和室速。结论 :PLA2 抑制剂DTNB可减轻I/R损伤 ,表明PLA2 在I/R心律失常中起着重要作用 ,同时也表明激活的KATP具有抗I/R心律失常的作用。但DTNB对抗I/R心律失常的作用与KATP的关系仍有待进一步研究。     

川芎嗪对实验性肾炎肾皮质内血小板活化因子、血栓素B_2的影响

目的 :探讨川芎嗪对实验性肾炎肾皮质内血小板活化因子 (PAF)、血栓素B2 (TXB2 )水平的影响。方法 :复制大鼠加速型抗肾小球基膜 (GBM)肾炎模型。分为肾炎组、肾炎 川芎嗪组 (治疗组 )。结果 :治疗组各期尿蛋白量较肾炎组减少 (P <0 .0 5 ,P <0 .0 1) ,第 2 1d时血清肌酐含量低于肾炎组 (P <0 .0 5 ) ,光镜和电镜下肾脏病理改变较肾炎组为轻 ,同时肾皮质内PAF、TXB2 含量少于肾炎组 (P <0 .0 1)。结论 :川芎嗪治疗实验性肾炎有效 ,其机理可能与减少肾皮质内PAF、TXB2 等有关。     

血小板常温保存对血小板计数、平均体积及分布宽度的影响

目的评估血小板计数、平均体积及分布宽度在血小板保存过程中的变化。方法来自于自愿献血者的30例单采血小板,置于血小板常温保存箱保存5d。分别在保存的第1d、第3d、第5d留取样品检测血小板计数、平均体积及分布宽度。结果随着保存时间的延长,血小板计数、平均体积及分布宽度没有发生明显改变(>0.05)。结论血小板的体外保存对血小板计数、平均体积及分布宽度无影响。